Ploche ONE: Hypoxia Stimuluje EMT žalúdočných nádorových buniek cez autokrinný TGF Signaling

abstraktné

epitelové mezenchýme prechod (EMT), je považovaná za korelovať s malignitou rakovinových buniek a zodpovedný za rakoviny invázie a metastáz. Máme už bolo skôr oznámené, že vzdialené metastázy bolo spojené s hypoxiou u rakoviny žalúdka. Preto sme skúmali vplyv hypoxické podmienky, o EMT z buniek karcinómu žalúdka. Žalúdočné rakovinové bunky boli kultivované v normoxie (21% O _{2) alebo hypoxia (1% O 2) po dobu 24 hodín. EMT bola vyhodnotená ako percento buniek vretenovité celkových buniek. Účinok transformujúci rastový faktor (D1 TGFβ1) alebo inhibítory tyrozínkinázy na EMT bola hodnotená. Úroveň expresie TGFβ1 stroje a TGFβR
bola hodnotená v reálnom čase RT-PCR. Produkcia TGFβ1 z nádorových buniek bola meraná pomocou ELISA. Hypoxia stimulovali EMT z OCUM-2MD3 a OCUM-12 článkov, ale nie to OCUM-2M buniek. Hladina expresie TGFβ1
mRNA za hypoxia bola významne vyššia ako v normoxie vo všetkých troch bunkových línií. Hladina expresie TGFβR
mRNA bola významne zvýšená hypoxiou v OCUM-2MD3 buniek, ale nie v OCUM-2M buniek. TGFβR inhibítor, SB431542 alebo Ki26894, významne potlačené EMT z OCUM-2MD3 a OCUM-12. Výroba TGFβ1 z OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek bola významne zvýšená v hypoxii v porovnaní sa, že v rámci normoxie. Tieto zistenia naznačujú, že by mohli hypoxia stimuluje EMT z buniek karcinómu žalúdka cez autokrinný TGF /TGFβR signalizácia}

Citácia :. Matsuoka J, M Yashiro, Doi Y, Y Fuyuhiro, Kato Y, Shinto O, et al. (2013) hypoxia stimuluje EMT žalúdočné nádorových buniek cez autokrinný TGF signalizácie. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310

Editor: Claudio M. Costa-Neto, University of Sao Paulo, Brazília

prijatá: 19. októbra 2012; Prijaté: 19.března 2013; Publikované: 17.mája 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Táto štúdia bola podporená čiastočne National Cancer Center pre výskum a vývoj fondu (23-a-9), a granty pomôcka pre vedecký výskum (KAKENHI, č. 20591573, 22390262 a 23390329) od Ministerstva školstva, vedy, šport, kultúra a technológie v Japonsku. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

konkurenčnými záujmami :. Autori majú tieto záujmy. KS, TS, a AM sú zamestnancami spoločnosti Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. Ki26894, ktorý bol použitý v tejto štúdii, je produktom Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. nie sú k dispozícii žiadne ďalšie patenty, výrobky vo vývoji alebo výrobky uvádzané na trh vyhlásiť, , To však nič nemení priľnavosť jednotlivých autorov do všetkých politík ploche jeden na zdieľanie dát a materiálov, ako je podrobne uvedené v online príručke pre autorov.

Úvod

epitelové mezenchýme prechod (EMT) je charakterizovaný zmeny v bunkovej morfológii, v ktorom epitelové bunky získavajú vlastnosti mezenchymálnych pri strate interakcie bunka-bunka a apicobasal polaritu [1], [2]. V epiteliálnych rakovín, EMT je považovaný za jeden z mechanizmov zodpovedných za začatie invazívne a metastatické správania [3] - [5]

A hypoxické prostredie existuje v niektorých oblastiach pevných nádorov, ktoré vykazujú rýchly rast, lebo angiogenézy. v karcinómov je heterogénna [6]. Hypoxia sa považuje za spojená s agresívnym nádorových fenotypov žalúdočných karcinómov [7], [8], vrátane metastatického schopnosť nádorových buniek [6], [9]. Klinické a experimentálne údaje takisto poskytnúť dôkaz o spojení medzi hypoxické prostredia a zlou prognózou [10], [11]. Je preto dôležité pre budúci vývoj liečby rakoviny objasniť mechanizmus metastáz vyvolanej hypoxiou.

