PLOS ONE: La hipoxia estimula la EMT de células de cáncer gástrico a través de autocrina TGF Signaling

Extracto

transición epitelio mesénquima (EMT) se considera que se correlaciona con la malignidad de las células cancerosas y responsable de la invasión del cáncer y la metástasis. Hemos informado anteriormente de que la metástasis distante se asoció con la hipoxia en el cáncer gástrico. Por ello, investigó el efecto de la condición hipóxica en EMT de células de cáncer gástrico. células de cáncer gástrico fueron cultivadas en normoxia (21% O _{2) o hipoxia (1% O 2) durante 24 h. EMT se evaluó como el porcentaje de células en forma de huso en las células totales. Se evaluó el efecto de la transformación del factor de crecimiento β1 (TGFß1) o inhibidores de la tirosina quinasa en la EMT. El nivel de expresión de TGFß1
y TGFβR
fue evaluada por tiempo real RT-PCR. La producción de células de cáncer de TGFß1 se midió por ELISA. La hipoxia estimula la EMT de OCUM-2MD3 y OCUM-12 células, pero no la de las células OCUM-2M. El nivel de expresión de TGFß1
mRNA en condiciones de hipoxia fue significativamente más alto que bajo normoxia en todas las tres líneas celulares. El nivel de expresión de TGFβR
ARNm se incrementó significativamente por la hipoxia en las células OCUM-2MD3, pero no en las células OCUM-2M. inhibidor TGFβR, SB431542 o Ki26894, suprimió significativamente la EMT de OCUM-2MD3 y OCUM-12. TGFß1 la producción de OCUM-2MD3 y OCUM-12 células se incrementó significativamente en condiciones de hipoxia en comparación con los que en virtud de normoxia. Estos resultados podrían sugerir que la hipoxia estimula la EMT de células de cáncer gástrico a través de la señalización de TGF /TGFβR autocrina}

Visto:. Matsuoka J, M Yashiro, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Shinto O, et al. (2013) La hipoxia estimula la EMT de células de cáncer gástrico a través de autocrina TGF señalización. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10.1371 /journal.pone.0062310

Editor: Claudio M. Costa-Neto, Universidad de Sao Paulo, Brasil |

Recibido: 19 Octubre, 2012; Aceptado: March 19, 2013; Publicado: 17-may 2013

Derechos de Autor © 2013 Matsuoka et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por el Fondo Nacional del cáncer Centro de Investigación y Desarrollo (23-a-9), y por subvenciones-en Ayudas a la Investigación Científica (KAKENHI, Nos. 20591573, 22390262 y 23390329) del Ministerio de Educación, Ciencia, Deportes, Cultura y Tecnología de Japón. Los proveedores de fondos tenido ningún papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:. Los autores tienen los siguientes intereses. KS, TS, y AM son empleados de Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, que se utilizó en este estudio, es un producto de Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. No hay más patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados para declarar . Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en línea en la guía para los autores.

Introducción

transición epitelio mesénquima (EMT) se caracteriza por los cambios en la morfología celular en el que las células epiteliales adquieren propiedades mesenquimales mientras que la pérdida interacciones célula-célula y la polaridad apicobasal [1], [2]. En los cánceres epiteliales, EMT es reconocido como uno de los mecanismos responsables de iniciar los comportamientos invasivos y metastásicos [3] - [5]

Existe un ambiente hipóxico en algunas regiones de cánceres sólidos que muestran un rápido crecimiento debido a la angiogénesis. en carcinomas es heterogénea [6]. La hipoxia se considera que está asociado con fenotipos tumorales agresivas de carcinomas gástricos [7], [8], incluyendo la capacidad metastásica de las células cancerosas [6], [9]. Los datos clínicos y experimentales también proporcionan evidencia de una asociación entre el ambiente hipóxico y mal pronóstico [10], [11]. Por tanto, es importante para el futuro desarrollo de tratamientos contra el cáncer para aclarar el mecanismo de la metástasis inducida por hipoxia.

