PLoS One: PFTK1 Elősegíti Gyomor rák kifejlődésének szabályozása által szaporodása, migrációja és Invasion

absztrakt katalógusa

PFTK1, más néven PFTAIRE1, CDK14, van egy új tagja Cdc2 kapcsolatos szerin /treonin protein-kinázok. A legújabb tanulmányok azt mutatják, hogy PFTK1 erősen expresszálódik számos rosszindulatú daganatok, mint például a hepatocelluláris karcinóma, nyelőcsőrák, a mellrák, és részt vesz a sejtciklus szabályozásában, daganatok proliferáció, migráció, és invázió, hogy további befolyásolják a prognózisa daganatok. Azonban a kifejezés és élettani jelentősége PFTK1 gyomorrákban továbbra sem tisztázott. Ebben a vizsgálatban elemeztük a kifejezés és klinikai jelentősége PFTK1 Western blot 8 párosított friss gyomorrák szövetekben nontumorous gyomornyálkahártya-szövetek és immunhisztokémiai 161 paraffinembedded szelet. Nagy PFTK1 expresszió korrelált a tumor grade, nyirokcsomó invázió, valamint a Ki-67. Keresztül sejtszámláiás (CCK) -8 vizsgálattal, áramlási citometria, telepek kialakulása sebgyógyulást és transzwell vizsgálatokban a vitro vizsgálatokban kimutatták, hogy PFTK1 túltermelése támogatni szaporodása, migrációja és invázió gyomorrák sejtek, míg PFTK1 akciós vezetett az ellenkező eredményt. Eredményeink először támogatta ezt PFTK1 játszhat fontos szerepet szabályozásában gyomorrák szaporodása, migrációja és adna egy új ígéretes terápiás stratégiát az emberi gyomorrák. Katalógusa

Citation: Yang L, Zhu J, Huang H, Yang Q, Cai J, Wang Q, et al. (2015) PFTK1 Elősegíti Gyomor rák kifejlődésének szabályozása által szaporodása, migrációja és Invasion. PLoS ONE 10 (10): e0140451. doi: 10,1371 /journal.pone.0140451 katalógusa

Szerkesztő: Keping Xie, a University of Texas MD Anderson Cancer Center, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: május 7, 2015; Elfogadva: szeptember 25, 2015; Megjelent: október 21, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Yang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír. katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatták a Természettudományi Alapítvány Kína (No. 81302285, 81402015 számú). katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem versengő érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák a negyedik leggyakoribb rosszindulatú daganat a második vezető oka a rákkal összefüggő halálozás mindenféle rák világszerte [1]. Ez nehéz gyógyítani, hacsak nem találtak egy korai szakaszban [2]. Hiánya miatt a specificitás, a korai diagnózis arány alacsony, és a legtöbb gyomor rákos betegek vannak középső-késői szakaszban, amikor diagnózis. 40% -60% gyomorrákos betegeknél kapott gyomorrák radikális művelet gyakran posztoperatív recidíva és metasztázis, ezek a jellemzők komolyan befolyásolja a hosszú távú túlélés gyomorrákos betegeknél [3,4]. Annak ellenére, hogy nagy előrelépés az új diagnózis és kezelési stratégiák a gyomorrák, a pontos molekuláris mechanizmus a gyomorrák is kevéssé értik. Így a azonosítása molekuláris mechanizmusa során a gyomorrák progresszió és metasztázis nyújthat betegek új diagnosztikus és terápiás stratégiákat.