Bolo oznámené, že rôzne rozpustné faktory, vrátane transformujúci rastový faktor-D1 (TGFβ1) [12], [ ,,,0],13], epidermálny rastový faktor (EGF), [14], inzulínu podobný rastový faktor-1 (IGF1) [15], fibroblastový rastový faktor (FGF), [16], rastový faktor hepatocytov (HGF) [17] boli korelované s EMT , TGF signály majú významnú úlohu v rôznych aspektoch metastatického šírenia rakovinových buniek, ako je migrácia, invázia, a EMT [12], [13]. Že TGF ligandy sa viažu k receptoru typu TGF II (TGFβRII), ktorý potom tvorí komplex s jedným TGFβR typu I alebo II. Typ TGFβR I (TGFβRI) prenáša signály v bunke prostredníctvom druhých poslov proteíny Smäd [13], [18]. Následní signály sú šírené prostredníctvom TGFβRI, ktorý fosforyluje receptorom regulovaných proteíny Smäd [19] [20]

Niektoré štúdie uvádzajú, že hypoxia podmienka môže tiež vyvolať EMT rakovinových buniek [21] -. [24] ale molekulárnej mechanizmus zodpovedný za EMT v hypoxické podmienky, zostáva nejasná. Preto sme skúmali vplyv hypoxie na morfologické charakteristiky buniek karcinómu žalúdka objasniť mechanizmy zodpovedné za hypoxiou indukovanú EMT.

Materiály a metódy

Bunková kultúra Bunkové línie a

boli použité sedem rakovina žalúdka bunkové línie. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO-III [28], a MKN-45 [29] boli odvodené z karcinómu žalúdka difúzna typu. MKN-74 [29] a MKN-7 [29] boli odvodené z intestinálneho typu. OCUM-2M, OCUM-2MD3 a OCUM-12 boli usadenými v našom laboratóriu, ako bolo oznámené predtým [25] - [27]. Stručne povedané, OCUM-12was odvodené od ascites spojené s difúznou typu karcinómu žalúdka a OCUM-2MD3 buniek, dcéra bunkové línie s vysokým potenciálom peritoneálnej metastázy, boli stanovené z OCUM-2M buniek pomocou ortotopické modelu nádoru, rodičovský bunkové línie ascites spojená s karcinómom žalúdka difúznou typu. Ostatné bunkové línie boli získané z bunkovej banky JCRB (Osaka, Japonsko) a v American Type Culture Collection (Rockville, MD). Bunky boli kultivované pri 37 ° C v 21% O _{2 (normoxie) alebo 1% o 2 (hypoxia). Hypoxické podmienky boli udržiavané pomocou modulárny inkubátor komory (Hirasawa, Tokio, Japonsko) s 5% CO 2 a 1% O 2 v rovnováhe s N 2 plynu. Kultivačné médium pozostávalo z Dulbecco modifikovanom Eagle médiu (DMEM ,. Nikken Bio, Osaka, Japonsko) s 10% fetálnym hovädzím sérom (. Nichirei Bio), 100 IU /ml penicilínu (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml streptomycínu (ICN Biomedicals), a 0,5 mM pyruvátu sodného (Cambrex, Walkersville, MD).}

morfologické zmeny

Rakovinové bunky boli kultivované za normoxických a hypoxických podmienok po dobu 24 hodín, a bunková morfológia bol pozorovaný mikroskopom. EMT sa stanoví, keď sa polygonálne alebo vreteno tvar nájdený v rakovinových bunkách pomocou mikroskopu s fázovým kontrastom. Frekvencia EMT bola hodnotená na základe rýchlosti polygonálnych alebo vretenovité bunky vo všetkých rakovinových buniek; EMT rýchlosť = počet polygonálnych alebo vretena tvar buniek /celkový počet buniek x 100 (%).

