PLoS ONE: RhoC regulira proliferaciju rak želuca stanice interakcijom s IQGAP1

Sažetak pregled

Naši rezultati prethodnih istraživanja pokazali su da su i Ras član homolognog obitelj C (RhoC) i IQ-domene GTPaza aktivirajući protein 1 (IQGAP1) su prekomjerno izražen u želučanom tkivu raka i stanica, ali njihova uloga u tumorigenensis nije jasno upućena. U tome smo izvijestili proliferaciju poticajni učinak RhoC i IQGAP1 na želučanih stanica raka i interakcije između dva proteina u regulaciji proliferacije stanica želuca raka. Plazmide i virusne konstrukti kodiraju ciljne siRNA i DNA se koristi za promjenu ekspresije RhoC i IQGAP1. MTT metodom i ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU su korištene za analizu učinka RhoC i različite strukture IQGAP1 na proliferaciju. razina proteina od IQGAP1 i RhoC na stanične linije su detektirani Western blot-a. Imunofluorescencije i Co-imunoprecipitacijski testovi primijenjeni su istražiti lokalizaciju i vezanje između RhoC i IQGAP1. Rezultati su pokazali da RhoC, IQGAP1 i C-terminalni fragment IQGAP1 značajno stimulira proliferaciju želučanih stanica karcinoma, i poboljšana ekspresija ciklina E i ciklin D1. S druge strane, smanjenje unutarnjeg IQGAP1 ili RhoC po siRNA oslabljena proliferaciju stanica. Iscrpljivanje IQGAP1 ekspresiju siRNA značajno blokira proliferativnu aktivnost konstitutivno aktivnog RhoC dok RhoC silencing od siRNA nije imao učinka na IQGAP1 induciranu proliferaciju u stanicama raka želuca. Co-imunotaloženje i imunofluorescencija testovi su pokazali da RhoC i IQGAP1 vezani jedni druge. U zaključku, naši rezultati ukazuju na to da RhoC stimulira proliferaciju stanica želuca raka kroz zapošljavanje IQGAP1 kao efektora pregled

Izvor:. Wu Y, Tao Y, Chen Y, Xu W (2012) RhoC regulira proliferaciju želučanog Stanice raka se kroz interakciju s IQGAP1. PLoS ONE 7 (11): e48917. doi: 10,1371 /journal.pone.0048917 pregled

Urednik: Zoran Culig, Innsbruck Medicinski fakultet, Austrija pregled

Primljeno: 26. lipnja, 2012; Prihvaćeno: 2. listopada 2012; Objavljeno: 7. studenoga 2012 pregled

Copyright: © 2012 Wu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan od strane specijalizirani znanstveni fond za iskusnog osoblja programa Sveučilišta Jiangsu (br. 11JDG114) i Nacionalna zaklada prirodoslovni Kine (br. 31040002). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Rho GTP mogu izazvati određene unutarstanični prijenos signala i utjecati na različite stanične aktivnosti, uključujući i reorganizacije aktin citoskeleta, transkripcije gena, preživljavanje i proliferaciju [1], [2]. Iako tri Rho izoforme, RhoA, RhoB i RhoC, pokazivati ​​više od 85% identiteta amino kiseline, oni daju razlike u funkciji u stanicama [3]. RhoA i RhoC proteina su pokazala da ima pozitivnu ulogu u proliferaciji i maligne transformacije [4], [5], [6], dok se ne pojavi uloga RhoB u tim procesima biti više divergentna [7], [8]. Većina studija pokazala je da RhoC imao više funkcija tumorskih metastaza, upravljajući djelovanje više silaznih efektora, razgradnje i rekonstrukcije izvanstaničnog matriksa (ECM). Međutim, i dalje neke kontroverze o ulozi RhoC u reguliranju stanične proliferacije [9], [10], [11], [12]. Rezultati iz Pila laboratorija pokazuju da RhoA i RhoC siRNA predstavljaju snažne alate za inhibiciju proliferacije stanica raka, invazivnost, i angiogenezu i In vitro pregled i In vivo pregled [9]. Sunce i sur pregled je utvrdio da intratumoralno injekcija RhoA ili RhoC siRNA na gole miševe može spriječiti rast tumora [13]. Za razliku od toga, Faried i sur pregled izvijestili da RhoA potiče rast tumora više od RhoC, dok RhoC izaziva udaljenim metastazama u odnosu na RhoA [11], u dogovoru s tim opažanjima Clark i kolege [14]. Studija ikoma i kolege pokazali su da RhoC nije utjecalo na rast tumora, ali povećava metastatski prirodu raka pluća stimulacijom stanične pokretljivosti, [10]. Stoga daljnje studije kako bi se identificiralo ulogu u reguliranju RhoC biološke aktivnosti stanica tumora. Pregled

