NRP1 als Salle polyvalente Net-tyrosine-kinase kenne kritescher Rollen an entholl Werdegang Leeschtung. MicroRNAs (miRNAs) sinn eng wichteg Klass déifgräifend Genen, datt zu enger Rei vun biologescher Funktiounen Équipe sinn, besonnesch Kriibs. Et bleift net kloer, ob miRNAs den Ausdrock vun NRP1 regléieren kann. D'Zil vun dëser Etude war bis miRNAs identifizéieren, datt de Wuesstem, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs duerch gezielt NRP1 Ausdrock inhibit konnt. Mir hu fonnt, datt Mir-338 Ausdrock vun gastric Kriibs Zell Linnen an gastric Kriibs Stoffer reduzéiert huet. Desweideren, hunn mer dat Mir-338 gastric Kriibs Zell Migratioun inhibited, Invasioun, Prolifératioun a gefördert apoptosis vun NRP1 Ausdrock gezielt. Als eng Offloss regulator vun NRP1, Mir-338 Ziler direkt NRP1. D'gezwongen Ausdrock vu Mir-338 inhibited der phosphorylation vun Erk1 /2, P38 MAPK an Akt; Ee, d'Expressioun vun phosphorylated Erk1 /2, P38 MAPK an Akt war vun der overexpression vun NRP1 restauréiert. An AGS Zellen Krankheet mat Mir-338 oder mat SiNRP1 transfected, goufen d'FAQ Niveau vun fibronectin, vimentin, N-cadherin an Wéngertsschleek ofgeholl, mä den Ausdrock vun E-cadherin fräi war. Den Ausdrock vun mesenchymal lues an Mir-338-ausdrécken Zellen war vun der Restauratioun vun NRP1 Ausdrock ze normal Niveauen restauréiert. An VIVO VerfÜgung, Mir-338 och entholl Wuesstem ofgeholl an Trupen D-MVA vun NRP1 gezielt. Dofir, schléissen mir dat Mir-338 Akten als Gentherapie Roman entholl suppressor zu gastric Kriibs. Mir-338 kann Opbau, invasiv, proliferative an apoptotic Verhaalen erofgoen, souwéi gastric Kriibs EMT, déi Ausdrock vun NRP1 attenuating VerfÜgung Fro:. Peng Y, Liu YM, Li LC, Wang LL, Wu XL (2014) MicroRNA-338 bremst Wuesstem, Missiounen a Metastasen vun Gastric Cancer vun NRP1 Expression gezielt. PLoS NËMMEN 9 (4): e94422. Doi: 10.1371 /journal.pone.0094422 VerfÜgung Redakter: Chih-Hsin Tang, China Medical University, Taiwan VerfÜgung Arnaque: 18 Oktober 2013; Akzeptéiert: 16. Mäerz 2014; Publizéiert: April 15, 2014 VerfÜgung Copyright: © 2014 Peng, et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht war duerch Projet vun Wëssenschaft an Technologie Comité vun Shapingba Uertschaft vun Chongqing (201302) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Neuropilins, dorënner neuropilin1 (NRP1) an neuropilin2 (NRP2), sinn Salle Net-tyrosine-kinase kenne déi éischt op hir kritesch Rollen vun den Entwécklungslänner nervös System baséiert identifizéiert goufen [1]. Nrp1 an Nrp2 hunn 44% homology an deelen vill strukturell a biologescher Eegeschaften. NRP1 gëtt haaptsächlech vun bloodvesselendothelia, an NRP2 ass haaptsächlech am lymphatic kritt [2] fonnt, [3]. Kierzunge Ënnersich identifizéiert NRP-1 als receptor fir d'wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF): lount Iech isoform VEGF-165 zu souwuel endothelial Zellen an e puer entholl Zellen [4], [5]. Fuerschung huet gewisen, datt NRP1 ass zu Multiple entholl Zorte weider-reglementéiert an ass op verschiddene entholl vasculatures ausgedréckt [3], [6] a suggeréiert datt NRP1 spillt enger kritescher Roll an entholl Werdegang. Fréi Recherche opgedeckt, datt NRP1 de Wuesstem vun erhéijen als coreceptor vun VEGFR Afloss hätt [5]. Onerfëllte spéit datt NRP1 tumorangiogenesis Schwong kënnt, entholl Wuesstem a rassistesch entholl apoptosis ouni VEGFR [7] Boost. NRP1 kann engem