PFTK1 (más néven PFTAIRE1, CDK14) egy új tagja a Cdc2 kapcsolatos szerin /treonin protein-kinázok, hogy először azonosított egér idegrendszer, és alapvető szabályozója ciklinek és a sejtciklus [5,6]. Kevés vizsgálatot végeztek, hogy jellemezze élettani funkció vagy biológiai jelentősége. Úgy tűnik, hogy PFTK1 erősen expresszálódik az agyban, a hasnyálmirigy, a vese, és a petefészek. A CDK-k kötődnek specifikus ciklin mezőt alkotnak funkcionális protein-kináz-komplexek és szabályozott részben szubcelluláris lokalizációja [7]. Például a ciklin Y, egy újszerű membránhoz kapcsolódó ciklin, kölcsönhatásba lép PFTK1 fokozza PFTK1 kináz aktivitását és toboroz PFTK1 a plazmamembrán [8]. PFTK1 kölcsönhatásba lép ciklin B2 kolokalizáció a sejtmagban hepatocelluláris karcinómában [9]. Az alapvető funkciója PFTK1 tűnik, mint egy ciklinfüggő kináz (CDK) szabályozó sejtciklus progressziójában és a sejt proliferáció által specifikusan kölcsönhatásba lép tagjai a ciklin fehérjék, mint például a ciklin D3 (CCND3), ciklin Y (CCNY), és képez terner komplexet a sejtciklus-inhibitor P21, így foszforilezi a tumorszuppresszor Rb a G1 /S átmenetet [10]. Knockout ciklin Y glióma sejtvonalak teszi a sejtciklus blokkoltuk S alatt [11]. A ciklin Y kölcsönhatásba lép PFTK1 állítsa M fázisában mitózis [12]. Ezek az eredmények együttesen belekeverni hogy PFTK1 működhet, mint egy tumor promoter keresztül sejtciklus szabályozására. Eközben számos tanulmány bizonyítja, hogy PFTK1 is más fontos funkciókat. PFTK1 modulálja oligodendrocita differenciálódás útján PI3K /AKT-út [13]. Nemrégiben PFTK1 ruházza HCC sejtmozgás inaktiválása révén az aktin-kötő motilis szuppresszáló funkciója TAGLN2 foszforiláció révén [14]. PFTK1 által közvetített foszforilációjának lehetővé Association CAD F-aktin filamentumok, ami fokozza polimerizáció az aktin stressz szálakat, és ezáltal elősegítse a sejtmigrációt és inváziót HCC sejtekben [15,16]. Túlexpressziója PFTK1 ruházhat mozgékony fenotípus rosszindulatú májsejtekben [9]. Egyetértésben a molekuláris megállapítások CCNY és /vagy PFTK1 egyedül aktiválhatja noncanonical Wnt jelátvitel, hogy fokozza a sejtek mozgékonyságát HCC sejtekben [17]. Mindezek a vizsgálatok arra utalnak, hogy PFTK1 is be lehet vonni a sejtek szaporodását és mozgékonyságát, azonban a kifejezés és jelentőségét PFTK1 gyomorrákban sejtek még homályos. Katalógusa

A tanulmányban célul tűztük, hogy végezzen átfogó elemzést PFTK1 kifejezés és annak prognózis szerepe a gyomorrák sejtek. Megvizsgáltuk a kifejezés PFTK1 és egyesülete klinikai jellemzői és a Ki-67 Western blot és immunhisztokémiai (IHC). A tanulmány azt mutatta, hogy PFTK1 fokozott proliferáció, migráció és invazivitását gyomorrák-sejtek által CCK-8, áramlási citometria elemzések, telepképződést elemzések, Transwell assay, az érintett a kifejezés a kapcsolódó fehérjéket. Ezeket a megállapításokat először észlelték a gyomorrák sejtek és olyan új betekintést a fejlődő kísérleti terápiák gyomorrákban. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

A szövetminták

Egy százhatvan -on gyomorrák szövetminták és kiegyenlített szomszédos noncancer szöveteket kiválasztott átesett betegek műtét 2007 és 2013 között a Department of Pathology, Nantong tumor Kórház. Ezeket a szöveteket tároltuk -80 ° C hőmérsékleten közvetlenül a műtéti eltávolítás után. A szövettani vizsgálat, mind gyomor szöveti mintákat fixáltuk 10% -os pufferolt formalinnal és paraffinba ágyaztuk sectioning. Kimetszett mintákat besorolása szerint a hetedik kiadása a TNM osztályozás gyomorrák [1] .Minden klinikopatológiai információkat az életkor, a nem, beszivárgás mélysége, differenciálódás állapot, nyirokcsomó invázió, ideg invázió és TNM. A jóváhagyási eltávolított szöveteket kutatási célokra kapunk Etikai Bizottsága Nantong Tumor Kórház. Jelzett beleegyezését adta is vettünk minden egyes beteg számára. A fő klinikai és patológiai változók 1. táblázat foglalja össze

