Gastric Kriibs ass eng malignant Krankheet déi aus der gastric epithelium loossen. A Potential uweist fir gastric Kriibs ass d'FAQ annexin A4 (ANXA4), eng intracellular Ca Fro:. Lin LL, Huang HC, Juan HF (2012) demaskéierte d'cuisine Mechanissem vun Gastric Cancer context Annexin A4 am Cancer Zell prolifération Ausschöpfung Exon flamenden Ofgrond. PLoS NËMMEN 7 (9): e44615. Doi: 10.1371 /journal.pone.0044615 VerfÜgung Redakter: Eric Y. Chuang, National Taiwan University, Taiwan VerfÜgung Arnaque: 6 Juni 2012; Akzeptéiert: 6 August 2012; Publizéiert: September 7, 2012 VerfÜgung Copyright: © Lin et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht vun der National Science Conseil vun Taiwan (NSC 99-2621-B-002-005-MY3, NSC 99-2621-B-010-001-MY3) ënnerstëtzt huet, d'National Taiwan University averstan-Kuerzsäiteg Steering Research Project (10R70602C3) an der National Gesondheet Research Institut, Taiwan (NHRIEX100-9819PI). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs Doudesfäll weltwäit a weist héich prevalence an asiatesch Populatiounen. Obwuel d'Heefegkeet vun gastric Kriibs zréckgeet, de globale 5-Joer Iwwerliewe Taux bleift héich [1]. Bestëmmung vun der effizientesten gastric Kriibs Therapien an fréi-Etapp diagnostic Handwierksgeschir Entwécklungslänner si wichteg Strategien an Medeziner Resultater betrëfft. Déi detailléiert Enquête vun der molekulare Mechanismen datt gastric carcinogenesis underlie hätt Hëllef vun den Entwécklungslänner nëtzlech therapeutesch Strategien fir dës Krankheet ze bidden. VerfÜgung Helicobacter pylori VerfÜgung ass eng gastric pathogen an ass der predominant etiological Faktor fir gastric carcinogenesis . Ongeféier d'Halschent vun der Bevëlkerung an d'Welt ass mat H infizéiert. pylori VerfÜgung, a méi wéi 60% vun gastric Kriibs Patienten hunn eng Geschicht vun H. pylori VerfÜgung -positivity [2], [3], [4]. Rezent Studien hun gewisen dass H. pylori VerfÜgung kënnen souwuel d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen an mucosal demagogesch Äntwerte induce [5], [6]. Sou, an fir de molekulare Mechanismen Basisdaten gastric carcinogenesis ze ermëttelen, ass et néideg der Roll a Mechanisme vun H ze ermëttelen. pylori VerfÜgung zu gastric carcinogenesis. VerfÜgung Annexins sinn am meeschten Organismen, dorënner Déieren, Planzen, liewen an protists ubiquitously ausgedréckt. Et ass mat enger Rei vun gestallt Funktiounen verbonne [7]. Baséierend op d'Struktur vun hire conserved Kär Domän, sinn annexins als intracellular Ca Annexin A4 (ANXA4) ass e Member vun der annexins Famill mat der digestive System verbonnen. Et ass reservéiert an epithelial Zellen ausgedréckt [16]. Rezent Studie berichten iwwer propedeutësch ANXA4 ass als eng potentiell gastric uweist op seng Identifikatioun vun Stoffer vun gastric Kriibs Patienten zu proteomic Etuden baséiert gin. Up-Regulatioun vun ANXA4 ass speziell zu H fonnt. pylori VerfÜgung -infected entholl Stoffer [17], [18]. Ervirgestrach, vill Studien hunn eng Relatioun tëscht ANXA4 Ausdrock a Kriibs gemellt. Dës Bezéiung gouf zu pancreatic adenocarcinoma [19], kloer Zell carcinoma vun ovary [20], [21], keen Auto carcinoma [22], colorectal carcinoma [23] an Aarbecht Kriibs [24] gemellt. An keen Auto Zell carcinoma, up-Regulatioun vun ANXA4 ass zu der Verbreedung vun entholl Zellen Équipe, Zell Migratioun Spur [22]. An colorectal Kriibs Patienten, héich Ausdrock vun ANXA4 war mat engem niddregen Iwwerliewe Taux verbonne a gouf als potentiell uweist fir entholl Diagnos gemellt [23]. Souwäit bewosst Funktioun, ANXA4 kéint soen wéi sécher, anticoagulation a Resistenz zu apoptosis [25], [26] induce. Dës Evenementer weisen, datt ANXA4 engem tumorigenic Funktioun huet déi Zell Lut dreiwen. VerfÜgung An dëser Etude, mir gehofft de molekulare Mechanismus, fir duerch déi ANXA4 carcinogenesis induces. Ze erreechen dat, iwwerwaacht mir den Taux vun gastric Kriibs Zellen mat verschiddene Ausdrock Niveau vun ANXA4. Mir évaluéiert och de transcriptional Ausdrock Profil vun ANXA4-overexpressing Zellen a benotzt Exon flamenden Ofgrond der afgerappt sécher vun ANXA4 ze analyséieren. Vun dësen Studien, identifizéiert mir 9 Kriibs-Zesummenhang Genen aus ANXA4 afgerappt Signaler vun der Ingenuity Passerelle Analys (QFont) Datebank benotzt. Doriwwer eraus, hien huet mir dat ANXA4 der Aktivatioun vun RHAMM, AKT, CDK1 an dem Ophiewe vun p21 reguléieren, an dofir eng ANXA4-reegelen bewosst Prolifératioun Passerelle proposéiert. D'Activatiounscode vun ANXA4 förderen Zell prolifération VerfÜgung Mir hunn am Rapport virdrun, datt ANXA4 an ass overexpressed H. pylori VerfÜgung Krankheet gastric entholl Otemschwieregkeeten [17]. Fir weider der Relatioun tëscht ANXA4 an carcinogenesis ermëttelen, fir mir ze soen, ob ANXA4 ënnerstëtzt Zell Prolifératioun. Zellen sech mat entweder voll-Längt transfected ANXA4 VerfÜgung cDNA ANXA4 Ausdrock oder spezifesche siRNA gestiermt gehofft ANXA4 Ausdrock fir Hammers. No transfection, iwwerwaacht mir gastric Kriibs Zellen vun AGS mat engem real-Zäit Zell Analyse (RTCA) System d'Lut. Zell Zuelen sech wéi eng Zell index (CI) Wäert opgeholl. De Wuesstem Kéiren vun AGS Zellen sech folgend transfection geännert. D'overexpression vun ANXA4 geklomme der Zell Taux vun AGS Zellen am Verglach mat Kontroll Zellen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001; Dorënner 1A), wobäi ANXA4 knockdown bedeitend d'Lut ofgeholl ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001; Dorënner 1B). Dës Resultater hindeit, datt ANXA4 d'Potential huet Zell Prolifératioun ze förderen. VerfÜgung ANXA4 Erhéijung Expression vun der Membran Proteinen, RHAMM an LAMP2 VerfÜgung Mir iwwerpréift och d'Differenz vun der Gentherapie Ausdrock tëscht ANXA4-overexpressing Zellen an Kontroll Zellen eidelen Vecteure ausdrécken. Mir iwwerpréift dëst mat Exon vill Analyse, déi mat véier Ämter pro Exon engem méi genee Vue vun der Gentherapie-Niveau Ausdrock offréiert, am Verglach zu der konventionell 3 'flamenden Ofgrond [27]. An Dorënner S1, der X VerfÜgung -axis vun der luucht Komplott weist de intensities vun Studiebäihëllefe Ausdrock an eng Experimenter gemooss an der Y VerfÜgung Achs weist de intensities vun Studiebäihëllefe Ausdrock am anere Experimenter gemooss . Dës Resultater weg eng Korrelatioun tëscht de Resultater vun zwee