Vplyv rôznych rozpustných faktorov na morfologické zmeny

skúmali účinky rôznych rozpustných faktorov vrátane EGF (korenie Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1 (korenie Tec), cievne rastový faktor endotelových buniek (VEGF R &D systems, Minneapolis, MN), základný FGF (Sigma, Saint Louis, MO), krvných doštičiek odvodil rastový faktor BB homodimer (PDGF-BB; korenie Tech), HGF (korenie Tech), TGFβ1 (kráľ Brewing, Kakogawa, Japonsko), na morfológiu rakovinových buniek. Bunky boli kultivované v DMEM obsahujúcim jednu z vyššie uvedených faktorov v požadovanej koncentrácii pri 37 ° C v normoxie. Bunková morfológia bola skúmaná po 24 hodinách. Experimenty sa vykonávali pre každý faktor v dvoch vyhotoveniach.

Účinky neutralizačných protilátok na morfologické zmeny

použitý neutralizačné protilátky, ako je anti-HGF protilátky (Genzyme Techne, MPLS, MN, USA), anti-TGF protilátky (R &D systems), anti-PDGF-BB (Genzyme), anti-FGF7 (R &D systems), anti-VEGFR3 (R &D systems). Bunky boli kultivované v DMEM obsahujúcim jednu z vyššie uvedených protilátok na 100 ug /ml pri 37 ° C v hypoxii. Bunková morfológia bola skúmaná po 24 hodinách.

Vplyv rôznych inhibítorov phospholylation na morfologické zmeny

Potom, čo bunky dosiahli semi-zhlukovania boli bunky pridané k TGF alebo každý inhibítora a inkubovať za hypoxických podmienok alebo normoxie po dobu 24 hodín. Potom, morfologické nálezy boli skúmané v porovnaní s kontrolou. Päť malých syntetické inhibítory phospholylation, Ki26894 (TGFβRI inhibítor, 10 uM, Kirin Pharma, Mishima, Japonsko), SB431542 (inhibítor TGFβRI, 10 uM, Sigma, Saint Louis, MO), Sunitinib (SU11248, 20 nM, inhibítor tyrozín kinázy proti VEGFR, PDGFR, c-kit, FGFR2 a FLT3, LKT Laboratories, St. Pail, MN), PD173074 (FGF /VEGF receptor inhibítor tyrozínkinázy, 5 nM, Santa Cruz, CA), lapatinib (GW572016, 10 nM, a inhibítor kinázy tyrozín proti EGFR a ErbB2, Toronto Research Chemicals), a PHA665752 (c-MET inhibítor, 2 uM;. Pfizer, San Diego, CA, USA) boli použité

kvantitatívnej real-time reverznej transkriptázy-polymeráza reťazová reakcia (RT-PCR)

Kvantitatívny RT-PCR bola vykonaná za účelom skúmať TGFβ1
TGFβRI, TGFβRII stroje a vimentin
mRNA výrazy. Rakovinové bunky boli inkubované za normoxických podmienok a za hypoxických podmienok po dobu 24 hodín. Po inkubácii sa celková bunková RNA bola extrahovaná za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, Carlsbad, CA) podľa inštrukcií výrobcu. Po odstránení genomickej DNA DNázy, cDNA bola pripravená zo 2 ug RNA s Maloney myšou vírusu leukémie reverznej transkriptázy (Invitrogen) s použitím náhodných primerov (Invitrogen). Ak chcete zistiť zmeny Preložte každý gén, real-time RT-PCR bola vykonaná na ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA) za použitia komerčne dostupné génovej expresie testy na TGFβ1
(Hs00998130,), TGFβRI
(Hs00610319), TGFβRII
(Hs00559661), vimentin
(Hs00958116), Twist
(Hs01675818), Zeb1
(Hs 00232783), Snail1
(Hs00195591), VEGF
(Hs00900055). PCR bola vykonaná pri teplote 95 ° C počas 15 s a 60 ° C počas 60 s po dobu 40 cyklov. Glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenázy (GAPDH) bol použitý ako vnútorný štandard pre normalizáciu hladín mRNA pre rozdiely v koncentrácii vzorky a nakladanie. Zložiť zmeny v expresii jednotlivých cieľovej mRNA vzhľadom k GAPDH bola vypočítaná na základe prahu cyklu (Ct) ako 2 ^{-Δ (ΔCt), kde ΔCt = Ct na ciele Ct GAPDH a Δ (ΔCt) = ΔCt _{hypoxiou ΔCt normoxie. Kvantitatívne PCR reakcie boli vykonané v troch opakovaniach.}}