Western-blot-analízis

Western blot assay-t kimutatására használt egyes fehérjék [18-20]. Először is, a gyomor Caner szöveteket és sejteket repedt lízis pufferben (1 M Tris-HCl, pH = 7,5, 1% Triton X-100, 10% -os nátrium-szulfát (SDS), 1% NP-40, 0,5 M EDTA, 0,5% nátrium- dezoxikolát, 10 ng /ml aprotinin, 1 mM PMSF, 10 ng /ml leupeptin), majd centrifugáltuk 10.000 x g értéken 30 percen összegyűjteni a felülúszót. A felülúszót 2 × SDS mintapufferrel és főtt. Egy ekvivalens mennyiségű fehérjék minden mintából elektroforézisnek 10% -os nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézissel (SDS-PAGE), majd át be egy polivinilidén-fluorid (PVDF) membránra (Millipore, Bedford, MA). Ezt követően, a membránokat blokkoltuk körülbelül 2 órán át szobahőmérsékleten, majd egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C hőmérsékleten a primer antitestekkel. Mosás után foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), amely 0,1% Tween 20-at három alkalommal, minden egyes 5 percig, a membránokat ezután inkubáljuk torma-peroxidázzal kapcsolt IgG, mint a szekunder antitest további 2 órán át szobahőmérsékleten. Ezután a membránokat fejlesztettek ki az ECL-érzékelő rendszerek (Imaging Technology, Ontario, Kanada). Az antitestek, amelyek ebben a vizsgálatban: anti-PFTK1 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-ciklin E (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-PCNA (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology), anti- GAPDH (1: 1000, Sigma), anti-β-catenin (1: 1000, santa Cruz Biotechnology), anti-Dvl1 (1: 600, santa Cruz Biotechnology), anti-Dvl2 (1: 600, santa Cruz Biotechnology), anti-Naked1 (1: 500, Cell Signaling), anti-MMP2 (1: 500, santa Cruz Biotechnology).

az immunhisztokémiai elemzések

röviden, a szöveti metszeteket viaszmentesített xilolban és rehidratált keresztül osztályozni-etanol. Ezután a metszeteket befagyasztjuk 3% -os metanolos-peroxidot körülbelül 10 percig, hogy blokkolja az endogén peroxidáz aktivitást. A magas nyomás és hőmérséklet autoklávban, annak immunreaktivitás továbbfejlesztett 0,1 M citrát-puffer-on 3 percig. A szöveti metszeteket inkubáltuk anti-PFTK1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology) és anti-Ki-67 (1: 400, Santa Cruz Biotechnology) 120 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Szerint a gyártó utasításait, mosás után foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), szövetek inkubáltuk tormaperoxidázzal konjugált anti-egér Ig-polimer, mint második antitesttel (Envision kit, Dako) 20 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Végül a metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük, dehidratált, és szerelt gyanta mount. Számszerűsíteni PFTK1 és a Ki-67 fehérje expresszió, mind a mértéke immunreaktivitás és intenzitását értékeltük, és gólt szerzett. Öt nagy teljesítményű területeken véletlenszerűen választottak az egyes részekben, és legalább 300 sejteket megszámoltuk parcellánként. A statisztikai elemzést PFTK1, minden egyes dia segítségével értékelték szemikvantitatív pontozási rendszer mind az intenzitása a foltot és a százalékos pozitív malignus sejtek. A sejteket Szerzett a következők: 1 (≤25% tumorsejtek festett), 2 (26% -50% tumorsejtek festett), 3 (51% -75% tumorsejtek festett), 4 (76% -100% tumorsejtek foltos). Sűrűség értékelés: 1 gyenge festést; 2 közepes festés; 3 erős festés. Aztán szorozni a két pontszámot és osztályozott őket két csoportra oszthatók: az alacsony és a magas kifejezés kifejezés. Ami a statisztikai elemzés a Ki-67, < 50% tumorsejtek festettük alacsony expresszió és ≥50% tumorsejtek festettük például a magas expressziót. Annak érdekében, hogy elkerüljék a technikai hibák, festés háromszor megismételjük, és hasonló eredményeket kaptunk.