coreceptor vun anere Wuesstem Faktoren ginn, déi dofir VEGF elucidates duerch neuropilins an dem Fehlen vun VEGFR-1or VEGFR-2 Signal kënnen [8], [9]. Als coreceptor vun TβRI /TβRII, kann NRP1 entholl apoptosis Trëttoir an entholl Wuesstem via souwuel kanonesche an Net-kanonesche sécher [10] Boost. NRP1, wéi eng coreceptor vun PDGFR /cmet, kënnt via P38MAPK Schwong tumorangiogenesis an Erk sécher [11]. VerfÜgung Als Offloss reglementaresche Genen vun NRP1, déi Transkriptiouns Faktoren sp1 /3 an AP1 kann den Ausdrock vun NRP1 regléieren [ ,,,0],12]. Verschidde Fuerschung huet gewisen, datt butyrate den Ausdrock vun neuropilin ech zu colorectal Zell Linnen duerch d'inhibition vun Sp1 transactivation Hien [13]. VerfÜgung MicroRNAs (miRNAs) sinn Net-coding RNS Molekülle ongeféier 21-23 nucleotides zu Längt datt regléieren Gentherapie Ausdrock am Post-transcriptional Niveau [14], [15], [16]. miRNA Ausdrock Analysë profiling hunn eng global verwandelt-Regulatioun vun alen miRNA Niveauen am primäre Mënsch erhéijen famill ze normal Stoffer réischt [17], [18]. Soumat kënnen miRNAs Funktioun als entholl suppressors oder oncogenes, an dysregulated miRNA Ausdrock ze entholl Zell Metastasen bäidroen kënnen. Et bleift net kloer, ob miRNAs den Ausdrock vun NRP1 regléieren kann; dofir, fir mir d'Zilscheif miRNAs vun NRP1 ze bestëmmen. Zousätzlech Funktioune vun NRP1 kann duerch ënnersicht der Zil- miRNAs vun NRP1 entdeckt ginn. VerfÜgung Mënscherechter Ray uplanzen an Zell zesummeféieren VerfÜgung Dës Etude geheescht frësch Stoffer, dorënner 41 Mënsch gastric Kriibs Echantillonen an 24 Echantillon vun bascht normal mucosal vun 41 Patiente ofgeleet Stoffer déi Agrëff bei der zweeter laizistesch Hospital vun Chongqing Medical University mécht tëschent 2012 an 2013. Dës Etude ass laut gehaal fir de "Biomedical Research sensibiliséieren Mënscherechter IFLA- Kritik (Meeschter um) 'Regulatioun vun de Ministère vun der Gesondheet an der Deklaratioun vun Helsinki op ethesch Prinzipien fir medezinesch Fuerschung sensibiliséieren Mënscherechter Themen. All Echantillon waren mat der Awëllegung vun de Patienten kritt an d'Experiment vun de Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot vun der Zweeter laizistesch Hospital vun Chongqing Medical University guttgeheescht. All Participant gëtt schrëftlech Erlaabnes vun dëser Etude matmaachen informéiert VerfÜgung D'SGC-7901, HGC-27, AGS, MKN-45 an N87 Zell Strecken aus der American Type Kultur Collection (ATCC kritt;. Manassas, VA , USA), an de GES-1 Zell Linn war vum Typ Kultur Collection vun der chinesescher Akademie vun de Wëssenschaften (Shanghai, China) kaaft. D'Zell Strecken cultured zu RPMI1640 (Hyclone, Logan Utah USA) mat 10% An et Bovine serum (FBS) ergänzt a sech op 37 ° C mat 5% CO2 incubated. VerfÜgung Primers, RNS Isolatioun a miRNA Detektioun d'primers fir Mir-338-3p an U6 sech mat der miScript Primer Assay Kit (QIAGEN Düsseldorf an Däitschland) produzéiert. De Message vun der miRNAs an dëser Etude benotzt sech wéi follegt zesummen: Mir-338-3p: UCCAGCAUC- AGUGAUUUUGUUG an U6: CGCAAGGAUGACACGCAAAUUCGUGAA- GCGUUCCAUAUUUUU. De Géigendeel primers sech och am Géigendeel Transkriptiouns Schrëtt benotzt. Total miRNA war vun cultured Zellen a mënschlech Otemschwieregkeeten uplanzen benotzt RNAiso fir klenger RNS (TaKaRa Bio, Otsu, Japan) laut den Hiersteller d'Instruktioune ofgebaut. Puer dovun-A Schwänz bäigebaut ze