PLoS ONE: Ciljanje CDH17 Potiskuje progresije tumora u rak želuca by snižavanje Wnt /beta-katenina Signaling

Sažetak pregled

Svrha pregled

karcinoma želuca i dalje jedan od vodećih uzroka smrti od raka u svijetu. Pacijenti obično prisutni kasni s lokalnim invazijom ili metastaza, za koje ne postoje učinkovite terapije dostupne. Nakon prethodne studije koje su identificirali adhesion molecule kadherina-17 (CDH17) kao potencijalni marker za želučane karcinoma, proveli smo proof-of-princip studija za razvoj racionalne terapijske pristupe koji ciljaju CDH17 za liječenje ove bolesti. Pregled

Metode

Imunohistokem se koristi za proučavanje ekspresije CDH17 u 156 želučanog karcinoma, a odnos između opstanka i CDH17 izražavanja proučavana je multivarijatne analize. Učinak RNA smetnji posredovanih obaranje CDH17 na proliferaciju staničnih linija karcinoma želuca, ispitana je in vitro i in vivo, kao i učinke na nizvodnog signaliziranja imunoblota. Pregled

Rezultati

CDH17 je dosljedno viša u ljudskim želučanog karcinoma, a ukupno preživljenje u bolesnika s CDH17 ranijim koracima bila slabija nego u onih bez ekspresije tog gena (5 god ukupna stopa preživljavanja 29,0% vs 45,0%, P < 0,01). Funkcionalni testovi su pokazali da CDH17 obaranje inhibirana proliferacija stanica, adheziju, migracije, invazije, clonogenicity i izazvati G0 /G1 uhićenje. Kod miševa shRNA posredovane CDH17 obaranje značajno inhibira rast tumora; intratumoralne injekcije od CDH17 shRNAs posljedicu značajne antitumorske efekte i na transplantiranim modelima tumora. Antitumorska mehanizmi u podlozi CDH17 inhibiciju uključuju inaktivaciju Wnt /β-katenina signalizaciju. Pregled

Zaključak

Naši rezultati prepoznati CDH17 kao biomarkera želučanog karcinoma i atraktivnog terapijski cilj za taj agresivni malignosti.

Izvor: Qiu Hb, Zhang Ly, Ren C, Zeng Zl, Wu WJ, Luo Hy, et al. (2013) Ciljanje CDH17 Potiskuje progresije tumora u rak želuca by snižavanje Wnt /β-katenina signalizaciju. PLoS ONE 8 (3): e56959. doi: 10,1371 /journal.pone.0056959 pregled

Urednik: Cara Gottardi, Northwestern University Feinberg School of Medicine, United States of America pregled

Primljeno: 22. listopada 2012. godine; Prihvaćeno: 16 siječnja 2013; Objavljeno: 15 ožujak 2013 pregled

Copyright: © 2013 Qiu et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane Nacionalne zaklade za znanost (Natural 30672408 na RHX). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći uzrok smrti od raka u svijetu. Iako je incidencija karcinoma želuca dramatično je smanjena u nekim razvijenim zemljama tijekom proteklog desetljeća, ukupno milijun novih slučajeva Procjenjuje se da se svake godine dijagnosticira [1]. Bolesnici s ovom bolešću obično imaju lošu prognozu, što čini 10% od ukupnog broja smrtnih slučajeva od raka [2]. Čak i nakon radikalne operacije, više od polovice pacijenata ponavljati. Zahvaćenost limfnih čvorova, dubina invazije tumora i mjesto tumora su identificirani kao najznačajnijih kliničko prognostičkih čimbenika [3], [4]. Pregled

Lokalni invazije i udaljene metastaze najčešće javljaju u naprednom želučanog karcinoma. Proces invaziju i metastaziranje je kompleksno i zahtijeva deregulacija različitim staničnim elementima uključujući kritičnih adhezijskih molekula. Kadherina pripada jednoj od molekula obitelji adhezijskih i igra bitnu ulogu u uspostavljanju interakcije stanica-stanica [5]. Kadherin-17 (CDH17), koji se također zove jetre crijevo (LI) kadherina ili humani peptid transporter-1 (HPT-1), je strukturno jedinstvena član superporodice kadherina [6], [7]. A takozvani klasični kadherini, kao što je E, N i P-kadherina imaju pet ponavljanja kadherina unutar izvanstanične domene, CDH17 sastoji se od sedam kadherina ponavlja. Štoviše, CDH17 ima samo 20 aminokiselina na citoplazmatske domene, a klasični kadherini imaju visoko konzervirana citoplazmatsku domenu koja se sastoji od 150-160 amino kiselina. CDH17 se izražava u miševa i ljudi gotovo isključivo u epitelnim stanicama iu embrionalnom i odraslom tankog crijeva i kolona, ​​s neznatnim izraza u želucu i jetri. [8] pregled