Sejttenyészetek és tranziens transzfekciós

MGC803 és HGC27 voltak gyomor-sejtvonalak, amelyeket vásárolt a sejt könyvtár a kínai Tudományos Akadémia. Mindkét RPMI-1640 közegben (Gibco-BRL, Grand Island, NY, USA). SGC7901 és GES1 voltak más gyomor-sejtvonalak, amelyeket bocsátotta rendelkezésünkre a Pathológiai Intézet Kutatási Nantong Egyetemen. SGC7901 és GES1 DMEM-ben tenyésztjük közegben (Gibco-BRL, Grand Island, NY, USA). Minden a közeg készült 10% magzati borjúszérummal (GIBCO-BRL, Grand Island, NY, USA) kiegészített 2 mM L-glutamint, 100 U /ml penicillin-sztreptomicin keverék (Gibco-BRL, Grand Island, NY, USA ), 37 ° C-on és 5% CO _{2. PFTK1 kis interferáló RNS-t (siRNS-t) terveztünk és szintetizáltunk Shanghai Genechem (Kína). Az siRNS célzási PFTK1 szekvenciák a következők voltak: 5'-GTTCATTCTTTACCACATT-3 ', 5'-AGGTTGCATCTTTGTTGAA-3', 5'-AAAGAGTCACCTAAAGTTA-3 ', 5'-ACCCATACAGGAAATCCAA-3'. A Flag-PFTK1 plazmidot vásárolt Shanghai Genechem (Kína). Lipofectamine 2000 transzfekciós reagenssel (Life Technologies) alkalmaztunk a sejtek transzfekciója a gyártó utasításai szerint.}

áramlási citometriás elemzés

Először is, az összes gyomor sejtvonalak fixáltuk 70% -os etanolban egy éjszakán át -20 ° C. Másodszor, miután mosott citrát-foszfát-puffert és PBS, a sejteket 1 mg /ml RNáz 30 percen át 37 ° C-on. Ezután a sejteket megfestettük 50 ug /ml propidium-jodid foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS) -Triton további 20 percig 4 ° C-on. Végül a sejteket analizáltuk Becton Dickinson áramlási citométer BD FACScan (San Jose, CA), és CellQuest beszerzés elemzés programokat. A kísérletet háromszor végezzük.

telepképződést assay

MGC803 sejtet tenyésztettünk hat üregű szövettenyésztő lemezeken (Corning, Corning NY) sűrűségben 200 sejt /lyuk után transzfektálása PFTK1 #siRNA és Flag-PFTK1 szerint a gyártó utasításai szerint. Két hét elteltével a sejt kolóniákat (≥50 sejt /telep) megszámoltuk végzett festéssel 0,5% kristályibolya.

sejtproliferációs vizsgálatokban

MGC803 sejtek, amelyek közé tartoztak a normál, transzfekciója PFTK1 # siRNS és Flag-PFTK1 oltunk 96 lyukú sejttenyésztő klaszter lemezekre (Corning, Corning NY) sűrűségben 2 × 10 ^{4 sejt /lyuk 100 ul kultúra és növesztjük egy éjszakán át. Szerint a gyártó utasításai sejteket alkalmazásával mérjük kereskedelmi CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japán). CCK-8 reagenseket adunk az egyes lyukakhoz, 2 órán át 37 ° C-on. Az abszorbanciát olvastuk a 450 nm hullámhossznál egy automata lemezleolvasóval. A kísérleteket kell ismételni legalább három alkalommal.}

sebgyógyító assay

MGC803 sejtet tenyésztettünk hat üregű szövettenyésztő lemezeken (Corning, Corning NY), sűrűséggel 5 × 10 ^{5 sejt /lyuk, és növesztjük összefolyásig egy éjszakán át. Transzfektálás után 48 órával a sejteket inkubáltuk szérummentes közegben. A vonal karcos belül Conflent sejtréteg felhasználásával fie végén egy 10 ml-es pipetta hegyével (0 időpontban), majd a sejteket PBS-sel mostuk. Képek migráló sejtek egymás után vett 24 óra, 48 óra alatt lezárása a sebesült régióban. Katalógusa}