Mir-338 an U6 mat der miRNA Reaktioun Respektiv Mix (TaKaRa Bio), an dann war cDNA aus 5 NG vun insgesamt RNS Wierderbuch mat der miRNA PrimeScript RT Aktivitéit Mix (TaKaRa Bio). Real-Zäit Hinnen alleguer gouf zu engem CFX96 Real-Time Hinnen alleguer Detektioun System (Bio-Rad) mat SYBR Premix Ex Taq II (TaKaRa Bio) gesuergt. D'Hinnen alleguer ware 95 ° C fir 30 Spiller, gefollegt vun 40 Zykle vun 95 ° C fir 5 ass a 60 ° C fir 30 ass. D'Donnéen waren géint d'U6 snRNA normalized. No amplification, war e vermëschen rop Analyse standing der Spezifizitéit vun de Produiten ze confirméieren. VerfÜgung pcDNA Expression Plasmids an Plasmid Transfection VerfÜgung Den ORF Haaptrei vun NRP1 war aus Frankräich DNA isoléiert vun der AGS Zell Implikatioune Linn, an der ORF Regioun vun der NRP1 cDNA dann subcloned an der GV230 Vecteure (GeneChem Corporation, Shanghai, China) gouf benotzt Lipofectamine 2000 an AGS an MKN45 Zellen Éislek plasmid transfected (Invitrogen) .Twenty-véier Stonnen no transfection, déi Zellen sech fir e Rettungsplang Experimenter benotzt. AGS Zellen déi mat NRP1 stably transfected huet sech ausgewielt mat 2 ug /ech puromycin (Invitrogen, Cergy-Pontoise, Frankräich) 48 h no der transfection. VerfÜgung miRNA Gene Biologie an Ectopic Expression VerfÜgung D' mënschlech Mir-338 Gentherapie war Hinnen alleguer-Kick vum normal Frankräich DNA an an engem lentiviral Vecteure gekloonten. D'lentiviruses sech duerch d'cotransfection vun HEK293T Zellen mat plasmids PGC-LV, pHelper 1.0 an pHelper 2.0 benotzt Lipofectamine 2000 (Invitrogen) entsteet. Viren waren 48 h Post-transfection gesammelt, an den Aids sech an der Präsenz vun 2 mg /ML polybrene (GeneChem Corporation) gesuergt. Kontroll miRNA viruse war vun GeneChem Corporation (Shanghai, China) kaaft. AGS Zellen déi mat Mir-338 stably Krankheet huet sech ausgewielt mat 2 ug /ech puromycin (Invitrogen) 48 h no der Wonn. VerfÜgung Gene Expression Knockdown vun RNS-Léif VerfÜgung NRP1 Ausdrock vun AGS war Zellen vun transfecting de folgenden geziilte siRNA Message (Sangon Biotech, Shanghai, China) mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen) entsat;: agatcgacgttagctccaa;: aacacctagtggagtgata;: CAATCACGTGCAGGCTCAA (wou net uginn, 3 siRNA # gouf benotzt). Kontroll siRNAs (Léift!) Sech vum Aféiere 4 huel Auswiesselungen an NRP1 gezielt Haaptrei (GATAGGTCATGACTGCCC) entsteet. Véierzeg-aacht Stonnen no transfection, war NRP1 Ausdrock vun immunoblotting iwwerpréift. VerfÜgung Luciferase Reporter Assay VerfÜgung A PsicheckTM-2 Dual-Luciferase miRNA Zil- Ausdrock Vecteure fir 3'UTR luciferase assays benotzt gouf (Sangon Biotech, Shanghai, China). D'Zil oncogene vun miRNA-338 huet op der Basis vun der online microRNA Zil- Datebank http://www.microrna.org/microrna/home.do ausgewielt. D'primer Message fir d'Wildwest-Typ 3'UTR sech wéi follegt zesummen: vir: 5'- CCGCTCGAG CAAAGGAC- GGAAGTGGAAGG -3 "an ëmgedréint 5'-ATTTGCGGCCGC GGAGTTCACAAGCACGAGG- TT-3". Well et zwee verbindlech Siten an der NRP1 3'UTR sinn, entworf mir zwee primer Message fir d'Mann- 3'UTR. Fir ee Mann- 3'UTR, goufen d'primer Message folgend: vir: 5'- GAAT- AATCAGGCATCTTTGTTGAGACCAAGTATGATT-3 'an ëmgedréint: 5'- GGTCTCAACAAAG- ATGCCTGATTATTCAAATGAAACC-3 ". Fir déi aner Mann- 3'UTR, goufen d'primer Message wéi follegt zesummen: vir: 5'- GCGAAATCCAAGGCATCTTCACCAAGCGTATTCCGTGT-3 'an ëmgedréint: 5'- GCTTGGTGAAGATGCCTTGGATTTCGCTCAGTTTCC-3 ". Fir d'luciferase assay, war Lipofectamine 2000 zu cotransfect MKN45 Zellen mat der kann awer och sin-Mir-338 an PsicheckTM-2 Dual-Luciferase miRNA Zil- Ausdrock vectors mat Wëld-Typ oder Mann- Zil- Message benotzt. D'Liichtkäfer luciferase Aktivitéit war mat der Dual Luciferase Assay (Promega, Madison, allem, USA) 18 h der transfection gemooss, an huet d'Resultater géint Renilla luciferase normalized. All reporter plasmid huet op d'mannst dräi mol transfected (op verschidden Deeg), an all Prouf war zu triplicate assayed. VerfÜgung Zell Nuetsvolen an Clonability Assays VerfÜgung D'transfected Zellen sech rakommen an 96-gutt Placke op eng Dicht vun 1 × 10 Migratioun a Missiounen Assays VerfÜgung Fir d'transwell Migratioun assays, 10 × 10 Antibodies VerfÜgung Antibodies géint fibronectin, vimentin, N-cadherin, E-cadherin, Schleek an GAPDH sech vu Santa Cruz déi (CA, USA) kaaft. Phospho-Erk1 /2, phospho-Akt, an phospho-P38MAPK sech aus Abcam (Cambridge, UK) kaaft, an total Erk1 /2, Akt, an P38MAPK sech aus BD Biosciences (USA). D Systemer (är ganz Famill, Punktzuel, USA), a HRP (horseradish peroxidase) -conjugated Geess anti-Kanéngchen conjugated HRP-Anti-Maus IgG an Geess IgG vu Santa Cruz Déi kaaft huet Immunoblotting VerfÜgung Total FAQ aus der transfected Zellen Ripa ofgebaut gouf benotzt lysis Prellbock (Beyotime, China) no der Taktik vum Produzent. No der ganzer-Zell FAQ dovu laachen sech de BCA FAQ assay benotzt, goufen déi 10% SDS polyacrylamide gelies electrophoresis gleichgestallt Montanten vun Zell lysates geléist a sech op enger polyvinylidene fluoride Membran transferéiert, wat dann zu 5% Nët-Fett Mëllech virbildlech war an TBST fir 1 Stonn bei 4 ° C. D'blots sech dann mat der Primärschoul antibodies incubated. No incubation mat HRP-conjugated Secondaire antibodies, goufen d'FAQ Interpreten mat enger verstäerkter chemiluminescence reagent (Millipore, Billerica, MA, USA) visualized. Déi folgend antibody dilutions sech benotzt: Anti-fibronectin, 1:200; Anti-vimentin, anti-E-cadherin an Anti-N-cadherin, 1:1200; Anti-Schleek an Anti-GAPDH, 1:500; Anti-phospho-Erk1 /2, anti-phospho-Akt, an anti-phospho-P38MAPK, 1:2000; Anti-NRP1, 1:600; Anti-total Erk1 /2, anti-Akt, an anti-P38MAPK, 1:500; an HRP-conjugated IgG, 1:7000. VerfÜgung Xenograft Experimenter VerfÜgung Männlech athymic Sauna Mais 6 bis 8 Woche vun Alter sech aus dem Déieren hun Center vun Chongqing Medical Uni kritt a sech acclimated fir 2 Wochen. Dës Etude gouf am strikte Aklang mat de Recommandatioune vun der Guide fir d'Fleeg an Uwendung vun schafft Déieren vun Chongqing Medical University gehaal. De Protokoll ass duerch de Comité op d'Ethik vun Déieren Experimenter vun Chongqing Medical University guttgeheescht. All Dokteschpraxen goufen ënner Natrium pentobarbital Anästhesie gesuergt, an all Efforten gemaach goufen Leed ze minimiséieren. Gläich Zuelen vun AGS Zellen (10 Immunohistochemistry VerfÜgung agekacht Saachen an formalin sech zu paraffin Bleck gesat an op positif gelueden microscope drënner sectioned. D'Sektiounen sech zu xylene, denken an graded Alkohol, an pretreated fir antigen retrieval zu citrate Prellbock fir 20 min an engem 98 ° C kache (CD34 an NRP1) deparaffinized. (; D Wunnengen 1:100 R &) de Rubriken huet bei 4 ° C Iwwernuechtung mat CD34 (1:200, Santa Cruz Déi) an NRP1 incubated. Immunostaining war standing der UltraSensitive S-P Detektioun Kit (KIT-9720, Maixin, anerer