Plos ONE: RhoC Uravnava širjenju želodca raka celic skozi interakcijo z IQGAP1

Povzetek

Naši rezultati prejšnjih raziskav so pokazali, da sta bila oba Ras homolog član družine C (RhoC) in IQ-domain-GTPase aktivira protein 1 (IQGAP1) prekomerno izražen v želodčnih tkiv in celic raka, vendar je njihova vloga v tumorigenensis ni jasno obravnavati. Tukaj smo poročali širjenja stimulativni učinek RhoC in IQGAP1 na želodcu rakavih celic in interakcijo med dvema beljakovin pri urejanju širjenja želodca rakavih celic. Plazmidov in virusne konstrukti kodirajo ciljno siRNA in DNA smo uporabili za spreminjanje izražanje RhoC in IQGAP1. MTT način in BrdU vključitev test smo uporabili za analizo učinkov RhoC in različne strukture za IQGAP1 na orožja. vsebnosti beljakovin v IQGAP1 in RhoC v celičnih linijah so odkrili Western blot. Imunofluorescenčnega in Co-imuno testi so bili uporabljeni za preiskavo lokalizacije in povezovanje med RhoC in IQGAP1. Rezultati so pokazali, da RhoC, IQGAP1 in C-terminalni fragment IQGAP1 znatno stimulira proliferacijo želodčnih rakavih celic in izboljšano izražanje ciklina E in ciklin D1. Nasprotno, zmanjšanje endogenega IQGAP1 ali RhoC ga siRNA oslabljena celične proliferacije. Izčrpavanje IQGAP1 izražanja, ki ga siRNA močno blokiral proliferativni aktivnosti konstitutivno aktivne RhoC, medtem ko RhoC utišanje s siRNA ni vplival na IQGAP1 sprožene orožja na želodcu rakavih celic. Co-imunoprecipitacije in imunofluorescenčnih testi so pokazali, da RhoC in IQGAP1 vezani med seboj. Skratka, naši rezultati kažejo, da RhoC spodbuja proliferacijo želodčnih rakavih celic prek zaposlovanju IQGAP1 kot efektor

Navedba. Wu Y, Tao Y, Chen Y, Xu W (2012) RhoC Uravnava širjenju želodčne rakave celice v interakciji z IQGAP1. PLoS ONE 7 (11): e48917. doi: 10,1371 /journal.pone.0048917

Urednik: Zoran Čulig, Innsbruck Medical University, Avstrija

Prejeto: 26. junij 2012; Sprejeto: 2. oktober 2012; Objavljeno: 7. november 2012

Copyright: © 2012 Wu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija je bila podprta z raziskovalnega sklada Specialized za višji kadrov Program Univerze Jiangsu (št. 11JDG114) in National Natural Science Foundation Kitajske (št. 31040002). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Rho GTPases lahko povzroči določene znotrajcelični prenos signala in vpliva na različne celične aktivnosti, vključno z reorganizacijo aktina citoskeleta, genskega prepisovanja, preživetje in orožja [1], [2]. Čeprav treh Rho izooblik, RhoA, RhoB in RhoC, kažejo več kot 85% identiteta amino kisline, ki jih podeljujejo razlike v delovanju v celicah [3]. RhoA in RhoC proteini so pokazale, da ima pozitivno vlogo pri širjenju in maligne transformacije [4], [5] [6], ker se zdi, da je bolj divergentno vloga RhoB v teh procesih [7], [8]. Večina študij je pokazala, da je imel RhoC več funkcij v tumorske metastaze, orchestrating delovanje več na nižji stopnji efektor, degradacijo in obnovo ekstracelularnega matriksa (ECM). Vendar pa ostaja nekaj polemike o vlogi RhoC pri regulaciji celične proliferacije [9], [10], [11], [12]. Rezultati Pile laboratorija so pokazali, da RhoA in RhoC siRNA predstavljajo močna orodja za zaviranje proliferacije celic raka, invazivnosti in angiogenezo, tako in vitro
in in vivo
[9]. Ne et al
ugotovili, da lahko intratumorska injekcija RhoA ali RhoC siRNA na golih miših zavira rast tumorjev [13]. V nasprotju s tem, Faried et al
poročali, da RhoA spodbuja rast tumorja več kot RhoC, medtem RhoC povzroča oddaljenih metastaz v primerjavi z RhoA [11], v soglasju z omenjenega stališča Clark in sodelavci [14]. Študija, ki jo Ikoma in kolegi, je pokazala, da RhoC ni vplivala na rast tumorja, ampak krepi metastatskega naravo pljučnega raka, ki ga spodbuja celično gibljivost [10]. Zato je potrebna nadaljnja študija za opredelitev vloge RhoC pri urejanju biološke aktivnosti tumorskih celic.