Trans-nos migrációs assay katalógusa

A sejtmigrációt vizsgálatot végeztünk transzwell kamra (8,0 lm pórusméretű; Costar, Cambridge, NY, USA). Körülbelül 1 × 10 ^{5 sejt /ml koncentrációban oltottuk a felső kamrái a médiumban, és RPMI-1640-t adtunk a alsó kamrák. 24 óra eltelte után, a felső sejtek, amelyeket nem vándoroltak eltávolítottuk, és az alsó sejtek vándorlását paraformaldehiddel fixáltuk és megfestettük kristályibolyával. A több vándorló sejtek 5 mező alatt megszámoltuk 200 × nagyítással, és minden kamrának határoztuk meg. Minden kísérletet háromszor megismételjük.}

Trans-nos inváziós vizsgálati eljárás

A sejtmigrációt vizsgálatot végeztünk transwell kamrába (8,0 lm pórusméret; Costar, Cambridge, NY, USA). BD MatrigelTM alapmembrán mátrix adtunk a felső kamrába 1 órán át 37 ° C-on. Ezután 500 ul tápközegben, amely kemotaktikus faktor helyeztünk az alsó kamrába. Körülbelül 1 × 10 ^{5 sejt /ml koncentrációban oltottuk a felső kamrái 37 ° C-on 24 h.Cells ezután paraformaldehiddel fixáltuk és megfestettük kristályibolyával. Minden kísérletet háromszor megismételjük.}

Statisztikai analízis

Minden statisztikai analízist végeztünk SPSS statisztikai 19 szoftvercsomag. A PFTK1, Ki-67 expresszió és a klinikai és patológiai jellemzői analizáljuk χ ^{2 teszt. A teljes túlélési görbéket a Kaplan-Meier módszerrel és vizsgáltak a log-rank teszt. A többváltozós elemzés elemeztük Cox-féle arányos kockázati modell, a kockázati arány és 95% -os konfidencia intervallum rögzítettük minden marker. Az értékeket átlag ± SE, és a p
< 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

PFTK1 túlzottan kifejeződik gyomor daganatos szövetek katalógusa

Úgy tűnik, hogy PFTK1 fontos ciklin dependens kináz, amely szabályozza a sejtciklus, de a kutatás gyomorrák még nem vizsgálták. Mivel overexpressziója PFTK1 találták májrák és a nyelőcsőrák, mint a normális szövetekben. Tehát érdemes az elemzés a kifejezés a PFTK1 a gyomor daganatos szövetekben és coorelation a szaporodó sejtmag antigén (PCNA). Először is megvizsgáltuk, a kifejezés a PFTK1 8 pár gyomor tumor szövetek és a megfelelő nontumorous gyomornyálkahártya szövetekben Western-blottal. Amint az 1. ábrán látható, míg a szomszédos normális szövetekben, fokozza a PFTK1 kimutatható volt mind a nyolc gyomor szöveteinek összhangban PCNA. Annak érdekében, hogy erősítse a klinikai jelentősége PFTK1 gyomorrákban progresszió, immunhisztokémiai (IHC) elemzéseket használtak megfigyelni expressziójának PFTK1 fehérje 161 gyomorrák szövetekben. Ahogy az várható volt, a kifejezés a PFTK1 és a tumor grade negatívan összefügg. PFTK1 volt szignifikánsan magasabb expressziót gyengén differenciálódott példányok, mint a jól differenciált példányok, amely összhangban volt a Ki-67. PFTK1 fejeztük sejtmembránhoz, a citoplazma, Ki-67 elsősorban a sejtmagban. Az eredmény ábrán látható 2. Ezután megvizsgáltuk az összefüggést a PFTK1 és a Ki-67 a Pearson-féle korrelációs együtthatót. Láthatjuk, hogy a 3A PFTK1 pozitívan kapcsolódó Ki-67 (Pearson-féle γ = 0,833, P katalógusa < 0,001). Katalógusa

PFTK1 társul kedvezőtlen klinikai jellemzői és gyenge gyomor tumor a betegek túlélése katalógusa

a klinikai szövetség vizsgálatot tárni, hogy elemezze a korreláció PFTK1 a gyomorrák klinikopatológiai jellemzők közül 161 szövetekben. Klinikopatológiai adatok az 1. táblázatban felsorolt ​​Nagy kifejezése PFTK1 kapcsolódik a tumor grade ( P katalógusa = 0,009), a beszivárgás mélysége ( P katalógusa = 0,002), nyirokcsomó invázió ( P
= 0,000), valamint a Ki-67 ( p
= 0,000). De nem volt összefüggés PFTK1 kifejezés és más klinikai változók, mint az életkor, a nem, a nervus invázió, és a TNM stádium. Katalógusa

