Up-reegelen sirtuin 1 (SIRT1), eng Nad Fro:. Hirai S, Endo S, Saito R, Hirose M, Ueno T, Suzuki H, et al. (2014) Antitumor Effects vun engem Sirtuin Inhibitor, Tenovin-6, géint Gastric Cancer BTS via Death Receptor 5 Up-reglementéieren. PLoS NËMMEN 9 (7): e102831. Doi: 10.1371 /journal.pone.0102831 VerfÜgung Redakter: Andrei L. Gartel, Universitéit vun Illinois bei Chicago, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 28. Oktober 2013; Akzeptéiert: 23 Juni, 2014; Publizéiert: 17. Juli 2014 zu Copyright: © 2014 Hirai et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht vun Stipendie-zu-Hëllef gouf vum Educatiounsministère, Kultur, Sport, Wëssenschaft an Technologie vun Japan (bis Nodeem) ënnerstëtzt. Nee zousätzlech externen Finanzéierung gouf fir dës Etude dobäi. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass eng vun de groussen Ursaache vun Kriibs Doud ronderëm d'Welt [1], [2]. Obwuel verschidde Chimioen fir fortgeschratt gastric Kriibs entwéckelt goufen, ass d'Iwwregens hätt nach aarm an Roman anticancer Drogen fir si gastric Kriibs waren. Gastric Kriibs ass eng biologically a genetesch heterogen Kriibs villen genetesch kennen an epigenetic alternations sensibiliséieren [3]. Dorënner, abnormalities vun der TP53 VerfÜgung entholl suppressor Gentherapie eng wichteg Roll an tumorigenesis Leeschtung [4], [5]. Ongeféier 30% vun de Patienten mat gastric Kriibs hun TP53 VerfÜgung stattfannen [6]. Och zu Kriibs Zellen mat Wëld-Typ (virstellen) TP53 VerfÜgung, huet et gemellt ginn, datt d'Funktioun vun TP53 VerfÜgung duerch negativ Regulatioun dorënner ubiquitination, methylation, an deacetylation opgeléist gëtt [7], [8]. An deem Kontext, géif et e versprécht Strategie ginn, datt inhibition vun dësen negativen Legislateuren Resultater zu der Opléisung vun antitumor Effete duerch Aktivatioun vun p53 zu virstellen ze iwwerhuelen TP53 VerfÜgung Cancers. Murine duebel Minutt 2 (MDM2) ass eng grouss Fro gestallt neien vun p53 [7]. Mir Rapport virdrun, datt en MDM2 inhibitor, nutlin-3, mächtegst antitumor Effekter géint gastric Kriibs Zellen duerch Aktivatioun vun der p53 Passerelle bewisen [9] VerfÜgung Sirtuin 1 (SIRT1), eng Nad Géint dësem Hannergrond, ze propagéieren mir ob tenovin-6, eng kleng-Protein Massa datt SIRT1 an SIRT2 Funktiounen bremst [15], [16], seng Nofolleg antitumor Effete duerch Aktivatioun vun der p53 Passerelle an gastric Kriibs Zellen. Viru Kuerzem, huet et schonn erwähnt, datt SIRT inhibitors den Doud receptor 5 (DR5), e Member vun der entholl necrosis Faktor receptor Famill, an e puer Cancers up-reegelen [17], [18]. Mir studéiert Weideren d'Abannung vun dësem receptor an der antitumor Aktivitéit vun tenovin-6 fir gastric Kriibs. Doriwwer eraus, mir den synergism vun tenovin-6 mat konventionelle cytotoxic Drogen fir d'Zukunft Medeziner Entwécklung vun gastric Kriibs iwwerpréift. VerfÜgung Zell Linnen VerfÜgung Seven gastric Zell Kriibs goufe benotzt: véier Zell Linnen mat virstellen TP53 VerfÜgung (MKN-45, NUGC-4, STKM-2, SNU-1), zwee Zell Linnen mat Mann--Typ (MT) TP53 Chemesch VerfÜgung Tenovin-6 war vum Cayman chemesche kaaft Company (Ann Arbor, MI). Docetaxel, SN-38, cisplatin, 5-fluorouracil (5-FU), doxorubicin an thapsigargin sech vu Wako (Rekorder, Japan) kritt. Si waren an Police sulfoxide (DMSO) op eng Usammlung vun 20 mm opgeléist an aliquots sech bei -20 ° C gespäichert. Stock Léisungen sech un d'Wënsch Finale Konzentratioune mat Wuesstem mëttelfristeg verdënntem virewech ze benotzen. VerfÜgung Antibodies a Western blot Analyse VerfÜgung SDS-polyaclylamidegel electrophoresis a Western blotting sech als virdru beschriwwen standing [22]. Der Primärschoul an de Lycée antibodies benotzt sech wéi follegt. Kanéngchen polyclonal antibodies géint SIRT1 (D739), acetylated (AC) -p53 (Lys382), phosphorylated (Phospho) -p53 (Ser15), BCL-2, AC-α-tubulin (Lys40), Doud receptor 5 (DR5), Sekondär -associated Doud public (FADD), eenalecn puer dovun (Kréien) -ribose polymerase (PARP) (Asp214), a Maus monoclonal antibodies géint p21 Real-Zäit grouss Hinnen alleguer fir Analyse vun SIRT1 VerfÜgung a SIRT2 VerfÜgung VerfÜgung Gentherapie Ausdrock RNS Echantillon waren aus Zell lysate ofgebaut engem High Pure RNS Isolatioun Kit benotzt (Roche kinnt, Mannheim, Däitschland), am Aklang mat der Uweisungen d'Hiersteller. Nom Frankräich DNA vun DNase geläscht war, gouf cDNA mat engem Héich- Kapazitéit RNS-ze-cDNA Kit (Life Technologies Corp., Karlsbad CA) virbereet. Real-Zäit grouss Hinnen alleguer war mat engem Obwuel Biosystems 7500 standing Fast Real-Time Hinnen alleguer System (Obwuel Biosystems, Foster City, CA). Primers an TaqMan Studiebäihëllefe fir SIRT1 VerfÜgung a SIRT2 VerfÜgung aus Obwuel Biosystems (Assay ID: Hs01009005 an Hs00247263, bzw.) kritt huet, an déi fir 18S ribosomal RNS (18S rRNA) RNAs ofgebaut vun Zellen sech fir d'famill Montanten vun der Zil- Gentherapie ( SIRT1, SIRT2 VerfÜgung) an der Referenz Gentherapie ( 18S rRNA VerfÜgung) déi grouss real-Zäit Hinnen alleguer. VerfÜgung analyséiert WST-8 Zell Nuetsvolen assays VerfÜgung WST-8 colorimetric assays gesuergt huet mat enger Zell Counting Kit-8 (Dojin Laboratoiren, Kumamoto, Japan), am Aklang mat de Protokoll d'Hiersteller. op eng Dicht vu 10 5 × an 96-gutt Placke rakommen Analys vun apoptosis duerch onkontrolléiert cytometry VerfÜgung BTS am 60-mm Platen op eng Dicht vu 5 × géint sech 10 siRNA gezielt DR5 siRNA gezielt DR5 war mat entworf siDirect Software (http://sidirect2.rnai.jp/), wéi virdrun gemellt [22]. siRNA transfection war mat duerchgefouert Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen, Karlsbad CA), am Aklang mat der Uweisungen d'Hiersteller. Kontroll siRNA war eng kënschtlech Haaptrei entworf d'mannst homology fir Mënscherechter a Maus Genen ze hunn. De Sënn an antisense strands vun siRNA an dëser Etude benotzt sech wéi follegt zesummen: DR5, 5'-CCGUUUGUGCGUACUUUGAGA-3 "(Sënn), 5'-UCAAAGUACGCACAAACGGAA-3" (antisense); Kontroll siRNA, 5'-CCGUACUAGCCAUUAUGCGUC-3 "(Sënn), 5'-CGCAUAAUGGCUAGUACGGGU-3" (antisense). VerfÜgung Fir Analyse vun den Auswierkunge vun siRNA op Zell Wuesstem an decidéiert, sech Zellen op engem niddregen plated Dicht (1 × 10 geschéckt Index VerfÜgung Fir erauszefannen, ob tenovin-6 de antitumor Auswierkunge vun konventionelle chemotherapeutic Agenten revaloriséiert kënne mir eng Kombinatioun index (CI) benotzt an eng isobologram CalcuSyn Software (Cambridge, UK) berechent benotzt, am Aklang mat der Chou an Talalay Steiren Effekt Prinzip [23]. An dëser Analys, CI > 1,3 beweist antagonism; CI = 1.1-1.3 moderéiert antagonism; CI = 0.9-1.1 additive Effekt; CI = 0.8-0.9 schmäerzhafte synergism; CI = 0.6-0.8 moderéiert synergism; CI = 0.4-0.6 synergism; an CI = 0.2-0.4 staark synergism. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung All Experiment an triplicate gesuergt a sech op d'mannst dräi Mol widderholl. All Donnéeën ginn als mengen ± normale deviation (Fils) ausgedréckt. D'Bedeitung vun Differenzen war vun Student d'T-Test an DUNNETT d'Test alles. p VerfÜgung -values &Si besteet; 0,05 waren däitlech als VerfÜgung Expression vun SIRT1, SIRT2, an acetylated (AC) -p53 zu gastric Kriibs Zell Linnen VerfÜgung. éischt, iwwerpréift mir den Ausdrock Niveau vun SIRT1, SIRT2, an AC-p53 zu siwen gastric Kriibs Zell Linnen. Mir benotzt HEK293 Zellen fir de positive Kontroll vun SIRT1 /2, an MCF-7 Zellen mat doxorubicin fir de positive Kontroll vun AC-p53 [24] behandelt. All gastric Kriibs Zell Linnen ausser NUGC-4 an STKM-1 Zellen ausgedréckt héijen Niveau vun SIRT1 FAQ, an SIRT2 Ausdrock Niveauen sech héich an all Zell Linnen ausser MKN-45 Zellen (Dorënner 1A). AC-p53 Ausdrock Niveauen an all Héich sech gastric Kriibs Zell Linnen mat virstellen TP53 VerfÜgung. VerfÜgung Mir analyséiert der Gentherapie Ausdrock vun SIRT1 VerfÜgung a SIRT2 Tenovin-6 inhibited Wuesstem vun gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Fir tenovin-6 Aktivitéit ze bestätegen, mir studéiert ob tenovin-6 de acetylation vun histone H3 an α-tubulin betraff. Tenovin-6 fräi acetylation vun histone vun dräi (MKN-45, NUGC-4, an KatoIII) vun de véier gastric Linnen Kriibs Zell getest, beweist d'inhibition vun SIRT1 deacetylation Aktivitéit (Dorënner 2A). AC-α-tubulin fräi nëmmen an eng Zell Linn (MKN-45) behandelt mat tenovin-6, dohier inhibition vun SIRT2 deacetylation Aktivitéit net definitiv zu gastric Kriibs Zellen gewise ginn hätt. VerfÜgung Next, mir bewäert d'Potential Anti-entholl Effet vun tenovin-6 géint gastric Kriibs Zellen. All gastric Kriibs Zell Linn war cultured an der Präsenz vun tenovin-6 (0,2, 1, 5, 10, 20, an 50 μM) fir dräi Deeg. Morphium-ofhängeg Wuesstem inhibition war an all Zell Linnen observéiert, net nëmmen déi, déi mat virstellen TP53 VerfÜgung mä och MT an automatesch Versiounen (Dorënner 2B). Hir IC 50 Wäerter gounge vun 2,34 bis 4,28 μM. (IC 50: 6,09 μM) Ausserdeem, war WST-8 assay am mënschleche fibroblast Zell Linn MRC-5 standing der toxicity vun tenovin-6 bis gastric Kriibs Zell Zeilen ze vergläichen. D'Wirtschaftlechkeet vun NUGC-4 mat tenovin-6 behandelt Zellen war wesentlech méi déif wéi déi vun MRC-5 Zellen, wéi zu Dorënner 2C gewisen. VerfÜgung Tenovin-6 apoptotic Zell Doud gastric Kriibs Zellen entschlof VerfÜgung Als zu Dorënner 3A an S1 gewisen, tenovin-6 Behandlung fräi Meenungsäusserung vun p53 an p21 zu virstellen TP53 VerfÜgung Zellen (MKN45 an NUGC-4). Up-Regulatioun vun AC-p53 war zu MKN-45 Zellen gewisen, mä net zu NUGC-4 Zellen. Geklomm p21 Ausdrock ass och zu MT observéiert TP53 VerfÜgung Zellen (NUGC-3). Par contre, huet net zu BCL-2 Ausdrock änneren bal all véier gastric Kriibs Zell Linnen. Erhéijunge vun DR5 an eenalecn PARP Ausdrock sech an all Zell Linnen getest observéiert. Den Niveau vum Ausdrock vun Trail, déi zu Kopplung Doud sécher als ligand Funktioun, war an all Zell Linnen liicht geklomm, obwuel den Ausdrock vun