IQ-domena GTPase-aktivacijo beljakovine (IQGAPs), so pomembni regulatorji celičnih procesov, ki vključujejo citoskeletne preureditve v celični migraciji , orožja in cytokinesis [15] [16] [17]. IQGAP1 je eden izmed članov treh sorodnih IQGAPs sesalcev in spreminja v znotrajcelični IQGAP1 izražanja ali funkcije je poročala, da spremeni celične aktivnosti [17] [18] [19] [20]. Kot oder protein IQGAP1 veže več proteinov, kot so onkogeni beta-catenin in Src, zaviralnih E-kadherina in Rho GTPases CDC42 in Rac1, in povzroči spremembo celičnega vedenj, zlasti za rakaste celice. Naša predhodna študija je pokazala, da so bile višje izrazi RhoC in IQGAP1 v želodca tkivu raka bistveno obratno povezana z diferenciacijo želodca rakavih celic [21]. Poleg tega so bili pomembni za širjenje in migracije rakavih celic tudi vsebnosti beljakovin. Zato smo hipotezo, da lahko tako RhoC in IQGAP1 igrajo pomembno vlogo pri preoblikovanju raka celic in proliferacijo in obstaja možnost povezave med njimi. V tej raziskavi smo proučevali vpliv RhoC in različne strukture za IQGAP1 na raka celično proliferacijo in celično cikla povezanih proteinov. Prav tako smo raziskali odnos med dvema molekul s skupno uporabo siRNA motenj in tehnike virusne okužbe.

Materiali in metode

Reagenti

želodca linije rakava celica BGC-823 [22] in afriške zelene opice ledvicami fibroblastne celice linije COS-7 je bilo, ki jih je inštitut za biologijo celice (Shanghai, Kitajska). The Green Fluorescent Protein (DKP) plazmid in celic transfekciji reagent Lipofectamin ™ 2000 je bilo iz Invitrogen (Carlsbad, CA); Plazmidi, ki kodirajo zastavo označila IQGAP1 (pFLAG-IQGAP1), Zastava označena IQGAP1 C-terminalni fragment (pFLAG-IQGAP1-C), in Zastava označena IQGAP1 N-terminalni fragment (pFLAG-IQGAP1-N), in adenovirusnih vektorjev kodira beta-galaktosidase (pAD-LacZ), konstitutivno aktivno obliko RhoC (pAD-RhoC-V14), celotno dolžino IQGAP1 (pAD-IQGAP1) in C-terminalni fragment IQGAP1 (pAD-IQGAP1-C) so bili prijazni daril iz Dr. Gerry Boss in Dr. Renate Pilz na University of California, San Diego, ZDA. Človeški ESPG BrdU, Mouse anti-BrdU protitelo, DNaze I, MTT, Hoechst 33.342 bili FITC- in Cy3-konjugiranih sekundarna protitelesa iz Sigma (St. Louis, MO). Anti-IQGAP1 protitelesa (proti N-terminalni fragment, 314-422 aa), anti-RhoA protitelesa, anti-IgG protitelesa, anti-CDK1 /protitelesa CDK2, kratke interferenčne RNA (siRNA) za RhoC in negativne kontrole so Božičkov Cruz Biotechnology (santa Cruz, CA). Rho C siRNA je bazen 3 ciljne specifične 20-25 nt siRNAs namenjen podreti izražanje genov s sekvencami, kot sledi: sequence1, občutek 5'-CUACUGUCUUUGAGAACUAtt-3'and nezaznavnih 5'-UAGUUCUCAA- AGACAGUAGtt-3 '; sequence2, občutek 5'-GCAGGAAGACUAUGAUCGAtt-3 "in nezaznavnih 5'-UCGAUCAUAGUCUUCCUGCtt-3 '; sequence3, občutek 5'-CAC- ACCAGCACUUUAUACAtt-3 "in protismiselno 5'-UGUAUAAAGUGCUGGUGUG- tt-3". protitelo anti-IQGAP1 (proti C-terminalni fragment, ki ustreza aminokislinam 863-1657 človeške IQGAP1) je bila od Millipore (Billerica, MA). Protitelo anti-RhoC je od Abcam (Cambridge, MA). protitelo B proti ciklin je od Bioworld tehnologijo (St. Louis Park, MN). D1 protitelo anti-ciklin in anti-ciklin E protitelesa iz Boster (Wuhan, Kitajska). SiRNA za IQGAP1 sintetiziramo z Qiagen (Valencia, CA), je bil cilj sekvenco IQGAP1 5'-AAGTTCTACGGGAAGTAATTG-3 '(5058-5078 bp). Hrenovo peroksidazo (HRP), označenih s sekundarno protitelo je iz Rockland Immunochemicals (Gilbertsville, PA). Protein G Plus /Protein A-agaroznem je od Calbiochem (San Diego, CA). Electrochemiluminescence (ECL) reagenti so bili od Millipore (Billerici, MA). Vsi reagenti, uporabljeni v tej študiji, so bili analitsko čisti.