Koristeći integrativnih genomske i proteomsku pristupe, istraživači su počeli identifikaciju novih onkogena i tumor uklanjanje smetnji kod raka želuca. Prethodne studije kliničkim skupinama identificirati CDH17 kao potencijalni bolesti marker za želučane karcinoma [9], [10]. Usprkos tim značajnim kliničkih nalaza, molekularni funkcije CDH17 ostaju nepoznati, a tumorogene ulogu u želučanom karcinom još nije potvrđeno. Evo, mi cilj secirati onkogenih signalne mehanizme CDH17 u kontekstu karcinom želuca i vrednovati učinke ciljanje CDH17 kao potencijalni terapijski pristup za rak želuca. Pregled

Metode

Pacijenti pregled

istraživanje populacija sastojala se od 156 uzastopnih pacijenata (106 muškaraca i 50 žena) na rasporedu za operaciju od 1. siječnja 2002. do 31. prosinca 2006. godine, na Sun Yat-Sen University Cancer Center, Guangzhou, Kina. Svi pacijenti uključeni u ovu studiju imali histološki potvrđena dijagnoza primarnog želučanog karcinoma koji je dodatno analizirana patološki nakon operacije. Operacija se sastojala od zbir ili ukupnog gastrektomije u svih bolesnika; standardizirana tehnika se koristi za kirurške resekcije i Limfadenektomija, kao što je opisano na drugom mjestu [3]. Pacijenti koji su podvrgnuti non-resective operacije, a oni s tipom Siewert sam cardia adenokarcinom su isključeni iz studije. Uzoraka i tumora veličine zabilježene su od strane patologa. Reprezentativni područja tumora su odabrane i trenutno zamrznuta. pTNM klasifikacija slijedio kriterije 6. izdanje UICC [11] .The prosječna dob bolesnika bila je 57,2 god (raspon: 27-78 god) dob, spol, vrstu operacije, lokacija tumora, TNM stadiju, kemoterapija, primjerak duljina, veličina tumora, i histološki diferencijacija, snimljene su za svakog pacijenta u bazi podataka. Svi pacijenti koji su bilo koji tip kemoterapije su na 5-FU, platina ili taksolom bazi režimima. Svi pacijenti, nakon otpuštanja iz bolnice, ušli follow-up programa u skladu sa standardnim protokolom [12]. Follow-up je bio zatvoren u travnju 2010. Istraživanje je odobreno od strane etičkog povjerenstva u Sun Yat-sen University Cancer Center, svi sudionici pod uvjetom da njihova pismeni informirani pristanak za sudjelovanje u ovom istraživanju. Pregled

stanične linije i CDH17 pregled antitela

karcinom želuca stanične linije, AGS, MKN-45, HGC-27, MGC-803 BGC-823 i SGC-7901 dobiveni su od American Type Culture Collection (Manassas, VA), rak japansko istraživanje potencijala banka (Tokio, Japan) i Peking Medicinsko sveučilište (Beijing, Kina). Stanice su uzgojene u RPMI 1640 mediju (Sigma), uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (Invitrogen) i 1% penicilin-streptomicin (Invitrogen). Miš monoklonsko protutijelo na CDH17 (ab54511) je bio iz Abcam (Cambridge, MA). Pregled

CDH17 kratko ukosnica RNA (shRNA) pregled

pLKO.1 puro (7 kb) lentivirusni konstrukt sadrži U6 promotor i HIV-1 RNA signala pakiranje s pruomycin- i ampicillin- elemente rezistencije kloniran 3 'iz humanog fosfoglicerat kinazu (hPGK) promotor. CpptCTE umetnut je 5 'od promotora hPGK. Ljudska CDH17 shRNA konstrukti su generirani vezanjem sljedeće kali oligomeri u jedinstvenim Agel i EcoRI pLKO.1 Puro: CDH17 shRNA naprijed (5'-CCG GCC ACT TTC ATA TCC GCT GGA ACT CGA GTT CCA GCG GAT ATG AAA GTG GTT TTT G 3 ') i obrnuto (5'-AAT TCA AAA ACC ACT TTC ATA TCC GCT GGA ACT CGA GTT CCA GCG GAT ATG AAA GTG G 3'). Lentivirusne pripravci se proizvode pomoću ko-transfekcije pLKO.1 puro praznim vektorom s CDH17 shRNA i pomoćnog virusa pakiranje plazmida pCMVΔR8.9 i pMG.G (u omjeru 10:10:1) u 293T stanicama. Transfekcija je provedena pomoću lipofektamina i PLUS reagens (Invitrogen). Lentivirusi su sakupljene u 24, 36, 48 i 60 sata nakon transfekcije. Dvije kontrole su postavljene u kojoj su želučani stanice raka ili nisu primile tretman ili transficirane su kodirani non-ciljane RNAi vektor (Mock). Infekcija provedena u prisutnosti 8 ug /ml polibren. Slijedeći infekcija, AGS i MKN-45 stanice su selektirane su za stabilnu ekspresiju shRNAs korištenjem 2 ug /ml puromicina. Stanice su lizirane za western blot analizom 10 dana nakon infekcije. Pregled