IQ domena GTPaza aktivirajući proteina (IQGAPs) su važni regulatori stanične procese koji uključuju citoskeleta pregradnje u stanične migracije proliferacija i Citokineza [15], [16], [17]. IQGAP1 je jedan od članova triju povezanih IQGAPs sisavaca i mijenja se u unutarstanični IQGAP1 izraz ili funkcija je izvijestio da mijenjaju stanične aktivnosti [17], [18], [19], [20]. Kao skela proteina IQGAP1 veže više proteina, kao što su onkogeni P-katenina i Src, supresor tumora E-kadherina i Rho GTPaze Cdc42 i Rac1 i uzrokuje promjenu staničnog ponašanja, osobito za stanice raka. Naša prethodna studija pokazala je da su viši izrazi RhoC i IQGAP1 u želučanom tkivu karcinoma značajno su obrnuto povezana s diferencijacijom želučanih stanica raka [21]. Osim toga, razina proteina su također relevantni za proliferaciju i migraciju stanica karcinoma. Dakle, mi pretpostavljamo da su i RhoC i IQGAP1 može igrati važnu ulogu u transformaciji stanica raka i proliferacije i postoji potencijalna povezanost između njih. U ovom istraživanju, proučavali smo utjecaj RhoC i različite strukture IQGAP1 na proliferaciju stanica raka i staničnog ciklusa srodnih proteina. Također smo istražili odnos između dvije molekule zajedničkom primjenom siRNA smetnji i virusne tehnike infekcije. Pregled

Materijali i metode pregled

Reagensi

želučani stanične linije raka BGC-823 [22] i bubrega afričkog zelenog majmuna linijama stanica fibroblasta COS-7 osigurana su od strane Instituta za staničnu biologiju (Shanghai, Kina). Zeleni fluorescentni protein (GFP), plazmid i stanične transfekcijski reagens Lipofectamin ™ 2000 su od Invitrogen (Carlsbad, CA); Plazmidi kodiraju zastavu označio IQGAP1 (pFlag-IQGAP1), Zastava tagged IQGAP1 C-terminalnog fragmenta (pFlag-IQGAP1-C), a zastava tagged IQGAP1 N-terminalnog fragmenta (pFlag-IQGAP1-N), a adenovirusne vektora koji kodira P-galaktozidaza (PAD-LacZ), konstitutivno aktivan oblik RhoC (PAD-RhoC-V14), potpune dužine IQGAP1 (PAD-IQGAP1) i C-terminalni fragment IQGAP1 (PAD-IQGAP1-C) su bili ljubazni darovi od Dr. Gerry Boss i dr Renate Pilz, University of California, San Diego, SAD. Ljudski EGF BrdU, miš anti-BrdU protutijelom, DNase I, MTT, Hoechst 33.342, FITC-om i Cy3-konjugirana sekundarna antitijela su od Sigma (St. Louis, MO). Anti-IQGAP1 antitijela (protiv N-terminalnog fragmenta, 314-422 AA), anti-RhoA antitijela, anti-IgG antitijela, anti-CDK1 /CDK2 antitijela, kratkih interferira RNA (siRNA) za RhoC i negativne kontrole su iz Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Rho C siRNA je bazen 3 ciljanim 20-25 nt iRNK osmišljen kako bi srušiti ekspresiju gena sa sekvencama kako slijedi: sequence1, osjetiti 5'-CUACUGUCUUUGAGAACUAtt-3'and protusmisleni 5'-UAGUUCUCAA- AGACAGUAGtt-3 '; sequence2, osjetiti 5'-GCAGGAAGACUAUGAUCGAtt-3 'i 5'-protusmisleni UCGAUCAUAGUCUUCCUGCtt-3'; sequence3, osjetiti 5'C- ACCAGCACUUUAUACAtt-3 ', a suprotnog smjera 5'-UGUAUAAAGUGCUGGUGUG- TT-3'. Anti-IQGAP1 antitijelo (na C-terminalni fragment koji odgovara aminokiselinama 863-1657 ljudskog IQGAP1) bio je od Millipore (Billerica, MA). Anti-RhoC antitijela iz Abcam (Cambridge, MA). B protutijela anti-ciklin je iz Bioworld tehnologije (St. Louis Park, MN). Anti-ciklin D1 antitijela i anti-ciklin E antitijela su iz Boster (Wuhan, Kina). SiRNA za IQGAP1 sintetiziranje Qiagen (Valencia, CA), ciljna sekvenca IQGAP1 5'-AAGTTCTACGGGAAGTAATTG-3 '(5058-5078 bp). Peroksidaza (HRP), koje je konjugirano Sekundarno antitijelo bilo je iz Rockland Immunochemicals (gilbertsville, PA). Protein G Plus /Protein A-agaroze je od Calbiochem (San Diego, CA). Electrochemilummiscence (ECL), reagensi su od Millipore (Billerica, MA). Svi reagensi korišteni u ovoj studiji bile su analitičkog stupnja.

