PLoS ONE: In-vitro-Charakterisierung des Rapid-Zytotoxizität von Anti-Krebs-Peptid HPRP-A2 durch Membran Zerstörung und der intrazelluläre Mechanismus gegen Gastric Cancer Cell Lines

Abstrakt

In dieser Studie HPRP-A2, einem synthetischen 15-mer kationischer Peptide mit allen D-Aminosäuren, inhibiert wirksam das Überleben von Magenzelllinien in einer dosisabhängigen Weise. Gastric Abtöten von Tumorzellen durch HPRP-A2 beinhaltet einen schnellen Zusammenbruch der Membranintegrität und intrazellulären Signalwege. Propidiumiodid (PI) und Lactat-Dehydrogenase (LDH) Assays zeigten, dass einstündige Behandlung mit HPRP-A2 zu Membranpermeabilität Änderungen BGC-823-Zellen in einer dosisabhängigen Art und Weise geführt. Außerdem HPRP-A2 induzierte Apoptose in BGC-823-Zellen beinhaltet eine deutliche Zunahme der Erzeugung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), Caspase-3, -8 und -9-Aktivierung, eine Verringerung des mitochondrialen Membranpotentials (MMP), und Zellzyklus Arrest in der G1-Phase. Zusätzlich zu seiner inhärenten Zytotoxizität HPRP-A2 stark mit Doxorubicin (DOX) synergized die Wirksamkeit des Tötens Magentumorzellen zu verbessern i n vitro
. Wir glauben, dass HPRP-A2 mit allen D-Aminosäuren könnte ein potenter Kandidat von Anti-Krebs-Therapeutika, vor allem in der Kombinationstherapie

Citation:. Zhao J, Hao X, Liu D, Huang Y, Chen Y (2015 ) In-vitro-
Charakterisierung des Rapid-Zytotoxizität von Anti-Krebs-Peptid HPRP-A2 durch Membran Zerstörung und der intrazelluläre Mechanismus gegen Magenkrebszelllinien. PLoS ONE 10 (9): e0139578. doi: 10.1371 /journal.pone.0139578

Editor: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, UNITED STATES

Empfangen: 2. Juli 2015; Akzeptiert: 15. September 2015; Veröffentlicht am: 30. September 2015

Copyright: © 2015 Zhao et al. Dies ist ein offener Zugang Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons Attribution verteilt, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorgesehen sind der ursprüngliche Autor und Quelle genannt

Datenverfügbarkeit: Alle relevanten Daten innerhalb des Papiers sind

Finanzierung:. Diese Studie wurde von der National Natural Science Foundation of China unterstützt (Nr 81373445, YXC und Nr 21442001, YBH) und dem Natural Science Foundation der Provinz Jilin (Nr 20150101189JC , YC und Nr 20140101042JC, YBH). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

in den vergangenen Jahrzehnten, obwohl Durchbruch bei der Entwicklung von Krebstherapien, Widerstand und unspezifische Toxizität von konventionellen Arzneimitteln erreicht wurden, sind immer noch Flaschenhals Fragen für potenzielle klinische Praktiken [1-3]. Daher ist es dringend mit unterschiedlichen Wirkungsweisen zur Entwicklung neuer Medikamente benötigt, die die Nachteile von vielen verfügbaren Medikamente überwinden kann.

Derzeit sind die potentiellen Anwendungen von Anti-Krebs-Peptide (ACPs) als therapeutische Mittel zur Behandlung von Krebs Progression ziehen mehr Aufmerksamkeit als herkömmliche Chemotherapie vor allem wegen der folgenden Eigenschaften: (1) eine hohe Spezifität. Die positiv geladenen Peptide selektiv Krebszellen zielen, die negative Ladungen tragen und haben unterschiedliche Membrankomponenten von normalen Zellen [4, 5], (2) neuartige Wirkungsweise. Es könnte multidrug-Resistenzmechanismen etabliert vermeiden [5-7]; (3) synergistische Anti-Krebs-Wirkung mit Chemotherapeutika. Es wurde berichtet, dass bestimmte ACPs synergistische Anti-Krebs-Aktivität erzeugen können, wenn die Verwendung mit verschiedenen herkömmlichen Krebsmedikamenten kombiniert [8-10].