Cell Culture, Transfekcija in okužbe
celice

BGC-823 in COS-7 smo gojili v 1 × Dulbeccovem spremenjenimi medij Eagle je (DMEM), dopolnjenem s 10% fetalnega govejega seruma (FBS) pri 37 ° C v 5% CO _{2 atmosferi. Medij je bil vsak drugi dan spremenile in celice so bile sub-kultiviramo na sotočju. Za transfekcijo so bile celice sub-kultiviramo dan pred postopkom in transfekcija želodčnih rakavih celic s plazmidi ali siRNA je bila izvedena po navodilih proizvajalca. Za okužbo so 293A celice transfekciji s adenovirusnih vektorjev PAD-lacZ, PAD-RhoC-V14, PAD-IQGAP1 in PAD-IQGAP1-C, in virusnih delcev, ki jih proizvajajo celice so bile pridelane in pomnožili. Virusi so poimenovali Ad-lacZ, Ad-RhoC-14, Ad-IQGAP1 in Ad-IQGAP1-C oziroma in so bili uporabljeni za okužbo BGC-823 celic. Na dan pred okužbo, so BGC-823 celic sveže nasadijo na 70-80% sotočju in proces okužba je bila izvedena v skladu z navodili proizvajalca na drugi dan.}

Western blot

kulturi celice smo sprali trikrat v PBS in lizirali z RIPA pufrom (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 1% (v /v) Triton X-100, 1 mM EDTA, 1 mM leupeptina, 1 mM fenilmetilsulfonil fluorid, 10 mM NaF , 1 mM Na _{3VO 4). Enake količine proteina smo ločili z 8% ali 12% SDS-PAGE po proteina molekulsko maso. Primarna protitelesa smo inkubirali čez noč pri 4 ° C, in ustrezna sekundarna protitelesa smo inkubirali 1 uro pri sobni temperaturi. Tri izpirke smo izvedli s TBS /T po vsakem inkubacijo protiteles. ECL reagenti so bili uporabljeni za prikaz pozitivne pasov na membrano.}

MTT Vsebnost

0,5-1 x 10 ^{3cells v 150 ul srednjih zasadimo v vdolbino 96-dobro plošče. Po vezave smo celice okužene z ustreznim adenovirusom 48 ur, ali transfektirana z siRNA za 72 ur oz. V kombinaciji skupinah smo celice transfektirali z siRNA ciljanje RhoC ali IQGAP1 24 h in nato okužene z Ad-IQGAP1-C /Ad-IQGAP1 ali Ad-RhoC-V14 za dodatno 48 ur pri 37 ° C v 5% CO _{2. V kultivirane celice speremo s PBS, obdelamo z 20 ul z MTT (0,5 mg /ml) in nato inkubiramo pri 37 ° C 1 uro. Medij odstranimo in 100 ul v dimetilsulfoksidu (DMSO) dodamo v vsako vdolbino. Absorpcijo je bila določena pri 490 nm z uporabo čitalnika mikroplošči. Vse teste smo izvedli v treh izvodih.}}