Experimenter a weg dofir eng Konstanz tëscht eisen zweete microarrays. Der Gentherapie Ausdrock Niveauen sech aus der intensities via Studiebäihëllefe baut gemooss berechent. Insgesamt goufen d'Expressioun vun 1.052 Genen fonnt vill verschidden ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) ze ginn. Tëscht ANXA4-overexpressing Zellen a Kontroll Zellen VerfÜgung ANXA4 ass engem Plasma Membran FAQ bindend, also mir proposéieren, datt aner Plasma Membran Proteinen kéint vun ANXA4 regulariséiert ginn an zesumme schaffen hir afgerappt sécher ze transduce. Fir d'sécher transduction vun ANXA4 reegelen beschen, mir propagéieren Plasma Membran Proteinen vun Exon vill Analyse. Véierzeg-siwen Plasma Membran Proteinen goufen observéiert engem ≥1.5-fantastesch Verännerung ANXA4-overexpressing Zellen (Table S1) ze hunn. Dorënner, hyaluronan-mediated motility receptor ( HMMR VerfÜgung) zougedréckt a dem gréissten Hausse an Ausdrock (2,4-fantastesch; Table S1). Ausserdem, huet eis virdrun Etude dass d'Zell Uewerfläch Ausdrock vu Dëst-verbonne Membran FAQ 2 ( LAMP2 VerfÜgung), engem Dëst Bissau, an-reegelen ANXA4 ass an ass zu exocytosis (Dorënner S2 an Fichier S1) Équipe . Hei, transcriptional Ausdrock vun der LAMP2 VerfÜgung zougedréckt och eng Erhéijung vun Ausdrock (1,8-fantastesch; Table S1) wann vun Exon vill Analyse gemooss. An dëser Etude, war ANXA4 overexpressed oder entsat (Dorënner 2A) an dann analyséiert vun immunoblotting d'FAQ Ausdrock vun RHAMM an LAMP2 ze kontrolléieren. ANXA4 overexpression den Ausdrock vun RHAMM (Dorënner 2B) an LAMP2 (Dorënner 2C) an, konsequent mat dëser fräi, ofgeholl der knockdown vun ANXA4 Ausdrock hirem Niveau vum Ausdrock (Dorënner 2B an 2C). VerfÜgung ANXA4 Overexpression reguléieren Cancer -related Gene Expression VerfÜgung Mir der Ingenuity Passerelle Analys (QFont) Datebank benotzt engem Gene Funktioun Analyse vun der Exon vill Donnéeën ze performant a fonnt, datt 25 vun de 42 Genen fir Réseau Funktioun Analyse beliwwert waren (≥2-fantastesch Ënnerscheed Ausdrock, t VerfÜgung Test, P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) (Table 1). Dräi funktionell Netzwierker huet vill mat ANXA4-reegelen Genen assoziéiert. De stäerkste staark verbonne Reseau Kriibs, Zell Zyklus, an reproduktive System Krankheet VerfÜgung ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,05; Dorënner 3A), an den Top-Ranking vun Krankheeten oder Krankheete war Kriibs VerfÜgung ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,05; Dorënner 3B). Et waren 9 Genen Kriips-Zesummenhang Genen vun ANXA4-overexpressing Zellen dorënner 7 Genen séiert, datt an eisem Experiment up-regulariséiert goufen. Dës Genen sinn eukaryotic Iwwersetzung Initiatioun Faktor 4E ( EIF4E VerfÜgung), succinate dehydrogenase komplex, subunit C, integral Membran FAQ, 15 kDa ( SDHC VerfÜgung), cyclin-ofhängeg kinase 1 ( CDK1 VerfÜgung), geläscht an Rezepter Leukämie 2 ( DLEU2 VerfÜgung), chromatin verbidden FAQ 5 ( CHMP5 VerfÜgung), Timeless proposéiert FAQ ( TIPIN VerfÜgung), PDZ- verbindlech kinase ( PBK VerfÜgung). Chorionic somatomammotropin Hormon 1 (placental lactogen) ( CSH1 VerfÜgung) an interferon, alpha 