PLoS ONE: PFTK1 Skatina skrandžio vėžio progresavimą reguliavimas dauginimosi, migracijos ir invazija

Anotacija

PFTK1, taip pat žinomas kaip PFTAIRE1, CDK14, yra naujas narys Cdc2 susijusių serino /treonino kinazės baltymų. Neseniai atlikti tyrimai rodo, kad PFTK1 yra labai pateikti keliomis piktybinių navikų, tokių kaip kepenų ląstelių karcinomos, stemplės vėžio, krūties vėžio, ir dalyvauja reguliuojant ląstelės ciklo, augliams, dauginimosi, migracijos, ir invazija, kad toliau daryti įtaką navikų prognozę. Tačiau pasakymas ir fiziologinė reikšmė PFTK1 skrandžio vėžio lieka neaiški. Šiame tyrime mes išanalizavo išraišką ir klinikinė reikšmė PFTK1 Vakarų dėmė iš 8 suporuotas šviežių skrandžio vėžio audiniuose, nontumorous skrandžio gleivinės audinius ir imunohistocheminis apie 161 paraffinembedded griežinėliais. Aukštos PFTK1 išraiška buvo susietas su naviko laipsnio, limfmazgių invazijos, taip pat Ki-67. Per Mobilusis Skaičiavimo Kit (CCK) -8 tyrimas, tėkmės citometrijos, kolonija formavimas, žaizdų gijimą ir transwell bandymo rezultatais, kad vitro tyrimai parodė, kad PFTK1 raiškos skatinamas dauginimosi, migracijos ir invazija skrandžio vėžio ląsteles, o PFTK1 nokdaunas buvo priešingų rezultatų. Mūsų išvados pirmą kartą palaikė, kad PFTK1 gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžys dauginimosi, migracijos reguliavimo ir suteiktų romaną perspektyvus gydymo strategiją prieš žmogaus skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Jonas L Zhu J huang H, Yang Q, Cai J, Wang Q, ir kt. (2015) PFTK1 Skatina skrandžio vėžio progresavimą reguliavimas dauginimosi, migracijos ir invazija. PLoS ONE 10 (10): e0140451. Doi: 10,1371 /journal.pone.0140451

redaktorius: Keping Xie, Teksaso MD Anderson Cancer Center universitetas, JAV

Įstojo: Gegužės 7, 2015; Priimta rugsėjo 25, 2015 m Paskelbta: Vasaris 21, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Yang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus

finansavimas:. Šis darbas buvo remiamas dotacijas iš Gamtos mokslo fondo Kinijos (Nr 81302285, Nr 81.402.015)

konkuruojančių interesų. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja.

Įvadas

Skrandžio vėžys yra ketvirtoji dažniausia piktybinių navikų ir antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio susijusio mirtingumo visose vėžio rūšių visame pasaulyje [1]. Ji yra sunku gydyti, nebent ji yra nustatyta ankstyvoje stadijoje [2]. Dėl specifiškumo stokos ankstyva diagnozė lygis yra žemas ir skrandžio vėžiu sergančių pacientų dauguma yra bent vidutinio vėlai, kai diagnozė. 40% -60% pacientų, sergančių skrandžio vėžiu gavo skrandžio vėžys radikali operacija dažnai turės pooperacinį pasikartojimui ir metastazes, šios savybės rimtai paveikti ilgalaikį išlikimą pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, [3,4]. Nepaisant didelio pažangos naujų diagnostikos ir gydymo strategijų skrandžio vėžio, tiksli molekuliniai mechanizmai skrandžio vėžiu tebėra menkai suprasti. Taigi, molekulinio mechanizmo nustatymas per skrandžio vėžio progresavimo ir metastazių gali teikti pacientams su naujų diagnostikos ir gydymo strategijas.