Ezen felül Kaplan-Meier analízis segítségével elemezze a szövetség között PFTK1 kifejezés és 161 a betegek túlélése. Szerint a túlélési görbék, magas expresszióját PFTK1 nyilván összefügg a rossz teljes túlélés, míg az alacsony kifejeződése PFTK1 korrelált jobb teljes túlélést. És az átlagos túlélési időt és hazárd mutattuk A 3. ábrán. Sőt, egyváltozós elemzés gyomorrákban szövetek azt mutatta, hogy a tumor grade ( P katalógusa = 0,020), a beszivárgás mélysége ( P katalógusa = 0,011), nyirokcsomó invázió ( P = katalógusa 0,011), TNM (P = 0,031), PFTK1 kifejezés ( P katalógusa = 0,002), és a Ki-67 expresszió ( P katalógusa = 0,013) volt prognosztikai faktorok a teljes túlélés (2. táblázat ). A többváltozós elemzés során a Cox-féle arányos kockázati modellt javasolt PFTK1 volt független prognosztikai mutatói a betegek teljes túlélés ( P katalógusa = 0,048, 3. táblázat). Összefoglalva, eredményeink igazolták, hogy a kifejezés a PFTK1 szignifikánsan összefügg a klinikai jellemzői és az általában gyenge túléléssel. Katalógusa

A kifejezés a PFTK1 a nem transzfektált és a transzfektált gyomorrák sejtek katalógusa

Mivel PFTK1 overexpresszálódik a gyomor daganatos szövetben, akkor elemeztük kifejezése PFTK1 sejtvonalak beleértve MGC803, SGC7901, HGC27, GES1. Ábrán a 4A, a kifejezés a PFTK1 normál gyomor sejtvonalban GES1 alacsonyabb volt, mint a gyomor-sejtvonalak MGC803, SGC7901, HGC27. A további vizsgálat a funkciója PFTK1 a gyomorrák sejtek in vitro,
MGC803 sejteket transzfektáltunk PFTK1-siRNS és SGC7901 sejteket transzfektáltunk Flag-PFTK1. Western-blotot mérésére használt PFTK1 kifejezést. Amikor Flag-ben PFTK1 transzfektált SGC7901, PFTK1 volt magasabb kifejezése (4.b ábra). Míg PFTK1-siRNS-t transzfektáltunk a MGC803, PFTK1-siRNSelért legmagasabb knockdown hatékonyság összehasonlítva más PFTK1-siRNS (ábra 4C). Tehát kiválasztottuk a Flag-PFTK1 és PFTK1-siRNS, hogy folytassa a következő kísérletet. Katalógusa

PFTK1 elősegítheti a sejtek vándorlását és invazív in vitro Matton

Úgy tűnik PFTK1 túltermelése növelheti CAD foszforiláció és fokozza CAD kötődnek F-actins, amelyek elősegítik a hepatocelluláris karcinóma sejtek migráció [16]. Tekintettel arra, hogy PFTK1 kapcsolatban állt a nyirokcsomó invázió gyomorrákban példányok megvizsgáltuk, hogy a PFTK1 érintheti gyomorrák sejtek migrációs és behatolás. Sebgyógyító assay és Transwell vizsgálat azt mutatta, hogy a migráció a Flag-PFTK1 sejtek nevezetesen képest emelkedett kontroll sejtek. Éppen ellenkezőleg, a migráció a PFTK1-siRNSsejteket csökkentett összehasonlítva kontroll sejtek (5A és 5B). Továbbá matrigelen inváziós vizsgálati is kimutatták, hogy a túlszabályzását PFTK1 által transzfektálá- Flag-PFTK1 javíthatja a inváziós képességét, és kiütése PFTK1 lehetne csökkenteni az invazív képességét gyomorrák sejtek (ábra 5C). Összességében, mi jöhet a következtetés, hogy PFTK1 elősegítik migrációs és behatolás gyomorrák sejtek. Katalógusa