Imunobloting i subcelularni frakcioniranje pregled

Proteinske lizati pripremljeni su iz staničnih linija monoslojeva pomoću pufera za lizu (1% NP-40,50 mM Tris -HCl, pH 8,0, 100 mM natrij-fluorida, 30 mM natrijev pirofosfat, 2 mM natrijev molibdat, 5 mM EDTA, 2 mM natrijev ortovanadat), koji sadrži inhibitore proteaze (10 mg /ml aprotinina, 10 mg /ml leupeptina, 1 mM fenilmetilsulfonil fluorida ). Koncentracije proteina su određene korištenjem testa za proteine ​​Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories Hercules, CA, USA). Stanični lizati su podvrgnuti natrijevim dodecil sulfacte-poliakrilamid gel elektroforezom (SDS-PAGE), te se odvoje proteini su elektroforetski prenese u imobilon-P membrane (Millipore). Nakon blokiranje bezmasnim mlijekom, membrane se inkubiraju neovisno u primarnim antitijelima P53 (Cell SignalingΠ2), MDM2 (Zymed!-7100), P21 (Zymed!-7000), ciklinski D1 (Santa Cruz sc-753 ) Rb (Cell Signaling΢9), β-katenina (Zymed, 13 do 8400), GSK3β (Santa Cruz, SZ-7291) i p-GSK3β (Ser9) (Cell SignalingΥ6). Membrana je isprana nekoliko puta u PBS s 0,1% Tween20 i skeniran na LI-COR Odyssey infracrvenom dvokolorsku detekcija vizualizator sustava (LI-COR Bioscience) u skladu s uputama proizvođača. Pregled

substaničnog fractionations su izvedena primjenom specifični puferi lize stanica i ponavljaju koraci centrifugiranja (Nuclear ekstrakt kit iz Active motiv, Carlsbad, CA) prema naputku proizvođača. Frakcije stanica su otopljeni u RIPA puferom, a koncentracija proteina je određena pomoću BCA protein kvantifikaciju testa. Proteinski ekstrakti (20 ug), nadalje u 1 × Laemmli pufera, podvrgne elektroforezi na 10% SDS-PAGE i prenesen na nitrocelulozne membrane, kao što je gore opisano. Western blot analiza poli-ADP-riboza polimeraze (PARP, od Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA) i superoksid dismutaza 2 (SOD2, od ABFrontier, Seoul, Koreja) provedena su za potvrdu odgovarajuće razdvajanje nuklearnog i citosolu proteina.

Kvantitativna reverzna transkriptaza-PCR (qPT-PCR) pregled

Ukupna RNA bila je ekstrahirana iz staničnih linija i smrznuti želučanog adenokarcinoma tkivima Trizol reagensa (Invitrogen). Reverzna transkripcija ukupne RNA (2 Ag) se izvodi pomoću Advantage RT za PCR set (Clontech), i cDNA se podvrgne PCR-28 ciklusa pojačanja sa slijedećim prajmera: CDH17 FW, 5'-ACAATCGACCCACGTTTCTC i CHD17 RV, 5 '-ATATTGTGCACCGGGATCAT. β-aktin je korišten kao kontrola. pregled

