PLoS ONE: exosomaal miRNAs van Peritoneum spoelvloeistof als potentiële prognostische Biomarkers van peritoneale metastasen bij maagkanker

Abstract

peritoneale uitzaaiingen is de meest voorkomende vorm van recidief bij patiënten met maagkanker (GC) en wordt geassocieerd met een slechte prognose. Peritoneale lavage cytologie, gebruikt om het risico van peritoneale metastasen evalueren, heeft een lage gevoeligheid. Hier onderzochten we de diagnostische waarde van exosomaal miRNA profielen peritoneale vloeistof voor het voorspellen van peritoneale verspreiding in GC. Totaal RNA werd geëxtraheerd uit exosomes geïsoleerd uit zes maag maligne ascites (MA) monsters, 24 peritoneale lavage vloeistof (PLF) monsters, en kweeksupernatanten (CM) van twee menselijke maagcarcinoom cellijnen die verschillen in hun potentieel voor peritoneale metastasen. Expressie van miRNAs exosomaal werd geëvalueerd Agilent Human miRNA microarrays en kwantitatieve reverse transcriptie polymerase kettingreactie (qRT-PCR). De microarray analyse gaf een lage variatie in het aantal en de signaalintensiteit van miRNAs gedetecteerd tussen de monsters. In de zes MA vloeistoffen, miR-21 toonde de hoogste intensiteit van het signaal. We identificeerden vijf miRNAs (miR-1225-5p, miR-320C, miR-1202, miR-1207-5p en miR-4270) met een hoge expressie in MA monsters, de PLF van serosa-invasieve GC, en de CM van een zeer metastatische GC cellijn; deze kandidaat-miRNA soorten lijkt samen te hangen met peritoneale verspreiding. Differentiële expressie van miR-21, miR-320C en miR-1225-5p werd gevalideerd in de PLF van serosa-invasieve en niet-invasieve GC met qRT-PCR en miR-21 en miR-1225-5p werden bevestigd geassocieerd met serosal invasie in GC. PLF kan worden gebruikt om de expressie van miRNAs exosomaal profiel. Onze resultaten suggereren dat miR-21 en miR-1225-5p kunnen dienen als biomarkers van peritoneale recidief na curatieve resectie GC, waardoor een nieuwe benadering voor een vroege diagnose van peritoneale verspreiding van GC

Visum:. Tokuhisa M, Ichikawa Y, Kosaka N, Ochiya T, Yashiro M, Hirakawa K, et al. (2015) exosomaal miRNAs uit Peritoneum spoelvloeistof als potentiële prognostische Biomarkers van peritoneale metastasen bij maagkanker. PLoS ONE 10 (7): e0130472. doi: 10.1371 /journal.pone.0130472

Editor: Soheil S. Dadras, University of Connecticut Health Center, VERENIGDE STATEN

Ontvangen: 1 februari 2015; Geaccepteerd: 20 mei 2015; Gepubliceerd: 24 juli 2015

Copyright: © 2015 Tokuhisa et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier

financiering:.. de auteurs hebben geen steun of financiering aan te melden

Competing belangen. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

MicroRNAs (miRNAs) zijn kleine (19-23 nucleotiden) niet-coderende RNA's die fungeren als post-transcriptionele regulatoren van genexpressie en een belangrijke rol spelen bij de controle van vele biologische processen, zoals celdifferentiatie, proliferatie en apoptose [1]. MiRNAs Aangetoond is oncogene of tumor-onderdrukkende activiteit hebben en gedereguleerde expressie van miRNA vele soorten aangetroffen in verschillende kankers suggereert mogelijke toepassing van miRNAs als biomarkers van kanker en metastase [2-5].