PFTK1 (taip pat žinomas kaip PFTAIRE1, CDK14) yra naujas narys Cdc2 susijusiai serino /treonino baltymų kinazės, kad pirmą kartą nustatė, kad pelės nervų sistemą ir yra esminis reguliatorius ciklinų ir ląstelės ciklo [5,6]. Buvo atlikti keli tyrimai apibūdinti savo fiziologines funkcijas arba biologiniai svarbą. Jis pranešė, kad PFTK1 yra labai išreikštas smegenų, kasos, inkstų, ir kiaušidžių. CDKs susieti su konkrečiais ciklino laukelį formuoti funkcinius baltymų kinazės kompleksus ir reguliuojama dalis jo pavienių ląstelių tyri- mas lokalizaciją [7]. Pavyzdžiui, nuo ciklino Y, jo nauju membrana-susijęs ciklino, sąveikauja su PFTK1 pagerina PFTK1 kinazės aktyvumo ir samdo PFTK1 į plazminės membranos [8]. PFTK1 sąveikauja su cikloniniai B2 bendradarbiavimo lokalizacijos į kepenų ląstelių karcinoma [9] branduolį. Pagrindinis funkcija PFTK1 pranešė kaip ciklino priklausoma kinazės (CDK) reguliuoja ląstelės ciklą ir ląstelių proliferaciją specialiai bendrauja su nariais cikloniniai baltymų, pavyzdžiui, cikloniniai D3 (CCND3), cikloniniai Y (CCNY) ir suformuoja trijų komponentų kompleksas su ląstelės ciklo inhibitorius P21, todėl fosforilina į auglio slopinamojo Rb už G1 /S perėjimo [10]. Nokautas cikloniniai Y glioma ląstelių linijų daro ląstelės ciklą užblokuotos S laikotarpį [11]. CIKLONAS Y sąveikauja su PFTK1 reguliuoti M etapą mitozės [12]. Šie duomenys kartu įpainioti kad PFTK1 gali funkcionuoti kaip naviko promotoriaus per reguliuoti ląstelės ciklą. Tuo tarpu, keli tyrimai parodė, kad PFTK1 taip pat turi ir kitų svarbių funkcijų. PFTK1 moduliuoja oligodendrocito diferenciaciją per PI3K /AKT kelyje [13]. Neseniai PFTK1 suteikia HCC ląstelių judrumą per nukenksminti aktino-privalomas judrūs slopinti funkciją TAGLN2 per fosforilinimo [14]. PFTK1 tarpininkaujant fosforilinimo leidžia asociacija CAD F-aktino gijų, todėl didinant polimerizacija aktino streso pluoštų, tokiu būdu skatinant ląstelių migraciją ir invazija į HCC ląstelių [15,16]. Padidėjusi PFTK1 gali suteikti judančią fenotipas piktybinių hepatocitų [9]. Pagal susitarimą su molekulinių išvadomis, CCNY ir /arba PFTK1 vien galite įjungti nekanoninių WNT signalizacijos didinti ląstelių judrumą HCC ląstelių [17]. Visi šie tyrimai leidžia manyti, kad PFTK1 gali būti įtraukti į ląstelių proliferaciją ir judrumo, tačiau išraiška ir reikšmė PFTK1 skrandžio vėžio ląstelių vis dar miglota.

Mūsų tyrime siekėme atlikti visapusišką analizę PFTK1 išraiška ir jos prognozės vaidmuo skrandžio vėžio ląsteles. Mes išnagrinėjo PFTK1 išraišką ir jo ryšį su klinikinių charakteristikų, ir Ki-67 "Western dėmė ir imunohistocheminis (IHC). Mūsų tyrimas parodė, kad PFTK1 sustiprintas dauginimosi, migracijos ir invazinis skrandžio vėžio ląstelių CCK-8, tėkmės citometrijos analizes, kolonija formavimas analizes, transwell tyrimą, paveikė susijusių baltymų ekspresiją. Šios išvados buvo pirmiausia pranešta skrandžio vėžio ląsteles ir gali sukurti romaną pažvelgti į besivystančių eksperimentinius gydymo skrandžio vėžio.

Medžiagos ir metodai

Audinių mėginiai

Vienas šimtas šešiasdešimt -onas skrandžio vėžio audinio mėginiai ir suderinti gretimų noncancer audiniai buvo atrinkti iš pacientų, kuriems buvo atlikta operacija tarp 2007 ir 2013 m departamento patologijos Nantong auglio ligoninėje. Šie audiniai buvo laikomi -80 ° C temperatūroje iš karto po chirurginio pašalinimo. Dėl histologinio tyrimo, visi skrandžio audinio mėginiai buvo nustatytas 10% buferiniame formalino ir įdėta į parafino už ruožais. Rezekcijos egzemplioriai buvo klasifikuojami pagal Septintąją Edition iš TNM klasifikacija skrandžio vėžys [1] .Visi klinikos informaciją, įtrauktą amžių, lytį, infiltracijos gylį, diferenciacijos statusą, limfmazgių invazija, nervų invazija ir TNM etapą. Pašalintų audinių tyrimų tikslais patvirtinimas buvo gautas iš etikos komitetas Nantong auglio ligoninėje. Pasirašė informuoti sutikimą taip pat buvo gauta iš kiekvienam pacientui. Pagrindiniai klinikiniai ir patologiniai kintamieji buvo apibendrinti 1 lentelėje