Sprooch, China) benotzt, an d'Faarf ass mat engem botzt Kit (PW017, Sangon Biotech, Shanghai, China) entwéckelt .Subsequently, de Rubriken huet mat hematoxylin counterstained. D'drënner waren dann Kierchefënster mat H &. E Wirklechkeet ze bewäerten VerfÜgung Quantification vun Immunohistochemical Stain Intensitéit VerfÜgung der entholl microvessel Dicht Fir erauszefannen, fënnef ausgewielt brightfield microscopic Biller (Vergréisserung 40 ×; Géigend 0,89 mm statistique Analys VerfÜgung SPSS 17,0 Software war fir statistesch Analyse benotzt. D'Donnéeë sinn als Mëttel ± normale deviation (s.d.) virgestallt. Group Vergläicher mat Student d'T-Test gemaach. Ënnerscheeder waren däitlech als bei p &Si besteet;. 0,05 VerfÜgung Mir selektionéiert VerfÜgung Fir an eiser nächster Analyse, FAQ Ziler vun NRP1 agebaut ginn concordantly vun op d'mannst virausgesot hat ze ginn dräi vun de folgenden véier Cepheid Handwierksgeschir: Miranda (http://www.microrna.org), PicTar (http://pictar.bio.nyu.edu/), TargetScan (http://genes.mit.edu/targetscan /index.html) an miRDB (mirdb.org/miRDB/). Baséierend op de Januar 2012 release Versioun, fonnt mir 11 microRNAs datt potenziell NRP1 cibléiert. Mir hu schonn e puer miRNAs abnormal ausgedréckt an gastric carcinoma mat engem Gene Chip [19] (Table 1) identifizéiert. Baséiert op der uewen zwee, virausgesot mir en Offloss miRNA vun NRP1: Mir-338 VerfÜgung Mir-338 Ass Down-reglementéiert Gastric Cancer Stoffer an Zell zesummeféieren VerfÜgung d'Rollen vun Bord ze wëssen. -338 zu mënschlech Entwécklung gastric Kriibs, gemooss mir seng Niveau vun Ausdrock vun 41 Mënsch gastric Kriibs Echantillonen an 24 bascht normal mucosa Echantillon. Laut engem qRT-Hinnen alleguer Analyse, war de Niveau vum Mir-338 Ausdrock vill zu der entholl Stoffer reduzéiert Verglach mat der bascht normal mucosa Stoffer (Figebam. 1A). Ausserdeem gouf Mir-338 Ausdrock am gastric Kriibs Zell Linnen (SGC7901, HGC27, AGS, MKN45 an N87) erofgaangen am Verglach mat der normal gastric mucosa Zell Linn (GES1) (Lalumi 1B). Dës Resultater hindeit, datt Mir-338 ass erof-reglementéiert gastric Kriibs Zellen, eng Opklärung déi relevant fir mënschlech Entwécklung gastric Kriibs ginn. VerfÜgung Mir-338 Ziler direkt Oncogenic NRP1 VerfÜgung NRP1 gouf Rapport eng wichteg Protein gin dass gastric Kriibs Wanderung an Invasioun fiert. Benotzt Cepheid Handwierksgeschir, virausgesot mir dass d'Zil- miRNA vun NRP1 war Mir-338. Fir weider bestätegen dat Mir-338 Ziler direkt oncogene NRP1, standing mir luciferase reporter assays ënnersicht ob Mir-338 direkt mat sengem Zil oncogenic NRP1 openee. Mir identifizéiert zwee potentiell bindend Siten fir Mir-338 op der 3'UTR vun der NRP1 mRNA. Fir erauszefannen, ob NRP1 vum Mir-338 duerch den direkten reglementéiert ass obligatoresch fir d'3'UTR vun NRP1, gebaut mir eng Serie vun 3'UTR Fragmenter, dorënner de vollen-Längt Wildwest-Typ NRP1 3'UTR, eng obligatoresch Site 1 Mann- an e verbindlechen Site 2 Mann- (Figebam. 2A). Dës Brochstécker sech dann an der psiCHECK2 luciferase reporter plasmid gesaat. Mir hu fonnt, dass de Co-transfection vum Mir-338 an der Show-Typ NRP1 3'UTR engem groussen Verloscht am luciferase Unitéiten ëmmer d'Kontrollen am Verglach mat. Allerdéngs, d'Co-transfection vum Mir-338 an der Mann- NRP13'UTR rauszesichen enger Ofsenkung luciferase Unitéiten Ursaach (Figebam. 