miRNAs zijn verpakt in secretorische microvesicles (bijv exosomes, apoptotische lichamen, en het afstoten van microvesicles), die schild miRNAs tegen afbraak door RNAse en dienen als voertuigen voor miRNA secretie in extracellulaire ruimte en lichaamsvloeistoffen. Exosomes klein membraneuze blaasjes die zijn betrokken bij cellulaire immuunresponsen; Maar recent is duidelijk geworden dat exosomes bevatten aanzienlijke hoeveelheden RNA en kunnen worden betrokken bij immuun-onafhankelijke regulatiemechanismen. Er is nu vastgesteld dat exosomes intercellulaire overdracht van miRNAs kan uitvoeren, dus deelnemen miRNA-gebaseerde signaleringsmechanismen [6]. Hogere-miRNA bevattende exosomes is ook bekend dat in het plasma van kankerpatiënten dan dat van gezonde individuen [7], wat suggereert dat exosome-based miRNA secretie betrokken bij kankerontwikkeling. Analyse van afwijkende miRNA expressie in het serum, speeksel, ontlasting, urine en is gebruikt voor de vroege detectie van B-cellymfoom en orale, intestinale en blaaskankers [8-11].

Maagkanker (GC) is de tweede meest voorkomende oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen in de wereld [12]. Het peritoneum is de meest voorkomende plaats van metastase en herhaling van GC en maligne ascites (MA), als gevolg van peritoneale verspreiding van kankercellen, zijn geassocieerd met een slechte prognose. Momenteel zijn er geen betrouwbare voorspeller voor de ontwikkeling van kwaadaardige peritoneale ascites bij patiënten GC. -MiRNA met exosomes vormen van een nieuw mechanisme van intercellulaire signalering en kunnen inzichten opleveren in het milieu dat toelaat kanker verspreiding in het buikvlies [13].

In deze studie werden exosomes geïsoleerd van MA en de intra-operatieve peritoneale lavage vloeistof (PLF) verkregen van GC patiënten monsters en het kweekmedium (CM) van sterk invasieve peritoneale cellijnen en miRNAs werden vervolgens geëxtraheerd uit deze monsters. De kwaliteit van het gewonnen exosomaal miRNAs en de consistentie van miRNA expressie patronen werden geverifieerd. MiRNA expressie profielen in MA, PLF en CM monsters werden vergeleken en de kandidaat-miRNAs in verband met peritoneale verspreiding van GC werden geïdentificeerd.

Materialen en methoden

Patiënten

Alle patiënten of hun verzorgers mits schriftelijke informed consent. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van Yokohama City University Hospital (Goedkeuring nr A110127001).

MA en intraoperatieve PLF monsters werden verzameld van GC de patiënten met de klinisch-pathologische kenmerken weergegeven in tabel 1. Alle patiënten hadden eerder geweest diagnose GC door histopathologische analyse van biopsie-monsters van de primaire letsels en zes MA patiënten waren gediagnosticeerd op de aanwezigheid van ascites door abdominale computertomografie (CT) scan. Ascites werden ook geanalyseerd door cytologie en al werden bevestigd als positief voor maligniteit door pathologen; de resterende MA monsters werden gebruikt voor miRNA isolatie. PLF werd intra-operatief verzameld van 24 patiënten GC (tabel 1). Na laparotomie werd 100 ml van normale zoutoplossing gegoten in de zak van Douglas en peritoneale lavage water werd opgevangen voor chirurgische resectie van de tumor. PLF werd geanalyseerd door cytologie en voor miRNA isolatie. Onder de 24 PLF monsters, zes werden onderzocht met behulp van miRNA microarray en 18 werden geanalyseerd door qPCR.