Stanična kultura, transfekcija i infekcija pregled

BGC-823 i COS-7 stanice su kultivirane u 1 × Dulbeccovom modificiranom Eagleovom mediju (DMEM) s 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) pri 37 ° C u 5% CO _{2 atmosfere. Medij se mijenja svaki drugi dan i stanice su sub-kultivirane na spajanja. Za transfekciju, stanice su sub-kultivirane dan prije postupka i transfekcija želučanih stanica karcinoma s plazmidima ili siRNA provedena je u skladu s uputama proizvođača. Za infekcije, 293A stanice su transficirane adenovirusni vektori PAD-lacZ, PAD-RhoC-V14, PAD-IQGAP1 i PAD-IQGAP1-C, a virusnih čestica koje proizvode stanice su sakupljene i pojačavaju. Virusi su pod nazivom Ad-lacZ, Ad-RhoC-14, Ad-IQGAP1 i ad-IQGAP1-C, a koristi se za infekciju BGC-823 stanice. Na dan prije infekcije, BGC-823 stanice su svježe posađene na 70-80% spajanja i proces infekcije provodi se u skladu s uputama proizvođača na drugi dan. Pregled}

Western blot-pregled

Kulturan stanice su isprane tri puta u PBS i lizirane s RIPA puferom (50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 1% (v /v) Triton X-100, 1 mM EDTA, 1 mM leupeptina, 1 mM fenilmetilsulfonil fluorida, 10 mM NaF , 1 mM Na _{3VO 4). Jednake količine proteina su razdvojeni 8% ili 12% SDS-PAGE prema protein molekulske mase. Primarna antitijela su inkubirani preko noći na 4 ° C, a odgovarajući sekundarna antitijela, inkubirani su 1 sat pri sobnoj temperaturi. Izvršena su tri ispiranja s TBS /T, nakon svake inkubacije antitijela. ECL reagensi su korišteni pokazati pozitivne trake na membrani. Pregled}

MTT Ispitivanje pregled

0.5-1 x 10 ^{3cells u 150 ul medija su stavljene u jažice od 96 jažica ploče. Nakon vezanja, stanice su inficirane s odgovarajućim adenovirusom tijekom 48 sati, ili transficirane siRNA tijekom 72 h, respektivno. U kombiniranim skupinama, stanice su transfektirane s siRNA ciljanja RhoC ili IQGAP1 24 h, a zatim inficirani s Ad-IQGAP1-C /oglasa IQGAP1 ili Ad-RhoC V14 dodatnih 48 h na 37 ° C u 5% CO _{2. Kultivirane stanice su isprane s PBS, pomiješa se s 20 ul MTT-a (0.5 mg /mL), te zatim inkubiran na 37 ° C tijekom 1 sata. Medij se odstrani i 100 ul dimetilsulfoksida (DMSO), dodani su u svaku jažicu. Absorbancija se odredi na 490 nm pomoću čitača mikroploče. Sve analize su izvršene u triplikatu. Pregled}}