FADD, eng wichteg adapter, net vun tenovin-6 betraff war. VerfÜgung Mir iwwerpréift ob tenovin-6 d'Nuetsvolen vun gastric Kriibs Zellen duerch d'Aféierungs- vun apoptotic Zell Doud ofgeholl. Cancer Zellen sech op eng Usammlung vun 10 μM oder enger zoustänneger Montant vun Kontroll Gefier (DMSO) fir 72 h op se ausgesat, an dann mat FITC-annexin V an PI Kierchefënster. Si goufen duerch onkontrolléiert cytometry analyséiert: Zellen negativ fir béid annexin V an PI sech als Nët-apoptotic, positiv Zellen fir annexin V waren nëmmen als fréi apoptotic gin, an Zellen positiv fir béid annexin V an PI sech considéréiert gin spéit apoptotic oder necrotic. Belaaschtung vun MKN-45 Zellen ze tenovin-6 fräi ufale vun fréi a spéit Phasen vun apoptosis vu 2,8% op 52,1% a vu 1,8% op 18.5%, respektiv (Dorënner 3B). Ähnlech Erhéijunge vun de Populatiounen an fréi a spéit Phasen vun apoptosis waren an aner Zell Linnen (NUGC-4, NUGC-3, an KatoIII) observéiert. Tenovin-6 apoptosis an all Zell Linnen getest entschlof, egal TP53 VerfÜgung Status. VerfÜgung Effekt vun DR5 VerfÜgung knockdown op tenovin-6-entschlof apoptosis VerfÜgung Next, fir z'iwwerpréiwen ob DR5 VerfÜgung silencing betraff apoptosis, Zell Nuetsvolen an apoptotic Taux tenovin-6-entschlof vun WST-8 assay analyséiert goufen an cytometry Flux, respektiv, vun TP53 VerfÜgung -null KatoIII Zellen. Inhibition vun DR5 Ausdrock vun spezifesch siRNA (Dorënner 4A) tenovin-6-entschlof Zell Doud an apoptosis zu KatoIII Zellen (Dorënner 4B an 4C) bedeitend reduzéiert. Mir ginn dräi verschidden siRNAs an eiser virleefeg Experimenter, a mir maachen d'ähnleche Resultater mat all siRNAs. VerfÜgung Mir propagéieren Aktivatioun vun der endoplasmic reticulum (ËH) Stress Passerelle, déi zu DR5 up-Regulatioun verbonnen ass, wéi virdrun gemellt [17]. Dann ass ee vun de mächtegst inducer vun DR5 an Offloss vun apoptosis, an oft während der ËH Stress lassgelooss. Als zu Dorënner 5A an 5B gewisen, obwuel schneiden liicht war-regulariséiert ginn duerch tenovin-6 Behandlung an all véier gastric Kriibs Zell Linnen, huet de fräi Niveauen vill méi niddereg wéi dat zu Kontroll Zellen mat thapsigargin behandelt, dat eng selektiv inhibitor vun sarcoplasmic ass /endoplasmic reticulum Ca Antitumor Effet vun tenovin-6 a Kombinatioun mat chemotherapeutic Agenten VerfÜgung Endlech, iwwerpréift mir ob tenovin- 6 verstäerkte der antitumor Auswierkunge vun chemotherapeutic Agenten dorënner docetaxel, SN-38, cisplatin, a 5-FU, an gastric Kriibs Zell Linnen. Véier Zell Linnen mat virstellen TP53 VerfÜgung (MKN-45, NUGC-4), MT TP53 VerfÜgung (NUGC-3), an dësen Texter TP53 VerfÜgung (KatoIII) goufen behandelt mat deenen Agenten eleng oder a Kombinatioun mat zwee Schrëtt (2 a 5 μM) vun tenovin-6. D'Konzentratioun waren 0,25 nm docetaxel, 1 nm SN-38, 0,5 oder 1 μM cisplatin, an 0,25 μM 5-FU. Wéi an Table 1 (a Dorënner S2) gewisen, docetaxel an SN-38 huet e schmäerzhafte synergistic Effekt op tenovin-6 Behandlung an dräi Zell Zeilen ze moderéiert, an cisplatin mat tenovin-6 engem moderaten synergistic Effet vun zwee Zell Linnen zougedréckt hierkommen 5-FU a Kombinatioun mat tenovin-6 zougedréckt engem nidderegen Effekt wéi déi aner KGB. Mir iwwerpréift der Ausstralung vun DR5 der Administratioun vun tenovin-6 mat chemotherapeutic KGB. DR5 