Se ha informado de que diversos factores solubles, incluyendo factor de crecimiento transformante-β1 (TGFß1) [12], [ ,,,0],13], factor de crecimiento epidérmico (EGF) [14], similar a la insulina factor-1 de crecimiento (IGF1) [15], factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) [16], factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) [17] se correlacionaron con EMT . señales de TGF tienen un papel importante en varios aspectos de la diseminación metastásica de las células cancerosas, como la migración, invasión y EMT [12], [13]. Los ligandos se unen a TGF TGF receptor de tipo II (TGFβRII), que luego forma un complejo con cualquiera de los tipos TGFβR I o II. TGFβR tipo I (TGFβRI) transmite señales dentro de la célula a través de segundos mensajeros proteínas Smad [13], [18]. señales descendentes se propagan a través TGFβRI, que fosforila proteínas Smad regulados por el receptor [19], [20]

Varios estudios han informado de que una condición de hipoxia puede inducir la EMT de las células del cáncer [21] - [24]., pero el mecanismo molecular responsable de EMT en una condición hipóxica sigue siendo poco clara. Por ello, investigó el efecto de la hipoxia sobre las características morfológicas de las células de cáncer gástrico para aclarar los mecanismos responsables de la EMT inducida por hipoxia.

Materiales y Métodos

Cultivo de células y líneas celulares

se utilizaron siete líneas celulares de cáncer gástrico. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], y MKN-45 [29] se derivaron de carcinoma gástrico de tipo difuso. MKN-74 [29] y MKN-7 [29] se obtuvieron a partir de tipo intestinal. OCUM-2M, OCUM-2MD3 y OCUM-12 fueron Establised en nuestro laboratorio, como se informó anteriormente [25] - [27]. Brevemente, OCUM-12was derivados de ascitis asociados con carcinoma de tipo difuso gástrico, y las células OCUM-2MD3, una línea de células hija con alto potencial de metástasis peritoneal, se establecieron a partir de células OCUM-2M utilizando el modelo de tumor ortotópico, una ascitis línea celular parental asociado con carcinoma gástrico de tipo difuso. Las otras líneas celulares se obtuvieron del banco celular JCRB (Osaka, Japón) o de la American Type Culture Collection (Rockville, MD). Las células se cultivaron a 37 ° C en 21% O _{2 (normoxia) o 1% O 2 (hipoxia). condiciones de hipoxia se mantuvieron usando una cámara Inkubator (Hirasawa, Tokio, Japón) con un 5% de CO 2 y 1% de O 2 equilibrada con N 2 de gas. El medio de cultivo consistía en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM;. Nikken Bio, Osaka, Japón) con suero bovino fetal 10% (. Nichirei Bio), 100 UI /ml de penicilina (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 g /ml de estreptomicina (ICN Biomedicals), y piruvato de sodio 0,5 mM (Cambrex, Walkersville, MD).}

cambios morfológicos

Las células cancerosas se cultivaron en condiciones de normoxia o condiciones de hipoxia durante 24 h, y la morfología celular se observó microscópicamente. EMT se determinó cuando la forma poligonal o husillo se encuentra en las células cancerosas al microscopio de contraste de fase. La frecuencia de EMT se evaluó por la tasa de células poligonales o en forma de huso en todas las células cancerosas; tasa de EMT = el número de células de forma poligonal o de husillo /número total de células x 100 (%).

Efectos de diversos factores solubles sobre los cambios morfológicos

Hemos examinado los efectos de diversos factores solubles , incluyendo EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro Tec), factor de crecimiento celular endotelial vascular (VEGF; R & D Systems, Minneapolis, MN), básico-FGF (Sigma, Saint Louis, MO), plaquetas factor de crecimiento -derivado BB homodímero (PDGF-BB; Pepro Tech), HGF (Pepro Tech), TGFß1 (king Brewing, Kakogawa, Japón), en la morfología de las células cancerosas. Las células se cultivaron en DMEM que contiene uno de los factores anteriores a la concentración requerida a 37 ° C en normoxia. La morfología celular se examinó después de 24 h. Los experimentos se realizaron para cada factor por duplicado.

Efectos de anticuerpos neutralizantes en los cambios morfológicos

usado anticuerpos neutralizantes, tales como anti-HGF (Genzyme techne, MPLS, MN, EE.UU.), anticuerpo anti-TGF (R & D Systems), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (amp I +; D Systems), anti-VEGFR3 (R & D Systems). Las células se cultivaron en DMEM que contiene uno de los anticuerpos anteriores en 100 g /ml a 37 ° C en la hipoxia. La morfología celular se examinó después de 24 h.

