PLoS ONE: A New Polymorphism Biomarker rs629367 assosiert med økt risiko og dårlig overlevelse av magekreft i kinesisk ved oppregulert miRNA-la-7a Expression

Abstract

Bakgrunn

Variant i pri -miRNA kunne påvirke miRNA ekspresjon og modne prosess eller skjøting effektivitet og dermed endrer den arvelige følsomhet og prognose av kreft. Vi forsøkte å vurdere miRNA-la-7 enkeltnukleotidpolymorfi (SNP) forbundet med risiko og prognose for magekreft (GC) som forutsi biomarkører, og dessuten dens mulige mekanismer.

Metoder

En to-trinns case-control studie ble utformet for å skjerme fire miRNA SNPs (pri-la-7a-2 rs629367 og rs1143770, pri-la-7a-1 rs10739971, pri-la-7F-2 rs17276588) i 107 GC pasienter , 107 atrofisk gastritt (AG), og matchet 124 kontroller ved hjelp av PCR-RFLP. To lovende SNPs ble validert i en annen uavhengige 1949 prøver (inkludert 579 mage kreftpasienter, 649 atrofisk gastritt og 721 kontroller) ved hjelp Sequenom MassARRAY plattform og sekvensering.

Resultater

Vi fant at pri-la -7a-2 rs629367 CC variant genotype var assosiert med økt risiko for magekreft og atrofisk gastritt med 1,83 ganger og 1,86 ganger, henholdsvis. For magekreft prognose, pasienter med rs629367 CC genotype hadde signifikant dårligere overlevelse enn pasienter med AA genotype (log-rank P
= 0,004). Vi videre undersøkt la-7a uttrykk nivåer i serum og funnet ut at la-7a uttrykk forhøyet gradvis for rs629367 AA, CA, CC genotype i atrofisk gastritt gruppe ( P
= 0,043). Videre fikk vi bekreftet disse funnene in vitro studie av overekspresjon la-7a bærer pri-la-7a-to villtype A eller polymorfe-type C-allelet ( P
< 0,001).

Konklusjoner

pri-la-7a-2 rs629367 CC genotype kan øke risikoen for magekreft samt atrofisk gastritt og var også assosiert med dårlig overlevelse av magekreft, noe som muligens ved å påvirke den modne la-7a uttrykk, og kan tjene som et forutsi biomarkør for høy risiko og dårlig prognose av magekreft

Citation. Xu Q, Dong Q, han C, Liu W, Sun L, Liu J et al. (2014) En ny Polymorphism Biomarker rs629367 assosiert med økt risiko og dårlig overlevelse av magekreft i kinesisk ved oppregulert miRNA-la-7a Expression. PLoS ONE 9 (4): e95249. doi: 10,1371 /journal.pone.0095249

Redaktør: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, USA

mottatt: 26 januar 2014; Godkjent: 24 mars 2014; Publisert: 23 april 2014

Copyright: © 2014 Xu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet er støttet med tilskudd fra National Key Basic Research Program of China (973 Program Ref. 2010CB529304), Natural Science Foundation National of China (Ref nr 31200968), og Science Technology Project i Liaoning-provinsen (Ref nr 2011225002) . Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

microRNAs (mirnas) er 18-25 nucleotide (nt)-lang, enkelt-strandet kodende RNA [1]. Enhver variasjon i pri-miRNA, pre-miRNA eller moden miRNA kan påvirke modne prosessen og funksjon av miRNA, noe som ytterligere kan påvirke ekspresjon av hundrevis av proteiner i interaksjonen veien [2]. Til en viss grad, spilte variant av miRNA en del som en "onkogen" eller "tumor suppressor gen" indirekte [3].