Imunohistokemija (IHH) pregled

ukupno 156 formalinom fiksiranih i parafin uklopljenih uzoraka raka želuca tkiva su odabrani za IHC studija. IHC bojenje je izvedena na dijelovima 5 ĩm tkiva rehidrirane ocjenjuju alkohola. Aktivnost endogene peroksidaze je blokirana s 0,3% vodikovim peroksidom na 15 minuta. Stakalca su mikrovalne pomiješa u 10 mM citratnom puferu (pH 6,0) za 10 min. Nespecifično vezanje blokirano je s 10% normalnim serumom kunića 20 min. Predmetnice tkiva inkubirani su s anti-CDH17 (1:50 razrjeđenje) kroz 60 minuta pri 37 ° C u vlažnoj komori. Rezovi su inkubirani s biotiniliranim anti zečjim protutijelom u koncentraciji 1:100 30 min na 37 ° C, zatim reagira s streptavidin-peroksidaza konjugata tijekom 30 minuta na 37 ° C i konačno inkubirana sa 3-3 'diaminobenzidin kao kromogena podloge. Da biste isključili lažno pozitivan signal, negativne kontrole su uključene u svakom testu zamjene primarnog protutijela s blokiranjem serum. Dva neovisni promatrači slijep za kliničko informacija zabio slajdova. Definicija bojanjem bio je kako slijedi: negativna, 0% do manje od 5% tumorskih stanica pokazuju imunoreaktivnost; slab, 5-40% tumorskih stanica koje pokazuju imunoreaktivnost; pozitivan, više od 40% tumorskih stanica pokazuju imunoreaktivnost. Pozitivni su slučajevi čije se dalje pod-svrstati u CDH17 + (imunog: 40-60%), CDH17 2+ (imunoreaktivnost: 60-80%) i CDH17 3+ (imunoreaktivnost: 80-100%). Pregled

U vitro testovi za procjenu tumora fenotip pregled

eksperimentalni postupci za stanični rast, stvaranje žarišta, mekom agaru, migraciju stanica, zacjeljivanje rana i staničnog ciklusa testovi opisani su u sporednu Metode S1. pregled

pokusi za spašavanje pregled

spašavanju CDH17 u shCDH17 AGS i MKN-45 stanične linije su opisani u sporednu Metode S1. pregled

In vivo mišjim modelima karcinoma želuca pregled

Ovo istraživanje je provedeno u strogo u skladu s preporukama u Vodiču za njegu i korištenje laboratorijskih životinja iz National Institutes of Health. Protokol je odobren od strane Odbora za etiku u životinjama iz Sun Yat-sen University Cancer Center (broj dozvole: 09-0238). Sve operacije se izvode pod natrijev pentobarbitala anestezijom, a učinjeni su svi napori kako bi se smanjili patnju. Nakon anestezije, Goli miševi su žrtvovani cervikalnom dislokacijom. Pregled

Stvaranje tumora u miševa. Pregled

vivo tumorigenesis istražena je tumor pokuse sa stranim tijelom. Oko 2 × 10 ^{6 AGS stanice inficirane s CDH17 shRNA, kontrola AGS stanice inficirane glumeći RNAi vektora i roditeljskih AGS stanica s.c. u lijeve i desne stražnje noge od 4 tjedana starih miševa (30 miševa, 10 po stanju). Stvaranje tumora u golih miševa je praćeno tijekom 8 tjedana perioda. Volumen tumora je izračunat prema formuli V = 0.5 × L × W 2. [13] pregled}

nose tumor mišji model. Pregled

potkožnim tumorima su inducirani u golim miševima pomoću AGS stanica, kako je gore spomenuto. Tjedan dana nakon inokulacije, miševi su tretirani s anti-CDH17 shRNA. Svaki miš dobio 100 ul intratumoralno injectionscontaining 1 × 10 ^{9 primjeraka CDH17 ili oponašanje lentivirus dva puta tjedno za 2 tjedna. Pet miševa su korištene u svakoj grupi. Rast tumora je praćena dnevno. pregled}

Statistika

Statističke analize provedene su pomoću SPSS 13.0. Razlike među varijablama su ocijenjeni od strane X2 analize ili 2-tailed Student t testa. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD, osim ako nije drugačije naznačeno. Ukupno preživljenje (OS) i preživljenje bez znakova bolesti (DFS) krivulje izračunate su po Kaplan-Meier metodi, a razlike između dvije skupine uspoređene su log-rank test. P vrijednost manja od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled

Rezultati

CDH17 vrlo je izražen u stanicama karcinoma želuca i odnosi se na slabom kliničkom ishodu pregled

Prije svega, ispitali smo razinu ekspresije CDH17 u 156 primjeraka želučanog karcinoma po IHC: 69 (44,3%) od 156 slučajeva bili pozitivni, dok je preostalih 87 slučajeva (55,7%) bili su negativni ili slab za CDH17 izražavanja (sl. 1). Razina ekspresije bila je + 2 + 3 + a u 21 (13,5%), 20 (12,8%) i 28 (17,9%) slučajeva respektivno. Ovi rezultati ukazuju na to da CDH17 može igrati važnu ulogu u nastanku tumora želuca raka. Nakon toga smo usporedili kliničke i patološke značajke bolesnika sa i bez CDH17 izražavanja. Nema statistički značajnih razlika između dvije skupine s obzirom na spol, dob, veličina tumora, tumora stranice, dubini invazije tumora, limfnih čvorova metastaza, udaljenim metastazama i TNM fazi (Tablica 1). Pregled