up-Regulatioun vun tenovin-6 war an MKN-45 Zellen (Dorënner S3) mat enger Kombinatioun vun docetaxel gestäerkt. VerfÜgung Mir bewisen, dass tenovin-6 mächtegst antitumor Aktivitéit begleet huet vun apoptotic Zell Doud am mënschleche gastric Kriibs Zellen mat virstellen TP53 VerfÜgung souwéi déi mat MT TP53 VerfÜgung. Puer spezifesch inhibitors vun sirtuins, wéi sirtinol, suramin, salermide, an thiobarbiturates, sech gemellt Zell Wuesstem zu verschiddenen Zorte vu Kriibs [29] zu inhibit. Meeschte Fuerscher beschriwwen der antitumor Auswierkunge vun sirtuin inhibitors zu Zell Linnen mat virstellen TP53 VerfÜgung [15], [29] - [31], an zougeschriwwen dëse zu der Aktivatioun vun apoptosis duerch acetylation vun p53. Mëttlerweil, waren e puer Rapporten am leschte Joer publizéiert, datt de antitumor Aktivitéite vun sirtuin inhibitors zu Zell Linnen mat MT zougedréckt TP53 VerfÜgung duerch p53-onofhängeg Weeër [17], [18]. Mir weisen datt DR5 knockdown der antitumor Auswierkunge vun tenovin-6 attenuated zu TP53 VerfÜgung -null gastric Kriibs Zellen. Aktivatioun vun den Doud receptor Signal Passerelle via up-Regulatioun vun DR5 spillt eng dréien Roll an tenovin-6-entschlof Zell Doud, wéi an anere Rapporten iwwert sirtuin inhibitors ernimmt. VerfÜgung Et huet gemellt ginn, datt DR5 Ausdrock verstäerkte salermide an entschlof apoptosis zu Mënsch Net-kleng-Zell haett Kriibs Zellen Droen MT TP53 VerfÜgung [17]. An datt Rapport, gläichzäiteg silencing vun SIRT1 VerfÜgung a SIRT2 VerfÜgung souwéi salermide up-reegelen DR5, begleet vun der up-Regulatioun vun ËH Stress-Zesummenhang Proteinen, wéi ATF4 a schneiden. Dës Resultater ugeholl datt ËH Stress war vun dëser DR5 Aféierungs- Équipe. Mir spekuléieren, datt tenovin-6 och zu enger Erhéijung vun DR5 Ausdrock via Aktivatioun vun ËH Stress gefouert mediated vun PERK, IRE1, ATF6, a kleng Stécker. Awer contrairement zu Erwaardungen, ausgeléist d'Signal Passerelle vun ËH Stress vun tenovin-6 ass net selbstverständlech fonnt. Trotzdem, et war kloer Beweiser datt DR5 vun tenovin-6 entschlof war. Et ginn aner Weeër vun schneiden-mediated DR5 up-Regulatioun: reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros), d'c-Jun NH 2-Uschloss kinase (JNK) Passerelle, déi p38 mitogen-ageschalt FAQ kinase Passerelle, an sou op [ ,,,0],32] - [38]. Mä mir hu ënnersicht net dës Weeër hei well mir net schneiden Aktivatioun vun eiser Etude identifizéiere kéint. Eis Resultater hindeit, datt aner p53- a schneiden-onofhängeg Weeër an tenovin-6-entschlof DR5 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen deelhuelen. VerfÜgung Mir bewisen, dass tenovin-6 apoptotic Zell Doud duerch Aktivatioun vun der DR5 Passerelle entschlof. Allerdéngs, p53 a schneiden Édouard war onwahrscheinlech an dëser DR5 Aféierungs- Équipe ze ginn, an de Mechanismus vun DR5 up-Regulatioun bleift onkloer. Mir hunn, viru kuerzem, ze propagéieren antitumor Auswierkunge vun tenovin-6 zu puer Colon Kriibs Zell Linnen, an hunn hir mächtegst antitumor Aktivitéit géint meescht vun hinnen mat an-Regulatioun vun DR5 souwéi [39]. Ee vun CaCo2 Colon Kriibs Zellen (MT TP53 VerfÜgung), apoptotic Zell Doud vun tenovin-6 ass manner evident an DR5 Ausdrock war net betraff waren-reegelen. CaCo2 Zell muss gemellt ginn héije Niveau vun Hëtzt Schock Proteinen