la-7 er den andre identifiserte miRNA etter oppdagelsen av den første miRNA, lin -4 [4] - [6]. Den la-7 familien har 10 medlemmer inkludert la-7a å la 7g, la-7i, MIR-98 og MIR-202. Den la-7 familien spiller en avgjørende rolle i å opprettholde normal fysiologisk funksjon av menneskelig. For eksempel kan den pri-miRNA av la-7 familie kombinere med LIN28 og undertrykke skjøting fremgangsmåten i drosha og dicer, to viktige restriksjonsenzymer som omfatter i det modne prosess for alle miRNA [7]. I tillegg, ved å banke ned drosha enzym for å undertrykke all miRNA moden prosess omfattende, Kumar på al fant at den viktigste årsaken til aktivering og fremming av cellens malign transformasjon var nedregulering av la-7 familie uttrykk [8]. Selv om mange tidligere studier har bidratt i stor grad til å illustrere de biologiske funksjonene til la-7 familie, har noen Studien fokuserte på genetiske variasjoner av medlemmer av familien. Faktisk, hvis to individer ble utvalgt tilfeldig, kan deres genomer demonstrere omtrent 0,1% mangfold, hvorav de mest vanlige mangfoldet var SNP [9]. På grunn av eksistensen av disse forskjeller, kan det samme genet fører til forskjellige genuttrykk produkter som kan resultere i forskjellig sykdom mottakelighet, arvelig fenotype og prognose for sykdom [10].

Tidligere studier viste at pri-miRNA SNP'er kan anvendes som genetiske markører for å forutsi risikoen for kreft. For eksempel ble pri-MIR-185 rs2008591 forbundet med risiko for brystkreft [11]; pri-MIR-34b /c rs4938723 var assosiert med risiko for leverkreft [12]. I denne studien, ved hjelp av data fra NCBI bioinformatikk databaser, vist vi alle SNPs i primær forløper området la-7 familien (± 600 bp), og fant at bare fire SNPs (pri-la-7a-1 rs10739971, pri -La-7a-2 rs629367 og rs1143770, pri-la-7F-2 rs17276588) hadde Minor allelfrekvens (MAF) > 5% i kinesiske befolkningen, og de var alle tagSNPs i Hapmap database. Så langt har få studier nevnt forholdet mellom de fire tagSNPs og sykdomsrisiko prediksjon bortsett schizofren lidelse [13], ikke-småcellet lungekreft [14] og diabetisk nefropati [15]. Deres potensielle rolle i å forutsi risikoen for kreft er fortsatt i stor grad ukjent

Magekreft er den nest største årsaken til kreftdød over hele verden og en av de hyppigste kreftformer i Øst-Asia og kinesiske populasjoner [16] -. [18]. Studier har vist at flere miRNA SNPs var forbundet med magekreft [19] - [22]. Men om de ovennevnte fire tagSNPs i pri-miRNA gener av la-7 var assosiert med risiko for magekreft og atrofisk gastritt i kinesisk populasjon, om det kan brukes som en prediktiv genetisk biomarkør for magekreft, og den spesifikke mekanismen for hvordan de regulerer risikoen sykdommen fortsatt må avklares.

i denne studien, må vi først vurdert sammenhengen mellom disse fire kandidat tagSNPs i pri-la-7a og mottakelighet av magekreft og dens forløper ved å gjennomføre en to-trinns case-kontrollstudie på kinesisk. Samtidig undersøkte vi om den risiko assosiert polymorfisme bidrar mot magekreftpasienters overlevelse. Videre undersøkte vi effekten av risiko-assosiert polymorfisme på å regulere sin modne miRNA uttrykk i serum og mage vev samt utforsket dens mulige reguleringsmekanisme i modulerende sykdomsrisiko og overlevelse. Ved å gjennomføre denne studien, håper vi å foreslå potensiell anvendelse utsiktene til studerte SNP som et forvarsel biomarkør for personer med høy risiko for magekreft og dens forstadier sykdom (atrofisk gastritt).