2 ( IFNA2 VerfÜgung) waren verwandelt-reegelen ANXA4. Baséierend op eis Resultater, proposéieren mir dass ANXA4 eng Funktioun am Pinguin Zell Prolifératioun huet. Desweideren, CDK1 VerfÜgung a PBK VerfÜgung (Dorënner 3B an Table 1) sech als an der ANXA4 Prolifératioun-Pinguin Modell Équipe ze ginn. Zanter CDK1 Aktivéierung ass an den Entwécklungslänner gastric Malz lymphoma mat der Zell Prolifératioun verbonne [28]. Géigesäitege Aktivatioun vun CDK1 an PBK gouf schonn gemellt [29]. An dëser Etude, déi an-Regulatioun vun CDK1 VerfÜgung a PBK VerfÜgung observéiert zu ANXA4-overexpressing Zellen validéiert gouf duerch grouss real-Zäit polymerase Kette Reaktioun (qRT-Hinnen alleguer) Analyse (Dorënner S3) reguléieren der Activatiounscode vun AKT, CDK1 an Negatioun. VerfÜgung ANXA4 vun p21 VerfÜgung CDK1 Aktivéierung, déi vun p21 reglementéiert ass, bremst G2 /M Phase verhaft, also Spur mitosis an Zell Prolifératioun [30 ]. Et ass och, datt AKT Bleck der Aktivatioun vun p21, dauernd seng Wierder zu der Zytoplasma an doduercher Spur Zell Prolifératioun [31] gemellt ginn. Benotzt immunoblot Analyse, observéiert mir dass overexpression vun ANXA4 der phosphorylation vun serine 473 op AKT an threonine 161 op CDK1 fräi a rofgaang den Ausdrock vun p21 (Dorënner 4A). Zousätzlech zu dëser, ofgeholl der knockdown vun ANXA4 Ausdrock phospho-AKT an phospho-CDK1 a fräi Meenungsäusserung vun p21 (Dorënner 4B). Dës Daten drop hindeit datt phospho-AKT, phospho-CDK1 an p21 vun ANXA4 regulariséiert ginn a si gouf Signaler vun ANXA4. VerfÜgung Ca An carcinogenesis, Ca An Kriibsfuerschung, d'Identifikatioun vun biomarkers an der nächster Ännerung vun hire mechanistic Relatiounen mat tumorigenesis kann un der Entwécklung vun nëtzlech diagnostic Handwierksgeschir an Resultat an optimal therapeutesch Strategien bäidroen. Kuerzem, hu méi a méi Studie gewisen datt uweist Kandidat Proteinen am annexins Famill an de Werdegang vun verschiddenen Cancers potenziell instrumental sinn; e.g., ANXA1 fir kloer Zell keen Auto Kriibs, ANXA2 fir gastric Kriibs an colorectal Kriibs, ANXA4 fir colorectal Kriibs, ANXA8 fir Broscht Kriibs, ANXA10 fir hepatocellular Kriibs, ANXA11 fir spillt Kriibs an colorectal Kriibs [35]. ANXA4, e Member vun der annexins Famill, huet observéiert ginn zu gastric entholl Stoffer overexpressed gin an ass och mat der gastric Kriibs-Zesummenhang H assoziéiert. pylori VerfÜgung Wonn [17]. Ausserdeem huet en annexins Familljemember, ANXA2, och observéiert ginn zu gastric Kriibs gin overexpressed an ass aarmséileg Medeziner Resultat dinn, et eng potentiell prognostic Faktor nees [36]. Geholl zesummen, dëse Conclusiounen proposéiere der Bedeelegung vun ANXA4 zu tumorigenesis; Ee, bleift seng exakt Mechanismus am Prozess onkloer. Fir d'bewosst Funktioun vun ANXA4 am Werdegang vun gastric Kriibs ze weider diskutéieren, lant mir de Lien tëscht deenen zwee an hien huet duerno, datt ANXA4 kann Kriibs-Zesummenhang Genen an verierwe de Pad zu Zell Prolifératioun regléieren. VerfÜgung zu de Moment studéieren, hunn mir dass carcinogenesis-verbonne Proteinen wéi RHAMM, AKT, p21, PBK, an CDK1 vun der overexpression vun