BrdU Vključitev Vsebnost

Stopnja sintezo DNA smo merili z BrdU vključitvijo imunofluorescencno. Količina cepitev celic je bila prilagojena za doseganje gostoto 70-80% konfluence na dan transfekcije. Plazmid pFLAG-IQGAP1, pFLAG-IQGAP1-C ali pFLAG-IQGAP1-N smo sočasno transfektirana z GFP plazmida v BGC-823 celicah s pomočjo Lipofectamin ™ 2000, kot je opisano zgoraj. 24 ur po transfekciji smo celice stradamo seruma preko noči, obdelamo s 200 μ
M BrdU in inkubiramo približno 16 ur. Celice smo nato sprali s PBS, določena v sveže pripravljenega 4% (v /v) paraformaldehid pri sobni temperaturi 10 minut, ter permeabiliziramo z 0,5% (v /v) Triton X-100, čemur sledi inkubacija z DNaze I (0,5 U /ul) 30 minut pri 37 ° C. Celice inkubiramo s primarnim protitelesom proti BrdU preko noči pri 4 ° C, čemur sledi Cy3-konjugiranega sekundarnega protitelesa za 1 h pri sobni temperaturi. Na koncu so bili jedra števec-obarvajo s podjetjem Hoechst 33342 15 minut, speremo s PBS za trikrat in vizualizira pod fluorescentno mikroskopijo. Vsak test je bil izveden v četverček in ponovi trikrat.

Co-imuno

Da bi raziskali interakcijo med RhoC in IQGAP1, COS-7 in BGC-823 celice so sočasno okuženi z ad IQGAP1 ali Ad-IQGAP1-C, in Ad-RhoC-V14 za 48 ur, nato pa smo lizirali z RIPA pufrom, kot je opisano. Protitelo proti RhoC, IQGAP1 ali izotipa IgG izravnane bila uporabljena za imuno oz. Immunoprecipitates smo analizirali z Western blotting-om, kot zgoraj, z uporabo anti-RhoC ali anti-IQGAP1 protitelesa.

imunofluorescence mikroskopijo

celice kultivirane v pokrivnih listih so bile določene s sveže pripravljenega 4% (vol /vol ) paraformaldehid v PBS 15 minut, permeabiliziramo z 0,3% Triton X-100 v PBS 10 minut, ter blokirali s 3% (m /v) govejega serumskega albumina (BSA) v PBS. Za imunofluorescenca so bile celice na pokrovu listih zaporedno inkubirana z kunčje poliklonalno protitelo proti IQGAP1 pri 4 ° C čez noč, FITC konjugiranega kozjega anti-kunčjega IgG za 1 uro pri sobni temperaturi, miške monoklonsko protitelo proti RhoC za 2 uri pri sobni temperaturi in končno kozji anti-mišji IgG, konjugiran z Cy3 1 h pri sobni temperaturi. Tri izpirke smo izvedli po vsakem inkubacijo protiteles. Jedra so bili nasprotni obarvali s podjetjem Hoechst 33342. Rezultat so opazili pod fluorescenčnim mikroskopom sestavljeni s CCD kamero (Leica).

Statistična analiza

Podatke smo analizirali z uporabo dveh tailed ANOVA ali študent je t
-test z statistične programske opreme SPSS, in izrazili kot sredstvo ± standardni odklon (SD). P
. ≪ 0.05 je zdelo pomembno

Rezultati

RhoC predstavljenih širjenju BGC-823 celic

Učinek RhoC na celično proliferacijo bilo tudi raziskati. BGC-823 celice so bile okužene z adenovirusom, ki kodira konstitutivno aktivne RhoC in celična proliferacija je zaznal MTT testu. Rezultati so pokazali, da RhoC spodbujati tudi širjenje želodca rakavih celic BGC-823. Prekomerno ekspresijo RhoC-V14 v BGC-823 celicah povzročil 48,7% povečanje proliferacije celic (sl. 1A in B). Medtem, izčrpavanje RhoC s siRNA zmanjša širjenje BGC-823 celic za 43,1% (sl. 1C in D).