Cell cultuur

De OCUM-2M cellijn werd vastgesteld op basis van een primaire tumor van scirrhous maagcarcinoom en de OCUM-2MD3 cellijn werd afgeleid van OCUM-2M cellen met een hoog potentieel voor peritoneale verspreiding in naakt muizen [14]. De cellen werden gekweekt in gemodificeerd Eagle's medium van Dulbecco (DMEM, Life Technologies, Grand Island, NY) aangevuld met 10% hitte-geïnactiveerd foetaal runderserum (FBS) en antibiotica-antimycotische bij 37 ° C in een CO 5% _{2 incubator. Naar cel CM verkrijgen, werden OCUM-2M en OCUM 2MD3-cellen drie keer gewassen met serum-vrij DMEM aangevuld met antibiotische-antimycotische en geïncubeerd in hetzelfde medium gedurende 48 uur.}

Isolatie van exosomes

Monsters voor isolatie exosome werden bereid zoals eerder [15] beschreven. Om grote celdeeltjes en celresten, MA, PLF en CM verwijderen werden gecentrifugeerd bij 2000 x g
gedurende 15 min bij 4 ° C en gefiltreerd door een 0,22 urn filter (Millipore, Billerica, MA). Het supernatant werd bewaard bij -80 ° C voor miRNA extractie.

Om exosomes precipiteren, werden monsters gecentrifugeerd bij 110.000 x g
gedurende 70 min bij 4 ° C. De exosoom pellet werd gewassen met 11 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) en opnieuw gecentrifugeerd zoals beschreven. De pellet werd gebruikt voor RNA-extractie.

Totaal RNA extractie en analyse

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit exosomes met een miRNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Duitsland) volgens de instructies van de fabrikant en werd vervolgens bij -80 ° C totdat ze nodig verdere analyse opgeslagen.

De kwaliteit, de concentratie en de grootte van de totale exosomaal RNA werden bepaald met een Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Foster City, CA). Vóór de analyse werd totaal RNA bereid met een Agilent RNA 6000 Pico kit (Agilent Technologies) volgens het protocol van de fabrikant.

miRNA microarray

MiRNAs geëxtraheerd uit de zes MA, zes PLF, en twee CM monsters werden geanalyseerd met behulp van Agilent Human miRNA microarrays (Agilent Technologies), die 1.226 menselijke miRNAs en 146 menselijke virale miRNAs bevatten. Voor miRNA detectie werd 100 ng RNA gelabeld en gehybridiseerd met de menselijke miRNA Microarray kit (16,0 Rel, Agilent Technologies) volgens het protocol van de fabrikant (miRNA volledige Labeling en Hyb kit voor miRNA Microarray System). Hybridisatie signalen werden gedetecteerd met een DNA microarray scanner G2505C (Agilent Technologies) en de gescande afbeeldingen werden geanalyseerd met behulp van de Agilent Feature Extraction Software (v. 10.7.3.1). Data-analyse werd uitgevoerd met behulp van Agilent GeneSpring GX software v. 11.0.2. (Log _{2 transformatie). Baseline transformatie werd niet uitgevoerd.}

De kwaliteit van miRNA extractie werd geanalyseerd volgens de variabiliteit in het aantal gedetecteerde miRNA microarray-species, signaalintensiteit en de correlatie van miRNA expressie tussen monsters volgens gemiddelde ± SD, variatiecoëfficiënt (CV), en correlatiecoëfficiënt (CC).

Selectie van peritoneale metastase-specifieke miRNAs

De expressie profielen van exosomaal miRNAs werden geanalyseerd om miRNAs die specifiek zijn voor GC peritoneale zijn te selecteren verspreiding met behulp van de volgende stapsgewijze aanpak. Stap 1: miRNA profielen in het CM van de zeer metastatische peritoneale OCUM-2MD3 cellen werden vergeleken met die van de parentale niet-metastatische OCUM-2M cellen en differentieel tot expressie miRNAs (gemiddelde veelvoudverandering > 2) werden geselecteerd <. br>

Stap 2: zes PLF monsters werden ingedeeld in twee groepen: T4 (n = 4) en T1-T3 (n = 2), volgens kankerstadium van tumorgrootte en uitbreiding (UICC-AJCC, 7 ^{e editie). Stadium T4 GC wordt gekenmerkt door de hoogste frequentie van peritoneale metastasen in vergelijking met andere fasen [16]. Het miRNA expressieprofielen T4 groep werden vergeleken met die van de T1-T3-groep en differentieel tot expressie miRNAs (gemiddelde veelvoudverandering > 2) werden geselecteerd}