Vakarų dėmė analizė

Vakarų dėmė analizė buvo naudojama, siekiant nustatyti tam tikrus baltymus [18-20]. Pirma, skrandžio CANER audiniai ir ląstelės buvo krekingo lizės buferiniame tirpale (1 M Tris-HCl, pH 7,5, 1% Triton X-100, 10% natrio sulfato (SDS), 1% NP-40, 0,5 M EDTA, 0,5% natrio deoksicholatas, 10 mikrogramų /ml aprotinino, 1 mM PMSF 10 mikrogramų /ml leupeptiną) ir tada centrifuguojamas 10.000 × g 30 min iki surinkti supernatantą. Supernatantas buvo praskiestas 2 × SDS buferinio tirpalo ir kaitinti. Ekvivalentinis kiekis baltymų iš kiekvieno mėginio buvo atliekama elektroforezė pagal 10% natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) ir tada perduodami į polivinilideno fluorido (PVDF) membrana (Millipore ", Bedford, MA). Po to, membranos buvo blokuotos apie 2 valandas kambario temperatūroje, po to inkubuojamos per naktį 4 ° C temperatūroje su pirminių antikūnų. Po plovimo su fosfatinio buferio druskų tirpalu (PBS), kuriame 0,1% Tween 20 tris kartus, kiekvieną 5 min, membranos buvo inkubuojamos su krienų peroksidazės susietos IgG kaip antrinio antikūno dar 2 valandas kambario temperatūroje. tada Membranos buvo sukurtas naudojant ECL aptikimo sistemas (vaizdo gavimo technologiją, Ontarijas, Kanada). Naudojami šiame tyrime antikūnai vietoje: anti-PFTK1 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-cikloniniai E (1: 500, Santa Cruz biotechnologijos), anti-PCNA (1: 1000, Santa Cruz biotechnologijos), anti GAPDH (1: 1000, Sigma), anti-β-kateninai (1: 1000, Santa Cruz biotechnologijos), anti-Dvl1 (1: 600, Santa Cruz biotechnologijos), anti-Dvl2 (1: 600, Santa Cruz biotechnologijos), anti-Naked1 (1: 500, Mobilusis signalizacijos), anti-MMP2 (1: 500, Santa Cruz biotechnologijos).

Imunohistocheminis analizuoja

trumpas, audinių dalys buvo devaškuoto į ksileno ir rehidrataciją per rūšiuojami etanolius. Tada skyriai numalšino 3% metanolyje peroksido apie 10 min blokuoti endogeninio peroksidazės aktyvumo. Pagal didelio slėgio ir temperatūros autoklave, jo reaktyvumas buvo sustiprintas 0,1 M citrato buferio 3 min. Audinių skyriai buvo inkubuojami su anti-PFTK1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology) ir anti-ki-67 (1: 400, Santa Cruz Biotechnology) 120 min kambario temperatūroje. Pagal gamintojo instrukcijas, po plovimo tirpalo fosfato buferio druskų tirpalo (PBS), audiniai buvo inkubuojamos su krienų peroksidazės-konjuguoto anti-pelės Ig polimeru antrąjį antikūną, (EnVision komplektas, Dako) 20 min kambario temperatūroje. Galiausiai, skaidres buvo counterstained hematoksilinu, dehidratuoti, ir montuojamas dervos kalno. Kiekybiškai PFTK1 ir Ki-67 baltymo ekspresiją, tiek reaktyvumas mastą ir intensyvumą, buvo įvertintos ir pelnė. Penkis aukšto galingumo laukuose buvo parinkta atsitiktinai, kiekvienai sekcijai ir ne mažiau kaip 300 ląstelės buvo skaičiuojamas viename lauke. Statistinės analizės PFTK1, kiekviena skaidrė buvo įvertintas naudojant pusiau kiekybiniai vertinimo sistemą už tiek dėmių intensyvumo ir teigiamų piktybinių ląstelių procentais. Ląstelės buvo įmušė taip: 1 (≤25% naviko ląstelių dažytų), 2 (26% -50% naviko ląstelių nudažomi), 3 (51% -75% naviko ląstelių nudažomi), 4 (76% -100% naviko ląstelių tamsintas). Dėl tankio įvertinimas: 1 silpna dažymo; 2 vidutinio dažymo; 3 stipri dėmių. Tada mes dauginami du balus ir suskirstyti į dvi grupes: žemas raiškos ir aukštos raiškos. Kaip statistinės analizės Ki-67, < 50% vėžinių ląstelių tamsintas kaip mažos raiškos ir ≥50% vėžinių ląstelių tamsintas kaip aukštas, išraiška. Siekiant išvengti techninių klaidų, dažymo buvo kartojamas tris kartus ir buvo gauti panašūs rezultatai.

