PLoS One: hipoxia Serkenti az EMT gyomorrák sejtek révén Autokrin TGF-jelzés

absztrakt katalógusa

A hámsejtek mesenchymalis tranzíció (EMT) tartják, hogy korrelációban rosszindulatú rákos sejtek és felelős a rák terjedését és áttét. Korábban már beszámoltunk, hogy a távoli áttétek járt hypoxia gyomorrákban. Ezért megvizsgáltuk a hatását hipoxiás állapotban EMT gyomorrák-sejtek. Gyomorrák sejteket tenyésztettünk normoxia (21% O _{2), vagy a hipoxia (1% O 2) 24 órán át. EMT értékeltük a százalékos orsó alakú sejtek teljes sejtekben. Hatása a transzformáló növekedési faktor β1 (TGFβ1), vagy tirozin-kináz-inhibitorok a EMT értékeltük. Az expressziós szintje TGFβ1 katalógusa és TGFβR katalógusa úgy értékeltük, hogy valós idejű RT-PCR-rel. A TGFβ1 termelés a rákos sejteket ELISA-val mértük. Hipoxia stimulált EMT a OCUM-2MD3 és OCUM-12 sejteket, de nem a OCUM-2M sejteket. Az expressziós szintje TGFβ1
mRNS alatt hypoxia szignifikánsan magasabb volt, mint amit alatt normoxia minden három sejtvonal. Az expressziós szintje TGFβR katalógusa mRNS szignifikánsan nőtt, hypoxia OCUM-2MD3 sejtek, de nem OCUM-2M sejteket. TGFβR inhibitor SB431542 vagy Ki26894, jelentősen visszaszorult EMT a OCUM-2MD3 és OCUM-12. TGFβ1 termelés OCUM-2MD3 és OCUM-12 sejtek szignifikánsan emelkedett alatt hipoxia képest, hogy az normoxia. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a hipoxia serkenti az EMT gyomorrák sejtek keresztül autokrin TGF /TGFβR jelátvitel. Katalógusa}

Citation: Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O, et al. (2013) A hipoxia Stimulálja az EMT gyomorrák sejtek révén Autokrin TGF-jelzés. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310 katalógusa

Szerkesztő: Claudio M. Costa-Neto, University of Sao Paulo, Brazília katalógusa

Beérkezett: október 19, 2012; Elfogadva: március 19, 2013; Megjelent: május 17, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány részben támogatta a Nemzeti Rákkutató Központ Kutatási és Fejlesztési Alap (23-a-9), valamint a támogatások-in támogatás Tudományos Kutatási (KAKENHI, sz. 20591573, 22390262 és 23390329) a minisztérium Oktatási, Tudományos, Sport, kultúra és a technológia Japánban. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők az alábbi érdekeit. KS, TS, és AM munkavállalói a Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, amit ebben a tanulmányban használt, egy olyan termék Hakko Kirin Co. Ltd. Nincsenek további szabadalmak, a fejlesztés alatt álló, illetve forgalmazott termékek nyilatkozni . Ez nem változtat a szerzők betartása minden PLoS One politikák adatok megosztása és anyagok, részletes online útmutató a szerzők. Katalógusa

Bevezető katalógusa

A hámsejtek mesenchymalis tranzíció (EMT) jellemzi változások a sejt morfológiájában, amelynek során epiteliális sejtek szert mezenchymális tulajdonságait míg a vesztes a sejt-sejt kölcsönhatások és apicobasal polaritás [1], [2]. Epitheliális rák, EMT elismerten az egyik felelős mechanizmusok beindítására invazív és metasztatikus viselkedés [3] - [5]. Katalógusa

A hipoxiás környezetben létezik bizonyos régióiban daganatos betegségek, amelyek megmutatják a gyors növekedés miatt az angiogenezis a karcinómák heterogén [6]. A hypoxia kell tekinteni társított agresszív tumor fenotípusát gastricus karcinómák [7], [8], beleértve az áttétes képessége rákos sejtek [6], [9]. Klinikai és kísérleti adatok azt is bizonyítják, hogy összefüggés van a hipoxiás környezet és rossz prognózist jelent [10], [11]. Ezért fontos, hogy a jövőbeli fejlődése rákkezelés, hogy tisztázza a mechanizmust az áttétek a hipoxia. Katalógusa

Azt jelentette, hogy különböző vízben oldódó tényező, köztük a transzformáló növekedési faktor-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], az epidermális növekedési faktor (EGF) [14], az inzulin-szerű növekedési faktor-1 (IGF-1) [15], a fibroblaszt növekedési faktor (FGF) [16], a hepatocita növekedési faktor (HGF) [17] korreláltak EMT . TGFp jelek fontos szerepe van a különböző aspektusait a metasztatikus rák terjedését sejtek, például a migráció, invázió, és EMT [12], [13]. A TGFp ligandumok kötődni TGFp receptorhoz II típusú (TGFβRII), amely aztán képez komplexet sem TGFβR I. típusú vagy II. TGFβR I típusú (TGFβRI) továbbítja a jeleket a sejten belül keresztül második messenger Smad fehérjék [13], [18]. Downstream jelet továbbadja keresztül TGFβRI, amely foszforilezi receptor által szabályozott Smad fehérjék [19], [20]. Katalógusa