Western blot analýza

Pre skúmanie účinku hypoxia na Smad2 fosforylácii, rakovinové bunky boli inkubované za normoxických a hypoxických podmienok po dobu 24 hodín, v danom poradí. Bunky boli lyžovanie v lyzačním pufri a alikvótne obsahujúce 50 ug celkového proteínu boli podrobené elektroforéze sodík dodecyl sulfát-polyakrylamidovom gélu; proteínové pásy boli prenesené na polyvinylidendifluoridovou membránu (Millipore, Billerica, MA). Bola membrána inkubovaná v TBS-T (10 mM TBS a 0,05% Tween 20) s prídavkom 5% odtučneného mlieka a 5% hovädzie albumín (Sigma) pri teplote miestnosti po dobu 1 hodiny. Potom sa membrána sa umiestni do roztoku TBS-T, obsahujúce primárnu protilátku p-Smad2 (Ser ^{465/467; 1: 1000, Cell Signaling Technology), alebo Smad2 /3 (1: 1000, Cell Signaling Technology), vimentin (1: 1000, Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000, Sigma) a nechala reagovať pri teplote 4 ° C cez noc. Potom sa každá protilátka bola trikrát premyje TBS-T počas 10 minút, a peroxidázou značené sekundárne protilátky (GE Healthcare, Buckinghamsire, Veľká Británia) reaguje s bola pridaná primárna protilátka. Tieto pásy boli detekované za použitia rozšírenej systému chemiluminiscencie (Wako, Osaka, Japan).}

enzyme-linked ImmunoSorbent assay (ELISA)

Výroba TGFβ1 z nádorových buniek bola meraná pomocou kvantitatívnej sendvičovej enzýmu imunologická metóda s použitím súpravy Quantikine ľudský TGFβ1 ELISA podľa inštrukcií Výrobca `(R &D systems). Rakovinové bunky boli inkubované za hypoxie alebo normoxie po dobu 24 hodín, potom sa médium nahradí sa 3 ml bezsérového DMEM. Bunky boli inkubované za hypoxie alebo normoxie, za ďalších 24 hodín. Podmienené médium (CM) bolo odobraté z každej misky, a centrifugovány pri 1000 g
po dobu 5 minút. Úroveň TGFβ1 sérového voľného CM bola meraná s použitím ELISA kitu. ELISA detekovaný aktívny aj latentný TGF.

Štatistická analýza

Porovnanie medzi dátovými súbory boli vyrobené s Študentský t
-test alebo Kruskal-Wallis jednosmerná ANOVA by radu nasleduje Dunna viacnásobného porovnávacieho testu. Rozdiely boli považované za štatisticky významné, pokiaľ bola hodnota P <. 0,05

Výsledky

Vplyv hypoxie na karcinóm morfológia

A hypoxické stav výrazne vzrástol počet polygonálne alebo vretenovité bunky prechádzajú EMT medzi OCUM-2MD3 alebo OCUM-12 buniek, ale nie medzi OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, alebo buniek KATO-III (viď obr. 1A a obr. S1). Bunková morfológia OCUM-2MD3 a OCUM-12 začala meniť po 4 hodinách v hypoxické kultúry. Po 12 hodinách kultivácie, zvýšená miera EMT bol pozorovaný u oboch bunkových línií. Miera EMT z OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek bol najvyšší u 24 h hypoxické kultúry (obr. 1b). Vzhľadom na to, že zmeny morfologické boli pozorovateľné po 24 hodinách kultivácie za hypoxia, že molekulárne mechanizmy EMT boli analyzované po 24 hodinách kultivácie za hypoxických podmienok použitia OCUM-2MD3, OCUM-12, a OCUM-2M bunky.