Metoder

Pasienter og studiedesign

Dette forskningsprosjektet ble godkjent av etisk komité i First Affiliated Hospital i Kina Medical University og studien ble delt inn i tre selvstendige, men relaterte deler inkludert risiko, prognose og mekanismer forskning . Risikoen del var to trinn er utformet, er en silanordning, og den andre er validert trinn. Å belyse sammenslutning av kandidat SNPs med magekreft og atrofisk gastritt risiko, screening scenen i ettertid rekruttert prøver inkludert 338 tilfeller, som består av 107 mage kreftpasienter, 107 atrofisk gastritt tilfeller og 124 matchede kontroller fra First Affiliated Hospital of China Medical University mellom 2005 og 2010. i validert scenen, vi undersøkte totalt 1949 saker, inkludert 579 magekreft, 649 atrofisk gastritt og 721 friske kontroller fra en helsesjekk program for magekreft screening i Zhuanghe i Liaoning-provinsen, Kina eller fra pasienter i først Affiliated Hospital of China Medical University, ble mellom 2002 og 2013. Alle fag i denne studien endoskopisk og histologisk bekreftet. Klassifiseringen av magekreft ble delt i intestinal-type og diffus-type for undergruppeanalyse som var basert på Lauren klassifikasjon [23], [24]. Klassifisering og gradering av gastritt var basert på oppdatert Sydney System [25], [26]. Temaer som ble endoskopisk og histologisk bekreftet med normal slimhinne eller bare minimal gastritt uten annen systemisk sykdom eller andre magesykdommer fungerte som kontroller. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra pasienter og medisinsk historie (inkludert alder, kjønn, røyking og alkoholforbruk) innhentet av spørreskjema og postene ble datastyrte som tidligere beskrevet [24].

For ytterligere å undersøke sammenhengen risiko-assosiert polymorfisme med clinicopathologic parametere og overlevelse i magekreftpasienter, vi brukte data fra 150 mage krefttilfeller, hvis informasjon for død eller overlevelse var tilgjengelig. Svulsten histologisk grad ble vurdert av Verdens helseorganisasjon kriterier og svulster ble iscenesatt ved hjelp av syvende utgaven av TNM staging system av International Union Against Cancer (UICC) /amerikanske Joint Committee on Cancer (AJCC) (2010) basert på postoperativ patologisk undersøkelse . Pasienter (I) med fjernmetastaser funnet preoperativt, (ii) som gjennomgikk preoperativ strålebehandling eller kjemoterapi, eller (iii) med ufullstendige patologiske data oppføringer ble ekskludert fra overlevelsesanalyse. Oppfølging ble gjennomført i august 2013. Endelig 150 pasienter ble inkludert i overlevelsesanalyse.

For vurdering av sammenhengen mellom risiko-assosiert polymorfisme og dens miRNA uttrykk i serum, 364 tilfeller blant 164 magekreft, 100 atrofisk gastritt og 100 friske kontroller ble undersøkt. Karakteristikken av inkluderte pasienter ble vist i Tilleggs Tabell S1. I tillegg til vurdering av sammenhengen mellom risiko-assosiert polymorfisme og dens miRNA uttrykk i mage vev, ble 97 ikke-canceous prøver og 94 mage kreftprøver innhentet fra 97 pasienter som gjennomgikk gastrektomi ved First Affilicated Hospital i Kina Medical University mellom 2009 og 2013.

motivets genotyping

Genomisk DNA ble ekstrahert som beskrevet tidligere med noen endringer [27]. Den genotyping Analysen ble utført ved CapitalBio (Beijing, Kina) bruker Sequenom MassARRAY plattform (Sequenom, San Diego, CA, USA) som tidligere beskrevet [24]. 5% av hele prøvene ble gjentatte ganger genotypet, og den samstemmighet var 100%, noe som viser at genotypingen var korrekt. De detaljerte materialene er vist i de utfyllende metoder.

Påvisning av serum H.pylori-IgG titer

I henhold til den metode som er beskrevet i litteraturen [28], serum H. pylori
-IgG titer ble oppdaget av enzymbundet immunosorbent analyse (ELISA, Helicobacter pylori IgG kit; Biohit, Helsinki, Finland). De detaljerte materialer ble vist i utfyllende metoder.

