PLoS ONE: Hipoksija skatina skrandžio vėžio ląstelių EMT per autokrining TGFβ Signaling

Anotacija

epitelio mezenchiminių perėjimas (EMT) laikomas koreliuoja su piktybinių vėžinių ląstelių ir atsako už vėžio invazijos ir metastazių. Mes anksčiau pranešė, kad tolimas metastazių buvo susijęs su hipoksija skrandžio vėžio. Todėl tyrė hipoksinio būklės poveikį EMT skrandžio vėžio ląsteles. Skrandžio vėžio ląstelės buvo auginamos normoxia (21% O _{2) arba hipoksija (1% O 2) 24 val. EMT buvo įvertintas kaip verpstės formos ląstelių procentais iš viso ląstelių. buvo įvertintas poveikis keičia augimo faktoriaus β1 (TGFβ1) arba tirozino kinazės inhibitorių, dėl EMT. Sąvoka lygis TGFβ1 parsisiųsti ir TGFβR
buvo įvertintas realiu laiku RT-PGR. TGFβ1 gamyba iš vėžinių ląstelių buvo matuota naudojant ELISA. Hipoksija skatino EMT iš OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, bet ne kad OCUM-2M ląsteles. Sąvoka lygis TGFβ1
mRNR pagal hipoksija buvo reikšmingai didesnis, negu nustatyta pagal normoxia į visus tris ląstelių linijų. Sąvoka lygis TGFβR
iRNR buvo žymiai padidėjęs hipoksija į OCUM-2MD3 ląsteles, bet ne OCUM-2M ląsteles. TGFβR inhibitorius, SB431542 arba Ki26894, reikšmingai slopino EMT iš OCUM-2MD3 ir OCUM-12. TGFβ1 gamyba iš OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių buvo žymiai padidėjęs pagal hipoksija, palyginti su pagal normoxia. Šie duomenys gali manyti, kad hipoksija stimuliuoja skrandžio vėžio ląsteles per autokrino TGFβ /TGFβR signalizacijos EMT}

nurodomoji dalis:. Matsuoka J Yashiro, M, Doi Y Fuyuhiro Y Kato Y Sintoistas P et al. (2013) Hipoksija stimuliuoja skrandžio vėžio ląstelių EMT per autokrining TGFβ signalizacijos. PLoS ONE 8 (5): e62310. Doi: 10,1371 /journal.pone.0062310

redaktorius: Claudio M. Kosta-Neto universiteto San Paulas, Brazilija

Įstojo: Spalio 19, 2012; Priėmė: Kovo 19, 2013 m Paskelbta: Gegužės 17, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Matsuoka et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas buvo iš dalies remiamą nacionalinio vėžio centro mokslinių tyrimų ir plėtros fondo (23-A-9), taip pat dotacijų-pagalbai moksliniams tyrimams (KAKENHI, Nr. 20591573, 22390262 ir 23390329) iš švietimo, mokslo ministerija, sportas, kultūra ir technologijos Japonijos. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų. Autoriai turi šias interesus. KS, TS, ir esu, yra darbuotojai Kyowa Hakko Kirin Ltd Ki26894, kuris buvo naudojamas šiame tyrime, yra Kyowa Hakko Kirin Co Ltd produktas Nėra papildomų patentų, produktų vystymo ar parduodama produktai deklaruoti , Tai nekeičia autorių laikytis visų PLoS ONE politikos dalijimosi duomenimis ir medžiagų, kaip nurodyta internete vadove autoriams.

Įvadas

epitelio mezenchiminių perėjimas (EMT) būdinga pokyčiai ląstelių morfologijos, per kurį epitelinės ląstelės įgyti mezenchiminių savybėmis, nes prarasti ląstelių-ląstelių sąveiką ir apicobasal poliškumą [1], [2]. Be epitelio vėžio, EMT yra pripažįstamas kaip vienas iš mechanizmų, atsakingų už veiksmų inicijavimą invazinių ir metastazavusiu elgesį [3] - [5]

kraujagyslių, hipoksinių aplinka egzistuoja kai kuriose kietosios vėžio, kurie rodo spartų augimą, nes regionuose angiogenezę. į karcinoma yra nevienalytė [6]. Hipoksija yra laikoma, kad būti susijęs su agresyvių naviko fenotipų skrandžio karcinoma [7], [8], įskaitant metastazavusio gebėjimas vėžinių ląstelių [6], [9]. Klinikiniai ir eksperimentiniai duomenys taip pat pateikti įrodymus, kad tarp hipoksinio aplinkos ir blogos prognozės [10] [11], asociacijos. Todėl svarbu, kad būsimos plėtros vėžio gydymo paaiškinti metastazių sukelto hipoksija mechanizmą.