Efecto de varios inhibidores phospholylation sobre los cambios morfológicos

Después de las células alcanzaron la semi-confluencia, se añadieron las células a TGF o cada inhibidor y se incubaron en condiciones de hipoxia o normoxia por 24 h. Entonces, los hallazgos morfológicos fueron examinados en comparación con el control. Cinco inhibidores phospholylation pequeña sintéticos, Ki26894 (inhibidor TGFβRI, 10 mM; Kirin Pharma, Mishima, Japón), SB431542 (inhibidor TGFβRI, 10 mM; Sigma, Saint Louis, MO), Sunitinib (SU11248, 20 nM; un inhibidor de la tirosina quinasa contra VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 y FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (FGF /VEGF receptor inhibidor de la tirosina quinasa, 5 nM; Santa Cruz, CA), Lapatinib (GW572016, 10 nM; una tirosina kinasa inhibidor contra EGFR y ErbB2, Toronto investigación de Sustancias Químicas), y PHA665752 (c-MET inhibidor, 2 M;. se utilizaron Pfizer, San Diego, CA, EE.UU.)

cuantitativo en tiempo real de la polimerasa con transcriptasa inversa reacción en cadena (RT-PCR)

RT-PCR cuantitativa se realizó para examinar TGFß1
, TGFβRI, TGFβRII de búsqueda y expresiones vimentina
ARNm. Las células cancerosas se incubaron en condiciones de normoxia y en condiciones de hipoxia durante 24 h. Después de la incubación, el ARN celular total se extrajo usando el reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA) según las instrucciones del fabricante. Después de la eliminación del ADN genómico por DNasa, cDNA se preparó a partir 2 g de ARN con virus de leucemia de ratón Maloney transcriptasa (Invitrogen) utilizando cebadores aleatorios (Invitrogen) revertir. Para determinar los cambios veces en cada gen, en tiempo real RT-PCR se realizó en el ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), utilizando comercialmente disponibles de genes ensayos de expresión de TGFß1 gratis (Hs00998130,), TGFβRI gratis (Hs00610319), TGFβRII gratis (Hs00559661), vimentina gratis (Hs00958116), torcedura gratis (Hs01675818), ZEB1
(Hs 00232783), Snail 1 gratis (Hs00195591), VEGFA gratis (Hs00900055). PCR se realizó a 95 ° C durante 15 s y 60 ° C durante 60 s durante 40 ciclos. deshidrogenasa gliceraldehído-3-fosfato (GAPDH) se utilizó como estándar interno para normalizar los niveles de ARNm para las diferencias en concentración de la muestra y la carga. Doblar los cambios en la expresión de cada ARNm diana con respecto a GAPDH se calculó basándose en el ciclo umbral (Ct) como 2 ^{-Δ (Ct), donde Ct = Ct Ct GAPDH y determinada por los objetivos Δ (Ct) = Ct _{hipoxia? Ct normoxia. Cuantitativos reacciones de PCR se realizaron por triplicado.}}

Western El análisis de transferencia

Para examinar el efecto de la hipoxia sobre la fosforilación de Smad2, las células cancerosas se incubaron en condiciones de normoxia o condiciones de hipoxia durante 24 h, respectivamente. Las células se lisaron en un tampón de lisis, y las alícuotas que contienen 50 mg de proteína total se sometieron a electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio; las bandas de proteínas se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno (Millipore, Billerica, MA). La membrana se incubó en TBS-T (TBS 10 mM y 0,05% de Tween 20) suplementado con 5% de albúmina no grasa de leche o 5% bovina (Sigma) a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la membrana se colocó en una solución de TBS-T que contiene el anticuerpo primario p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000; Cell Signaling Technology) o Smad2 /3 (1: 1000; Cell Signaling Technology), La vimentina (1: 1000; Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000; Sigma) y se dejó reaccionar a 4 ° C durante la noche. Entonces, cada anticuerpo se lavó tres veces con TBS-T durante 10 min, y un anticuerpo secundario marcado con peroxidasa (GE Healthcare, Buckinghamsire, Reino Unido) reactivo con se añadió el anticuerpo primario. Las bandas se detectaron utilizando un sistema de quimioluminiscencia (Wako, Osaka, Japón).}

ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

La producción TGFß1 de las células cancerosas se midió mediante una enzima cuantitativos sándwich técnica de inmunoensayo usando un kit Quantikine humano TGFß1 ELISA, de acuerdo con la instrucción del fabricante de (R & D Systems). Se incubaron las células cancerosas en condiciones de hipoxia o normoxia durante 24 h, a continuación, el medio se reemplazó con 3 ml de DMEM libre de suero. Las células se incubaron en condiciones de hipoxia o normoxia, por 24 h adicionales. Se recogió medio condicionado (CM) a partir de cada plato y se centrifugó a 1000 g
por 5 min. TGFß1 nivel de CM libre de suero se midió usando el kit de ELISA. ELISA detecta tanto el TGF activa y latente.

El análisis estadístico

Las comparaciones entre conjuntos de datos se hicieron con de Student t-test
o la prueba de Kruskal-Wallis ANOVA de una vía por filas seguido de la prueba de comparación múltiple de Dunn. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas cuando el valor de p fue. ≪ 0,05

Resultados

Efectos de la hipoxia sobre la morfología de las células cancerosas

Una condición hipóxica aumentó significativamente el número de de células poligonales o en forma de huso sometidos a EMT entre OCUM-2MD3 o OCUM-12 células, pero no entre OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, o las células KATO-III (Fig. 1A y Fig. S1). La morfología de las células de OCUM-2MD3 y OCUM-12 comenzó a cambiar después de 4 h en la cultura hipóxica. Después de 12 horas de cultivo, una mayor tasa de EMT se observó en ambas líneas celulares. La tasa de EMT de la OCUM-2MD3 y OCUM-12 células fue mayor a las 24 h de cultivo hipóxico (fig. 1B). Dado que los cambios morfológicos fueron evidentes a las 24 h de la cultura en condiciones de hipoxia, se analizaron los mecanismos moleculares de la EMT a las 24 h de cultivo bajo condiciones de hipoxia utilizando OCUM-2MD3, OCUM-12, y OCUM-2M células.

Efectos de diversos factores de crecimiento sobre la morfología celular de cáncer de

factores solubles se utilizaron a concentraciones de 10 ó 100 ng /ml. OCUM-2MD3 y OCUM-12 células se hicieron en forma de huso después de la adición de TGFß1 o HGF, pero no después de la adición de EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF o PDGF-BB después de 24 h bajo normoxia (Tabla 1). En contraste, las células OCUM-2M no mostraron cambios morfológicos después de la adición de ningún factor (Fig. 2).

Efectos de anticuerpos neutralizantes sobre la morfología de células de cáncer en condiciones de hipoxia

EMT inducida por hipoxia se parcialmente inhibido por el anticuerpo anti-TGF-β1 a 100 mg /ml, pero no por anti-HGF anticuerpo (Tabla 2).

Efectos de la hipoxia en TGFß1
, TGFβRI
y TGFβRII
la expresión del ARNm de las células de cáncer gástrico

El nivel de expresión de TGF
fue significativamente (p < 0,001) aumentó en condiciones de hipoxia en todas OCUM -2MD3, OCUM-12, y OCUM-2M células, en comparación con el nivel bajo normoxia (Fig. 3A). Los niveles de expresión de TGFβRI
y TGFβRII
aumentaron significativamente bajo una condición de hipoxia en las células OCUM-2MD3. En contraste, los niveles de TGFβR1
y TGFβR2
expresión se redujo significativamente bajo una condición de hipoxia en células OCUM-2M (Fig. 3B).

Efecto de la hipoxia sobre la producción TGFß1 libera de las células de cáncer gástrico

La producción TGFß1 de OCUM-2MD3 y OCUM-12 células fue significativamente (p < 0,001) aumentó en condiciones de hipoxia en comparación con la normoxia, pero no la de células OCUM-2M (Figura 3C. ).

Efectos de la hipoxia en Smad2 fosforilación de líneas celulares de cáncer gástrico

en OCUM-2MD3 y OCUM 12 células, la fosforilación de Smad2 se incrementó en condiciones de hipoxia, en comparación a los indicados en normoxia condición. Por el contrario, la fosforilación de Smad2 no se incrementó bajo una condición de hipoxia en las células OCUM-2M (Fig. 4).