Der allgemeine Mechanismus der Peptid-induzierten Zelltod ist Cytoplasmamembran Unterbrechung über Mizellisierung oder Porenbildung , obwohl einige von ACPs berichtet Apoptose durch Todesrezeptor-Weg und /oder mitochondriale Weg [8, 11] auszulösen. Darüber hinaus kann die Porenbildung auf der Zellmembran und die Veränderung der Membrandurchlässigkeit einen besseren Kanal für den Eintritt von anderen Krebsmedikamenten in Zellen bereitzustellen und ihre Antikrebs-Aktivitäten erhöhen [8, 12].

Unsere früheren Studie hat bewiesen, dass HPRP-A2 den Zelltod auslösen kann und induzierte Apoptose in HeLa und HepG2-Zelllinien [12] gleichzeitig verbesserte DOX /Epirubicin (EPI). Darüber hinaus aufgrund der D-Aminosäure-Zusammensetzung ist HPRP-A2 resistent gegen proteolytische Spaltung und erhält sich eine äquivalente Antikrebsaktivitäten zu ihrer L-Enantiomeren [6, 12]. Basierend auf den früheren Studien wollen wir zwei Ziele in dieser Studie zu erreichen: die zugrunde liegende Antikrebs- Mechanismus HPRP-A2 zu umreißen und die synergistische Antikrebswirkung auf BGC-823 und SGC-7901-Zellen zu untersuchen, wenn sie mit DOX HPRP-A2 kombiniert.

Materialien und Methoden

die Zelllinien und Zellkultur

menschlichen Magenkrebszelllinien BGC-823 und SGC-7901 von der American Type Culture Collection erhalten wurden authentifiziert, die die Zelle Linien durch Kurz tandem repeat-DNA-Tests innerhalb von 6 Monaten nach der Reanimation verwendet wurden, und in DMEM mit fötalem Rinderserum (FBS; 10% v /v), Penicillin (100 U /ml) und Streptomycin (100 U /ml) in einer feuchten Atmosphäre bei 37 ° C mit 5% CO _2.

Peptidsynthese und Reinigung

Das Peptid durch die Festphasenpeptidsynthese unter Verwendung von Fmoc (9-fluorenyl synthetisiert -methoxycar-carbonyl) Chemie, wie zuvor beschrieben [13]. Eine weitere Charakterisierung wurde durch Massenspektrometrie und Aminosäureanalyse festgestellt. DOX · HCl wurde von Meilun Biology Technology Co. gekauft, Ltd (Dalian, China).

Die Lebensfähigkeit der Zellen-Assays

BGC-823 und SGC-7901-Zellen (5 x 10 ^{3) wurden in dreifacher Ausführung ausplattiert in 96-Well-Mikrotiterplatten. Komplettmedium wurde nach 24 h mit 100 ul frischem Medium, enthaltend verschiedene Konzentrationen von Arzneimitteln ersetzt. Nach weiteren 24 h wurden die Zellen mit 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromid (MTT) bei 37 ° C für 4 h inkubiert. Danach Dimethylsulfoxid (DMSO) wurde hinzugefügt, um die Formazankristallen und die Absorption bei 492 aufzulösen nm mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät gemessen wurde (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Shandong, China). Jin-Formel wurde verwendet, um die synergistische Wirkung der Behandlung von HPRP-A2 und DOX Kombination quantifizieren. Die Formel lautet: Q = Ea + b /(Ea + Eb-Ea × Eb), wobei Q die Kombinationsindex; Ea + b stellt die Zellproliferationshemmungsrate des kombinierten Arzneimittel; Ea und Eb sind Zeichen der Zellproliferationshemmung Rate jedes Medikament. Nach der Berechnung:. Q < 0,85, Q > 1,15 und 0,85 < Q < 1,15 Antagonismus zeigen, Synergie und additive Wirkung bzw. [14]}

Hämolyse-Aktivitätstest

Hämolyse Aktivitätsanalyse war durchgeführt, wie zuvor beschrieben [13]. Zu erhalten mit EDTAK stabilisierten roten Blutkörperchen, frisches menschliches Blut wurde 5 min bei 1000 rpm zentrifugiert, zweimal mit PBS gewaschen und auf eine Endkonzentration von 2% in PBS verdünnt. 70 &mgr; l von 2% humanen Erythrozyten wurden in einen Rundboden-96-Well-Platte gegeben, gefolgt von 70 &mgr; l verschiedener Konzentrationen von HPRP-A2. Nach Inkubation bei 37 ° C für 1 h wurde die Platte dann bei 3000 rpm für 10 min und 90 &mgr; l Überstand wurde zentrifugiert, zu einer Flachboden-96-Well-Platte übertragen. Die Freisetzung von Hämoglobin wurde bei 540 nm durch Messung der Absorption des Überstandes bestimmt. Erythrocyten in PBS und destilliertem Wasser (dH _{2 O) wurden als negative und positive Kontrollen verwendet wurden. Die hämolytische Aktivität wurde als Prozentsatz der Versuchsgruppe und der positiven Kontrolle berechnet, nach der Subtraktion der negativen Kontrolle sind. Daten sind die Mittelwerte ± SD von drei unabhängigen Experimenten.}