Buvo pranešta, kad įvairios tirpios veiksnius, įskaitant transformuojantis augimo faktorius-β1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermio augimo faktoriaus (EGF) [14], į insuliną panašaus augimo faktoriaus-1 (IGF1) [15], fibroblastų augimo faktoriaus (FGF) [16], hepatocitų augimo faktoriaus (HGF) [17] buvo susijęs su EMT , TGFβ signalai turi svarbų vaidmenį įvairiais aspektais metastazavusio plisti vėžio ląstelių, tokių kaip migracijos, invazijos, ir EMT [12], [13]. Į TGFβ ligandų jungiasi prie TGFβ receptorių II tipo (TGFβRII), kuris sudaro kompleksus su bet TGFβR I arba II tipo. TGFβR I tipo (TGFβRI) perduoda signalus per ląstelę per antra Messenger SMAD baltymų [13], [18]. Tolesni signalai dauginami per TGFβRI, kuris fosforilina receptorių reguliuojama SMAD baltymus [19], [20]

Keletas tyrimų pranešė, kad kraujagyslių, hipoksinių sąlyga gali sukelti EMT vėžinių ląstelių [21] - [24]., bet molekulinės mechanizmas pagal hipoksinio būklės atsakingas už EMT lieka neaiškus. Todėl tyrė hipoksijos poveikį ant morfologiškai charakteristikas skrandžio vėžio ląstelių išsiaiškinti mechanizmus, atsakingus už hipoksija sukeltos EMT.

Medžiagos ir metodai

Mobilusis Kultūra ir ląstelių linijos

buvo naudojami septyni skrandžio vėžio ląstelių linijos. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO III [28], ir MKN-45 [29] buvo kilęs iš pasklidųjų tipo skrandžio karcinoma. MKN-74 [29] ir MKN-7 [29] buvo kilęs iš žarnyno tipą. OCUM-2M, OCUM-2MD3 ir OCUM-12 buvo įsteigtų mūsų laboratorijoje, kaip buvo pranešta anksčiau [25] - [27]. Trumpai tariant, OCUM-12was gautos iš ascitas, susijusių su difuzine tipo skrandžio karcinoma, ir OCUM-2MD3 ląstelių dukrą ląstelių linijos su dideliu potencialu peritoninės metastazių, buvo nustatytos iš OCUM-2M ląstelių naudojant orthotopic naviko modelis, tėvų ląstelių linija ascitas susijęs su difuzine tipo skrandžio karcinoma. Kiti ląstelių linijos buvo gauti iš JCRB ląstelių banko (Osaka, Japonija) arba American Type Culture Collection (Rockville, MD). Ląstelės buvo auginamos 37 ° C temperatūroje 21% O _{2 (normoxia) arba 1% O 2 (hipoksija). Hipoksinio sąlygos išliko naudojant modulinę inkubatorius kamerą (Hirasawa, Tokijas, Japonija) su 5% CO 2 ir 1% O 2 subalansuotas N 2 dujų. Kultūrinė terpė sudarė Dulbecco modifikuota Eagle terpė (DMEM;. Niko Bio Osaka, Japonija) su 10% vaisiaus galvijų serumo (. Nichirei Bio), 100 TV /ml penicilino (TKT Biomedicals, Kosta Mesa, Kalifornija), 100 g /ml streptomicino (TKT Biomedicals) ir 0,5 mM natrio piruvato (Cambrex, Walkersville MD).}

morfologiniai pokyčiai

vėžio ląstelės buvo auginamos pagal normoxic ar hipoksinės sąlygų 24 h, ir ląstelių morfologija buvo stebimas mikroskopu. EMT buvo nustatomas tuomet, kai daugiakampio formos arba suklys forma buvo nustatyta vėžinių ląstelių fazinio kontrasto mikroskopu. Iš EMT dažnis buvo vertinamas pagal daugiakampio arba verpstės formos ląstelių visų vėžinių ląstelių norma; EMT tarifas = iš daugiakampio arba suklio formos ląstelių skaičius /bendras ląstelių skaičius × 100 (%).