Nakon toga, istražili smo potencijalni utjecaj statusa ekspresije CDH17 na dugoročni opstanak bolesnika po univarijantne i multivarijatne analize. Prosječno praćenje je 24,3 mjeseci, na kraju praćenja, 68 bolesnika još uvijek živ, 87 pacijenata je umro od tumora, a jedan pacijent je umro od drugog razloga; rak se odnose na pet godina stopa preživljavanja u cijeloj seriji bila je 37,8%. Jednosmjerna analiza pokazala je povezanost između ukupnog preživljavanja i tumora stranice, histološke diferencijacije, TNM stadiju i CDH17 izraz (tablica S1). U multivarijatne analize, sijelo tumora (p = 0,02) histološki diferencijaciju (p = 0,02), TNM stadij (p < 0,001) i CDH17 izraz (p < 0,01) bili su neovisni prognostički čimbenici za ukupno preživljenje. Sl. 2A prikazuje ukupnu razliku preživljavanje između bolesnika sa i bez CDH17 izražavanja. Prosječno preživljavanje bio je 15,9 mjeseci u bolesnika s CDH17 izražavanja u usporedbi s 26,6 mjeseci u tim CDH17 negativne ili slabog izražavanja (P 0,01), što odgovara smanjenju od 16% smrtnosti. Nadalje, preživljavanje bez bolesti (DFS) Analiza je provedena u 131 bolesnika podvrgnutih R0 resekcija. Na kraju praćenja, 69 (52,7%) bolesnika su još uvijek živi i 62 (47,3%) bolesnika je umro od tumora ili udaljenih metastaza, multivarijatne analize pokazale su slične rezultate, histološki diferencijacije, sijelo tumora, dubina invazije tumora (PT faza), limfnih čvorova metastaze (pN faza) bili neovisni prognostički čimbenici za preživljavanje bez bolesti (podaci nisu prikazani). Također smo otkrili da pacijenti bez CDH17 ekspresije imaju bolju prognozu nego oni koji su s CDH17 ekspresiju u tkivo tumora (Slika 2B). (P 0,01). Sveukupno preživljenje je smanjen u bolesnika s visokom ekspresijom CDH17 (IHH 2+, 3+) nego u bolesnika s CDH17 + izraza (Sl. 2c). Medijan preživljenja bolesnika čiji su tumori imali veći CDH17 izraz lica bio je 10,9 mjeseci za CDH17 3+, 21,1 mjeseci za CDH17 2+ i 25,7 mjeseci u onih koje se CDH17 + izraz (p < 0,01). Pregled

CDH17 izražena u ljudskim staničnim linijama želučanih

Mi smo ocijenili da li ljudske stanične linije karcinoma želuca izraziti CDH17 i na taj način bi se mogla koristiti za daljnje procjenu funkcije potencijala ovog proteina. Odabrali smo panel 6 želučanog stanične linije karcinoma s različitim metastatskim potencijalom: AGS, MKN-45, HGC-27, MGC-803 BGC-823 i SGC-7901. Razina CDH17 mRNA je mjerena QRT-PCR analize. Jaka ekspresija je viđen u osnovnoj i metastatskog želučane stanica karcinoma (AGS i MKN-45) (Sl. S1A). Western blot analiza potvrdila visoku CDH17 ekspresije proteina u AGS (osnovan od primarnog tumora) i MKN-45 (metastatski) (Sl. S1B). Pregled

Uzeti zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da CDH17 je važno za pokretanje i metastaze karcinoma želuca; barem podskup dobro credentialed stanične linije karcinoma želuca zadržava izražavanje CDH17 omogućuje dodatno funkcionalnu karakterizaciju. pregled

CDH17 obaranje inducira anti-tumorske učinke in vitro

Dalje, ispao mi se CDH17 u stanične linije-AGS karcinom želuca i MKN-45 pomoću CDH17 specifične shRNAs. Obaranje dao je 75% smanjenje i mRNA i proteina (slika 3a.). Zatim smo ocijenili tumorskih i metastatskih svojstva (proliferacija, formiranje kolonija, ljepljenja, invazije i staničnog ciklusa) iz CDH17 deficitarnim želučanih stanica raka (shCDH17 stanice) u usporedbi s lažno vektorskih zaražene kontrolnim stanicama. pregled