Efectos de los inhibidores de la fosforilación de la quinasa de la EMT y la expresión de vimentina en hipoxia

Cualquiera de las inhibidores de la fosforilación TGFβR, Ki26894 y SB431542, inhiben los cambios morfológicos de OCUM-2MD3 y 12 OCUM células bajo una condición de hipoxia, pero otros tres inhibidores, lapatinib, sunitinib, y PHA665752, no lo hicieron (Figura 5A, 5B). Por otra parte, ninguno de los inhibidores tiene algún efecto en la morfología de OCUM-2MD3 y OCUM-12 células bajo normoxia (datos no mostrados). El nivel de expresión de vimentina
, que se utilizó como un marcador de EMT, se incrementó significativamente por la hipoxia, y se redujo en cualquiera de los inhibidores de TGFβR Ki26894 y SB431542 (Figura 5C). nivel de proteína vimentina también se incrementó en condiciones de hipoxia, y se redujo en cualquiera de los inhibidores de TGFβR Ki26894 y SB431542 (Figura 5D).

Efectos de las condiciones hipóxicas en los factores asociados con la EMT.

hipóxico aumentó significativamente la condición VEGF-a
nivel de ARNm en OCUM-2M, OCUM-2MD3, y OCUM-12 células. El nivel de expresión de torcedura
o ZEB1
se incrementó de manera significativa por la hipoxia en OCUM-2MD3 y OCUM-12 células, pero se redujo en las células OCUM-2M. El aumento de la expresión de torcedura
o ZEB1
se redujo en cualquiera de los inhibidores de TGFβR Ki26894 y SB431542 en OCUM-12 células. condiciones hipóxicas no afectó en el nivel de expresión de Snail 1 gratis (Figura 6).

Discusión

Recientemente, varios estudios han informado de que un microambiente que rodea las células hipóxicas de tumores sólidos podría contribuir a la progresión del cáncer [30] - [34]. Sin embargo, los mecanismos moleculares responsables de la progresión del cáncer en la hipoxia no están claros. Se ha informado de que la hipoxia es uno de los factores desencadenantes de EMT [35]. En el presente estudio, un EMT condición hipóxica inducida en las líneas celulares de cáncer gástrico de tipo difuso OCUM-2MD3 y OCUM-12, pero no en las células de tipo intestinal. cáncer gástrico de tipo difuso se caracteriza por la malignidad más alto que el cáncer gástrico de tipo intestinal [36]. El potencial de EMT de las células cancerosas en condiciones de hipoxia podría ser una de las razones para el elevado potencial maligno del cáncer gástrico de tipo difuso.

Muchos estudios han informado de que varias moléculas podrían afectar EMT de las células cancerosas, incluyendo TGF [23 ], [37], EGF [38], y PDGF [39]. En el presente estudio, TGF estimulada EMT de OCUM-2MD3 y OCUM-12 células, pero EGF y PDGF no lo hizo. Además, la inducción de EMT en condiciones de hipoxia se redujo significativamente por anti-TGF anticuerpos neutralizantes o inhibidores de fosforilación TGFβR tanto en OCUM-2MD3 y OCUM-12 células. Tomados en conjunto, estos resultados indican que el nivel de producción de TGF en células de cáncer, fue significativamente superior en condiciones de hipoxia, y los niveles de expresión de TGFβR y la fosforilación de Smad2 se incrementaron por la hipoxia. La vimentina es un componente característico de células mesenquimales y no se expresa normalmente en células epiteliales. Debido a que la expresión de vimentina
en las células epiteliales juega un papel esencial en la EMT a través de la interacción con la actina y otros filamentos intermedios [40], la vimentina se utilizó como un marcador de EMT en este estudio. El nivel de expresión de vimentina
se incrementó significativamente por la hipoxia, y se redujo en los Inhibidores de la fosforilación TGFβR Ki26894 y SB431542. Estos resultados sugirieron que EMT bajo una condición de hipoxia se asocia con la autocrina TGF /TGFβR de señalización en el cáncer gástrico de tipo difuso. Varios estudios informaron las correlaciones entre EMT y TGF señalización en la hipoxia. [2], [21], [23], [32], [37] En el cáncer gástrico, se ha informado de que la EMT se correlaciona con la malignidad de las células cancerosas y responsable de la invasión del cáncer y la metástasis. Sin embargo, los mecanismos responsables de EMT de células de cáncer gástrico no están claros. En este trabajo se aclaró que la EMT de células de cáncer gástrico fue inducida a través de la señalización TGF en condiciones de hipoxia. inhibidores TGFβR pueden por lo tanto ser agentes prometedores para el tratamiento de la metástasis del cáncer gástrico.