als suppressor vun DR5 [40] bekannt auszedrécken - [43]. Dës Relatioun soll an Zukunft studéiert weider ginn. SIRT1 kann histone H4 lysine 16 (H4K16) souwéi H3K9, H3K14, an H1K26, déi enk Zesummenhang sinn ze Gentherapie silencing [11] deacetylate. Ausserdeem, ass et vill entspriechend Net-histone heescht de Législateur: transcriptional Faktoren, DNA Reparatur Maschinnen Elementer, nuklear kenne, histone-verbidden Enzymen, an Zell sécher Molekülle, well soss beschriwwen [11] - [13]. Dës villen a komplizéiert Associatiounen vun SIRT1 Aktivitéit sinn an verschidde biologesch Funktiounen, wéi Regulatioun vun der Gentherapie Ausdrock an DNA Schued gefléckt Équipe. Cancer Zellen tendéieren dës Funktiounen vun SIRT1 fir ze verlaangen ze iwerliewen, proliferate, an katastrophal Frankräich Schued gefléckt. Rezent Etuden hunn d'Fähegkeet vun tenovin-6 identifizéiert dat ze induce an autophagy als Deel vun hirer Anti-neoplastic Auswierkunge vun Leukämie Zellen [44], [45] inhibit. Et kann op Kriibs Zell gelooss hänkt wéi tenovin-6 neoplastic Aktivitéit betreffen. Weider Studien sinn waren de Lien tëscht der tenovin-6-mediated Doud Passerelle an der komplex Rollen vun SIRT1 ze klären. VerfÜgung Mir iwwerpréift d'Auswierkunge vun docetaxel kombinéiert, SN-38, cisplatin, a 5-FU mat tenovin -6 well se fir d'Behandlung vu Patienten mat fortgeschratt gastric Kriibs [46], [47] oft benotzt ginn. Liicht ze synergistic Auswierkunge vun docetaxel an SN-38 mat tenovin-6 am gastric Kriibs Zell Linnen moderéiert, egal TP53 VerfÜgung Status, fonnt goufen. VerfÜgung Obwuel Behandlungen Kombinatioune vun docetaxel an sirtuin sensibiliséieren inhibitors hunn net schonn Kombinatioune vun docetaxel an aner HDAC inhibitors gemellt, wéi trichostatin a an suberoylanilide hydroxamic Seier (Saha) muss gemellt ginn ze hunn synergistic Effekter Zesummenhang mat caspase Aktivéierung oder tubulin acetylation zu puer Kriibs Zell Linnen [48] - [50] . An eiser Etude, bleift et kloer, wann d'tubulin acetylation vun tenovin-6 ëmmer d'antitumor Wierkung beaflosst, well d'tubulin acetylation nëmmen an eng Zell Linn gewise gouf. SN-38 (déi aktiv Form vun irinotecan) ass eng DNA topoisomerase ech inhibitor datt nëmmen während der S Phase Akten an interferes mat DNA Gedächtnis a Zell Divisioun [51], [52]. HDAC inhibitors acetylation vun histones induce an der chromatin Struktur kengem, woubäi topoisomerase inhibitor méi einfach DNA Zougang kann, DNA Schued Saachen [51], [53]. Ausserdeem, huet eng remarquabel Erhéijung vun Ros Generatioun schonn am klengen-Zell haett Kriibs Zellen op gläichzäiteg aussetzt Saha an topotecan (e kuckt virdrun vun camptothecin) [51] gemellt. D'fräi as vun Behandlung kombinéiert tenovin-6 a SN-38 kënnen ze kooperativer Regulatioun vun der DNA Schued Äntwert zum Deel ginn. VerfÜgung De Virdeel vun kombinéiert Therapie mat tenovin-6 a cisplatin oder 5-FU ass manner wéi déi mat den anere Agenten gastric Kriibs Zellen, obwuel e puer Reportagen der Opléisung vun apoptosis vun kombinéiert Behandlung mat cisplatin oder 5-FU an aner HDAC inhibitors an aner erhéijen bewisen hunn [54] -. [57] VerfÜgung Betreffend d' toxicity Evaluatioun vun tenovin-6, déi mir engem fibroblast Zell Linn als Alternativ net-tumorigenic Zellen der toxicity géint normal Zellen ze soe