IQGAP1 Enhanced širjenju BGC-823 celic

(1) Rezultati MTT testom.

za oceno prispevek IQGAP1 do orožja, je MTT test se uporablja za odkrivanje preživetja raka celične linije želodca BGC-823. Rezultati so pokazali, da v primerjavi s kontrolnimi celicami (Ad-LacZ skupina), visoko ekspresijo C-terminalni fragment IQGAP1 (Ad-IQGAP1-C skupino) ali celotno dolžino IQGAP1 (Ad-IQGAP1 skupine) izboljšano celično proliferacijo za 116% in 39%, v tem zaporedju ( *
P < 0,05, *
P <. 0.05, slika 2A in B). Nasprotno je N-terminalni fragment IQGAP1 nima očitnega vpliva na proliferacijo celic. Po drugi strani pa vmešavanje IQGAP1 izražanja s siRNA zmanjšano celično proliferacijo za 43% v primerjavi z negativno kontrolo ( *
P. ≪ 0,05, slika 2C in D). Ti rezultati so pokazali, da je IQGAP1 lahko pospešila celične proliferacije; aktivna domena je nahajal v C-terminalni fragment proteina.

(2) Rezultati BrdU vključitve testu.

BrdU vključitev testom dobimo vzorec odziva podoben tistemu opazili MTT test. Izražanje zastave-IQGAP1 in zastave-IQGAP1-C bistveno spodbujati sintezo DNK na ravni skoraj 1 flod in 2-krat, kot so opazili pri zastave-D1 (* P < 0,05, * p. ≪ 0,05, slika 2E in F) , medtem ko IQGAP1-N ni pokazala nobenih učinkov na sintezo DNK, kar kaže, da IQGAP1 drugače uravnava sintezo DNK prek različnih področjih.

zveza med RhoC in IQGAP1 pri spodbujanju širjenju BGC-823 celic

(1) RhoC in IQGAP1 ni vplivala na izrazu seboj.

Zgornji rezultati nakazujejo, da sta RhoC in IQGAP1 prispevali k širjenju BGC-823 celic. Da se razjasni morebitno povezavo med RhoC in IQGAP1 pri regulaciji celične proliferacije, smo najprej raziskati, če IQGAP1 in RhoC vpliva na njihovo izražanje drug drugega. BGC-823 celice smo transfektirali z siRNA da rasklapanje izražanja RhoC ali IQGAP1, nato pa so bile okužene z adenovirusom kodiranje IQGAP1, IQGAP1-C ali konstitutivno aktivno RhoC oz. Western blot smo uporabili za ugotavljanje, ali se lahko spreminja ekspresijo in aktivnost enega proteina vpliva na izražanje drugega proteina ali ne. Rezultati so pokazali, da je za povečanje eksogeni ali rasklapanje endogenega IQGAP1 ali IQGAP1-C, ni vplival na izražanje RhoC. Podobno povečanje konstitutivno aktivno RhoC ali motnje endogenega RhoC niso vplivale na izražanje IQGAP1 ali IQGAP1-C (sl. 3A).

(2) IQGAP1 je efektorja RhoC v stimuliranje proliferacije celic.

MTT test je bil uporabljen za pojasnitev razmerja med RhoC in IQGAP1 pri spodbujanju širjenja. Rezultati so pokazali, da je RhoC-siRNA ni očitnega vpliva na proliferacijo s IQGAP1 (** P < 0,01, slika 3B.) Povzročajo. Vendar pa izčrpavanje IQGAP1 izražanja, ki ga siRNA blokira širjenje z ekspresijo konstitutivno aktivne RhoC povzročile (* p < 0,05, ** p < 0,01, slika 3C.). To kaže, da med postopkom stimuliranje proliferacije BGC-823 celic, RhoC zahteva sodelovanje IQGAP1. Poleg tega, ker učinek RhoC je potrebno IQGAP1 medtem ko je učinek IQGAP1 je ni zahteval RhoC, lahko RhoC je na postopke pred IQGAP1 in je IQGAP1 kot efektor.