účinky rôznych rastových faktorov na nádorových buniek morfológiu

Rozpustné faktory boli použité v koncentrácii 10 alebo 100 ng /ml. OCUM-2MD3 a OCUM-12 bunky sa stali vretenovitého tvaru po pridaní TGFβ1 alebo HGF, ale nie po pridaní EGF, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF alebo PDGF-BB po 24 h pod normoxie (tabuľka 1). Na rozdiel od toho OCUM-2M bunky nevykazovali morfologické zmeny po pridaní všetkých faktorov (obr. 2).

Účinky neutralizačných protilátok na nádorových buniek morfológia za hypoxie

EMT vyvolanej hypoxiou sa čiastočne inhibovaná anti-TGF-D1 protilátky pri 100 ug /ml, ale nie anti-HGF protilátok (tabuľka 2).

Vplyv hypoxie na TGFβ1
, TGFβRI
a TGFβRII
mRNA expresie žalúdočných rakovinových buniek

úroveň prejavenia TGF
bol štatisticky významne (P 0,001) vzrástol na základe hypoxické podmienky, vo všetkých OCUM -2MD3, OCUM-12, a OCUM-2M bunky, v porovnaní s úrovňou podľa normoxie (obr. 3A). Hladiny expresie TGFβRI stroje a TGFβRII
boli výrazne zvýšené podľa hypoxické stavu v OCUM-2MD3 buniek. Na rozdiel od toho hladiny TGFβR1 stroje a TGFβR2
expresie sa významne znížili v hypoxické podmienky, v OCUM-2M buniek (obr. 3B).

Vplyv hypoxie na výroba TGFβ1 prepustený z žalúdočných rakovinových buniek

výroba TGFβ1 od OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek štatisticky významne (p nižšie ako 0,001) vzrástol za hypoxie v porovnaní s normoxie, ale nie tak z OCUM-2M buniek (obr 3C. ).

Vplyv hypoxie na Smad2 fosforylácie s rakovinou žalúdka bunkových línií

v OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek, Smad2 fosforylácie bola zvýšená na základe hypoxické stavu, v porovnaní so pod normoxické podmienka. Na rozdiel od toho Smad2 fosforylácie nebola zvýšená v hypoxické podmienky, v OCUM-2M buniek (Obr. 4).

Účinky inhibítorov fosforylácie kinázy na EMT a vimentin expresie v hypoxii

Každá z inhibítory TGFβR fosforylácie, Ki26894 a SB431542, inhibuje morfologické zmeny OCUM-2MD3 a OCUM 12 buniek v hypoxické stave, ale tri ďalšie inhibítory, Lapatinib, Sunitinib, a PHA665752, nie (obrázok 5A, 5B). Na druhej strane, žiadny z inhibítorov malo akýkoľvek vplyv na morfológiu OCUM-2MD3 a OCUM-12 bunkách pod normoxie (dáta nie sú uvedené). Hladina expresie vimentinu
, ktorý bol použitý ako marker, EMT bola významne zvýšená hypoxia, a bola znížená o jeden z inhibítorov TGFβR Ki26894 a SB431542 (obrázok 5C). Úroveň vimentin proteínov bola tiež zvýšená v hypoxia, a bola znížená o jeden z inhibítorov TGFβR Ki26894 a SB431542 (obrázok 5D).