PI-Assay

BGC-823-Zellen (1 × 106 Zellen /Vertiefung) wurden in Platten mit sechs Vertiefungen ausgesät. Nach Inkubation mit HPRP-A2 (5, 10, 15 &mgr; M) für 1 h wurden die Zellen gesammelt und dann mit 5 &mgr; g /ml PI bei 4 ° C für 10 Minuten im Dunkeln behandelt. Die Zellen wurden dreimal mit PBS gewaschen und dann die Fluoreszenzintensität von PI erfassen unter Verwendung der Durchflusszytometrie (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

LDH-Freisetzung

LDH-Freisetzung Aktivität wurde durch LDH-Assay-Kits (Jiancheng Bioengineering, Ltd., China), gemessen nach den Anweisungen des Herstellers. BGC-823-Zellen wurden bei 5 x 10 ^{3 Zellen /Well in einer 96-Well-Platte ausgesät. Nach der Inkubation mit HPRP-A2 (5, 10, 15 &mgr; M) für 1 h wurde die Freisetzung von LDH im Überstand mit einem Mikroplattenleser gemessen (GF-M3000; Gaomi Caihong Analytical Instruments Co., Ltd Shandong, China) an 450 nm. Zellen ohne Behandlung oder mit Triton X-100 wurde als negative und positive Kontrollen, jeweils verwendeten lysiert. Alle Versuche wurden in Triplikaten durchgeführt. LDH-Aktivität wurde als Prozentsatz der Versuchsgruppe berechnet und der positiven Kontrolle, nach Abzug des negativen Kontrolle sind.}

ROS-Test

ROS-Assay-Kits (BestBio, Co. Shanghai, China) wurde verwendet, um die Erzeugung von ROS detektieren. Zellen (1 × 106) wurden von HPRP-A2 behandelt (5, 10, 15 &mgr; M) für 1 Stunde. Die nachfolgenden Verfahren wurden gemäß dem Protokoll des Herstellers durchgeführt. Kurz gesagt, für 3 verdauten Zellen durch Trypsin wurden bei 1.500 rpm zentrifugiert min, dreimal mit PBS gewaschen und dann in 500 &mgr; l PBS suspendiert. Nach Inkubation mit 2 ', 7'-dichlorofluorescin diacetat (DCFH-DA) fluoreszierende Sonde für 20 min bei 37 ° C wurden die Zellen dreimal mit PBS gewaschen und detektiert die grüne Fluoreszenzintensität (in GEOMITTEL) mittels Durchflusszytometrie. Die grüne Fluoreszenzintensität war positiv mit dem Niveau der ROS korreliert.

Messung von MMP

MMP durch das Mitochondrienmembranpotential Assay Kit mit 5,5 bestimmt wurde ', 6,6'-Tetrachlor -1,1 ', 3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine Iodid (JC-1), die eine Sonde der mitochondrialen Aktivität ist (BestBio, Co., Shanghai, China). JC-1 wird immer dann verwendet mitochondrialen Depolarisation zu erfassen in den frühen Stadien der Apoptose auftritt. Wenn Zellen mit hoher MMP, JC-1 in der mitochondrialen Matrix gesammelt und bilden J-Aggregate und rote Fluoreszenz erzeugen. Im Gegensatz dazu Monomer JC-1-Monomer enthaltenden Zellen monomermonomer niedrigen MMP haben und zeigen grüne Fluoreszenz. Mitochondrial Depolarisation wurde durch eine Abnahme der roten (590 nm, FL-2-Kanal) /grün (530 nm, FL-1 Kanal) Fluoreszenzintensitätsverhältnis bestimmt. Kurz gesagt, nach der Behandlung mit HPRP-A2 (5, 10, 15 &mgr; M) für 1 h wurden BGC-823-Zellen gesammelt und inkubiert mit 0,5 ml JC-1 für 20 min bei 37 ° C Arbeitslösung, dann zweimal mit PBS gewaschen, in PBS suspendiert und mittels Durchflusszytometrie analysiert (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

Caspase-Aktivitätstest

Die Zellen mit HPRP-A2 (10, behandelt wurden, 15 uM) für 24 h und dann Ebenen der Caspase-Aktivitäten wurden gemessen, um die entsprechenden Caspase-Aktivität Nachweis-Kits unter Verwendung von (BestBio, Co., Shanghai, China), nach den Anweisungen des Herstellers. Durchschnittliche Daten sind als Mittelwert ± SD von mindestens drei unabhängigen Experimenten dargestellt.