Mobilaus kultūros ir trumpalaikis transfekcija

MGC803 ir HGC27 buvo skrandžio ląstelių linijas, kurios buvo perkamos iš ląstelių bibliotekoje Kinijos mokslų akademija. Abu buvo auginamos RPMI-1640 Medium (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, JAV). SGC7901 ir GES1 buvo dar skrandžio ląstelių linijas, kurios buvo maloniai teikiamos patologijos tyrimų Nantong universiteto. SGC7901 ir GES1 buvo kultivuojamos DMEM Medium (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, JAV). Visi vidutiniai buvo su 10% vaisiaus galvijų serumo (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, JAV), papildant 2 mM L-glutaminas, 100 V /ml penicilino streptomicino mišinys (GIBCO-BRL Grand Island, NY, JAV ), esant 37 ° C ir 5% CO _{2. PFTK1 nedidelio kištis RNR (siRNR) buvo suprojektuotas ir susintetinti Šanchajus Genechem (Kinija). SiRNR taikymo PFTK1 sekas buvo taip: 5'-GTTCATTCTTTACCACATT-3 ', 5'-AGGTTGCATCTTTGTTGAA-3', 5'-AAAGAGTCACCTAAAGTTA-3 ', 5'-ACCCATACAGGAAATCCAA-3'. Vėliavos-PFTK1 plazmidės buvo įsigytas iš Šanchajaus Genechem (Kinija). Lipofectamine 2000 transfekcija reagentas (Life Technologies ") buvo naudojama ląstelių transfekciją pagal gamintojo instrukcijas.}

tėkmės citometrijos analizė

Pirmiausia, visi skrandžio ląstelių linijos buvo nustatytas 70% etanolio naktį -20 ° C. antra, po to, kai plaunamas citratas-fosfato buferio ir PBS, ląstelės buvo inkubuojamos su 1 mg /ml RNaseA 30 min 37 ° C temperatūroje. Tada, ląstelės buvo tamsintas su 50 mikrogramų /ml propidiumo jodido fosfato buferinio tirpalo (PBS) -Triton dar 20 min, esant 4 ° C temperatūroje. Pagaliau, ląstelės buvo analizuojami naudojant "Becton Dickinson srautą citometro BD FACScan (San Jose, CA), ir CellQuest įsigijimo programų analizės. Eksperimentas buvo atliekamas tris kartus.

Colony formavimo tyrimai

MGC803 ląstelės buvo auginamos šešių bei kultūros plokštės (Corning "Inc", "Corning NY) esant 200 ląstelių tankis /gerai po transfekuoja PFTK1 #siRNA ir vėliava-PFTK1 pagal gamintojo instrukcijas. Po dviejų savaičių, kad ląstelių kolonijos (≥50 ląstelių /kolonija) buvo skaičiuojami nudažant 0,5% violetinei.

ląstelių proliferaciją tyrimai

MGC803 ląstelių, kurios įtrauktos normalu, transfekavimas PFTK1 # siRNA ir vėliava-PFTK1 buvo pasėjamos į 96 duobučių ląstelių kultūros klasterio plokštės (Corning "Inc", "Corning NY) esant 2 × 10 ^{4 ląstelių /gerai 100 iL kultūros tankumo ir auginamos per naktį. Pagal gamintojo nurodymus, ląstelės buvo matuojamas naudojant komercinę CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japonija). CCK-8 reagentai buvo pridedama prie kiekvieno gerai 2 h inkubacijos 37 ° C temperatūroje. Absorbcija buvo skaityti apie 450 nm bangos ilgio automatiniu plokštelių skaitytuvas. Eksperimentai turi pakartoti bent tris kartus.}

Žaizdų gijimo tyrimas

MGC803 ląstelės buvo auginamos šešių bei kultūros plokštės (Corning "Inc", "Corning NY) ne daugiau kaip 5 × 10 tankio ^{5 ląstelių /gerai ir auginami iki susiliejimo naktį. Po to, kai transfekuota 48 valandas, ląstelės buvo inkubuojamos su serumo neturinčioje terpėje. Linija buvo subraižyti per conflent ląstelių sluoksniu, naudojant FIE galą 10 ml pipetės galiuką (laikas 0) ir ląstelių buvo išplauta su PBS. Vaizdai iš migruojančių ląstelių buvo nuosekliai priimtas po 24 val, 48 val uždarymo sužeista regione metu.}