Számos tanulmány számolt be, hogy a hipoxiás állapot okozhat, EMT rákos sejtek [21] - [24], de a molekuláris mechanizmus felelős EMT alatt hipoxiás állapot továbbra is tisztázatlan. Ezért megvizsgáltuk a hatását a hipoxia a morfológiai jellemzőit gyomorrák sejtek tisztázni felelős mechanizmusok hypoxia indukálta EMT. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Cell Culture és sejtvonalak katalógusa

hét gyomorrák sejtvonalakat használtunk. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], és MKN-45 [29] származnak diffúz típusú gyomorrák. MKN-74 [29] és MKN-7 [29] származnak intesztinális típusú. OCUM-2M, OCUM-2MD3 és OCUM-12-t establised laboratóriumunk, mint korábban jeleztük [25] - [27]. Röviden, OCUM-12was származó aszcitesz kapcsolódó diffúz típusú gyomorrák, és OCUM-2MD3 sejtek egy lánya sejtvonal nagy potenciállal peritonealis metasztázis, hoztunk létre OCUM-2M sejtekbe orthotopikus tumor modell, a szülői sejtvonal ascites kapcsolódó diffúz típusú gyomorrák. A többi sejtvonalat nyert JCRB sejt bank (Osaka, Japán), vagy az American Type Culture Collection (Rockville, MD). A sejteket 37 ° C-on 21% O _{2 (normoxia), vagy 1% O 2 (hypoxia). Hipoxiás körülmények tartottuk fenn a moduláris inkubátor kamra (Hirasawa, Tokió, Japán), 5% -os CO 2 és 1% O 2 kiegyensúlyozott N 2 gáz. A táptalaj Dulbecco-féle módosított Eagle-tápközeg (DMEM; Nikken Bio., Osaka, Japán) 10% magzati borjúszérummal (Nichirei Bio.), 100 NE /ml penicillin (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml sztreptomicinnel (ICN Biomedicals) és 0,5 mM nátrium-piruvátot (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfológiai változások

Cancer sejteket normoxiás vagy hipoxiás körülmények között 24 órán át, és a sejt morfológiája volt megfigyelhető mikroszkopikusan. EMT-ben határozzák meg, amikor a sokszögű vagy orsó alakú találtak rákos sejtek fáziskontraszt-mikroszkóp alatt. A frekvencia a EMT értékeltük az arány a sokszög vagy orsó alakú sejtek valamennyi rákos sejtek; EMT sebesség = száma sokszög vagy orsó alakú sejtek /összes sejt × 100 (%).

hatásait a különböző oldható faktor morfológiai változások

hatását vizsgáltuk a különböző oldható faktorok , beleértve az EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF; R &D Systems, Minneapolis, MN), alap-FGF-t (Sigma, Saint Louis, MO), a vérlemezke -eredetű növekedési faktor BB homodimer (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFβ1 (king Brewing, Kakogawa, Japán), a morfológia a rákos sejtek. A sejteket DMEM-ben tenyésztjük, amely az egyik fenti tényezők a kívánt koncentrációban, 37 ° C-on normoxia. Sejtmorfológia vizsgáltuk 24 óra elteltével. Kísérleteket végeztünk az egyes tényezők, két példányban.

hatásai neutralizáló ellenanyagok morfológiai változások

Mi használt semlegesítő antitestek, mint például az anti-HGF antitest (Genzyme Techne, MPLS, MN, USA), anti-TGFp ellenanyaggal (R &D rendszerek), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &; D systems), anti-VEGFR3 (R &D rendszerek). A sejteket DMEM-ben tenyésztjük, amely az egyik fenti antitestek 100 pg /ml 37 ° C-hypoxia. Sejtmorfológia vizsgáltuk 24 óra elteltével.

hatása különféle phospholylation inhibitorok morfológiai változások

Miután a sejtek elérték félig torkolat, sejteket adtunk TGFp vagy két inhibitort, és inkubáltuk hipoxiás állapot vagy normoxia 24 órán át. Ezután morfológiai megállapítások vizsgáltuk, összehasonlítva a kontroll. Öt kis szintetikus phospholylation inhibitorok, Ki26894 (TGFβRI inhibitor, 10 jim; Kirin Pharma, Mishima, Japán), SB431542 (TGFβRI inhibitor, 10

• PLoS One: A Janus kináz 2 polimorfizmus társított kockázat a gyomorrákos betegeknél a kínai Population
• PLoS One: Több-to-Multiple közötti kapcsolatok mikroRNS és célgének Gyomor Cancer