BrdU inkorporacije Test pregled

Brzina sinteze DNA je mjerena s BrdU inkorporacije imunoflorescencijom. Taloženje se količina stanica je podešena da se postigne gustoću 70-80% konfluentnosti na dan transfekcije. Plazmid pFlag-IQGAP1, pFlag-IQGAP1-C ili pFlag-IQGAP1-N bio ko-transfektiran sa GFP plazmida u BGC-823 stanicama pomoću Lipofectamin ™ 2000 kao što je gore opisano. 24 sata nakon transfekcije, stanice su serum izgladnjele tijekom noći, pomiješa se s 200 μ
M BrdU i inkubira oko 16 sati. Stanice su zatim isprane s PBS, fiksiraju u svježe pripravljen 4% (v /v) paraformaldehida pri sobnoj temperaturi tijekom 10 minuta i permeabilizirane s 0,5% (v /v) Triton X-100, nakon čega slijedi inkubacija sa DNase I (0.5 U /ul) kroz 30 minuta na 37 ° C. Stanice su inkubirane s primarnim protutijelom protiv BrdU preko noći na 4 ° C, nakon čega slijedi Cy3-konjugiranih sekundarnih antitijela tijekom 1 sata pri sobnoj temperaturi. Konačno, jezgre su brojač-obojene s Hoechst 33342 15 minuta, ispere s PBS tri puta i vizualizirani pod fluorescentnim mikroskopom. Svaki test je izveden u kvartet i ponovio tri puta. Pregled

Co-imunotaloženje pregled

Kako istražiti interakciju između RhoC i IQGAP1, COS-7 i BGC-823 stanice su ko-inficirane s ad- IQGAP1 ili Ad-IQGAP1-C i Ad-RhoC-V14 tijekom 48 h, a zatim su lizirane s RIPA puferom, kao što je opisano. Se protutijelo protiv RhoC, IQGAP1 ili izotipa odgovarajućih IgG je uporabljen za imunoprecipitaciju, respektivno. Imunoprecipitati su analizirani Western blot analizom kao što je prije, upotrebom anti-RhoC ili anti-IQGAP1 antitijela. Pregled

imunofluorescencije mikroskopija pregled

uzgojene na poklopcima stanice su fiksirane sa svježe pripravljenim 4% (v /v ) paraformaldehida u PBS tijekom 15 minuta, natopljeni s 0,3% Triton X-100 u PBS-u tijekom 10 minuta i blokirane s 3% (m /v) goveđeg serumskog albumina (BSA) u PBS-u. Za imunofluorescencije, stanice na poklopcima redom su inkubirani sa zečjim poliklonskim antitijelima IQGAP1 na 4 ° C preko noći, FITC-konjugiranim kozjim anti-kunić IgG za 1 h pri sobnoj temperaturi, mišjim monoklonskim protutijelom protiv RhoC tijekom 2 sata na sobnoj temperaturi, te konačno anti-mišjim IgG konjugiranim s Cy3 1 h pri sobnoj temperaturi. Izvršena su tri ispiranja nakon svake inkubacije antitijela. Jezgre su protu-obojene s Hoechst 33342. Rezultat je promatrana pod fluorescentnim mikroskopom sastavljenog sa CCD kamere (Leica). Pregled

Statistička analiza pregled

Podaci su analizirani pomoću dvosmjernog ANOVA ili Studentov t pregled -test sa statističkog programa SPSS, a izražava se kao prosjek ± standardna devijacija (SD). P pregled. ≪ 0.05 je smatrana značajnom pregled

Rezultati

RhoC promoviranih proliferaciju BGC-823 stanicama pregled

Učinak RhoC na proliferaciju stanica bila također istražuje. BGC-823 stanice su zaražene s adenovirus kodiranje konstitutivno aktivnog RhoC i proliferacija stanica je otkriven pomoću MTT testa. Rezultati su pokazali da RhoC također promiče proliferaciju stanica želuca raka BGC-823. Prekomjerna ekspresija RhoC-V14 u BGC-823 stanicama uzrokovane 48,7% povećanje stanične proliferacije (sl. 1a ib). U međuvremenu, osiromašeni RhoC po siRNA smanjuje proliferaciju BGC-823 stanice od 43,1% (sl. 1 C i D). Pregled