Transeuropiniai pat migracijos tyrimas

Mobilusis migracijos tyrimas buvo atliktas naudojant transwell kamera (8,0 LM porų dydis; Costar, Kembridžas, Niujorkas, JAV). Apie 1 × 10 ^{5 ląstelių /ml, buvo pasėjamos viršutiniuose rūmų vidutinio ir RPMI-1640 buvo įtraukta į dugną rūmams. Po 24 h, viršuje ląstelės, kurios nebuvo migravo buvo pašalinta ir apačioje ląstelės, kurios buvo migravo buvo nustatytos paraformaldehidu ir tamsintas su violetinei. Migruojančių ląstelių skaičius 5 laukai buvo skaičiuojami pagal 200 × priartinimas, ir buvo nustatyta, kad kiekvienam kameroje priemonės. Visi eksperimentai buvo kartojamas tris kartus}

Transeuropiniai gerai invazija tyrimas

Mobilusis migracijos tyrimas buvo atliktas naudojant transwell kamerą (8,0 LM porų dydis; costar, Kembridžas, Niujorkas, JAV).. BD MatrigelTM pamatinės membranos Matrica buvo įtraukta į viršutinio kameroje 1 valandą, o esant 37 ° C temperatūroje. Tada, 500 mikrol terpėje, turinčioje chemotaktinis faktorius buvo dedamas į apatinę kamerą. Apie 1 × 10 ^{5 ląstelių /ml buvo sėklomis viršutiniuose kamerose 37 ° C temperatūroje 24 h.Cells buvo tada tvirtinama paraformaldehidu ir nudažomi su violetinei. Visi eksperimentai buvo kartojamas tris kartus.}

Statistinė analizė

Visos statistinė analizė buvo atlikti naudojant SPSS Statistics 19 programinės įrangos paketą. PFTK1, Ki-67 išraiška ir clinicopathologic funkcijos buvo analizuojami naudojant χ ^{2 testą. Bendras išgyvenamumas kreivės buvo apskaičiuojamas Kaplan-Meier metodu ir buvo išbandyta su log-rank testą. Daugiamatė analizė buvo analizuojami Cox proporcinės rizikos modelį, rizikos santykis ir jo 95% pasikliautinasis intervalas buvo įrašyti kiekvieną persekiotoją. Vertės buvo pateikti kaip vidurkis ± SE, ir P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas.}

Rezultatai

PFTK1 ekspresija skrandžio navikų audiniuose

Jis pranešė, kad PFTK1 yra svarbus cikloniniai priklauso kinazės, kurios gali reguliuoti ląstelių ciklą, tačiau įjungimo skrandžio vėžio tyrimai niekada nebuvo tirta. Nuo padidėjusią PFTK1 buvo nustatyta kepenų vėžio ir stemplės vėžiu, palyginti su sveikų audinių. Taigi įdomu analizuoti iš PFTK1 išraiška skrandžio navikų audiniuose ir jos coorelation su plinta ląstelių branduolių antigeno (PCNA). Pirma, mes išnagrinėjo PFTK1 išraišką 8 porų skrandžio navikų audiniuose ir jų atitinkamų nontumorous skrandžio gleivinės audiniuose Vakarų dėmė. Kaip parodyta Fig 1, palyginti su gretimų normaliuose audiniuose, ląstelę PFTK1 buvo aptikta visų aštuonių skrandžio audinių sutarimu su PCNA. Siekiant patvirtinti klinikinė reikšmė PFTK1 skrandžio vėžio progresavimą, imunohistocheminis (IHC) analizė buvo naudojama stebėti PFTK1 baltymo ekspresiją 161 skrandžio vėžio audiniuose. Kaip ir tikėtasi, PFTK1 ir naviko laipsnio išraiška buvo neigiamai susijęs. PFTK1 turėjo žymiai didesnę raišką prastai diferencijuotų egzempliorių nei gerai diferencijuotų egzempliorių, kuris buvo suderintas su Ki-67. PFTK1 buvo išreikštas ląstelių membranos, o citoplazma, Ki-67 daugiausia branduolį. Rezultatas buvo parodyta 2 pav Tada mes ištirti ryšį tarp PFTK1 ir Ki-67 koreliaciją pagal Pirsono koreliacijos koeficientas. Matome pav 3A, kad PFTK1 teigiamai susijęs su Ki-67 (Pirsono gama = 0,833 P
< 0,001).