Efektai įvairių tirpių veiksnių morfologinis pokyčiai

išnagrinėjo įvairių tirpių veiksnių poveikį , įskaitant EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (Pepro TEC), kraujagyslių endotelio ląstelių augimo faktorius (VEGF; R & D sistemas, Minneapolis, MN) BASIC-FGF (Sigma, Saint Louis, MO), trombocitų -derived augimo faktoriaus BB homodimeras (PDGF BB; Pepro Technika) HGF (Pepro Technika) TGFβ1 (karalius alaus, Kakogawa, Japonija), nuo vėžinių ląstelių morfologija. Ląstelės buvo kultivuojamos DMEM, kurių sudėtyje yra vienas iš minėtų veiksnių tuo reikiamos koncentracijos 37 ° C temperatūroje, normoxia. Ląstelių morfologija buvo tiriama po 24 h. Eksperimentai buvo atliekami kiekvieno veiksnio dviem egzemplioriais.

Poveikis neutralizuojančių antikūnų apie morfologinis pokyčiai

Mes naudojome neutralizuojantys antikūnai, pavyzdžiui, anti-hgf antikūnų (Genzyme Techne, MPLS, MN, JAV) anti-TGFβ antikūnas (& D sistemos), anti-PDGF BB (Genzyme), anti-FGF7 (& D sistemos), anti-KEAFR 3 (R & D sistemos). Ląstelės buvo auginamos DMEM kurių sudėtyje yra vienas iš aukščiau antikūnai 100 mikrogramų /ml, esant 37 ° C temperatūroje, hipoksija. Ląstelių morfologija buvo tiriama po 24 h.

Poveikis įvairių phospholylation inhibitorių apie morfologinis pokyčiai

Po pasiekė pusiau santakoje ląstelių, ląstelės buvo įtraukta į TGFβ arba kiekviena inhibitorius, inkubuojami pagal hipoksinio būklę arba normoxia 24 h. Tada morfologiniai duomenys buvo analizuojami lyginant su kontrole. Penki nedidelio sintetiniai phospholylation inhibitoriai, Ki26894 (TGFβRI inhibitorius, 10 mkm; Kirin Pharma, Mishima, Japonija), SB431542 (TGFβRI inhibitorius, 10 mkm; "Sigma, Sent Luisas, Misūris), sunitinibo (SU11248, 20 nm; tirozino kinazės inhibitorius prieš VEGFR, PDGFR, c-KIT, FGFR2 ir FLT3, LKT laboratorijos, Šv talpą, MN) PD173074 (FGF /VEGF receptoriaus tirozino kinazės inhibitorius, 5 nm; Santa Krusas, Kalifornija), Lapatinibas (GW572016, 10 nM, A tirozino kinazės inhibitorius prieš EGFR ir ErbB2, Toronto mokslinių tyrimų cheminių medžiagų), ir PHA665752 (c-RER inhibitorius, 2 mkm;. "Pfizer", San Diegas, CA, JAV) buvo naudojami

Kiekybiniai realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininė reakcija (PGR)