IQGAP1 Poboljšana proliferaciju BGC-823 stanicama pregled

(1) Rezultati MTT testom. pregled

kako ocijeniti doprinos IQGAP1 na proliferaciju, MTT test korišten je za otkrivanje održivost rak želuca stanične linije BGC-823. Rezultati su pokazali da je u usporedbi s kontrolnim stanicama (Ad-LacZ skupina), visoka ekspresija C-terminalnog fragmenta IQGAP1 (Ad-IQGAP1-C skupina) ili pune dužine IQGAP1 (Ad-IQGAP1 grupe) pojačanu proliferaciju za 116%, a 39%, odnosno ( * pregled P < 0.05 * pregled P ', 0,05, slika 2A i B). Nasuprot tome, N-terminalni fragment IQGAP1 nema vidljiv učinak na proliferaciju stanica. S druge strane, smetnje IQGAP1 ekspresije sa siRNA smanjuje proliferaciju stanica za 43%, u usporedbi s negativnom kontrolom ( * pregled P ', 0,05, slika 2C i D). Ovi rezultati pokazuju da IQGAP1 bio u mogućnosti da se ubrza proliferaciju stanica; aktivna domena je smješten na C-terminalni fragment proteina. pregled

(2) Rezultati ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU. pregled

Test ugradnje BrdU dala obrazac odgovora sličan onome u MTT test. Izražavanje Flag-IQGAP1 i zastave-IQGAP1-C znatno unaprijeđen sintezu DNA na razine gotovo 1 flod i 2 puta nego što je uočena s Flag-D1 (* P 0,05, * p. ≪ 0,05, Sl 2E i F) dok IQGAP1-N nije pokazala nikakve učinke na sintezu DNA, što ukazuje da IQGAP1 drugačije regulira sintezu DNA putem različitih domena. pregled

pridruživanju između RhoC i IQGAP1 u stimuliranju proliferacije BGC-823 stanicama pregled

(1) RhoC i IQGAP1 nije utjecalo na izrazu jedni druge. pregled

Navedeni rezultati snažno sugeriraju da su RhoC i IQGAP1 pridonio širenju BGC-823 stanicama. Kako bi se razjasnila moguću povezanost između RhoC i IQGAP1 u regulaciji stanične proliferacije, mi prvo istraživali ako IQGAP1 i RhoC utjecati na njihov izraz jedni druge. BGC-823 stanice su transficirane s siRNA za obaranje ekspresiju RhoC ili IQGAP1, a zatim su zaražene s adenovirus kodiranje IQGAP1, IQGAP1-C ili konstitutivno aktivnog RhoC respektivno. Western blot je primijenjen za detekciju bilo promjena ekspresije i aktivnosti jednog proteina može utjecati na ekspresiju druge proteinske ili ne. Rezultati su pokazali da povećanje egzogeni ili obaranje endogene IQGAP1 ili IQGAP1-C, nije utjecao na izražavanje RhoC. Slično tome, povećanje konstitutivno aktivnu RhoC ili smetnje endogenog RhoC nije utjecao na izražavanje IQGAP1 ili IQGAP1-C (sl. 3a). Pregled

(2) IQGAP1 bio efektor RhoC u poticanju proliferaciju stanica. pregled

MTT test korišten je da se razjasni odnos između RhoC i IQGAP1 u poticanju širenja. Rezultati su pokazali da RhoC-siRNA nije očigledan učinak na proliferaciju uzrokovane IQGAP1 (** P 0,01, slika 3B).. Međutim, osiromašeni IQGAP1 ekspresiju siRNA blokira proliferaciju uzrokovane izražavanja konstitutivno aktivnog RhoC (* P 0,05, ** p < 0.01, Slika 3c.). To pokazuje da je u procesu poticanja širenja BGC-823 stanicama, RhoC zahtijeva sudjelovanje IQGAP1. Nadalje, budući da RhoC efekt potrebno IQGAP1 dok IQGAP1 efekt nije potrebna RhoC, RhoC možda uzvodno od IQGAP1 i uzeo IQGAP1 kao efektora. Pregled