ANXA4 reglementéiert ginn. E Sënn Representatioun vun ANXA4-entschlof afgerappt Signaler zu Zell Prolifératioun Zesummenhang ass zu Dorënner 6. dës HMMR VerfÜgung (RHAMM) ass eng oncogene datt an e puer Cancers overexpressed ass, gastric Kriibs abegraff, an huet zu ville bewosst agebonne ginn Prozesser, wéi Zell sécher, Zell Prolifératioun, an tumorigenesis [37], [38]. VerfÜgung Et gemellt gouf, datt RHAMM der RAS sécher CASCADE an activéiert AKT [39] induces. D'RAS sécher CASCADE transduces afgerappt Signaler vun activating phospho-AKT duerch phosphoinositide 3-kinases. Dëst Aktivatioun vun AKT huet och als Bewaacher fir gastric Kriibs Werdegang [40] gemellt ginn. Mir hu virdrun erwähnt, dass H. pylori VerfÜgung Wonn ass mat ANXA4 overexpression verbonne [17]. H. pylori VerfÜgung kann de cytotoxin verbonne Gentherapie A (CagA) an Provider Zellen liwweren, an AKT Aktivéierung doraus, an domat Zell Prolifératioun Spur [41]. Am Sënn vun Zell Iwwerliewe, Hien AKT apoptosis stimuléiert NF-κB [42]. Rezent Etuden hunn och gewisen, datt ANXA4 openee mat p105 (den NF-κB p50 Virleefer FAQ) an Hien der transcriptional Aktivitéit vun NF-κB eng anti-apoptotic Effekt [25] zu induce. Geholl zesummen, dës Observatiounen weisen, datt ANXA4 spillt eng wichteg Roll an der Zell Iwwerliewe an Zell Wuesstem. VerfÜgung CDK1-cyclin B1 investéiert regléieren der Zell Zyklus G2 /M Phase an hunn och doran tumorigenesis [43] agebonne ginn. Eng rezent Etude Teamchef fräi Meenungsäusserung vun CDK1 mat de Werdegang vun H verbonnen ass. pylori VerfÜgung -associated gastritis zu lymphoid Otemschwieregkeeten lymphoma mucosa-verbonne [28]. An dëser Etude, war CDK1 Aktivéierung up-reegelen ANXA4. Dës Evenementer hindeit datt ANXA4 der afgerappt Signal Passerelle Mediate konnt, flénke tumorigenesis zu gastric Kriibs Patienten mat engem H. pylori VerfÜgung Wonn. VerfÜgung Nieft z'engagéieren an de Werdegang vun Kriibs, huet ANXA4 och zu Qualifikatiounen chemoresistance verbonne goufen Drogen ze anticancer [44], [45], [46]. An engem paclitaxel-resistent Zell Linn (H460 /T800), ass ANXA4 Ausdrock fräi an am helle en der [44]. Am kloer Zell carcinoma vun der ovary an Vollek Zellen, ass ANXA4 Ausdrock gefördert a mat Resistenz ze Behandlung mat carboplatin verbonnen, an ass als eng uweist fir waat fir cisplatin ginn [45], [46]. Ausserdeem, ass ANXA4 eng intracellular Ca Ca An Conclusioun, weisen eis Resultater datt d'silencing vun ANXA4 epithelial Zell Prolifératioun erof, iwwerdeems seng overexpression Prolifératioun zouhëlt. Ausserdeem, induces ANXA4 afgerappt Signaler dass Zell Wuesstem förderen. Mir hypothesize datt dës afgerappt Signaler an Aktivéierung vun Provider Zell Divisioun pathogenic Evenementer kënnen am H. pylori VerfÜgung -induced carcinogenesis. Am aktuellen Medeziner Therapie, AKT, p21 an CDK1 gewiescht wéi eng anticancer Drogenofhängeger Zil- benotzt. AKT inhibitor, Perifosine, ass eng mëndlech Anti-Kriibs verlaangt an huet Anti-Prolifératioun Aktivitéit zu puer entholl Modeller [55], [56], [57]. Paclitaxel (ëmgedréint) an vincristine kann induce an p21 Ausdrock Erhéijung G2 /M verhaft an Spär Zell Prolifératioun [58], [59], [60], [61] zu erofgoen. Flavopiridol ass eng inhibitor vun e puer CDKs dorënner CDK1 apoptosis an Anti-angiogenesis zu induce [62]. Des Studie weisen, datt d'Héicht vun ANXA4 zu Patiente wéi engem Alkohol- Zil fir gastric Kriibs Therapie considéréiert ginn hätt. Multiple Drogen a Kombinatioun mat Hëllef kéint méi efficace Behandlung fir Signaler vun der Passerelle erauszesichen. Geholl zesummen, hätt dës Etude nei Abléck déi an der Entwécklung vun therapeutesch Strategien fir gastric Kriibs. VerfÜgung Zell zesummeféieren a VerfÜgung Kultur Konditioune Mënscherechter Mo. adenocarcinoma AGS Zellen (CRL-1739, ATCC) sech zu 90% RPMI 1640 mëttelfristeg ugebaut (biologesch Industries, Beth-Haemek, Israel) dat mat 1% penicillin /streptomycin an 10% an et Bovine serum (biologesch Industries, Beth-Haemek, Israel) ergänzt war . Zellen sech op 37 ° C an enger kontrolléiert humidified Atmosphär an eng incubator mat 5% CO cultured 2. VerfÜgung Plasmids an Transfections VerfÜgung Full-Längt ANXA4 VerfÜgung war Implikatioune vun Hinnen alleguer d'primer hien huet misse mat ANXA4 VerfÜgung -F (5 'atataagcttgccaccatggccatggcaaccaaa 3') a ANXA4 VerfÜgung -R (5 'gcgcgggaattcttaatcatctcctccaca 3'), an der amplification Produit gouf an der HindIII hin /EcoRI Siten vun pcDNA 3.1 (+) (Invitrogen, Karlsbad CA). ANXA4 VerfÜgung -specific siRNA an negativ Kontroll Stealth siRNA (Stealth RNAi ™) sech aus Invitrogen (Karlsbad CA, USA) kaaft. Zellen sech cultured zu sechs-gutt Placken oder op Beschichtete Cover Ausrutscher fir 24 h. Zellen sech dann mat pcDNA 3.1 (+) / ANXA4 VerfÜgung (8 μg fir eng sechs-gutt zappen; 0,4 μg /ml fir e 96-gutt E-Plack) transiently transfected oder ANXA4 VerfÜgung siRNA (100 pmol fir eng sechs-gutt zappen; 10 pmol fir e 96-gutt e-Plack) mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen) no der Taktik vum Produzent. D'Effizienz vun Ausdrock Vecteure an siRNA transfection war vun immunoblot analyséiert. No transfection fir 48 h, war den Ënnerscheed Ausdrock vu Proteinen an Genen fonnt VerfÜgung Antibodies VerfÜgung D'Maus monoclonal an dëser Etude benotzt antibodies sech wéi follegt zesummen:. CDK1 p34 (sc-51578) vu Santa Cruz Déi (Santa Cruz, CA, USA); LAMP2 (ab25631) an RHAMM (ab67003) aus Abcam (Cambridge, UK); an α-tubulin (T5168) aus Fläch (Dorset, UK). D'Kanéngchen polyclonal antibodies sech wéi follegt zesummen: ANXA4 (sc-28827), p21 (sc-397), an pCDK1 p34 (dëss 161; sc-101654) vu Santa Cruz Déi; an AKT (9272) an Pakt (Ser473; 9271S). aus Zell sécher Technology (Beverly, MA, USA) VerfÜgung Immunoblotting VerfÜgung Zell lysates sech aus AGS Zellen bereet datt transiently mat der transfected sech Ausdrock vectors pcDNA 3.1 (+) / ANXA4 VerfÜgung (8 μg) oder ANXA4 VerfÜgung siRNA (100 pmol). Fir d'Differenzen an FAQ Ausdrock ënner Konditiounen vun héich intracellular bestëmmen [Ca Exon Singular Hybridization an Analys VerfÜgung der afgerappt Genen vun ANXA4 ze studéieren, am Verglach mir der Gentherapie Ausdrock Profiler tëscht der mat pcDNA3.1 transfected Zellen (+) / ANXA4 VerfÜgung a mat eidelen Vecteure transfected Kontroll Zellen eng Exon vill benotzt. Total bewosst RNS ofgebaut