Zellzyklusanalyse

BGC-823-Zellen (1 × 10 ^{6) wurden in ausgesät 6-Well Platten für 24 h. Nach Induktion mit HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) für 24 h wurde die Zellzyklusverteilung von einem FACScan-Cytometer und Cell Quest Software (FACS Calibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA) bestimmt. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt.}

Die statistische Analyse

Die Daten werden dargestellt als ± SD von drei unabhängigen Bestimmungen bedeutet. Die statistische Signifikanz der Unterschiede zwischen den Gruppen wurden analysiert, indem t
-test, mit Bedeutung angenommen in P
< 0,005 (*) und P
< 0,001 (**).

Ergebnisse |

Peptide und Zytotoxizität

Wie in Fig 1, Peptid gezeigt HPRP-A2 eine α-Helix-amphipathischen membranaktive 15-Rückstand Peptid von allen D-Aminosäuren zusammengesetzt. Vergleichen der selektiven Toxizität von HPRP-A2 in Richtung Magenkrebszellen und normalen Zellen (menschliche Erythrozyten), können wir leicht feststellen, dass die IC _{50 (die Konzentration des Arzneimittels, bei der die Lebensfähigkeit der Zellen um 50% im Vergleich zu unbehandelten reduziert Zellen) Werte sind weit weniger als die minimale hämolytische Konzentration (die Konzentration des Arzneimittels, die in 20% Zell Hämolyse) des HPRP-A2 geführt. Diese Ergebnisse zeigten, dass HPRP-A2 kann selektiv die Magenkrebszellen zu töten und schonen die normalen Zellen (Bild 2 und 3). Ähnliche Anti-Krebs-Aktivitäten der beiden Zelllinien (BGC-823 und SGC-7901) zeigte, dass es ein breites Spektrum Wirkung in der Anti-Krebs-Wirkung von HPRP-A2 war. Aufgrund seiner membranaktive Charakteristik, HPRP-A2 zeigt die Anti-Krebs-therapeutisches Potential, da es selektiv toxisch gegenüber Tumorzellen als normale Zellen ist.}

HPRP-A2 induziert die Erhöhung der Membranpermeabilität

um wurden die Änderung der Membrandurchlässigkeit nach der Inkubation mit HPRP-A2, die zelluläre Aufnahme von PI und extrazelluläre Freisetzung von LDH um zu überprüfen, mit der Durchflusszytometrie und Mikroplatten-Reader zu BGC-823-Zellen untersucht. Wie in Fig 4 gezeigt ist, bewegen sich die durchflusszytometrische Graphen der PI allmählich zu der Richtung der hohen Fluoreszenzintensität in einer konzentrationsabhängigen Art und Weise, und die erhöhte Freisetzung von LDH wurde auch in die Zellen mit HPRP-A2 inkubiert beobachtet. Das heißt, HPRP-A2 den Schaden der Zellmembran verursachen könnte und bei der Verbesserung der Permeabilität der Zellmembran führen.

HPRP-A2, die Schäden der mitochondrialen Funktion
verursacht

Die intrazelluläre reaktive Sauerstoff Spezies (ROS) Freisetzung und mitochondriale Membranpotential (MMP) mit FACS nachgewiesen die Mitochondrien-Funktion von BGC-823-Zellen zu reflektieren in vitro
. Wie in 5A gezeigt ist, ergab die durchflusszytometrische Histogramm der mit einer höheren Konzentration von HPRP-A2 inkubierten Zellen höhere Fluoreszenzintensität für 1 h nach der Inkubation. Die entsprechende durchflusszytometrischen quantitativen Vergleich der Fluoreszenzintensität in GEOMITTEL bei diesen verschiedenen Konzentrationen zeigte einen ähnlichen Trend, nämlich, dass die erhöhte Freisetzung von ROS in BGC-823-Zellen in Gegenwart von HPRP-A2 war konzentrationsabhängig. Ähnliche konzentrationsabhängig veränderte Trend auch in 5B, das Verhältnis von FL2-H /FL1-H deutlich beobachtet verringert, eine Depolarisation von MMP anzeigt.