kifejezése PFTK1 elősegítése elterjedése gyomorrák sejtek katalógusa

Az eredmények szerint a fent bemutatott, PFTK1 volt pozitív korrelált PCNA, Ki-67 expresszió és tumor grade, melyek a sejtek proliferációs marker. Elemezzük a szerepe PFTK1 szabályozására elterjedése képességét. Először is, MGC803 sejteket transzfektáltunk PFTK1-siRNS, Flag-PFTK1 és meghatároztuk CCK-8 vizsgálatban. Túlexpressziója PFTK1 kimutatták, hogy fokozza a gyomorsav-sejtek növekedési üteme, mint a kontroll, míg kiütése PFTK1 megmutatta az ellenkező eredményt (6A). Összhangban fokozza sejt növekedési üteme a következő PFTK1 túltermelése, telepképző assay azt is kimutatta, hogy növelheti kolónia képződését. És kiütése PFTK1 mutatta, ugyanazt az eredményt a CCK-8-assay (6B). Végül feltártuk a proliferációs mechanizmusa PFTK1 áramlásos citometriás elemzés, és az adatok azt javasolta, hogy több gyomor rákos sejteket találtak a S fázis jelenlétében ektópiás PFTK1, kevesebb gyomor rákos sejteket találtak az S fázisban transzfektálása a PFTK1- siRNS(ábra 6C). Összefoglalva, ezek az adatok azt mutatják, hogy a PFTK1 részt a sejtciklus szabályozásában felgyorsításával G0 /G1-S átmenet. Katalógusa

A jel útja PFTK1 előmozdításában proliferációját és migrációját katalógusa

További mechanizmusának tanulmányozására amely PFTK1 szabályozott gyomorrák sejtek szaporodását, a migráció, invázió, úgy döntöttünk, hogy érzékeli a kapcsolódó fehérje megváltozott Western blot amikor PFTK1 volt túlzott mértékben vagy knockdown a MGC803. Amint arról, PFTK1 aktiválhatja noncanonical Wnt jelátviteli hepatocelluláris karcinóma [17]. Wnt jelátviteli kapcsolatos daganatos burjánzását és migrációt. Felfokozását PFTK1 részben aktivált Dvl2, Naked1, MMP2 és emelkedett expressziója sejtciklus szabályozó ciklin E, de nem változott Dvl1, β-catenin. Mi több, azt találtuk, hogy akciós endogén PFTK1 expresszió csökken Dvl2, Naked1, MMP2, ciklin E kifejezés, de nem változott Dvl1, β-catenin (7. ábra). Katalógusa

Vita katalógusa

Mivel az egyik legmagasabb előfordulási rák a világon, az 5 éves túlélés a gyomorrák kevesebb, mint 20% -25% az Egyesült Államokban, Európában és Kínában, mert a könnyű visszaesni és a magas metasztázis ráta posztoperatív [2]. Helicobacter pylori fertőzés, a változás a onkogén és a tumor szuppresszor gének, a sejtciklus szabályozásában, és a telomeráz aktiválás társított gyomorrák [21]. Rendellenes sejtciklus szabályozás a gyomorrák kialakulásával volt a témája a kutatás az utóbbi években. Pontos és szigorú sejtciklus szabályozásában függ bizonyos ellenőrzési tényezőket, beleértve a sejtciklus-függő kináz (CDK), sejtciklus fehérje (ciklinek) és sejtciklus-függő kináz inhibitorok (CKIs). Mindenki ismeri a 11 klasszikus CDK-(CDK1-11), PFTK1 új sejtciklus függő kináz megállapítják, hogy nem végig, és a kapcsolat között PFTK1 és a rák nem sok, még a gyomorrák. [22] katalógusa