gouf benotzt TRIzol® Reagent (Invitrogen), an RNS Puritéit war vun spectrophotometry (A260 /A280 Verhältnis) wéi och vun capillary electrophoresis (Agilent 2100 Bioanalyzer, Agilent Technologies, gekësst Alto, CA, USA) confirméiert. RNS Veraarbechtung an hybridization sech mat der Affymetrix Mënscherechter Exon 1.0 ST flamenden Ofgrond (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) standing no de Protokoll d'Hiersteller. All Partie huet 28.869 gutt-forcéiert Genen mat 764.885 verschidden Ämter. D'Partie ass ongeféier 26 Ämter fir all Gentherapie. Affymetrix Studiebäihëllefe baut Informatiounen sinn op NetAffx Web Site ugewisen (http://www.affymetrix.com) [63]. Microarray Analyse (n = 2 pro Grupp) gouf standing mat der Partek Genomics Suite Versioun 6.5 (Partek Galaxy St Louis, MO, USA). D'Matière Donnéeën (CEL Fichieren) sech mat der sécherlech multichip averaging (RMA) sind normalized an analyséiert benotzt t VerfÜgung Tester. Analyse vun der Funktioun an der biologescher Mechanismus vun der differentially ausgedréckt Genen war mat der Ingenuity Passerelle Analyse (QFont) Software Versioun 7.5 gesuergt; engem Virsprong vun 3 oder uewen ass statistesch relevant considéréiert ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.01) d'Informatiounen ze Annotéiert. Mir hunn der vill Daten zu der Geo Datebank proposéiert, an d'Serie Rekord Zuel ass GSE33620. VerfÜgung Chemeschen Real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) VerfÜgung D'Donnéeën Exon vill kritt benotzt Partek Software an der QFont Datebank war vun qRT-Hinnen alleguer confirméiert. RNS war vun AGS Zellen mat TRIzol® Reagent (Invitrogen) an der RNeasy® Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Däitschland) isoléiert no der Taktik vum Produzent. Éischt-staarkt cDNA war aus total mRNA Wierderbuch ëmgedréint Transkriptiouns Kit benotzt (Invitrogen, Karlsbad CA). Primers (Table S2) benotzt entworf DNAStar Software (DNAStar Galaxy, Madison, allem, USA) an PrimerBank (http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank). Gene Ausdrock war mat engem Bio-Rad iQ5 real-Zäit Hinnen alleguer erkennen System gemooss mat enger SYBR Green Supermix (Bio-Rad Laboratoiren, Hercules, CA, USA), a gouf normalized zu GAPDH Ausdrock. VerfÜgung Zell prolifération Assay VerfÜgung AGS Zellen sech an all gutt vun engem 16-gutt microtiter e-Plack iwwerlaascht. All gutt Texter microelectronic éichter flamenden Ofgrond op der Basis vun der Zell index (CI) ze entdecken. Fir transfection Experimenter, no incubation fir 24 h, goufen AGS Zellen fir 6 h mat Ausdrock vectors oder siRNAs transfected a fir eng total vun 84 h iwwerwaacht. D'E-Plack war an der Real-Time Zell Organer (RTCA) System an incubated an eng incubator mat 5% CO 2 op 37 ° C gesat. Den Niveau vun Zell Prolifératioun war den CI vertrueden, déi op d'elektresch impedance baséiert gouf mat de System xCELLigence gemooss (Roche, Mannheim, Däitschland). VerfÜgung statistique Analys VerfÜgung Data als mengen ± ausgedréckt huet Standard deviation (Fils). Ënnerscheed tëscht onofhängeg Gruppe war mat enger zwee-tailed Student d'analyséiert t VerfÜgung Test. Daten aus der Zell Prolifératioun assay kritt sech mat den Test zwee-Prouf Kolmogorov-Smirnov analyséiert. A P VerfÜgung Wäert vu manner wéi 0,05 statistesch Bedeitung uginn. VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