Kiekybinė PGR buvo atliekama siekiant ištirti TGFβ1
TGFβRI, TGFβRII, parsisiųsti ir Vimentin
iRNR išraiškas. Vėžinės ląstelės buvo inkubuojami pagal normoxic sąlygomis ir pagal hipoksinių sąlygų 24 h. Po inkubacijos, bendras korinio RNR buvo išskirta naudojant Trizol reagentą (Invitrogen, Carlsbad, CA) pagal gamintojo instrukcijas. Pašalinus genomo DNR DNaze, kDNR buvo paruošti iš 2 mikrogramų RNR su Maloney pelės leukemijos viruso atvirkštinės transkriptazės (Invitrogen), naudojant atsitiktinius pradmenis (INVITROGEN). Norėdami nustatyti lenkimo pokyčius kiekvieno geno, realaus laiko PGR buvo atliekama ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), naudojant komerciškai prieinamas genų ekspresijos tyrimus, atlikti TGFβ1
(Hs00998130,), TGFβRI
(Hs00610319) TGFβRII
(Hs00559661) vimentin
(Hs00958116) Tvist
(Hs01675818) Zeb1
(Hs 00.232.783) Snail1
(Hs00195591) VEGFA
(Hs00900055). PGR buvo atliekama, esant 95 ° C temperatūroje 15 s ir 60 ° C temperatūroje 60 s 40 ciklų. Gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH) buvo naudojamas kaip vidinis etaloninis normalizuoti iRNR lygiui skirtumus mėginio koncentraciją ir pakrovimo. Sulenkite pokyčius kiekvienai tikslinei iRNR, palyginti su GAPDH išraiška buvo apskaičiuojamas remiantis slenkstinis ciklas (CT) kaip 2 ^{-Δ (ΔCt), kur ΔCt = Ct target- ct GAPDH ir Δ (ΔCt) = ΔCt _{hipoksija-ΔCt normoxia. Kiekybine PGR reakcijos buvo atliekami tris kartus.}}

Vakarų dėmė analizė

nagrinėjant hipoksijos poveikį Smad2 fosforilinimo, vėžinės ląstelės inkubuojamos pagal normoxic ar hipoksinės sąlygų 24 h, atitinkamai. Ląstelės buvo lizuojamos į lizės buferiniame tirpale, ir mėginiai, kurių sudėtyje yra 50 pg bendrųjų baltymų buvo atliktas natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės; baltyminiai juostos buvo perkeltas į polivinilideno difluoridą membranos ( "Millipore, BILLERICA, MA). Membrana buvo inkubuojami TBS-T (10 mM TBS ir 0,05% Tween 20), papildytoje su 5% ne-riebus pienas arba 5% jaučio serumo albuminas, (Sigma) kambario temperatūroje 1 val. Be to, membrana buvo dedamas į TBS-T tirpalas, kuriame yra pirminį antikūną p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000; Mobilusis signalines technologijos) arba Smad2 /3 (1: 1000; Mobilusis signalines technologijos), Vimentin (1: 1000; Cell Signaling technologija), anti-βactin (1: 1000; Sigma) ir leidžiama reaguoti esant 4 ° C naktį. Tada, kiekvienas antikūnas buvo tris kartus plaunamos TBS-T 10 min, ir peroksidazės-pažymėtas antrinis antikūnas ( "GE sveikatos priežiūros, Buckinghamsire, Jungtinė Karalystė) reaktyvus su buvo įtraukta pirminis antikūnas. Juostos buvo aptikta naudojant sustiprintą chemiliuminescencine sistemą (WAKO Osaka, Japonija).}

imunofermentinės analizės (IFA)

TGFβ1 gamyba iš vėžinių ląstelių buvo matuojamas kiekybinio sumuštiniai fermento imunologinė technika naudojant Quantikine žmogaus TGFβ1 ELISA rinkinys, pagal manufacturer`s instrukcija (R & D sistemos). Vėžinės ląstelės buvo inkubuojami pagal hipoksijos ir normoxia už 24 valandas, po to vidutinės buvo pakeistas iki 3 ml serumo neturinčioje DMEM. Ląstelės buvo inkubuotos pagal hipoksijos ir normoxia Be to, papildomų 24 h. Sąlyginis vidutinio (cm) buvo surinkta iš kiekvieno patiekalo ir centrifuguojamas 1000, G
5 min. TGFβ1 lygis serume nemokamai CM buvo matuojamas naudojant ELISA rinkinys. IFA aptikti tiek aktyvų ir latentinis TGFβ.