Účinky hypoxické podmienky, na faktoroch spojených s EMT.

hypoxické podmienkou výrazne zvýšila VEGF-a
úrovni mRNA v OCUM-2M, OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek. Úroveň expresie Twist
alebo Zeb1
bola významne zvýšená hypoxiou v OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek, ale bola znížená v OCUM-2M buniek. Zvýšená expresia Twist
alebo Zeb1
bola znížená o jeden z inhibítorov TGFβR Ki26894 a SB431542 v OCUM-12 buniek. Hypoxická podmienka nebola ovplyvnená na úrovní expresie Snail1
(Obrázok 6).

Diskusia

V poslednej dobe niekoľko štúdií vyplýva, že hypoxické mikroprostredie obklopujúce pevnej nádorové bunky by mohli prispieť k rakovine progresie ochorenia [30] - [34]. Avšak molekulárne mechanizmy zodpovedné za progresiu rakoviny v hypoxii zostávajú nejasné. Bolo oznámené, že hypoxia je jedným zo spúšťačov pre EMT [35]. V tejto štúdii, je hypoxia stav indukovaný EMT v difúznej typu nádorových bunkových línií žalúdočné OCUM-2MD3 a OCUM-12, ale nie v črevnej typu buniek. Difúzny typ rakoviny žalúdka sa vyznačuje vyššou ako malignity karcinómu žalúdka intestinálneho typu [36]. EMT potenciálu rakovinových buniek za hypoxii môže byť jedným z dôvodov vysokej malígneho potenciálu difúzna typu rakoviny žalúdka.

Mnoho štúdií vyplýva, že niekoľko molekúl môže mať vplyv na EMT rakovinových buniek vrátane TGF [23 ], [37], EGF [38], a PDGF [39]. V tejto štúdii, TGF stimulované EMT z OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek, ale EGF a PDGF nie. Okrem toho, EMT indukcia v hypoxické podmienky, sa významne znížil o anti-TGF neutralizačných protilátok alebo inhibítory TGFβR fosforylácie v oboch OCUM-2MD3 a OCUM-12 buniek. Dohromady tieto výsledky ukazujú, že úroveň produkcie TGF v rakovinových bunkách bola významne zvýšená v hypoxia, a expresné hladiny TGFβR a Smad2 fosforylácie bola zvýšená hypoxiou. Vimentin je charakteristickým prvkom mezenchymálnych buniek, a je zvyčajne vyjadrená v epiteliálnych bunkách. Vzhľadom k tomu, výrazom vimentin
v epitelových bunkách hrá zásadnú úlohu v EMT prostredníctvom interakcie s aktínu a iné medziprodukty vlákien [40], vimentin bola použitá ako EMT marker v tejto štúdii. Hladina expresie vimentin
bola významne zvýšená hypoxia, a bola znížená o fosforylácie inhibítory TGFβR Ki26894 a SB431542. Tieto zistenia naznačujú, že EMT v hypoxické podmienky, je spojená s autokrinný TGF /TGFβR signalizáciu v difúznej typu rakoviny žalúdka. Niekoľko štúdií hlásené korelácia medzi EMT a TGF signalizácie v hypoxii. [2], [21], [23], [32], [37] v karcinómu žalúdka, sa uvádza, že je v korelácii s EMT malignity nádorových buniek a zodpovedný za rakoviny invázie a metastáz. Avšak mechanizmy zodpovedné za EMT z buniek karcinómu žalúdka zostávajú nejasné. Tento dokument jasne uvedené, že EMT rakovinových buniek žalúdka bola vyvolaná pomocou TGF signalizačných pod hypoxie. inhibítory TGFβR by preto mohla byť sľubné činidlá pre liečbu žalúdočných nádorových metastáz.