Utjecaj RhoC i IQGAP1 na ekspresiju staničnog ciklusa srodnih proteina

kako bi se dodatno potvrditi proliferacija stimulirajuće djelovanje RhoC i IQGAP1 i istražiti mogući mehanizam kroz koji se ti proteini regulirati proliferaciju stanica, primjenjuje se Zapadna upijajući otkrivanje ekspresiju staničnog ciklusa srodnih proteina u stanicama tretiranim s metodama povećanje ili smanjenje RhoC i IQGAP1. Rezultati su pokazali da je povećanje RhoC i IQGAP1 stimulira ekspresiju ciklina E i ciklina D1, dok je imao učinak ekspresije ciklina B i CDK1 /2. S druge strane, smanjenje RhoC i IQGAP1 inhibira ekspresiju ciklina E i ciklin D1. U međuvremenu, u slučaju RhoC ušutkavanja po siRNA, povećanje IQGAP1 ili IQGAP1-C i dalje povećavaju ekspresiju ciklina E i ciklina D1 (sl. 4). Teze rezultati pokazuju da RhoC i IQGAP1 može regulirati širenje kroz promjenu ekspresije proteina staničnog ciklusa u vezi i uzrokuje više stanica za ulazak u S fazu. Pregled

RhoC i IQGAP1 lokalizirani and Bound jedni druge u stanicama pregled

imunofluorescencije metoda Co-imunotaloženje primijenjeni su dalje ispitati mogući vezanja između RhoC i IQGAP1. Oba BGC-823 i COS-7 stanice su ko-inficirane s Ad-IQGAP1 i Ad-RhoC-V14 ili Ad-IQGAP1-C i Ad-RhoC-V14 48 h, a ukupni lizat stanica je imunoistaloži s anti-RhoC antitijela i ispitana s antitijelima protiv IQGAP1 ili imunoprecipitiran s protu-IQGAP1 antitijela i ispitana s antitijelima RhoC, respektivno. Rezultati su pokazali RhoC i IQGAP1 vezani međusobno, s C-terminalnim fragmentom IQGAP1 kao vezno mjesto sa RhoC (Sl. 5A i C). Štoviše, eseja imunoflorescencije otkriva da IQGAP1 distribuiran uglavnom u citoplazmi, gdje je ko-lokalizirana sa RhoC (Sl. 5B i D). Pregled

Rasprava pregled

nekontroliranu proliferaciju stanica raka zahtijeva koordinirani i strogo regulira funkcija mnogih proteina [23], [24], [25], [26]. To je, dakle, presudno za proučavanje mehanizma kako su ti proteini djeluju u regulaciji proliferacije stanica karcinoma. Naši prethodni rezultati su dokumentirali da je izraz IQGAP1 i RhoC su povećani u želučanom tkivu raka i staničnim linijama karcinoma [21]. Razina njihove izraze imala značajnu korelaciju s lošom diferencijacije karcinoma želuca. Međutim, to nije sasvim jasno da li IQGAP1 i RhoC su povezane sa staničnom proliferacijom tumorigenensis. U ovom istraživanju, razina ekspresije od IQGAP1 i RhoC i njihovih bioloških aktivnosti u rak želuca staničnoj liniji BGC-823, bili su prilagođeni kroz infekcije s adenovirusnim konstruktima ili transfekciju s plazmida DNA ili siRNA. Proliferaciju stanica zatim je istražen pomoću ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU i MTT metodom. Rezultati su pokazali da je konstitutivno aktivna RhoC značajno unaprijeđen proliferacije aktivnost želučanog raka stanične linije BGC-823, i iscrpljivanje RhoC po siRNA inhibiran osobine. Podaci istraživanja su pokazala da RhoC imao važnu ulogu u migraciji stanica i metastaziranje [27], [28], [29], [30], [31], ali bilo je nekih proturječnosti o tome da li RhoC reguliraju proces transformacije i proliferacije u stanicama tumora [27], [29], [32]. Naši rezultati pružaju dokaze da RhoC nemamo proliferacije poticajno djeluje na želučane stanice raka. To će biti od pomoći u rasvjetljavanju uloge RhoC u regulaciji proliferacije stanica raka. Pregled