CDH17 shRNA posredovanih obaranje rezultiralo značajno smanjuje rast stanica staničnih linija karcinoma želuca (p 0.001) (Slika 3A, desno).. Formiranje žarišta također značajno inhibira (P < 0.001) u shCDH17 stanicama u usporedbi s lažnim stanicama (Slika 3B, lijevo)., sličan rezultat je dobiven u mekanom agaru u kojima koloniziranje je značajno smanjena u shCDH17 stanica (P < 0.001; Sl. 3B, desno). Uloga CDH17 u metastaza proučavana je za liječenje rana i transjažična testovima. CDH17 obaranje bio u mogućnosti smanjiti pokretljivost stanica (sl. 3C, lijevo), kao što je određeno u testu rane. Transwell® analiza pokazala da je smanjena ekspresija CDH17 značajno smanjuje staničnu adheziju (p 0.001) (sl. 3C, desno). Kako bi istražili mehanizam u pozadini inhibicije rasta za CDH17 obaranje, stanični ciklus distribucija stanica s CDH17 shRNA ukosnice i Mock je određena protočnom citometrijom: shCDH17 stanice su uhićeni u G0 /G1 fazi, s manje stanica u G2 /M-fazi (Sl . 3D). Antitumorni učinak CDH17 obaranje također vidjeti u metastatskom želuca stanica karcinoma MKN-45 (Sl. S2A-E). Prema prihvaćenim standardima koji bi omoguĘiti kvalitetu i točnost RNAi pokusa [14], proveli smo eksperimenti spašavanja ponovno izražava CDH17 u AGS i MKN-45 shCDH17 stanice (Sl. S3A-B). Obnova CDH17 izražavanja u AGS i MKN-45 stanice vratio stanice na roditeljskom fenotipa, što potvrđuje da su antitumorski efekti CDH17 obaranje nije bilo zbog off ciljne učinke. Eksperimenti spašavanja otkrila da je nakon obnove CDH17 izražavanja u te dvije stanične linije je torn smjeru i metastatski potencijal povećan je na sličnim razinama roditeljskih AGS i MKN-45 stanice (Sl. S3C-F). Ovi rezultati pružaju snažne dokaze o onkogenim uloga CDH17 u stanicama karcinoma želuca. Pregled

CDH17 kao In Vivo meta za rak želuca Therapy Netlogu

Ispitali smo je li CDH17 je potreban za formiranje tumora i invazivnosti u stanice karcinoma želuca u golim miševima modela. Mi potkožno injicira shCDH17, lažna i roditeljske AGS stanica u miševa. Tumori obično vidljive makroskopski leđnog bočne unutar 6 do 8 tjedana perioda od injekcije stanica. 1 miš s obje roditeljske AGS i lažno grupe umrlo tijekom trećeg tjedna nakon što je (su korišteni za humano krajnje točke) injekcije. Miševi su žrtvovani 8 tjedana nakon injekcije stanica tumora. U skupini miševa koji su injicirani s shCDH17 stanicama, 2 miševa nije prikazana tumora čvor i 8 miševa pokazala značajno formiranje smanjenim tumora u usporedbi s miševima kojima je ubrizgan lažno stanicama. Veličina tumora i težina su značajno smanjeni u miševima kojima je injiciran shCDH17 stanicama u usporedbi s miševima kojima je ubrizgan lažno stanicama (Sl. 4A). Ovi rezultati pokazuju da je smanjenje CDH17 izražavanja može značajno potisnuti torn smjeru in vivo. Pregled

Kako bi se dodatno procijeniti učinak CDH17 obaranje na rast primarnog tumora, onda smo istraživali je li in vivo isporuka CDH17 shRNA može ometati rast nekog osnovana tumorskih iz roditeljskih AGS stanica u miševa. Jedan tjedan poslije tumora inokulacije, kad je tumor dosegao je oko 100 mm ^{3, izveli smo intratumoralne injekcije CDH17 shRNA ili mock vektor u dozi od 10 9 virusnih čestica /injektiranje na mjestu tumora. Injektiranje se primjenjuje dva puta tjedno, tijekom 2 tjedna. U životinja injekcija s Mock vektorom, tumori progresivno rasla tijekom pokusa. Naprotiv, intratumoralne injekcije od CDH17 shRNA rezultiralo značajno manje tumore na svakoj vremenskoj točki, uključujući konačnog volumena mjerenja (Sl. 4B). Ispitivanje tumorskih stanica CDH17 IHC pokazali značajnu-naniže namijenjen CDH17 cilja u shCDH17 tretiranih stanica (p < 0,05; Sl. 4B). Ovi rezultati pokazuju da se in vivo silazni CDH17 u stanicama karcinoma želuca smanjuje stvaranje tumora kod miševa, što ukazuje da je CDH17 terapeutski cilj za želuca. Pregled}