hypoxiou stimulované EMT z OCUM-2MD3 buniek, ale nie to OCUM-2M buniek. EMT bol zapletený v podpore inváziu rakovinových buniek a metastáz. Kým OCUM-2MD3 je "dcérou" bunková línia OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 bunky majú väčší potenciál pre metastázy do pobrušnice u nahých myší než OCUM-2M buniek [25], [34] , Rakovinové bunky bez migrovať do peritoneálnej dutiny sú vystavené hypoxie v dôsledku nedostatku kŕmení proximálnej nádoby [41]. Hladina expresie TGFβ1
mRNA za hypoxia bola významne vyššia ako v normoxie vo všetkých troch bunkových línií. Naproti tomu hladina expresie TGFβRI stroje a TGFβRII
mRNA bola významne zvýšená hypoxiou v OCUM-2MD3 buniek, ale nie v OCUM-2M buniek. Rozdielne odpovede TGFβR
výraz medzi normoxie a hypoxia by mohla byť jedným z hlavných dôvodov pre EMT hypoxiou indukovanú. Máme už bolo skôr oznámené, že žalúdočné rakovinové bunky pod hypoxia ukázal EMT a vysoké migračné a útočné aktivity v porovnaní s rakovinových buniek v normoxie [34]. Up-reguláciu EMT hypoxických nádorových buniek môže byť jeden z dôvodov vyšší potenciál pre metastázy do pobrušnice v OCUM-2MD3 buniek v porovnaní s OCUM-2M buniek.

podmienka hypoxické výrazne zvýšilo hladinu expresie zo Twist stroje a Zeb1
v OCUM-2MD3 a OCUM-12 článkov, ale nie, že v OCUM-2M buniek. Hypoxia rastúca aktivita Twist stroje a Zeb1
expresie bol znížený s inhibítormi TGFβR (Ki26894 a SB431542) v OCUM-12 buniek. EMT v hypoxia by mohla byť čiastočne regulovať transkripčné faktory, Twist stroje a Zeb1.

Hoci HGF ovplyvnila morfológiu nádorovej bunke ako OCUM-2MD3 a OCUM 12-buniek, hypoxiou indukovanú EMT nebola inhibovaná anti-HGF neutralizačných protilátok alebo inhibítor c-Met v oboch OCUM-2MD3 alebo OCUM-12 buniek. produkcie HGF nebol detegovaný v OCUM-2MD3 alebo OCUM-12 buniek v každom z oboch hypoxiou a normoxie (dáta nie sú uvedené). Väčšina HGF je odvodená z buniek strómy v karcinómu žalúdka [42]. Aj keď HGF nemusí hrať dôležitú úlohu pre hypoxiou indukovanú EMT, HGF môže stimulovať EMT nádorových buniek pomocou interakcie s rakovinou stromálnych.

EMT hypoxiou indukovaná OCUM-2MD3 buniek bola čiastočne inhibovaná inhibítory TGFβR , ale rôzne ďalšie inhibítory, vrátane inhibítor c-Met, inhibítor PDGF, inhibítor EGFR, a inhibítora VEGFR, nemal žiadny vplyv na EMT hypoxiou indukovanú v tejto štúdii. Tieto zistenia naznačujú, že iný faktor (y), môže byť spojená s EMT hypoxiou indukovanú v niektorých nádorových buniek. V ďalších štúdiách, bude potrebné skúmať ďalšie nové faktory, ktoré môžu mení morfológiu rakoviny.

Na záver, autokrinný TGF /TGFβR signalizáciu podľa hypoxia môže byť jedným z faktorov spojených s agresívnou fenotyp EMT v bunky karcinómu žalúdka. signalizačné inhibítory TGF /TGFβR sa zdajú byť terapeuticky sľubný u karcinómu žalúdka.

Podporné informácie
Obrázok S1.
morfologické zmeny žalúdočnej buniek pod hypoxické stave. V MKN-7, MKN-45, MKN-74 a KATO-III, morfologické zmeny neboli nájdené pod hypoxia
doi :. 10,1371 /journal.pone.0062310.s001
(TIF)

• Ploche ONE: Janus kinázy 2 polymorfizmy sú spojené s rizikom u pacientov s karcinómom žalúdka v čínskej populácie
• Ploche ONE: Multiple-to-Multiple vzťahoch medzi mikroRNA a cieľových génov v žalúdočnej Cancer