Statistinė analizė

palyginimai tarp duomenų rinkinių buvo su Studento , T
-test arba Kruskal-Wallis ANOVA iki gretos po Dunn anketa kelių palyginimo bandymas. skirtumai buvo statistiškai reikšmingi, kai P vertė buvo. < 0,05

Rezultatai

Poveikis hipoksija dėl vėžio ląstelių morfologija

kraujagyslių, hipoksinių būklė smarkiai išaugo skaičius daugiakampio arba verpstės formos ląstelių atliekama EMT tarp OCUM-2MD3 ar OCUM-12 ląstelių, bet ne tarp OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74 arba KATO-III ląstelių (pav. 1A ir pav. S1). Ląstelių morfologija OCUM-2MD3 ir OCUM-12 pradėjo keisti po 4 h, hipoksinio kultūrą. Po 12 h kultūros, padidėjęs norma EMT buvo matyti tiek ląstelių linijų. EMT norma OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių buvo didžiausias po 24 h hipoksinio kultūros (1b pav.). Kadangi morfologiniai pokyčiai buvo akivaizdūs po 24 h kultūros pagal hipoksija, molekulinius mechanizmus EMT buvo analizuojami 24 h kultūros pagal hipoksinės sąlygomis naudojant OCUM-2MD3, OCUM-12 ir OCUM-2M ląsteles.

poveikis įvairių augimo faktorių vėžio ląstelių morfologijos

Tirpios veiksniai buvo naudojama koncentracija yra 10 arba 100 ng /ml. OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių tapo verpstės formos po TGFβ1 ar HGF to, bet ne po EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF ar PDGF-BB to po 24 h pagal normoxia (1 lentelė). Priešingai, OCUM-2M ląstelės neparodė morfologinius pokyčius po to, bet kokius veiksnius, be (2 pav.).

Poveikis neutralizuojančių antikūnų vėžio ląstelių morfologija pagal hipoksija

EMT sukelta hipoksija buvo iš dalies slopina kovos su TGF-β1 antikūno 100 mikrogramų /ml, bet ne anti-hgf antikūnų (2 lentelė).

Poveikis hipoksija dėl TGFβ1
TGFβRI
ir TGFβRII
iRNR raiška skrandžio vėžio ląstelių

išraiška lygis TGFβ
buvo reikšmingai (p < 0,001) padidėjo po hipoksinio būklės visi OCUM -2MD3, OCUM-12, ir OCUM-2M ląstelės, palyginti su lygio pagal normoxia (3A pav.). Sąvoka lygiai TGFβRI parsisiųsti ir TGFβRII
buvo žymiai didesnis pagal hipoksinio būklės OCUM-2MD3 ląsteles. Priešingai, lygių, TGFβR1 parsisiųsti ir TGFβR2
išraiška buvo gerokai sumažėjo po hipoksinio būklės OCUM-2M ląstelių (pav. 3b).

poveikis hipoksija nuo TGFβ1 gamyba paleistas iš skrandžio vėžio ląstelių

TGFβ1 gamyba iš OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių buvo reikšmingai (p < 0,001) padidėjo po hipoksijos, palyginti su normoxia, bet ne tai, kad iš OCUM-2M ląstelių (pav 3C. ).

Poveikis hipoksija dėl Smad2 fosforilinimo skrandžio vėžio ląstelių linijų

OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, Smad2 fosforilinimas buvo padidintas pagal hipoksinio būklės, palyginti su pagal normoxic būklė. Priešingai, Smad2 fosforilinimo nebuvo padidintas pagal hipoksinio būklės OCUM-2M ląstelių (4 pav.).

Poveikis fosforilinimo kinazės inhibitorių apie EMT ir vimentin raiškos hipoksija

Bet iš TGFβR fosforilinimo inhibitoriai, Ki26894 ir SB431542, slopino morfologinius pokyčius OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių pagal hipoksinio būklės, tačiau kitos trys inhibitoriai, Lapatinibas, sunitinibo ir PHA665752, nebuvo (pav 5A, 5B). Kita vertus, nė vienas iš inhibitorių neturėjo jokio poveikio OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių morfologijos pagal normoxia (duomenys neparodyta). Sąvoka lygis vimentin
, kuris buvo naudojamas kaip EMT persekiotoją, buvo žymiai padidėjęs hipoksija ir sumažėjo arba iš TGFβR inhibitorių Ki26894 ir SB431542 (5C pav.) Vimentin baltymų lygis taip pat buvo padidintas pagal hipoksija ir sumažėjo arba iš TGFβR inhibitorių Ki26894 ir SB431542 (5d pav.)