Podreguliranje Wnt /β-katenina signaliziranje CDH17 obaranje pregled

ispitivali smo nekoliko putova kako bi otkrili molekularni mehanizam CDH17 obaranje posredovanoj inhibiciji želučanog rasta raka, proliferaciju i metastaze. Pronašli smo nekoliko članova Wnt /β-katenina puta biti različito izražena između shCDH17 i roditeljskih stanica. β-katenina izraz, fosforilacija GSK-3β i ciklin D1 izraz smanjena; i Rb izraz povećana u oba AGS i MKN-45 shCDH17 stanica. Osim toga, izraz P53, MDM2 i ključni regulator staničnog ciklusa p21 povećana je u CDH17-obaranje stanice. (Sl. 5A). U TOPFlash /FOPFlash reporter Luciferaze (Sl. 5B), obnova CDH17 u oba AGS i MNK-45 stanica značajno je povećao snagu TCF /LEF signala u usporedbi s kontrolama shCDH17. Nadalje, kao što je prikazano na način imunoblot analizom otkrili smo porast od oba ukupnog i nuklearne β-katenina proteina nakon obnove CDH17 u AGS i MKN-45, u usporedbi s shCDH17 (Sl. 5c) .Together, ovi rezultati pokazuju da CDH17 obaranje rezultate silazni Wnt /β-katenina puta u želuca stanica raka. To je, pak, sugerira da CDH17 održava proliferativni potencijal kroz Wnt /β-katenina putevima signalizacije. Pregled

Rasprava pregled

CDH17 je roman kadherina, njegova struktura se razlikuje od onih klasičnih kadherina time, da je N-terminalna domena i citoplazmatski dio pokazuje značajnu homologiju s klasičnim kadherina [6]. Je biološka funkcija CDH17 je još uvijek nepoznat. Brojne studije su izvijestili povišene razine CDH17 u raznim ljudskih tumora, koji povezuje ekspresiju tog proteina za prognozu i rizika procjeni [10], [15]. CDH17 prekomjerna ekspresija je prikazana u želučanom adenokarcinoma [9], karcinom [16] i kolorektalnog karcinoma [17]. To pokazuje da CDH17 može biti presudna u nastanku tumora želuca i rak jetre. Pregled

U ljudi, CDH17 obično se izražava isključivo na bazolateralnu površini hepatocita i cntcrocitima. Nakon prvog izvješća o CDH17 kao crijevne metapasia biljega Grotzinger et al [9], nekoliko istraživanja su ocijenjeni CDH17 izraz u raka želuca. CDH17 je izražen u 50-78% želučanog tkiva raka s crijevni tipa prevlast [18], [19]. U ovom istraživanju, pokazali smo da CDH17 je onkogena i atraktivan terapeutski cilj kod raka želuca: CDH17 vrlo je izražena u tumorskim tkivima, s gotovo pola želučanog karcinoma Biti CDH17 pozitivno za IHC. Park i njegovi kolege procijenili su izraz CDH17 u više od 200 uzoraka karcinoma želuca tkiva, te je izvijestio da je vrlo izražena u ranijim fazama TNM [20], osim toga, oni su otkrili da je pokazala smanjenu ekspresiju CDH17 biti usko povezan s tumorom agresivnosti i limfnih čvorova metastaze ljudskog želučanog karcinoma [20]. Međutim, drugi izvijestili da je njezin izraz lica bio je znatno veći u naprednim limfnih čvorova metastaza [18], [21]. U našem istraživanju, ne postoji veza između CDH17 izražavanja i drugih kliničkopatološkim značajke. Pregled

Kao prognostički faktor, CDH17 izraz pokazala tendenciju pokazatelj nepovoljnog opstanak u više skupina pacijenata, čak i nakon kontroliranje za tumorske fazi. U tom kontekstu, Prosječno preživljavanje 15,9 mjeseci u skupini s pozitivnim CDH17 izražavanja, nasuprot 26,6 mjeseci u bolesnika s IHC negativnim tumorima predstavlja klinički značajan odnos. Nadalje, istraživačka analiza pokazuje slabu ukupno preživljavanje u bolesnika s visokom ekspresijom CDH17 proteina (IHC 2+ i 3+) u usporedbi s pacijentima s niskim ekspresije CDH17 proteina (IHC +). Ovi nalazi su značajan s obzirom na lošu prognozu u ovoj populaciji. Kolektivno, CDH17 izraz je koristan prognostički marker u želučanom karcinomu i čini se da je povezana s progresijom tumora. Pregled