Stap 3:. Het geselecteerde miRNAs die gemeenschappelijk waren beide stappen en die werden uitgedrukt in MA werden verder gefilterd op basis van intensiteit van het signaal. Degenen met de intensiteit waarden van meer dan log _{2 10 in MA en PLF werden geselecteerd als kandidaat miRNAs in verband met peritoneale metastasen; miR-21 toonde de hoogste gemiddelde intensiteit van het signaal onder MA monsters. De differentiële expressie van miRNA soorten geselecteerd in stap 3 werd in de resterende 18 PLF monsters gevalideerd door qRT-PCR.}

Kwantitatieve analyse van peritoneale metastasen specifieke miRNA expressie door qRT-PCR

TaqMan microRNA assays (Life Technologies) werden gebruikt om de relatieve expressieniveaus van miR-21 kwantificeren (assay ID. 000.397), miR-320C (assay ID. 241053_mat), miR-1225-5p (assay ID. 002.764) en miR-16 (assay ID. 000391). Reverse transcriptie werd uitgevoerd met de TaqMan miRNA RT Kit (Life Technologies) onder de volgende omstandigheden: 30 min bij 16 ° C, 30 minuten bij 42 ° C en 5 minuten bij 85 ° C. PCR werd uitgevoerd in 96-well platen met de 7500 Real Time PCR System (Life Technologies) uitgevoerd; Alle reacties werden uitgevoerd in drievoud. De expressieniveaus van target miRNAs werden genormaliseerd aan die van miR-16, dat werd gebruikt als een stabiel tot expressie control [17]. Bij het analyseren van onze microarray gegevens van exosomaal miRNA in kwaadaardige ascites monsters, miR-16 presenteerde de laagste coëfficiënt van variatie (CV = 4%) tussen de kandidaat interne standaarden, met inbegrip van miR-638 (CV = 8%), laat-7a (CV = 8%), en 142-3p (CV = 23%).

Statistische analyse

Continue variabelen werden vergeleken met behulp van Student's t
-test. Indien nodig, wordt de t
-test werd gewijzigd om ongelijke varianties vergelijken. Het verschil tussen categorische variabelen werd beoordeeld volgens Fisher's exact test. Correlatie tussen twee variabelen werd geëvalueerd met behulp Pearson correlatiecoëfficiënt. Verschillen werden als statistisch significant beschouwd bij P < 0,05. Statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS 21.0 voor Windows (IBM, Armonk, NY).

Resultaten

Kwantitatieve analyse van RNA geëxtraheerd exosomaal

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit geïsoleerde exosomes van MA, intra-operatieve PLF en mobiele CM. De mediane concentratie van de geëxtraheerde exosomaal RNA was 4,4 ng /ul (variërend 1,2-6,1 ng /ul) van MA en 6,4 ng /ul (1,7-16,4 ng /ul) gedurende PLF. Electroferogrammen bleek een groot aantal kleine RNA soorten in alle CM en klinische monsters, terwijl er geen of zeer weinig verontreiniging met 18S en 28S ribosomaal RNA (geen duidelijke pieken bij de overeenkomstige molecuulgewicht) waargenomen (figuur 1).

Prestaties van miRNA microarrays

Om de expressie van exosomaal miRNA microarrays in elke groep van de monsters te testen, onderzochten we het aantal gedetecteerde miRNAs, percentiel van intensiteit van het signaal, het aantal van de meest gevangen miRNAs, en de correlatie van miRNA expressie tussen de groepen. Het aantal miRNA soorten gedetecteerd in elke groep door microarray wordt getoond in figuur 2. In de zes MA en zes monsters PLF, betekenen deze getallen werden 490,1 (SD = 42,3; CV = 8,6%) en 367,5 (SD = 13,4; CV = 3,6%), respectievelijk. In elke groep, de variabiliteit van het aantal gedetecteerde miRNAs onder monsters laag was