PFTK1 yra susijęs su nepageidaujamų savybių ir prastos skrandžio naviko pacientų išgyvenimo

Klinikinė asociacija tyrimas buvo ištirta analizuoti PFTK1 koreliaciją su skrandžio vėžio klinikos funkcijų tarp 161 audinių. Į klinikos duomenys buvo išvardytos 1 lentelėje Aukštos raiškos PFTK1 buvo susijęs su naviko laipsnio ( P
= 0,009), infiltracijos gylis ( P
= 0,002), limfmazgių invazijos ( P
= 0,000), taip pat Ki-67 ( P
= 0,000). Bet ten buvo tarp PFTK1 saviraiškos ir kitų klinikinių kintamųjų, tokių kaip amžius, lytis, nervų invazijos ir TNM etape jokio ryšio.

Be to, Kaplan-Meier analizė buvo naudojama analizuoti tarp PFTK1 saviraiškos ir 161 asociaciją pacientų išgyvenamumas. Pagal išgyvenimo kreivių, aukštos raiškos PFTK1 buvo akivaizdžiai koreliuoja su prasta bendrą išgyvenamumą, o žemas išraiška PFTK1 koreliavo su geresnio bendro išgyvenamumo. O vidutinis išgyvenamumo laikas ir rizikos santykis buvo parodė pav 3B. Be to, vienmatės analizės skrandžio vėžio audiniuose parodė, kad auglys įvertinimas ( P
= 0,020), infiltracija gylis ( P
= 0,011), limfmazgių invazija ( P
= 0,011), TNM stadija (p = 0,031), PFTK1 išraiška ( P
= 0,002), ir Ki-67 išraiška ( P
= 0,013) buvo prognostiniai veiksniai bendrojo išgyvenamumo (2 lentelė ). Daugiamatė analizė naudojant Cox proporcinės rizikos modelį pasiūlė PFTK1 buvo nepriklausoma prognostiniai rodikliai pacientų bendro išgyvenamumo ( P
= 0,048, 3 lentelė). Apibendrinant galima teigti, kad mūsų rezultatai parodė, kad PFTK1 išraiška reikšmingai susijęs su klinikiniais charakteristikas ir prastos bendro išgyvenamumo.

Iš PFTK1 išraiška nontransfected ir perkeltų skrandžio vėžio ląstelių

Kaip PFTK1 ekspresija skrandžio navikų audiniuose, tada mes analizuojami išraišką PFTK1 ląstelių linijas, įskaitant MGC803, SGC7901, HGC27, GES1. Nuo pav 4A, iš PFTK1 raiškos normalus skrandžio ląstelių linijos GES1 buvo mažesnis nei skrandžio ląstelių linijų MGC803, SGC7901, HGC27. Dėl papildomos studijuoti PFTK1 funkciją skrandžio vėžio ląstelių in vitro
MGC803 ląstelės buvo pernešta su PFTK1-siRNA ir SGC7901 ląstelės buvo pernešta su vėliava PFTK1. Vakarų dėmė buvo naudojamas matuoti PFTK1 išraiška. Kai vėliavos PFTK1 buvo pernešta į SGC7901, PFTK1 turėjo didesnę raišką (pav 4b). Nors PFTK1-siRNR buvo pernešta į MGC803, PFTK1-siRNRpasiekė aukščiausią triuškinantis veiksmingumo, palyginti su kitos PFTK1-siRNA (pav 4c). Taigi mes išrinkome vėliavos-PFTK1 ir PFTK1-siRNAtęsti šiuos eksperimentus.

PFTK1 gali skatinti ląstelių migruoti ir invazinės in vitro

Jis pranešė PFTK1 raiška gali padidinti CAD fosforilinimas ir sustiprinti CAD jungiasi prie F-actins, kurios skatina kepenų ląstelių karcinoma ląstelių migraciją [16]. Atsižvelgiant į tai, kad PFTK1 buvo susijęs su limfmazgių invazijos skrandžio vėžio egzempliorių, mes studijavo ar PFTK1 gali turėti įtakos skrandžio vėžio ląstelių migraciją ir invazija. Žaizdų gijimo tyrimas ir transwell tyrimus, atliekamus parodė, kad su jos vėliava-PFTK1 ląstelių migracija buvo pastebimai išaugo, palyginti su kontrolinių ląstelių. Priešingai, iš PFTK1-siRNAląstelių migracija buvo sumažintas, palyginti su kontrolinių ląstelių (pav 5a ir 5b). Be to, Matrigel invazija tyrimai taip pat parodė, kad ląstelę PFTK1 iki transfekcijai vėliavos PFTK1 galėtų pasistūmėti invazinių galimybę ir nokdaunas iš PFTK1 gali sušvelninti invazinių gebėjimą skrandžio vėžio ląstelių (pav 5c). Apskritai, mes galime prieiti prie išvados, kad PFTK1 skatinti migracijos ir invazija skrandžio vėžio ląsteles.