2B). Dës Resultater hindeit, datt Mir-338 Ziler direkt NRP1. VerfÜgung Mir-338 bremst Gastric Cancer Zell Migratioun, Missiounen a prolifération a förderen Apoptosis vun NRP1 VerfÜgung Fir déi funktionell Bedeitung vum Mir-338 overexpression ënnersicht zu gastric Kriibs, Krankheet mir der Zell gastric Kriibs Linnen AGS an MKN45 mat LV-kann awer och sin-mir-338. Am Verglach mat den Ausdrock vun cont-Mir, gouf Mir-338 overexpressed vill an der AGS an MKN45 Zell Reien Wonn mat LV-kann awer och sin-mir-338 (Dorënner 3A). Mir hunn och déi, am Verglach mat cont-Mir, den Ausdrock vun NRP1 war vill verwandelt-reglementéiert an d'AGS an MKN45 Zell Reien Wonn mat LV-kann awer och sin-mir-338 (Dorënner 3B). D'Zellen mat gezwongen Ausdrock vu Mir-338 Schatzkummer ofgeholl vill Prolifératioun Verglach mat den Zellen mat gezwongen Ausdrock vun cont-Mir (Dorënner 3C). De Mir-338-Krankheet Zellen Schatzkummer och reduzéiert Kolonie Opstellung ëmmer: d'Zuel vun Foci am Mir-338-ausdrécken Zellen Verglach rofgaang war mat der cont-Mir-Krankheet Zellen (Dorënner 3D). D'transwell Wanderung an Matrigel Invasioun assays bewisen, dass Mir-338 bedeitend der Migratioun an Invasioun Pouvoir vun der AGS an MKN45 Zellen (Dorënner 3) reduzéiert. D'fluorescence-ageschalt Zell zortéieren (FACS) Analyse gewisen, datt de Batti Ausdrock vu Mir-338 Féierung ze gastric Kriibs Zell apoptosis. De Prozentsaz vun insgesamt apoptotic Zellen (fréi apoptotic + spéiden apoptotic) vill vun 11% an Äntwert ze Mir-338 overexpression Verglach mat cont-Mir overexpression zu AGS Zellen fräi. A 10% Erhéijung vun der Zuel vun apoptotic Zellen war an der MKN45 Zellen mat Mir-338 overexpression Verglach zu cont-Mir (Dorënner 3F) observéiert. Mir-338 konnt den Ausdrock vun NRP1 duerch direkt inhibiting NRP1 ët oder aner indirekt Kreesleef regléieren, datt mer nächst ascertained ob d'Reduktioun vun NRP1 Ausdrock hätt d'inhibition vun gastric Kriibs Zell Migratioun, Iwwerfall a Prolifératioun no de Batti Ausdrock vun miR- observéiert erklären 338. Mir forcéiert dofir de Beweis vun Mir-338 zu AGS Zellen zesumme mat engem bauen wouvun der NRP1 Haaptrei coding mä de 3'UTR vun der NRP1 mRNA subtil. Als Resultat, Kriseperiod dëser bauen eng NRP1 mRNA datt bis Mir-338 méi resistent war. Mir hu fonnt, datt gastric Kriibs Zell Migratioun, Invasioun, Prolifératioun an apoptosis an der AGS Zell Linn restauréiert goufen mat gezwongen Mir-338 Ausdrock an NRP1 Restauratioun (Dorënner 3G-3J). Déi Resultater weisen, datt Mir-338 gastric Kriibs Zell Migratioun, Iwwerfall a Prolifératioun bremst an ënnerstëtzt apoptosis vun NRP1 gezielt. VerfÜgung Effekt vum Mir-338 op sécher Weeër an AGS BTS VerfÜgung Als engem Net- tyrosine-kinase receptor, NRP1 kann den Ausdrock vun der phosphorylation vun Erk1 mëttelméisseg Erhéijung /2, Akt, an P38MAPK entholl Zell Prolifératioun an Metastasen ze förderen, souwéi d'apoptosis an immun Äntwerte Trëttoir. Well NRP1 engem afgerappt Zil vum Mir-338 ass, gemengt mir dat Mir-338 vum Ausdrock vun der phosphorylation vun Erk1 erofgoen kéint /2, Akt, an P38MAPK. Mir hu fonnt, datt de Batti Ausdrock vu Mir-338 der phosphorylation vun Erk1 inhibited /2, mee d'famill Ausdrock Niveau vun insgesamt Erk1 /2 war net vill verännert. Mir-338 kéint och de phosphorylation vun P38 MAPK an Akt (Lalumi 4A) erofgoen. Mir-338 konnt de 3'UTR vun der NRP1 mRNA kruet der phosphorylation vun ERK1 /2, Akt an P38MAPK ze regléieren; Ee, mir wosst net ob