PFTK1 eredetileg megtalálható a idegrendszerben patkányok [23]. PFTK1 modulálja oligodendrocita differenciálódás útján PI3K /AKT-út [13]. A legújabb kutatások azt jelentette, hogy PFTK1 felülszabáiyoződik emberi nyelőcsőrák, hepatocelluláris karcinóma és társult a tumor növekedésével, migrációs és behatolás [14,24]. Tanulmányunkban azt vizsgáltuk, hogy a kifejezés a PFTK1 részt gyomorrák sejtek szaporodása, migrációja és invázió. Először kimutattuk, hogy PFTK1 kifejezve magasabb a gyomorrák szövetekben, mint a szomszédos nem-tumoros szövetekben Western blot, hogy összhangban az eredményeket más rákos megbetegedések (1. ábra). Ezt követően, immunhisztokémia kimutatta magas expresszióját PFTK1 kapcsolódik a tumor grade, beszivárgás mélysége, nyirokcsomó invázió, valamint a Ki-67 161 gyomorrák szövetekben. Ezek az eredmények kéri PFTK1 érintheti gyomorrák proliferációját és migrációját. Kaplan-Meier analízis kimutatta, hogy PFTK1 megjósolta az általában gyenge túléléssel (3B ábra). A többváltozós elemzés során a Cox-féle arányos kockázati modellt javasolt PFTK1 volt független prognosztikai mutatói a betegek teljes túlélését. Annak érdekében, hogy jobban megértsük a szabályozó hatását PFTK1 a gyomor-sejtek, MGC803 sejteket transzfektáltunk PFTK1-siRNS, Flag-PFTK1 in vitro katalógusa (4. ábra). 6. ábra azt mutatta, PFTK1 elősegítheti proliferáció által CCK-8 telepképző assay. Ugyanakkor, PFTK1 növelte a G1-S fázis transzformáció szerinti áramlási citometriás, amely egybeesik a megállapítása PFTK1 hepatocelluláris karcinómában [10]. Ciklin E volt az egyik fontos szabályozó tényező alatt a G1-S fázis transzformáció és ciklin E fehérje lehet meghatározni, mint egy prognosztikai tényezője betegek gyomorrák [25]. Érdekes, PFTK1 szint nőtt, miután transzfektálása a Flag-PFTK1 consistented a PCNA, MMP2 és a ciklin E (7. ábra). Katalógusa

Ezen kívül azt is megvizsgálták, hogy PFTK1 befolyásolhatja a sejtek migrációs és behatolás képességét a sebgyógyulást vizsgálat és transwell vizsgálatokban. Az eredmények azt mutatták, hogy a túltermelése PFTK1 növelheti a sejtek migrációs és behatolás, ami oka lehet a változás a downstream a PFTK1 szignálútvonalak (5. ábra). Amint arról a hepatocelluláris rák, a PFTK1 és /vagy CCNY egyedül képes aktiválni nem-kanonikus Wnt jelátvitel okozó sejtek migrációs és behatolás [17]. Wnt útvonalakat tartalmazza a kanonikus Wnt /β-catenin jelátvitel és a nem-kanonikus Wnt jelátviteli út (Wnt /Ca ^{2+ és Wnt /PCP). Wnt jelátvitel módja fontos szerepet játszott a fejlesztés a rákos megbetegedések és a szabályozott sejtek proliferáció, migráció és invázió [26]. Ezt követően azt találtuk, fehérjék expresszióját β-catenin, Dvl1, Dvl2, Naked1. Dvl2 és Naked1 pozitívan korrelált PFTK1 és a kanonikus Wnt /β-catenin kapcsolatos fehérjék β-catenin, Dvl1 nem változott (7. ábra). A fenti, ezért azt gondolták, hogy PFTK1 elősegítheti migrációs és behatolás szabályozásán keresztül nem kanonikus Wnt jelátvitel. És ott is voltak cikkek prompt nem kanonikus Wnt jelátviteli elősegíti migrációs és behatolás képességét gyomorrák sejtek [27,28]. Katalógusa}

Egy szóval, a kifejezés PFTK1 jelentősen növelték az emberi gyomorrák szöveteket. Expressziót vagy kiütése PFTK1 transzfektáltuk a Flag-PFTK1 vagy PFTK1-siRNSnyilvánvalóan érintett gyomorrák sejtek szaporodása, migrációja és invázió. Eredményeink az első alkalommal, hogy új bizonyítékot PFTK1 a gyomorrák kialakulásával és a kínálat laboratóriumi alapja a klinikai kezelés. De további vizsgálatokra van szükség, hogy megértsék a pontos mechanizmusa PFTK1 érintő proliferációs, migrációs és behatolás képességét a gyomor rákos sejteket. Katalógusa

• PLoS One kimutatása és jellemzése áttétes rákos sejtek a Mesogastrium a gyomorrákos betegek
• PLoS One: Diétás zsírbevitel és a kockázat az gyomorrák: meta-analízise megfigyeléses vizsgálatok