išraiška PFTK1 skatinti platinimu skrandžio vėžio ląstelių

Pasak pirmiau pateiktų rezultatų, PFTK1 teigiamai koreliuoja su PCNA, Ki-67 raiškos ir naviko laipsnio, kuris buvo ląstelių proliferaciją žymeklis. Mes analizuoti PFTK1 vaidmenį reguliuojant platinimo galimybes. Pirma, MGC803 ląstelės buvo pernešta su PFTK1-siRNA, vėliavos PFTK1 ir buvo pasiryžę CCK-8 tyrimą. Padidėjusi PFTK1 įrodyta, kad padidinti skrandžio ląstelių augimo lygį, nei kontrolės, o nokdaunas iš PFTK1 parodė priešingą rezultatą (pav 6a). Atitikti didinant ląstelių augimo tempas po PFTK1 raiškos, kolonijas sudarančių tyrimas taip pat parodė, kad gali padidinti kolonijų susidarymą. Ir nokdaunas iš PFTK1 parodė tą patį rezultatą su CCK-8 tyrime (pav 6B). Galiausiai, mes ištirti platinimo mechanizmą PFTK1 tėkmės citometrijos analizė ir duomenys rodo, kad daugiau skrandžio vėžio ląstelės buvo rasta S fazę negimdinio PFTK1 akivaizdoje, mažiau skrandžio vėžio ląstelės buvo rasta S fazę transfekuoja su PFTK1- siRNR(pav 6C). Apibendrinant, šie duomenys rodo, kad PFTK1 dalyvavo ląstelių ciklo reguliavimo spartinant G0 /G1 -S perėjimą.

Signalas kelias iš PFTK1 skatinant platinimu ir migracijos

Jei toliau studijuoti mechanizmą kuri PFTK1 reguliuoja skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją, migraciją, invazija, mes nusprendėme aptikti atitinkamą baltymų pasikeitė Vakarų dėmė, kai PFTK1 buvo ekspresija ar triuškinantis į MGC803. Kaip pranešama, PFTK1 gali aktyvuoti nekanoninių WNT signalizacijos kepenų ląstelių karcinoma [17]. WNT signalizacijos buvo susijęs su navikų platinimu ir migracija. Ląstelę PFTK1 dalies aktyvuota Dvl2, Naked1, MMP2 ir padidėjęs ląstelių ciklo reguliatoriaus cikloniniai E išraišką, bet nepasikeitė Dvl1, beta kateninai. Dar daugiau, mes nustatėme, kad endogeninio PFTK1 išraiškos triuškinantis gali sumažėti Dvl2, Naked1, MMP2, cikloniniai E išraišką, bet nepasikeitė Dvl1, beta kateninai (7 pav).

Diskusijos

Būdamas vienas didžiausių sergamumo vėžiu visame pasaulyje, 5 metų išgyvenamumas skrandžio vėžiu yra mažesnė nei 20% -25% iš JAV, Europoje ir Kinijoje, nes lengva atkryčio ir aukštos metastazių norma Pooperaciniuose [2]. Helicobacter pylori infekcija, iš onkogeno ir navikų supresorinių genų kaitos, ląstelės ciklo ir telomerazės aktyvavimo reguliavimas yra susijęs su skrandžio vėžio [21]. Nenormalus ląstelių ciklo reguliavimas skrandžio vėžio išsivystymo buvo mokslinių tyrimų tema pastaraisiais metais. Tikslus ir griežtas reglamentavimas ląstelės ciklo priklauso nuo kai kurių kontrolės veiksnių, įskaitant ląstelių ciklo priklausomo kinazės (CDKs), ląstelės ciklo baltymo (ciklinų) ir ląstelinio ciklo priklausomų kinazės inhibitoriais (CKIs). Kiekvienas žmogus yra susipažinęs su 11 klasikiniais CDKs (CDK1-11), PFTK1 kaip naujos ląstelės ciklo priklausomo kinazės yra rasti ne kartu ir tarp PFTK1 ir vėžio ryšys yra ne daug, taip pat skrandžio vėžio [22].