Naši rezultati pokazuju da je slična RhoC, prekomjerna ekspresija egzogenog IQGAP1 i IQGAP1-C također promiče proliferaciju BGC-823 stanicama, dok obaranje endogenog IQGAP1 prigušuje proliferacije sposobnost stanica, što ukazuje da IQGAP1 pridonosi regulaciji stanične proliferacije. S obzirom da su i RhoC i IQGAP1 imaju ulogu u regulaciji proliferacije stanica raka i njihovih izraza su vrlo tijesno povezane, možemo dodatno istražiti funkcionalnu povezanost između RhoC i IQGAP1. Rezultati su pokazali da je u BGC-823 stanicama s knock-down od IQGAP1 izražavanja, infekcije s adenovirus kodiranja konstitutivno aktivnog RhoC ne može stimulirati proliferaciju aktivnost više; dok BGC-823 stanice s knock-down RhoC ekspresije, prekomjerna ekspresija ili IQGAP1 IQGAP1 C kroz inficiranjem stanica adenovirusom koji kodiraju odgovarajuće DNA još uvijek može uzrokovati veću proliferaciju aktivnost. To pokazuje da RhoC vozio proliferacije tumora putem IQGAP1, posebno preko C-terminalnog fragmenta IQGAP1. Ova funkcionalna povezanost između RhoC i IQGAP1 dodatno je podržan od strane Co-imuno i imunofluorescencije. Ovi rezultati sugeriraju da RhoC je IQGAP1 kao efektora u regulaciji proliferacije stanica raka, bacajući novo savjet o odnosu tih proteina. Pregled

Kako bi se prvenstveno istražiti nizvodno mehanizam kroz koji RhoC /IQGAP1 regulirati proliferaciju stanica želuca raka ispitivali smo učinak RhoC /IQGAP1 na ekspresiju staničnog ciklusa srodnih proteina, uključujući i ciklina E, ciklin D1, ciklin B i o ciklinu ovisnom kinazom (CDK). Rezultati su pokazali da su i RhoC i IQGAP1 stimulira ekspresiju ciklin E i ciklin D1, ali nije imao učinka na ekspresiju ciklina B i CDK. Proliferaciju eukariotskih stanica kontrolira na specifičnim mjestima u staničnom ciklusu, osobito u prvoj fazi raspora (G1) do faze DNA sintetički (S), a u drugoj fazi raspora (G2) do mitoze (M) prijelaza. Od čega, G1-S prijelazi je glavni propis točka staničnog ciklusa. Ciklin D1 i ciklin E kontrolu staničnog napredovanje kroz promicanje G1 u S fazi staničnog ciklusa. Naši rezultati sugeriraju da je, kada je RhoC aktivira izvanstanične ili unutarstanični signal, to zasigurno IQGAP1 a zatim utjecao na ekspresiju proteina stanične ciklusa vezanih izravno ili neizravno preko neke nejasne korake prijenosa signala, što na kraju može dovesti do promjena u progresiji stanica i proliferacija (Sl. 6). pregled

na kraju, ovi podaci iz trenutnoj studiji, u kombinaciji s prethodno objavljenim podacima [21], podupiru hipotezu da RhoC sudjeluje u oba migracije i proliferacije stanica želuca raka. IQGAP1 sudjeluju regulaciju proliferacije stanica karcinoma kao nizvodni efektor RhoC. Ovi podaci mogu se sjaji svjetlo na razvoj terapijskih pristupa za rak želuca. Pregled

Izvori pregled

Zahvaljujemo dr Gerry Boss i dr Renate Pilz u University of California, San Diego, CA, USA, za ljubazni darovi adenovirusni konstrukata.

• PLoS ONE: polimorfizama ERCC1 i XPF gena i rizik od raka želuca u istočnoj kineskoj Population
• PLoS ONE: Reg IV je izravna Target crijevnih transkripcijskog čimbenika CdX2 u želučanom Cancer