Signal intensiteit distributie voor elke groep wordt gepresenteerd in fig. 3; Dit toont de verwerkte signalen genormaliseerd naar 25, 50, 75, en 90 ^{e percentiel in elke groep. In het 50 e percentiel, het logboek _{2 ten opzichte van signaal intensiteiten voor MA (figuren 3-1) en PLF (figuren 3 en 2) monsters en tussen de drie groepen (MA, PLF en CM figuren 3 en 4) was 5,53 ± 0,19 (CV = 3,49%), 6,14 ± 0,24 (CV = 3,87%) en 4,97 ± SD (CV = 5,24%), respectievelijk. De variabiliteit van intensiteit van het signaal tussen de monsters in elke groep, evenals tussen de groepen was laag.}}

De nummers van miRNAs gebruikelijk onder de monsters in de MA, PLF en CM groepen waren 327, 263 en 354 respectievelijk, terwijl dit 194 voor de drie groepen (figuur 4).

Tabel 2 toont de correlatie van miRNA expressie tussen elke twee monsters. De hoogste en de laagste CC waarden waren 0,94 en 0,68, respectievelijk; de gemiddelde CC van alle monsters was 0,79 (CV = 8,86%). In MA, PLF en CM groepen, de CC gemiddelde waarden waren 0,85, 0,88 en 0,90, respectievelijk, en de variabiliteit in de expressieprofielen voor elke groep werd laag.

Selectie van kandidaat miRNAs verband met peritoneale verspreiding

tot op heden zijn geen gegevens beschikbaar over de expressieprofielen van exosomaal miRNAs geassocieerd met peritoneale verspreiding geweest, vanwege het ontbreken van normale ascitesvloeistoffen waartegen de MA expressieprofielen vergelijken. Wij selecteerden miRNAs in verband met peritoneale verspreiding met behulp van een stapsgewijze aanpak. Het aantal miRNAs vaak meegenomen in de zes MA monsters bedroeg 327. Stappen 1 en 2, 140 en 118 metastase-specifieke miRNAs werden geselecteerd in de CM en PLF groepen, respectievelijk. Uit deze 327, 140 en 118 miRNAs werden vijf miRNAs geselecteerd als kandidaten in verband met peritoneale verspreiding (Figuur 5). Twee ervan (miR-1225-5p en miR-320c) en miR-21 met de hoogste signaalintensiteit van de MA-specifieke miRNAs gevalideerd als zijnde differentieel tot expressie in 18 PLF monsters qPCR gebruikt (tabel 3).

Validatie kandidaat miRNA expressie door qPCR

Achttien PLF monsters werden verdeeld in twee groepen volgens de metastatische fase T4 (geperforeerd serosa, n = 9) en T1-T3 (subserosa of minder, n = 9) en de expressie van miR-21, miR-320C en miR-1225-5p werd geanalyseerd met qRT-PCR. Figuur 5 laat zien dat het niveau van miR-21 en miR-1225-5p in T4-stadium GC patiënten waren significant toegenomen in vergelijking met die in T1-T3 patiënten (miR-21, P = 0,027, en miR-1225-5p, P = 0,008; figuur 5). Het verschil in miR-320C expressie tussen twee patiëntengroepen was niet significant (p = 0,928, Fig 6).

Vervolgens de correlatie tussen miRNA niveaus en klinische achtergrond van GC patiënten werd onderzocht (Tabel 4). MiR-21 en miR-1225-5p expressie was significant hoger bij patiënten met T4-stadiumkanker dan in T1-T3-fase patiënten (p = 0,015). Geen significante correlatie gevonden tussen miRNA expressie en andere klinische parameters.

Discussie

In deze studie hebben we onderzocht, voor het eerst, de miRNA inhoud van exosomes geïsoleerd van MA en PLF van GC patiënten. Onze studie toont aan dat exosomaal miRNAs consequent kan worden gewonnen uit MA en PLF en dat miRNA expressie profielen kan de status van buikvlies in GC patiënten aan te geven.