RNA ekstraksjon og real-time PCR reaksjon for miRNA uttrykk in vivo

miRNA hentet metode fra serum og vev ble brukt som beskrevet av litteraturen [29] med noen modifikasjoner. Den revers transkripsjon reaksjonen ble brukt One Step Prime Script miRNA cDNA (Perfect Real Time) Kit (TAKARA Biotechnology Co., Ltd, Dalian, Kina) og Real-time PCR reaksjonen ble brukt miRcute miRNA qPCR deteksjon kit (SYBR) (TIANGEN Biotech Co ., Ltd, Beijing, Kina). De detaljerte materialer ble vist i utfyllende metoder.

Transient transfeksjon og real-time PCR reaksjon for miRNA uttrykk in vitro

Den kommersielle uttrykk plasmid pCMV-MIR-la-7a-2 rs629367- C ble kjøpt fra Origene Company (Origene Biotech Co., Ltd, Shanghai, Kina). Dette plasmidet ble gjennomført en stedsspesifikk mutagenese på -216 fra C til A (pCMV-la-7a-2 rs629367-A) ved Sainuo Company (Sainuo Biotech Co., Ltd, Beijing, Kina) og bekreftet ved sekvensering. Og kandidatcellelinjer ble sekvensert for å genotype pri-la-7a-2 rs629367 stedet for å undersøke om det var noen variant av dette rs629367 polymorfisme nettstedet. Deretter cellelinjene av villtype og også den laveste to la-7a uttrykk, SGC-7901 og AGS, ble valgt for transfeksjon (flere detaljer se Utfyllende Metoder og Supplerende Figur S2). Den menneskelige gastrisk karsinom cellelinje, AGS ble kjøpt fra ATCC, American Type Culture Collection, USA og SGC-7901 ble kjøpt fra Cell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, Kina. Etter 72 timer ble det totale RNA av celler hentet og Real-time PCR ble brukt til å oppdages la-7a uttrykk etter revers transkripsjon for å sammenligne den modne la-7a produsert av pCMV-la-7a-2 rs629367-A vs. pCMV-la-7a-2 rs629367-C.

statistikker

de studerte fire miRNA polymorfismer ble testet for Hardy-Weinberg likevekt (HWE) blant kontrollene. De kontinuerlige variabler er vist som gjennomsnitt ± standardavvik (SD) og sammenlignet ved analyse av varians, mens de diskrete variabler ble fremstilt som frekvenser og prosenter og forhold ved χ2 test [24]. Multivariat logistisk regresjon justert for alder, kjønn og H. pylori
infeksjon ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom miRNA polymorfismer og sykdomsrisiko. Fordi røyking og alkoholbruk hadde nesten en tredjedel mangler data var ikke egnet som justeringsfaktorer, bare som stratifiserte faktorer for analyse av sammenhengen mellom miRNA polymorfismer og sykdomsrisiko. Univariate og multivariate overlevelsesanalyser ble utført av log-rank test og Cox modell. Overlevelseskurver ble kartlagt ved hjelp av Kaplan-Meier-metoden. Multivariat overlevelsesanalyse ble utført ved å tilsette SNP til alle clinicopathological parametere med P
< 0,05. I tillegg ble kopier av miRNA anvendt lg verdi for en normalfordeling, og effekten av miRNA polymorfismer for sin ekspresjonsnivåer ble testet ved analysen av varians (ANOVA) test. Korrelasjonen av la-7a ekspresjon i serum og vev ble vist som korrelasjonskoeffisienten av korrelasjonsanalysen. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av SPSS versjon 16,0 programvare (SPSS, Chicago, IL, USA) og i screening scenen, p-verdier og lt; 0,10 ble betraktet som signifikant mens alle andre analyser ble ansett som p-verdier. ≪ 0,05 som betydelig