Caspase-Aktivierung und Zellzyklusanalyse

Aktivierung von Caspase-3, -8 und -9 in HPRP-A2-induzierten Zellen wurde bei 405 nm unter Verwendung eines mit einem Mikroplattenlesegerät gemessen. Wie in 5C gezeigt, Caspase-3, -8 und -9 wurden alle 24 h in BGC-823-Zellen nach der Behandlung mit HPRP-A2 erhöht, was die Induktion von Apoptose legt nahe, dass durch die HPRP-A2 kann abhängig Caspase- . Wie in Figur 6 mit den verschiedenen Konzentrationen von HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) gezeigt BGC-823-Zellen behandelt, für 24 h in den Erhöhungen in sub-G1 Verhaftung und in G1 Verhaftung geführt. Diese Erkenntnisse verstärkt auch die erhöhte Caspase-3-Aktivität nach der Behandlung von HPRP-A2.

HPRP-A2-induzierte Zunahme der DOX Zytotoxizität

BGC-823 und SGC-7901-Zellen wurden ausgewählt, um studieren die synergistische Anti-Krebs-Wirkung von HPRP-A2 und chemotherapeutischen Wirkstoff DOX. Die Zellen wurden 4, 24 und 48 h mit HPRP-A2 (6 &mgr; M) und /oder Dox (1,6 &mgr; g /ml) behandelt. MTT-Assays wurden verwendet, um die kombinatorische Antikrebs-Wirkungen auf Zellen zu untersuchen. Die Wirkstoffkonzentrationen in dieser Studie ausgewählt wurden basierend auf der IC _{50 Werte jeder allein Arzneimittels. Es gab keine offensichtliche Zytotoxizität oder Wachstumsreduktion bei jeder Droge alleine verwendet wurde. Wenn im Gegensatz dazu in den Peptid /Arzneimittelkombinationen (HPRP-A2 /DOX) gleichzeitig Dosen alleine verwendet werden verwendet, zeigte die Kombination signifikante Zytotoxizität (Fig 7). Es ist auch klar, dass Anti-Krebs-Aktivität von HPRP-A2 wurde nicht viel von der Inkubationszeit beeinflusst; Im Gegensatz dazu mit der Zunahme der Inkubationsdauer auf 48 h, DOX zeigt viel höhere Antitumor-Aktivität als die von 4 h, was anzeigt, die drastisch unterschiedliche Wirkungsmechanismen zwischen ACP und chemotherapeutischen Arzneimittels. Nach der Formel Jin, alle Q (Kombinationsindex) Werte waren größer als 1,15, die, dass es zwischen der α-Helix-Peptid HPRP-A2 und dem herkömmlichen Anti-Krebs-Medikament DOX in BGC-823 und SGC-7901-Zellen wurden signifikante synergistische Effekte zeigt erhielten große Aufmerksamkeit als vielversprechende chemotherapeutischen Mitteln.}

Diskussion

vor kurzem Anti-Krebs-Peptide (AKP-Staaten), die die Nachteile der aktuellen Medikamente zu vermeiden. Viele Studien haben bestätigt, dass einige synthetische und natürliche kationische Peptide, die eine schnelle und breites Spektrum von Antikrebsaktivität gegenüber Tumorzellen besitzen und nicht als normale Zellen, wie menschlichen roten Blutkörperchen [4, 15]. Darüber hinaus ACPs wurden auch die Fähigkeit zu haben, bestätigte die multidrug-Resistenzmechanismus zu überwinden, und Synergieeffekte in der Kombinationstherapie [11].

HPRP-A2 besitzt eine schnelle und breite Spektrum der Anti-Krebs-Aktivität jedoch einige Unterschiede treten auch in der Empfindlichkeit des HPRP-A2 an verschiedene Zelllinien. Auf der Grundlage der verschiedenen IC _{50 -Werte für HPRP-A2 bis BGC-823 (8,65 ± 0,38 uM), SGC-7901 (10,42 ± 0,30 uM), PC3 (21,38 ± 0,56 uM) und B16 (19,16 ± 0,38 uM ), wählten wir BGC-823 und SGC-7901-Zellen als Forschungsziele. Außerdem haben sich die Aktivitäten der Antikrebs HPRP-A2 zu anderen Krebszelllinien wie HeLa und HepG2 wurde in unserer früheren Arbeit veröffentlicht [12]. Beide BGC-823 und SGC-7901-Zellen gehören zu Magen-Zelllinien, so wählten wir BGC-823 als Beispiel die Anti-Krebs-Mechanismus von HPRP-A2 zu untersuchen In-vitro-
.}