Vpliv RhoC in IQGAP1 na izražanje celičnega cikla Podobni Beljakovine

za dodatno potrditev stimulacijski orožja učinek, ki RhoC in IQGAP1 in razišče morebitno mehanizem, s katerim so ti proteini uravnavajo proliferacijo celic smo uporabili Western blot za odkrivanje izražanja proteinov, povezanih celičnega ciklusa v celicah, ki so se zdravili z metodami poveča ali zmanjša RhoC in IQGAP1. Rezultati so pokazali, da je povečanje RhoC in IQGAP1 spodbudila izražanje ciklina E in ciklin D1, medtem ko je imel nobenega vpliva na izražanje ciklina B in CDK1 /2. Po drugi strani pa je zmanjšanje RhoC in IQGAP1 inhibira izražanje ciklina E in ciklin D1. Medtem, v primeru RhoC utišanje ga siRNA, povečanje IQGAP1 ali IQGAP1-C še povečajo ekspresijo ciklin E in ciklin D1 (sl. 4). Teze Rezultati so pokazali, da bi lahko RhoC in IQGAP1 urediti širjenja s spreminjanjem ekspresijo povezanih cikla beljakovin celice in povzročajo več celic za vstop v S fazo.

RhoC in IQGAP1 Co-lokaliziran in Bound seboj v celice

Imunofluorescenčni in način Co-imuno smo uporabili za nadaljnje preučiti morebitno vezavo med RhoC in IQGAP1. Oba BGC-823 in COS-7 celice so sočasno okuženi z Ad-IQGAP1 in Ad-RhoC-V14 ali Ad-IQGAP1-C in Ad-RhoC-V14 za 48 ur, in skupni celični lizat bilo imuno z anti-RhoC protitelesa in skeniran z protiteles proti IQGAP1 ali imuno z anti-IQGAP1 protitelesa in skeniran z protiteles proti RhoC oz. Rezultati so pokazali RhoC in IQGAP1 vezani drug na drugega, s C-terminalni fragment IQGAP1 kot vezavnega mesta s RhoC (sl. 5A in C). Poleg tega imunofluoroscenca pokazala, da je IQGAP1 prodajajo v glavnem v citoplazmi, kjer je sočasno lokaliziranim z RhoC (sl. 5B in D).

Pogovor

Nenadzorovano širjenje rakavih celic zahteva usklajeno in dobro urejeno funkcija številnih proteinov [23], [24], [25], [26]. Zato je bistvenega pomena, da preuči mehanizem, kako se ti proteini interakcijo pri urejanju širjenja na rakavih celic. Naši prejšnji rezultati so dokumentirani, da so izraz IQGAP1 in RhoC v želodčnih tkivih raka in raka na celičnih linijah [21] povečal. Raven njihovih izrazov imela pomembno povezanost s slabo diferenciacijo rakom želodca. Vendar pa ni povsem jasno, ali so IQGAP1 in RhoC povezana s proliferacijo celic v tumorigenensis. V tej študiji, ravni ekspresije IQGAP1 in RhoC in njihovih bioloških aktivnosti v rakave celice skladu želodca so BGC-823 prilagojena z okužbo s adenovirusnih konstrukti ali transfekciji z plazmidne DNA ali siRNA. Širjenje celice smo nato raziskovali uporabo brdu vključenega testa in način MTT. Rezultati so pokazali, da je konstitutivno aktivni RhoC pomembno spodbujati aktivnosti širjenju raka celične linije želodca BGC-823, in izčrpavanje RhoC s siRNA inhibira lastnosti. Podatki raziskav so pokazali, da je imel RhoC pomembno vlogo pri celični migraciji in metastaz [27], [28], [29] [30] [31], vendar je bilo nekaj protislovij o tem, ali RhoC urediti proces preoblikovanja in širjenja v tumorskih celicah [27] [29] [32]. Naši rezultati so dokaz, da se imajo RhoC učinek proliferacije spodbujanje na želodcu rakavih celic. To bo v pomoč pri pojasnjevanju vloge RhoC pri urejanju širjenje rakavih celic.