Mir-338 der 3'UTRs vun anere Genen kruet kéint eng gläichberechtegt Effet ze erreechen. Also war Rettungsplang Experimenter gesuergt, an der Restauratioun vun NRP1 Ausdrock sech duerch eng immunoblot Analyse (Lalumi 4B) confirméiert. Mir hunn erausfonnt, datt d'phosphorylation Niveau vun Erk1 /2, Akt an P38MAPK waren an der AGS Zellen mat gezwongen Mir-338 Ausdrock an NRP1 Restauratioun (Lalumi 4C) net vill verännert. Dofir, schléissen mir dat Mir-338 der phosphorylation vun ERK1 /2, P38 MAPK an Akt via NRP1 reguléieren. VerfÜgung Mir-338 der Epithelial Phenotype vun Gastric Cancer VerfÜgung bestëmmt EMT ass eng wichteg Mechanismus mat Kriibs invasiveness an Metastasen assoziéiert. De Phänomen vun EMT ass den Iwwergank vun epithelial Zellen definéiert zu fibroblastoid- oder mesenchymal-wëll Zellen. EMT ass duerch de Verloscht vun epithelial lues an d'Acquisitioun vun mesenchymal Komponente charakteriséiert. E-cadherin, occludin an cytokeratin si während EMT downregulated hierkommen N-cadherin, vimentin, fibronectin an Wéngertsschleek upregulated sinn. NRP1 verbessert sécher iwwer dräi grouss Weeër verbonne gewiescht ze EMT, i.e., TGF-β, hh an HGF /cMet. Fir d'Roll vun NRP1 am Gank der mesenchymal phenotype vun gastric Zellen fannen, do hu mer de Beweis vun NRP1 vun RNS Amëschen (RNAi) verwandelt (Figebam. 5A) an iwwerpréift den Ausdrock vun mesenchymal lues wéi fibronectin, vimentin, N-cadherin an Schleek, souwéi d'epithelial Bewaacher E-cadherin, an AGS Zellen. Mir hunn erausfonnt, datt d'Ausdrock Niveau vun fibronectin, vimentin, N-cadherin an Wéngertsschleek ofgeholl huet, mä den Ausdrock vun E-cadherin war an der NRP1-do ass entholl Zellen (Figebam. 5B) fräi. D'Resultat weist, datt NRP1 EMT Prozess zu gastric Kriibs fueren kann. Well NRP1 engem afgerappt Zil vum Mir-338 ass, gemengt mir dat Mir-338 der epithelial phenotype vun gastric Kriibs bestëmmen hätt. Fir festzestellen, ob de molekulare Ännerungen typesch vun engem reduzéierten EMT Accident zu Mir-338-ausdrécken Zellen, iwwerpréift mir den Ausdrock vun mesenchymal an epithelial lues zu AGS Zellen. D'immunoblot Analyse gewisen, datt den Ausdrock Niveau vun fibronectin, vimentin, N-cadherin a Schleek am AGS Zellen mat de Batti Ausdrock vu Mir-338 ofgeholl huet. Doriwwer eraus, huet de Batti Ausdrock vu Mir-338 der Ausdrock vu E-cadherin an der AGS Zell Linn hierkommen d'Kontroll-Krankheet Zellen E-cadherin negativ bliwwen. Mir hu fonnt, datt Mir-338 der phosphorylation vun ERK1 /2, P38 MAPK an Akt via NRP1 reegelen; also, et ass néideg fir aner Gewerkschaften, ob Mir-338 EMT via NRP1 regléieren konnt. D'immunoblot Analyse gewisen, datt den Ausdrock vun der uewen mesenchymal lues am Mir-338-ausdrécken Zellen dem normalen Niveau vun der Restauratioun vun NRP1 Ausdrock (Figebam. 5C) restauréiert gouf. Ofzeschafen, hien huet dës Resultater dass Mir-338 EMT via NRP1 zu gastric Kriibs Zellen inhibit konnt. VerfÜgung Mir-338 entholl Wuesstem erof an Hien D-MVA vun gezielt NRP1 An VIVO Baséierend op der observéiert Verloschter am Opbau, invasiv an proliferative Verhaalen vun AGS an MKN45 Krankheet Zellen mat LV-kann awer och sin-mir-338, mir propagéieren nächst der Roll vum mir-338 zu Wuesstem an VIVO. subcutaneously Sauna Mais mat gläiche Zuelen inoculated Mir (1 × 10 Ausschöpfung Gentherapie Fritten a Bioinformatik, mir virausgesot, datt d'Zil miRNA vun NRP1 war Mir -338. Fuerschung huet gewisen, datt