in dieser Studie haben wir gezeigt, dass HPRP-A2 ist eine amphipathische α-helikalen Peptid mit signifikanter Antitumor-Aktivität zu BGC-823 und SGC-7901-Zelllinien. Unsere Studien haben gezeigt, dass HPRP-A2 eine Krebs-selektive Toxizität zeigten, vor allem, weil die Krebszellen aus mehreren anionischen Phospholipiden zusammengesetzt sind und enthalten O-glycosylierten Mucin, das die negative Ladung auf der Krebszellenoberfläche erhöht [16, 17]. Darüber hinaus zeigen mehr Mikrovilli auf Krebszellen kann die Konzentration des Bindungspeptid erhöhen, indem die Membranoberfläche zu erweitern und dadurch stärkere Zytotoxizität gegen Krebs Zellmembranen [11, 18].

ACPs zu stören Zellmembran fähig sind, die gegebenen verursachen Permeabilitätsveränderungen Zellmembran. In dieser Studie wurde die Änderung der BGC-823 Zellmembran durch Detektieren PI-Permeabilisierung und LDH-Freisetzung beobachtet. Die schrittweise Anhebung der PI Permeabilisierung und LDH-Freisetzung sind in konzentrationsabhängigen Art und Weise nach der Behandlung mit HPRP-A2. Außerdem HPRP-A2-induzierte Zelltod ist mit der Erzeugung von reaktiven Sauerstoffspezies, die Depolarisation von MMP, die Aktivierung der Caspase-Aktivitäten und der Block in der G1-Phase des Zellzyklus in Verbindung gebracht.

Neben der Zytotoxizität von HPRP-A2, wir haben bewiesen, dass es die Wirksamkeit von DOX gegen BGC-823 und SGC-7901-Zellen steigern konnte, was mit unserer vorherigen Studie konsistent ist. In unserer früheren Studie haben wir kombinatorische Antikrebstherapie unter Verwendung von α-helikalen Peptide HPRP-A1 und A2-HPRP mit der chemischen Medikamenten DOX und EPI in HeLa und HepG2-Zelllinien [12] untersucht. Die Synergie gezeigt ermöglicht die Verwendung von relativ geringen Konzentrationen von Peptiden und Drogen signifikante Anti-Krebs-Effekte zu erzielen In-vitro-
und in vivo
. Diese Dosisreduktion minimiert Arzneimittelnebenwirkungen auf normale Zellen und ermöglicht eine effektive Apoptose-vermittelten Anti-Krebs-Wirkung. Unsere vorliegende Studie hat Auswirkungen in diesem HPRP-A2 kann ein vielversprechendes therapeutisches Krebs werden Mittel mit hoher Anti-Krebs-Selektivität und eine starke synergistische Wirkung in der Kombinationstherapie. Unsere Studien zeigen, vor allem den Mechanismus der HPRP-A2-induzierten Zelltod und kann im Design von Chemotherapeutika gegen Magen-Zelllinien.

Schlussfolgerungen

HPRP-A2 zeigt eine starke Aktivität gegen Krebs hilfreich sein, um BGC- 823 und SGC-7901-Zelllinien und eine geringe Toxizität gegen menschliche rote Blutzellen. HPRP-A2 induzierte Krebszelltod durch sowohl direkte membranzerstörende Wirkung und intrazellulären Mechanismen, einschließlich einer dramatischen Zunahme in Caspase-3, -8 und -9-Aktivierung, eine Verringerung des mitochondrialen Membranpotentials (MMP), und der Erzeugung von ROS und Zellzyklusarrest in G1. Außerdem HPRP-A2 stark mit DOX synergized die Wirksamkeit des Tötens Magentumorzellen zu verbessern In-vitro-
. Unsere Ergebnisse unterstreichen die breite Anti-Krebs-Potenzial von HPRP-A2 und seines Wirkungsmechanismus aufzuklären. Wir glauben, dass zur Bekämpfung von Krebs erfolgreich ACPs mit effektiver und Tumor-Targeting-Eigenschaften ausstatten, neue Wege eröffnen.

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