Referenz zu de Virgänger Rapporten [15], [18]. Et war schwiereg, eng adäquat normal Kontroll fir Komparativ Studie ze fannen, an dofir waren ass definitiv de toxicity vun tenovin-6 (an Kombinatioun mat Anti-Kriibs Drogen) zu VIVO VerfÜgung, mat Déier xenograft Modeller ze studéieren. An Conclusioun, engem sirtuin inhibitor, tenovin-6, huet e sécherlech antitumor Effekt géint Mënscherechter gastric Kriibs Zellen. Dëst war onofhängeg vun TP53 VerfÜgung Status a war via weider-Regulatioun vun DR5 entschlof. Weider Etude ass waren de Mechanismus ze klären, déi tenovin-6 reguléieren DR5 Ausdrock. Tenovin-6 kombinéiert mat docetaxel an SN-38 hat e klenge Virdeel fir inhibition vun gastric Kriibs Zell Prolifératioun, déi eng Verfilmung Strategie fir d'Behandlung vun fortgeschratt gastric Kriibs bidden hätt. VerfÜgung
, an ee mat dësen Texter TP53 VerfÜgung). Spannen, tenovin-6 apoptosis an all Zell Linnen entschlof, net nëmmen déi, déi mat Wëld-Typ TP53, VerfÜgung mä och Mann--Typ an automatesch Versiounen, begleet vun up-Regulatioun vun Doud receptor 5 (DR5). An der KatoIII Zell Linn ( TP53 VerfÜgung -null), silencing DR5 tenovin-6-entschlof apoptosis Ofstand attenuated, suggeréiert, dass d'Jarnéier Mechanismus hannert seng antitumor Auswierkungen op Aktivatioun vun den Doud receptor Signal Passerelle baséiert ass. Obwuel endoplasmic vun sirtuin inhibitors ëmmer reticulum Stress gemellt war DR5 up-Regulatioun vun anere Kriibs Zell Zeilen ze induce, konnt mer net markéiert Aktivéierungscode vu sengem Zesummenhang Molekülle fannen, wéi ATF6, PERK, a kleng Stécker, an Zellen gastric Kriibs mat tenovin- behandelt 6. Tenovin-6 a Kombinatioun mat docetaxel oder SN-38 Nofolleg e schmäerzhafte synergistic cytotoxicity géint gastric Kriibs Zellen ze moderéiert. Zu der Konklusioun, huet tenovin-6 mächtegst antitumor Aktivitéit géint Mënscherechter gastric Kriibs Zellen via DR5 up-Regulatioun. Eis Resultater solle fir d'Zukunft Medeziner Entwécklung vun sirtuin inhibitors hëllefräich sinn VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
(NUGC-3, STKM-1), an eng Zell Linn mat automatesch TP53 VerfÜgung (KatoIII) [19] - [21]. Zell Linnen mat virstellen TP53 VerfÜgung (MCF-7 Broscht Kriibs, HEK293 mënschlech embryonal Nier Zellen) an MRC-5 normale Mënsch Här iwert mech selwer huet den Kontrollen an dëser Etude mat abegraff. MKN-45, NUGC-4, KatoIII, an MRC-5 Zell Strecken aus RIKEN BRC Zell Bank (Tsukuba, Japan) kritt. SNU-1 an MCF-7 Zell Strecken aus der American Type Kultur Collection (Rockville, MD) kaaft. NUGC-3 an HEK293 Zell Strecken aus Gesondheet Science Research Resources Bank (Rekorder, Japan) kritt. STKM-1 an STKM-2 Zell Strecken vum Dr. Shunsuke Yanoma (Yokohama City University, School vun Medezin, Japan) Audit gëtt. VerfÜgung
entworf an Wierderbuch déi Fläch-Aldrich sech wéi follegt zesummen: 5'-AACCCGTTGAACCCCATTCG (vir primer), 5'-CGGGCGGTGTGTACAAAGG (ëmgedréint primer), 5'-AACGCAAGCTTATGACCCGCACTTACTGG (bis ewell). Reaktioune waren am triplicate ënner normale thermocycling Konditiounen mat 30 NG vun cDNA, 900 nm primers, 250 nm Ämter, an engem Taqman Gene Expression Master Mix (Obwuel Biosystems), am Aklang mat der Produktioun vum Protokoll gesuergt. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