den Ausdrock vun Mir-338 zu verschiddene erhéijen schwankt. Huang XH et al. gewisen, datt duerch gezielt smoothened Liewer Kriibs Zell Invasioun Trupen Mir-338-3p [20]. Desweideren, an melanomas, Mir-193a, Mir-338, an Mir-565 huet an Patienten mat engem BRAF stattfannen [21] gewise gin underexpressed. Vun dësen Daten, opgrond mir dat Mir-338 als entholl suppressor handelen kéint. Et ass keng publizéiert Literatur iwwer ob Mir-338 zu gastric Kriibs underexpressed ass. An eiser Etude, huet den Ausdrock Niveau vun Mir-338 éischt zu 41 Mënsch gastric Kriibs Echantillonen an 24 Echantillon vun bascht normal mucosa Stoffer gemooss. Mir évaluéiert dann den Ausdrock vun Mir-338 zu fënnef gastric Kriibs Zell Linnen an normal gastric mucosa Zell Linnen. Mir hu fonnt, datt de Begrëff vun Mir-338 huet verwandelt-reglementéiert souwuel d'entholl Stoffer an de Kriibs Zell Linnen. Desweideren, konnt de overexpressed Mir-338 gastric Kriibs Zell Migratioun, Iwwerfall a Prolifératioun, inhibit an apoptosis förderen. Mëttlerweil, kann déi tumourigenic Qualitéiten komplett vun NRP1 overexpression restauréiert ginn. Zousätzlech, proposéiert de luciferase reporter assays dass Mir-338 Ziler direkt NRP1. Sou, schléissen mir dat Mir-338 Akten als potentiell entholl suppressor zu gastric Kriibs, eng Funktioun, déi vun ofzegewinnen den Ausdrock vun NRP1 erfëllt ass. VerfÜgung Als Net-tyrosine-kinase receptor, NRP1 der mëttelméisseg Erhéijung kënnt Ausdrock vun der phosphorylation vun Erk1 /2, Akt, an P38MAPK. M Akagi et al. fonnt, datt d'inhibition vun NRP-1 den Ausdrock vun der phosphorylation vun Erk1 /2, Akt, an P38MAPK [22] reduzéiert. Zousätzlech huet dës Distanz an der Fuerschung, déi d'Expressioun vun ERK1 /2 phosphorylation up-gereegelt gouf zu NRP-1-overexpressing Zellen [23]. An dëser Etude, fonnt mir dass overexpressed Mir-338 vum Ausdrock vun der phosphorylation vun Erk1 erofgoen kéint /2, Akt, an P38MAPK, en Effekt datt op NRP1 Restauratioun opgehuewe gouf. Der Aktivatioun vun Erk, Akt an P38MAPK am Veräin mat apoptosis Resistenz /Zell Iwwerliewe gouf zu enger Rei vu Modell Systemer [24], [25], [26] gutt dokumentéiert.
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Nei Fuerschung identifizéiert e Link tëscht dem Darmmikrobiom a Strokes
Mouthwash beaflosst d'Auswierkunge vun der Übung
Plastik elo allgemeng a mënschlechen Hocker fonnt
Ganz Vibratioun hëlleft Entzündung ze reduzéieren,
Fuerschung weist datt Probiotika hëllefe kënnen Angscht an Depressioun ze bekämpfen
De Mikrobiom Verloscht vum Antibiotikum benotzt beaflosst d'Äntwert op d'Gripp Impfung
Gutt-Boost Iessen kann en Enn vun der Kandheet Ënnerernährung weltwäit enden
DFuerscher hunn eng nei Aart vu Liewensmëttel entwéckelt déi Darmbakterien bei ënnerernährte Kanner verbessert an ass besser beim Wuesstum wéi Standard Liewensmëtteltherapie. Nathan Devery
Detailléiert Kaart vum mënschlechen Zongmikrobiom
Eng nei Studie am Journal publizéiert Zellberichter am Mäerz 2020 bericht dBenotzung vu fortgeschrattem a schnelle Spektral Imaging Techniken fir eng detailléiert Kaart vu mikrobielle Gemeinschaften
Mathematesche Modell weist de Risiko vun der SARS-CoV-2 Infektioun no fecaler Mikrobiota Transplantatioun op
An hirem neie Pabeier verfügbar op bioRxiv* Virdruck Server, US Fuerscher vun der OpenBiome Nonprofit Organisatioun hunn e mathematesche Modell benotzt fir dNëtzlechkeet vu verschiddenen Teststrateg