Resultater
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Dorënner S1. VerfÜgung luucht Komplott vun de Studiebäihëllefe intensities an der widderholl Exon vill Experimenter. D'Studiebäihëllefe intensities vun zwee widderholl Experiment separat op eng presentéiert X VerfÜgung -axis a Y VerfÜgung -axis. All ewell war vun engem eenzege Punkt vun der luucht Komplott vertrueden. Dës Resultater zougedréckt der Konstanz vun eisem zweete Exon vill Experimenter VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0044615.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2. VerfÜgung ANXA4 bedeelegt an Reparatur Plasma Membran vun exocytotic Membran astellen. Vertrieder Flux cytometric analyséiert d'Präsenz vun LAMP2 zu H bewisen. pylori VerfÜgung -infected Zellen. (A) ANXA4-overexpressing Zellen sech mat (B) Verglach ANXA4 VerfÜgung -silenced Zellen. D'Resultater weisen, datt ANXA4 LAMP2 Ausdrock op der Uewerfläch vun H ënnerstëtzt. pylori VerfÜgung -infected Zellen. ANXA4 overexpression, Während-ANXA4; Kontroll siRNA, siControl; . ANXA4 VerfÜgung siRNA, si ANXA4
Doi: 10,1371 /journal.pone.0044615.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S3. VerfÜgung ANXA4 induces afgerappt Signal transduction. A qRT-Hinnen alleguer assay vun ANXA4-overexpressing AGS Zellen (schwaarz Rumm) war standing d'Donnéeë vu Exon flamenden Ofgrond (gro Rumm) kritt ze confirméieren. Der relativer mRNA Niveau vun CDK1 VerfÜgung a PBK VerfÜgung waren gemooss an normalized zu GAPDH VerfÜgung mRNA Niveauen VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0044615.s003
(TIF) VerfÜgung Dorënner S4. VerfÜgung Intracellular Ca
Lungemikroben kënne hëllefen d'Resultater bei schwéier kranke virauszesoen
Wuesstumsprobleemer bei virzäitege Puppelcher verbonne mat verännert Darmbakterien
Studie beschreift initial Baseline gesond Darmmikrobiom Datebank an Iwwerflossprofil
Fuerschung kuckt op Aerobiome,
Sinn DNA-baséiert Diaken a personaliséiert medizinesch Liewensmëttel d'Zukunft fir Gewiichtsverloscht?
Wëssenschaftler entwéckelen Peptiden déi d'Gläichgewiicht an den Darmbakterien restauréieren an d'Atherosklerose ëmgoen
Déi westlech Diät kann de Risiko vun 'déidlecher Sepsis' erhéijen,
warnen Experten Nei Fuerschung, déi op der Portland State University gemaach gouf, seet datt déi westlech Diät de Risiko vu schwéiere Sepsis a Mortalitéit duerch dInfektioun erhéicht. Hurr
Eng Multi-Omics Approche fir d'Entwécklung vun Drogen géint COVID-19
Eng nei Studie verëffentlecht um Pre -Print Server medRxiv* am Mee 2020 bericht eng Multi-Omics Approche déi et méi einfach maache kann Drogen zentwéckelen déi effektiv géint COVID-19 sinn. Multi-Om
Lungemikroben kënne hëllefen d'Resultater bei schwéier kranke virauszesoen
Eng nei Studie verëffentlecht am American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine weist datt dOpzeechnung vun der Aart a Weis wéi dOrganismen, déi an de Longen liewen, an Aart an Zuelen än