vun real-Zäit grouss Hinnen alleguer. MKN-45 Zellen Schatzkummer SIRT1 VerfÜgung Gentherapie Ausdrock, dass ronn 2,5 fantastesch méi héich wéi déi vun Här iwert mech selwer war, mä aner Linnen gastric Kriibs Zell rauszesichen (Dorënner 1B). An NUGC-4 Zellen, war de Niveau vun der Gentherapie Ausdrock vun SIRT1 VerfÜgung niddereg, wéi SIRT1 FAQ war. MKN-45 Zellen zougedréckt gehumpelt héich SIRT2 VerfÜgung Gentherapie Ausdrock, während aner Zell Linnen awer zimlech niddereg Ausdrock Niveauen. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Dorënner S1. VerfÜgung rel Intensitéit vun den Ausdrock vun Dorënner 3A dës 'Proteinen. Semi-quantitation vun Western blotting densitometry Équipe normalization zu β-actin Niveauen VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0102831.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2. VerfÜgung Cytotoxic Auswierkunge vun chemotherapeutic Drogen a Kombinatioun mat tenovin-6. Cytotoxic Auswierkunge vun chemotherapeutic Drogen dorënner docetaxel, SN-38, cisplatin, a 5-FU, an hir Opléisung vun de Folge vun tenovin-6 zu gastric Kriibs Zellen mat gastric Kriibs Zellen. D'Zellen sech cultured fir 72 h mat der uginn Konzentratioune vun tenovin-6 a chemotherapeutic Drogen. A: Docetaxel (0,25 nm), B: SN-38 (1 nm), C: cisplatin (1 oder 0,5 μM; NUGC-3 mat 0,5 μM cisplatin behandelt huet), an D: 5-FU (0,25 μM) -Supporter a Kombinatioun mat tenovin-6. Statistesch Bedeitung vun Ënnerscheeder tëschent Gruppe war mat DUNNETT d'Test bewäert. * p VerfÜgung &Si besteet; 0,01; ** p VerfÜgung &Si besteet; 0,05. Intrigue: docetaxel, CDDP:. Cisplatin VerfÜgung Doi: 10,1371 /journal.pone.0102831.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S3. VerfÜgung DR5 Ausstralung an der Administratioun vun tenovin-6 mat docetaxel oder SN-38 zu gastric Kriibs Zellen (MKN-45 an KatoIII). Docetaxel, SN-38 an tenovin-6 sech op eng Usammlung vun 0,25 nm installéiert, 1 nm an 2 μM. Semi-quantitation vun Western blotting densitometry Équipe normalization zu β-actin Niveauen. Intrigue:. Docetaxel VerfÜgung Doi: 10,1371 /journal.pone.0102831.s003 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung
Detailléiert Kaart vum mënschlechen Zongmikrobiom
Haushalts Desinfektiounsmëttele kéinte bäidroen zum Adipositasrisiko bei Kanner
Féiert Hypertonie ëmmer zu eeschte COVID-19?
Typ 1 Diabetis verbonne mat Darmmikrobiom a genetesche Faktoren
Planzefudder kënnen Antibiotikaresistent Superbugs op Mënschen iwwerdroen
Den Neil Bell ernannt als Chief Development Officer vun Avacta Life Sciences
Jonk Blutt restauréiert d'Vitalitéit bei eeler Leit
Dem Bram Stoker säin Dracula iwwerlieft um Blutt vu jonke Meedercher. Elo hunn dFuerscher festgestallt datt et vläicht eng Wourecht an dëser bizarre Theorie gewiescht wier! Laut engem Genetiker um U
Allgemeng Pilz op der Haut kann entzündlech Darmkrankheet verursaachen
Therapien, déi bestëmmte commensal Pilze zielen, kënnen en neie Wee zur Behandlung vun inflammatorescher Darmkrankheet (IBD) ubidden, laut LA Fuerscher. Hannergrond | Shutterstock IBD ass
Schlamm an Duschkäpp kéint geféierlech Lungebakterien fanne Studie
Eng Studie huet gewisen datt dDuschkäpp Schlämm enthalen, déi potenziell geféierlech Bakterien Heem kënne sinn, déi zu enger schwiereger Lungenerkrankheet féieren. Mycobakteriell Bakterien si verantwo