Ova studija pokazuje da shRNA posredovane CDH17 obaranje u vrlo tumorskih želučane stanične linije karcinoma AGS i MKN-45 efektivno potiskuju rast stanica, smanjenje stvaranje fokusa i nastanak kolonija u mekom agaru, kao i invazivnost i metastatičkog sposobnost rak želuca in vitro. G1-S faze tranzicije je glavni kontrolna točka za napredovanje staničnog ciklusa i p21 je jedan od ključnih negativnih regulatora tijekom ove tranzicije [22]. Glavni staničnog ciklusa učinak CDH17 obaranje inhibicija G1-S faze tranzicije kroz aktivaciju p21 je potvrđen blot studijama (Sl. 5). Nedavna istraživanja u HCC stanicama utvrđeno da iscrpljivanje CDH17 rezultiralo inhibiciju invazije, rasta i metastaza u MHCC97H hepatocelularnih stanicama karcinoma [16]. CDH17 je pozitivan regulator migracijskih, ljepila i invazivnih ponašanja. Zamislivo je da se, u skladu s N-kadherina. Kod karcinoma želuca, CDH17 može posredovati interakciju karcinom u želučanom strome i biti uključeni u promociju želučane metastaza raka omogućavanjem migracije stanica karcinoma i ponovno uspostavljanje prianjanje homofilno stanica-stanica u metastaze. Naše studije pružaju novi uvid u svoje potencijalne uloge u pokretanju želuca i napredovanja raka. Prema našim rezultatima, CDH17 je onkogena i atraktivan terapeutski cilj u raka želuca. Pregled

Prema tome, možemo pretpostaviti da je ciljanje CDH17 mogu se koristiti za liječenje raka želuca in vivo. Mišji modeli karcinoma želuca su korištene za provjeru učinka ciljanja CDH17 kao potencijalni tretman. Infekcija stanica želučanog karcinoma po CDH17 shRNA ukinuo njihovu kancerogenost kod miševa. U miševa koji nose tumor, lokalna primjena lentivirusnog temelji CDH17 shRNA inhibira rast tumora, što pokazuje upečatljiv suzbijanje utjecaja na formiranje tumora. Ovi nalazi imaju važan klinički implikacije za liječenje karcinoma želuca. Trenutno, samo je jedan FDA je odobrila ciljane terapije za liječenje podskup karcinoma želuca: trastuzumab, monoklonalno protutijelo koje ometa HER2 receptora. Nažalost, HER2-izražavajući tumori su rijetki, samo 22% želuca od raka mogao imati koristi od ove terapije [23]. Nasuprot tome, CDH17 vrlo izražena u karcinomu želuca kod gotovo 50% pacijenata (tablica 1) .Currently, standardna terapija za karcinom želuca uključuje operacije s optimalnom debulking bolesti praćeno citotoksične terapije. Unatoč tim naporima, 80% bolesnika s karcinomom želuca dijagnosticiranih razvije recidiv bolesti i samo 20% od tih bolesnika preživi 5 godina nakon dijagnoze [24]. Naši rezultati snažno sugeriraju da pacijenti s rakom želuca može imati koristi od ciljane terapije protiv CDH17 i jamči za istraživanje i dizajn potencijalnih inhibitora CDH17. Pregled

Molekularni mehanizmi kojima CDH17 regulira rast raka želuca tek treba razjasniti. Nedavni izvještaj pokazao je trans-interakciju između E-kadherina i CDH17 u cntcrocitima tijekom razvoja crijevnog epitela [25], [26], što upućuje da CDH17 može sjeći s Wnt put kroz svoje koordinaciji s E-kadherina i /ili povezana partneri. Prethodna su istraživanja pokazala da je ciljanje CDH17 deaktivira Wnt /β-katenina signalizaciju u hepatocelularnog karcinoma [16]. Aktivacija Wnt /β-katenina signaliziranja se nalazi u oko 30% karcinoma želuca i transgenski životinjski modeli su također pokazali da Wnt signalni potiče želučane karcinogeneze [27].

• PLoS ONE: Caveolin-1 Expression razina u karcinom povezan fibroblasta predviđa ishod u rak želuca
• PLoS ONE: Faza II Studija Ocjenjivanje 2 rasporede doziranja za oralnu Foretinib (GSK1363089), cMET /VEGFR2 Inhibitor, u bolesnika s metastatskim rakom želuca