Efektai hipoksinio būklės dėl veiksnių, susijusių su EMT.

hipoksinio būklė žymiai padidėjo, VEGF-A
iRNR lygio OCUM-2M, OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių. Sąvoka lygis Tvist
arba Zeb1
buvo žymiai padidėjęs hipoksija į OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, tačiau sumažėjo OCUM-2M ląsteles. Padidėjęs išraiška Twist
arba Zeb1
sumažėjo arba iš TGFβR inhibitorių Ki26894 ir SB431542 į OCUM-12 ląstelių. Hipoksinio būklė nebuvo paveikta dėl išraiškos lygį, Snail1
(6 pav.)

Diskusijos

Neseniai keli tyrimai pranešė, kad kraujagyslių, hipoksinių mikroaplinka aplinkinių kietojo naviko ląsteles galėtų prisidėti prie vėžio progresavimo [30] - [34]. Tačiau molekulinius mechanizmus atsakingi už vėžio progresavimo hipoksija lieka neaiški. Buvo pranešta, kad hipoksija yra vienas iš paleidiklius EMT [35]. Šioje tyrimą, kraujagyslių, hipoksinių būklė sukelta EMT į difuzinis tipo skrandžio vėžio ląstelių linijų OCUM-2MD3 ir OCUM-12, bet ne žarnyno tipo ląsteles. Difuzinis tipo skrandžio vėžys yra būdingas didesnis piktybinių navikų nei žarnyno tipo skrandžio vėžio [36]. EMT potencialas vėžinių ląstelių pagal hipoksija gali būti viena iš didelio piktybinio potencialo difuzinis tipo skrandžio vėžio priežasčių.

Daugelis tyrimų, pranešė, kad keletas molekulės gali turėti įtakos EMT vėžinių ląstelių, įskaitant TGFβ [23 ], [37], "EGF [38], ir PDGF [39]. Šioje studijoje, TGFβ skatino EMT iš OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, tačiau bendras EGF ir PDGF nebuvo. Be to, "EMT indukcija pagal hipoksinio būklės buvo žymiai sumažėjo anti-TGFβ neutralizuoti antikūną arba TGFβR fosforilinimo inhibitoriai tiek OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių. Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad gamybos lygis TGFβ į vėžio ląsteles žymiai padidėjo po hipoksijos ir ekspresijos lygis TGFβR ir Smad2 fosforilinimo buvo padidintos hipoksija. Vimentin yra būdinga sudedamoji dalis mezenchiminių ląstelių ir yra paprastai išreiškiamas ne epitelio ląstelių. Kadangi išraiška vimentin
į epitelio ląstelių vaidina svarbų vaidmenį EMT per sąveiką su aktino ir kitų tarpinių gijų [40], vimentin buvo naudojamas kaip EMT persekiotoją šiame tyrime. Sąvoka lygis vimentin
buvo žymiai padidėjęs hipoksija, ir buvo sumažintas pagal TGFβR fosforilinimo inhibitorių Ki26894 ir SB431542. Šie rezultatai rodo, kad EMT pagal hipoksinio būklė yra susijusi su autokrining TGFβ /TGFβR signalizacijos difuzinis tipo skrandžio vėžio. Keletas tyrimų pranešė tarp EMT ir TGFβ koreliacijas signalizacijos hipoksija. [2], [21], [23], [32], [37] skrandžio vėžio, tačiau jis buvo pranešė, kad EMT koreliuoja su piktybinių navikų vėžinių ląstelių ir atsakingas už vėžio invazija ir metastazių. Tačiau atsakingi už EMT skrandžio vėžio ląstelių mechanizmai lieka neaiški. Šiame dokumente paaiškinta, kad EMT skrandžio vėžio ląstelių buvo sukeltas per TGFβ signalizacijos pagal hipoksija. taip TGFβR inhibitoriai gali būti perspektyvus agentai skrandžio vėžio metastazių gydymo.