La hipoxia estimula la EMT de las células OCUM-2MD3, pero no la de las células OCUM-2M. EMT se ha implicado en la promoción de la invasión del cáncer y la metástasis. Mientras OCUM-2MD3 es una línea celular "hija" de OCUM-2M [25], [34], las células OCUM-2MD3 tienen mayor potencial de metástasis en el peritoneo de ratones desnudos que las células OCUM-2M [25], [34] . Las células cancerosas gratuitas para migrar en la cavidad peritoneal están expuestos a la hipoxia debido a la falta de un recipiente de alimentación proximal [41]. El nivel de expresión de TGFß1
mRNA en condiciones de hipoxia fue significativamente más alto que bajo normoxia en las tres líneas celulares. Por el contrario, el nivel de expresión de TGFβRI
y TGFβRII
ARNm se incrementó significativamente por la hipoxia en las células OCUM-2MD3, pero no en las células OCUM-2M. Las diferentes respuestas de los TGFβR
expresión entre normoxia e hipoxia podría ser una de las razones clave para la EMT inducida por hipoxia. Hemos informado anteriormente de que las células de cáncer gástrico en condiciones de hipoxia mostraron EMT y altas actividades migratorias e invasivas en comparación con las células cancerosas en normoxia [34]. La sobre regulación de la EMT de las células cancerosas hipóxicas podría ser una de las razones para el mayor potencial para la metástasis en el peritoneo en las células OCUM-2MD3 comparación con las células OCUM-2M.

condición hipóxica aumentó significativamente el nivel de expresión de torcedura
y ZEB1 Hoteles en OCUM-2MD3 y OCUM-12 células, pero no en las células que OCUM-2M. El aumento de la actividad de la hipoxia- torcedura
y ZEB1
expresión se redujo con inhibidores TGFβR (Ki26894 y SB431542) en OCUM-12 células. EMT en la hipoxia podría ser regulada en parte por factores de transcripción, torcedura
y ZEB1.

A pesar de que el HGF afectó la morfología de las células de cáncer en OCUM-2MD3 y 12 OCUM células, hipoxia inducida EMT no fue inhibida por anti-HGF anticuerpo neutralizante o un inhibidor de c-Met en cualquiera OCUM-2MD3 o OCUM-12 células. la producción de HGF no se detectó en OCUM-2MD3 o OCUM-12 células bajo ya sea la hipoxia y normoxia (datos no mostrados). La mayoría de HGF se deriva de las células del estroma en el cáncer gástrico [42]. Mientras HGF podría no jugar un papel importante para EMT inducida por hipoxia, HGF podría estimular la EMT de las células cancerosas a través de la interacción con el cáncer estromal.

El EMT inducida por hipoxia de las células OCUM-2MD3 fue inhibida en parte por inhibidores TGFβR , pero varios otros inhibidores, incluyendo inhibidores de c-Met, inhibidor de PDGF, un inhibidor de EGFR, y el inhibidor de VEGFR, no tuvieron efecto sobre la EMT inducida por hipoxia en este estudio. Estos hallazgos sugieren que otro factor (s) podría estar asociado con EMT inducida por hipoxia en algunas células cancerosas. En futuros estudios, será necesario examinar otros nuevos factores que pueden alterar la morfología del cáncer
.

En conclusión, el autocrina TGF /TGFβR señalización en condiciones de hipoxia podría ser uno de los factores asociados con el fenotipo agresivo de la EMT en células de carcinoma gástrico. inhibidores de la señalización TGF /TGFβR parecen ser terapéuticamente prometedora en el cáncer gástrico.

Información de Apoyo
figura S1.
cambios morfológicos de las células gástricas bajo una condición de hipoxia. En MKN-7, MKN-45, MKN-74, y Kato-III, no se observaron cambios morfológicos en condiciones de hipoxia
doi:. 10.1371 /journal.pone.0062310.s001 gratis (TIF)

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