De prognose van GC met serosal invasie blijft slecht, zelfs na R0 resectie, omdat van de hoge mate van herhaling, met name peritoneale metastasen (PM) [18]. PM in GC is de meest gecompliceerde soort van herhaling, omdat het moeilijk te voorspellen en te diagnosticeren. Hoewel ascites is de meest voorkomende symptoom PM, veel GC patiënten met PM niet ontwikkelen ascites. Onder de imaging-gebaseerde diagnostische methoden, is high-speed spiraal CT grote schaal gebruikt voor de beoordeling van de preoperatieve stadiëring van GC en post-therapeutische follow-up; echter bij PM de diagnostische nauwkeurigheid onvoldoende is, vooral vanwege lage gevoeligheid [19]. Met behulp van PET-CT voor PM diagnose GC is controversieel, omdat is gerapporteerd dat FDG-PET lage sensitiviteit voor de detectie van PM in GC [20]. PLF is uitgegroeid tot het volgende doel voor de diagnose en voorspelling van PM in GC. Cytologisch onderzoek van intra verzameld PLF wordt gebruikt voor het voorspellen van peritoneale herhaling [21] en wordt gebruikt voor GC staging Japan [22]. Echter, sommige onderzoekers gemeld dat PLF cytologie de gevoeligheid die nodig is voor de voorspelling en detectie van PM [21] vertoont, en het gebruik van moleculaire diagnostische methoden, zoals RT-PCR zijn voorgesteld voor de detectie van micro-metastasen PLF. In een multicenter prospectieve studie mRNA expressie van de genen die coderen voor carcino-antigeen (CEA) en cytokeratine 20 (CK-20), geëvalueerd door RT-PCR is bruikbaar gebleken voor het voorspellen van overleving en PM in GC zijn [23] . Het nadeel van mRNA-gebaseerde diagnostische methoden is de hoge afbreekbaarheid van mRNA tijdens chirurgische procedures.

Daarentegen miRNAs ingesloten in exosomes stabiel en kunnen circuleren in lichaamsvloeistoffen, zoals serum, plasma , speeksel, urine, moedermelk en tranen, voor langere tijd [24, 25]; exosomes zijn ook geïsoleerd uit MA bij eierstokkanker [26].

Voor zover wij weten is er geen rapport over exosomaal miRNAs geïsoleerd van de PLF van GC patiënten. Levänen et al. verzamelde exosomes van bronchoalveolaire lavage vloeistof en geanalyseerd exosomaal miRNA expressie aan allergie gerelateerde miRNA soorten [27] op te sporen. Liu et al. gemeld dat exosomes geïsoleerd uit cervicovaginal lavage vloeistoffen hoge miR-21, die kan worden gebruikt als een biomarker van cervicale kanker [28]. Hier, analyseerden we de expressie profielen van exosomaal miRNAs in de PLF van GC patiënten door miRNA microarray technologie om de kandidaat-diagnostische miRNA biomarkers te identificeren voor de voorspelling van uitzaaiingen in GC.

In ons onderzoek, de eerste uitdaging lay in de kwantitatieve isolatie van exosomaal miRNA uit PLF. Weber et al. geëvalueerd miRNA expressie in 12 lichaamsvloeistoffen en gemeld dat de totale RNA-concentratie in peritoneale vloeistof was 775 ug /L [25], die minder dan wij van MA en PLF-4400 en 6400 ug /L respectievelijk de reden voor de was verschil kan de methode voor het isoleren van totaal RNA, omdat Weber et al. direct gewonnen RNA van peritoneale vloeistof, terwijl we eerst geïsoleerd exosomes en vervolgens gebruikt deze voor de RNA-extractie. Analyse van de kwaliteit van RNA geïsoleerd uit PLF toonde een overvloed aan kleine (< 200 nt) RNA soorten in CM en MA. Er waren geen duidelijke 18S en 28S ribosomale RNA pieken in de voorbereiding, met vermelding van de afwezigheid van besmetting met intracellulaire RNA.