Hipoksija skatino EMT iš OCUM-2MD3 ląsteles, bet ne kad OCUM-2M ląsteles. EMT buvo susijęs skatinti vėžio invazijos ir metastazes. Nors OCUM-2MD3 yra "dukra" ląstelių linijoje OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 ląstelės turi didesnį potencialą metastazių į nuogas pelių, nei OCUM-2M ląstelių [25] pilvaplėvės [34] , Vėžinės ląstelės gali laisvai migruoti į pilvaplėvės ertmę yra veikiami hipoksija dėl to, kad proksimalinį padavimo laivo [41] trūkumo. Sąvoka lygis TGFβ1
mRNR pagal hipoksija buvo reikšmingai didesnis, negu nustatyta pagal normoxia visose ląstelių linijų trijų. Priešingai, sąvoka lygis TGFβRI parsisiųsti ir TGFβRII
iRNR buvo žymiai padidėjęs hipoksija į OCUM-2MD3 ląsteles, bet ne OCUM-2M ląsteles. Skirtingi atsakymai TGFβR
išraiška tarp normoxia ir hipoksija gali būti viena iš pagrindinių priežasčių, dėl hipoksijos sukeltos EMT. Mes anksčiau pranešė, kad skrandžio vėžio ląstelės pagal hipoksija parodė EMT ir didelės migracijos ir invazinių veiklą, palyginti su vėžio ląstelių normoxia [34]. Up-reguliavimas EMT hipoksinių vėžinių ląstelių gali būti viena iš aukštojo potencialo priežasčių metastazių į į OCUM-2MD3 ląstelių pilvaplėvės palyginti su OCUM-2M ląsteles.

hipoksinio būklė žymiai padidėjo išraiška lygį iš Twist parsisiųsti ir Zeb1
OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, bet ne kad OCUM-2M ląsteles. Hipoksija didinimo veikla, Tvist parsisiųsti ir Zeb1
išraiška sumažėjo su TGFβR inhibitoriais (Ki26894 ir SB431542) į OCUM-12 ląstelių. EMT į hipoksija gali būti iš dalies reglamentuoja transkripcijos veiksnių Tvist parsisiųsti ir Zeb1.

Nors HGF paveikė vėžinių ląstelių morfologija OCUM-2MD3 ir OCUM-12 ląstelių, hipoksija sukeltos EMT nebuvo slopinamas anti-HGF neutralizuoti antikūną arba c-met inhibitorių arba OCUM-2MD3 ar OCUM-12 ląstelių. HGF gamyba nebuvo aptikta OCUM-2MD3 ar OCUM-12 ląstelių pagal abiejų hipoksija ir normoxia (duomenys neparodyti). Dauguma HGF yra kilęs iš stromos ląstelių skrandžio vėžio [42]. Nors HGF gali ne vaidinti svarbų vaidmenį hipoksija sukeltos EMT, HGF gali skatinti EMT vėžinių ląstelių per vėžiu stromos sąveika.

hipoksija sukeltos EMT iš OCUM-2MD3 ląstelių buvo iš dalies slopina TGFβR inhibitorių , bet įvairūs kiti inhibitorių, taip pat c-Met inhibitoriaus, PDGF inhibitoriaus, EGFR inhibitorių, ir VEGFR inhibitoriaus, neturėjo jokio poveikio hipoksijos sukeltos EMT šiame tyrime poveikį. Šie rezultatai rodo, kad kitas veiksnys (-ai) gali būti susijęs su hipoksija-sukeltas EMT į kai kurių vėžio ląstelių. Be būsimoms studijoms, bus būtina išnagrinėti kitų naujų veiksnių, kurie gali keičia vėžio morfologijos.

Taigi, autokrining TGFβ /TGFβR signalizacijos pagal hipoksija gali būti vienas iš veiksnių, susijusių su agresyvaus fenotipas EMT į skrandžio karcinomos ląstelės. TGFβ /TGFβR signaliniai inhibitoriai atrodo terapiškai perspektyvus skrandžio vėžio.

Parama Informacija
pav S1.
morfologiškai pakito skrandžio ląstelėse, kurioms pritaikytas hipoksinio būklės. Be MKN-7, MKN-45, MKN-74 ir KATO-III, morfologiškai pakito nerasta pagal hipoksija
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF)

• PLoS ONE: Janus kinazės 2 Polimorfizmais, susijusio su rizikos pacientams, sergantiems skrandžio vėžio Kinijos gyventojų
• PLoS ONE: Keli iki Keli santykius tarp mikro RNR ir tikslinių genų skrandžio vėžio