Naši rezultati so pokazali, da je podoben RhoC, prekomerno ekspresijo eksogenega IQGAP1 in IQGAP1-C tudi spodbuja širjenja BGC-823 celic, ker rasklapanje endogenega IQGAP1 oslabljena sposobnost proliferacije celice, kar pomeni, da IQGAP1 prispeva tudi k ureditvi celične proliferacije. Glede na to, da imata obe RhoC in IQGAP1 vlogo pri uravnavanju širjenje rakavih celic in njihovih izrazov so bili tesno povezani, bomo podrobneje preučiti funkcionalno povezavo med RhoC in IQGAP1. Rezultati so pokazali, da je z družbo v BGC-823 celice knock navzdol za IQGAP1 izražanja, okužbo z adenovirus kodiranje konstitutivno aktivno RhoC ne more spodbuditi dejavnosti za širjenje orožja in več; v BGC-823 celic, medtem ko je pri knock navzdol od RhoC izražanja, prekomerno ekspresijo IQGAP1 ali IQGAP1-C z okužbo celic z adenovirusom kodirajo ustrezno DNK še vedno povzroča višjo aktivnost širjenja jedrskega orožja. To kaže, da RhoC peljal proliferacijo tumorja skozi IQGAP1, zlasti s pomočjo C-terminalni fragment IQGAP1. Ta funkcijska povezava med RhoC in IQGAP1 je podprto tudi z Co-imuno in imunofluorescence. Ti rezultati kažejo, da RhoC je IQGAP1 kot efektor pri urejanju širjenje rakavih celic, metanje nov namig o odnosu teh proteinov.

V prvi vrsti raziskati mehanizem na nižji stopnji, prek katerega RhoC /IQGAP1 urejanje širjenja želodčnih rakavih celic smo raziskovali vpliv RhoC /IQGAP1 na izražanje proteinov povezanih celičnega ciklusa, vključno ciklin E, ciklin D1, ciklin B in ciklin odvisno kinazo (CDK). Rezultati so pokazali, da sta RhoC in IQGAP1 spodbujati izražanje ciklin E in ciklin D1, vendar ni imel nobenega vpliva na izražanje ciklin B in CDK. Širjenje evkariontskih celicah je krmiljen na določenih točkah celičnega cikla, zlasti v prvi fazi reže (G1) v fazi DNA-sintetični (S) in drugo fazo reže (G2) na mitozo (M) prehoda. Od tega, G1-S prehaja je glavni ureditev točke celičnega cikla. Ciklin D1 in ciklin E nadzorujejo napredovanje celičnega s spodbujanjem G1 do S fazi celičnega cikla. Naši rezultati kažejo, da, ko je RhoC aktivira zunajcelični ali znotrajcelični signal je vezan na IQGAP1 in nato vplival na izražanje proteinov celičnih povezanih cikla, neposredno ali posredno prek nekaterih nejasnih korakih prenos signalov, ki bi lahko sčasoma privede do spremembe napredovanja celic in orožja (sl. 6).

Skratka, ti podatki iz trenutne študije, v povezavi z že objavljenimi podatki [21], podpirajo hipotezo, da RhoC sodeluje tako migracij in širjenje želodca rakavih celic. IQGAP1 sodelujejo tudi ureditev širjenja rakavih celic kot efektor na nižji stopnji od RhoC. Ti podatki se lahko svetijo luči na razvoj terapevtskih pristopov za raka želodca.

Priznanja

Zahvaljujemo se dr Gerry Boss in dr Renate Pilz na University of California, San Diego, CA, ZDA, za prijazni darila adenovirusnih konstrukti.

• Plos ONE: polimorfizmi v ERCC1 in Natisnite Geni in tveganje želodčnega raka v vzhodni kitajski Population
• Plos ONE: Reg IV je neposreden cilj črevesnih prepisovalni dejavnik CDX2 želodčnega raka