PFTK1 pradžių buvo rastas nervų sistemos žiurkių [23]. PFTK1 moduliuoja oligodendrocito diferenciaciją per PI3K /AKT kelyje [13]. Naujausi tyrimai pranešė, kad PFTK1 yra aktyvinama žmogaus stemplės vėžio, kepenų ląstelių karcinoma ir asocijuojasi su naviko augimo, migracijos ir invazijos [14,24]. Mūsų tyrimo duomenimis, mes ištirti, ar PFTK1 išraiška buvo įtrauktas į skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazijos. Iš pradžių, mes parodė, kad PFTK1 išreiškė didesnis skrandžio vėžio audiniuose nei gretimose nontumor audinių Vakarų dėmė, kad pagal kitų vėžio rezultatus (1 pav). Vėliau imunohistocheminis parodė aukštos raiškos PFTK1 buvo susijęs su naviko laipsnio, infiltracijos gylio, limfmazgių invazijos, taip pat Ki-67 161 skrandžio vėžio audiniuose. Šie rezultatai paskatino PFTK1 gali turėti įtakos skrandžio vėžys platinimu ir migracija. Kaplan-Meier analizė parodė, kad PFTK1 prognozuojama prasta bendrą išgyvenimą (pav 3b). Daugiamatė analizė naudojant Cox proporcinės rizikos modelį pasiūlė PFTK1 buvo nepriklausoma prognostiniai rodikliai pacientų bendro išgyvenamumo. Siekiant dar labiau suprasti reglamentavimo poveikį PFTK1 skrandžio ląstelėse, MGC803 ląstelės buvo pernešta su PFTK1-siRNA, vėliavos PFTK1 in vitro
(4 pav). 6 pav parodė PFTK1 galėtų skatinti platinimu CCK-8, kolonijas sudarančių testo. Tuo pačiu metu, PFTK1 padidėjo G1-S fazių transformaciją pagal tėkmės citometrijos, sutampanti su PFTK1 išvadą, buvo kepenų ląstelių karcinoma [10]. CIKLONAS El buvo vienas iš svarbiausių veiksnių reguliavimo metu G1-S fazių virsmo ir cikloniniai E baltymų galėtų apibrėžti kaip prognostinis faktorius pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu [25]. Įdomu tai, kad PFTK1 lygis buvo padidintas po transfekuoja su vėliava PFTK1 consistented su PCNA, MMP2 ir cikloniniai E (7 pav).

Be to, mes taip pat išnagrinėjo, ar PFTK1 gali turėti įtakos ląstelių migraciją ir invazija galimybę pagal žaizdų gijimą tyrimas ir transwell tyrimai. Rezultatai parodė, kad PFTK1 raiška galėtų sustiprinti ląstelių migraciją ir invazija, kuris gali būti dėl to, kad pasroviui iš PFTK1 signalo kelius (5 pav) pasikeitimus. Kaip pranešė kepenų vėžio, PFTK1 ir /arba CCNY vien gali aktyvuoti nekanoninį WNT signalizacijos sukelia ląstelių migraciją ir invazija [17]. WNT keliai įtraukti kanoninę WNT /β-kateninai signalizacijos ir nekanoninį WNT signalizacijos kelią (WNT /Ca ^{2 + ir WNT /PCP). WNT signalizacijos būdas suvaidino svarbų vaidmenį vėžio ir reguliuojamoje ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazijos [26] plėtrai. Vėliau, mes nustatėme, išraiška baltymų β-kateninai, Dvl1, Dvl2, Naked1. Dvl2 ir Naked1 buvo teigiamai koreliuoja su PFTK1 ir kanoninė WNT /β-kateninai susijusių baltymų beta-kateninai, Dvl1 nepasikeitė (7 pav). Iš aukščiau, mes todėl spėjama, kad PFTK1 gali skatinti migracijos ir invazija per reguliavimo nekanoninį WNT signalizacijos. Ir ten taip pat buvo straipsniai greitas nekanoninį WNT signalizacijos skatina migracijos ir invazija gebėjimą skrandžio vėžio ląstelių [27,28].}

Žodžiu, iš PFTK1 išraiška labai buvo padidintas žmogaus skrandžio vėžio audiniuose. Padidėjusi ar triuškinantis iš PFTK1 iki transfekuoja su vėliava PFTK1 ar PFTK1-siRNAakivaizdžiai paveikti skrandžio vėžio ląstelės dauginimosi, migracijos ir invazijos. Mūsų rezultatai pirmą kartą pateikia naują įrodymą PFTK1 į skrandžio vėžio ir tiekimo laboratorinių pagrindu plėtros klinikinio gydymo. Tačiau tolesni tyrimai norint suprasti tikslią mechanizmą PFTK1 įtakos dauginimosi, migracijos ir invazija gebėjimą skrandžio vėžio ląsteles.

• PLoS ONE: aptikimas ir apibūdinimas metastazavęs vėžines ląsteles į Mesogastrium skrandžio vėžio Patients
• PLoS ONE: Dietiniai riebalų ir rizikos skrandžio vėžiu: metaanalizė stebėjimų Studies