Het tweede probleem bij dit onderzoek betrokken zijn consistentie in de kwaliteit van de exosomaal miRNAs geïsoleerd. In onze studie zagen we lage variabiliteit in het aantal gedetecteerde miRNA soorten en miRNA signaalintensiteit en een hoge correlatie van miRNA expressie tussen de monsters in elke groep. Het gemiddelde aantal detecteerbare miRNAs in MA en PLF waren 490 en 367, die in overeenstemming met het aantal van miRNAs (397) eerder gedetecteerd in peritoneale vloeistof [25].

PLF en MA toonden lage variabiliteit in signaalintensiteit (CV = 3,87% voor de 50 ^{e percentiel). Verder werden miRNA expressiepatronen sterke correlatie tussen monsters binnen elke groep (CC > 0,850), maar ook tussen groepen (0,8 > CC > 0,7). Deze resultaten geven aan dat PLF een high-yield bron van goede kwaliteit miRNAs, die in overeenstemming zijn expressie patronen in de microarray-test te laten zien zou kunnen zijn.}

De miRNA expressie profielen werden geanalyseerd om miRNAs die specifiek zijn voor peritoneale uitzaaiingen te selecteren. MiR-21 toonde hogere expressie bij patiënten met T4-stadium carcinoom dan bij die van de T1-T3-groep. Fabbri et al. gemeld dat miR-21 en miR-29a in kanker Vrijgegeven exosomes beïnvloed tumorgroei en verspreid door binding aan en activering TLRs in de omringende immuuncellen induceren en een prometastatic ontstekingsreactie [29]; Dit ondersteunde het idee dat tumor afgeleide exosomes bijdragen aan de premetastatic micro [30, 31]. Dit kan dat de T4-carcinoom afgeleid exosomes creëren premetastatic niche in het buikvlies, die vervolgens ondersteunt peritoneale invasie na curatieve resectie van GC aan te geven.

Met behulp van een stapsgewijze aanpak, we vijf exosomaal miRNAs geselecteerd (miR-320C , miR-1202, miR-1225-5p, miR-1207-5p en miR-7270) en gevalideerd miR-320 en miR1225-5p uitdrukking in het PLF 18 CG patiënten door qRT-PCR. Mir-1225-5p vertoonden hogere expressie in T4 dan T1-T3 fase CG patiënten bevestigde de resultaten die microarray, terwijl er geen verschil in miR-320 niveaus tussen patiëntengroepen. Mir-1225 doelstellingen van de polycystische nierziekte gen, PKD1
, die vaak is gemuteerd in polycysteuze nieren; aldus kan miR1225 de progressie van de ziekte [31] beïnvloeden. Het verband tussen miR-1225 en kanker blijft onduidelijk. MiR-21 en miR-1225-5p kan een premetastatic niche te bereiden in het buikvlies voor de verspreiding en de afwikkeling van metastaseren kankercellen en daarmee kan de aanleg voor de peritoneale recidief na curatieve GC resectie te geven.

PLF levert informatie over de status van het peritoneum, zoals veranderingen in de populatie van immuuncellen en secretie van groeifactoren en cytokinen [32, 33]. Cytologie en moleculaire diagnostische assays zijn gebaseerd op de detectie van kankercellen, terwijl profilering van miRNAs in PLF kan worden gebruikt voor het voorspellen van een peritoneale premetastatic fenotype in GC, doeltreffender preventieve en curatieve maatregelen.

• PLoS ONE: Zic1 Promoter Hypermethylering in Plasma DNA is een potentiële biomarker voor maagkanker en intra-epitheliale Neoplasia
• PLoS ONE: MicroRNA-206: Effectieve Remming van maagkanker Progression door de c-Met Pathway