Resultatene

viktigste effekten av miRNA polymorfismer på magekreft og atrofisk gastritt risiko

genotypefrekvensene av studerte SNP i screening scenen ble vist i tabell 1 og electrophoretogram og sekvense figur av disse fire miRNA polymorfismer genotyper ble vist i Tilleggs figur S1. pri-la-7F-2 rs17276588 ble ekskludert fra videre analyse fordi den avvek fra HWE. To SNPs ble ansett lovende til å bli assosiert med sykdom risiko: de varianten genotypefrekvensene av pri-la-7a-1 rs10739971 mellom atrofisk gastritt og kontrollgruppen viste statistisk forskjell (27,1% vs. 13,7%, P
= 0.018, Tabell 1), og den varianten genotypefrekvensene av pri-la-7a-2 rs629367 mellom magekreft og kontrollgruppen viste også forskjell (1,9% vs.6.5%, P
= 0,094, Tabell 1) . Vi vurderte p-verdi < 0,10 som betydelig og valgte dette to lovende SNP-områder til validert scenen

For å bekrefte sammenslutning av pri-la-7a-1 rs10739971 og pri-la-7a-2 rs629367 polymorfismer. med magekreft og /eller atrofisk gastritt risiko, vi re-evaluert disse to SNPs i ytterligere 1949 tilfeller i forstørret validert scenen. Frekvensen av polymorfismer i alle prøvene er vist i tabell Tilsetnings S2. Friske kontroller var frekvens tilpasset magekreft og atrofisk gastritt tilfeller av alder (± 5 år) og kjønn (01:01). Etter frekvenstilpasning, ble bare 501 magekreft og 501 kontroller for magekreft risikoanalyse og 612 atrofisk gastritt og 612 kontroller for atrofisk gastritt risikoanalyse endelig inkludert. I den forstørrede validert stadiet, varianten genotypefrekvensene av pri-la-7a-2 rs629367 mellom magekreft og kontrollgruppen var statistisk forskjellig (6,4% vs. 4,0%, tabell 1). Sammenlignet med vanlige AA genotype ble variant CC genotype assosiert med en 1,83 ganger økt risiko for magekreft ( P
= 0,048, 95% CI = 1,01 til 3,32, tabell 1), og var også assosiert med en 1,86 ganger økt risiko for atrofisk gastritt ( P
= 0,032, 95% KI = 01.06 til 03.28, tabell 1). I tillegg ble variant CC genotype forbundet med en 1,93 ganger høyere risiko for atrofisk gastritt i forhold til (A + AC) genotyper ( P
= 0,021, 95% CI = 1,11 til 3,36, tabell 1) , Men gjorde vi ikke observere statistisk signifikant sammenheng mellom pri-la-7a-1 rs10739971 og sykdomsrisiko i den validerte scenen.

Stratifisert analyse og interation analyse

For ytterligere å undersøke potensialet innflytelse av alder, kjønn og miljømessige faktorer som status for h.pylori
infeksjon, røyking og drikking av alkohol på genetisk effekt, utførte vi stratifiserte analyser for pri-la-7a-en rs10739971 og pri-la-7a-2 rs629367 polymorfismer basert på disse faktorene (tabell 2). Vi har observert ulike effekter av pri-la-7a-2 rs629367 på sykdomsrisiko i ulike undergrupper. Statistisk sammenheng mellom CC genotype og økt atrofisk gastritt risiko ble funnet hos kvinner ( P
= 0,025, OR [95% CI] = 2,59 [1,13 til 5,92]), H. pylori
serologi-negative undergruppe ( P
= 0,036, OR [95% CI] = 1,97 [1,05 til 3,73]), og i ikke-drikking undergruppe ( P
= 0,023 ELLER [95% CI] = 2.44 [1.13 til 5.26]). I tillegg ble det CC genotype funnet å være assosiert med økt magekreftrisiko hos pasienter med alders ≦ 50 år gammel ( P
= 0,026, OR [95% CI] = 6,02 [1,24 til 29,10]) og H. pylori
serologi-negative undergruppe ( P
= 0,036, OR [95% CI] = 2,02 [1,05 til 3,90]). Men når vi utførte interaksjonsanalyse mellom rs629367 SNP og H. pylori
infeksjon, røyking og drikking av alkohol, ingen statistisk interaksjon effekt ble funnet ( P
_{samhandling = henholdsvis 0,786 og 0,382, se Utfyllende Tabell S3). Ingen signifikant sammenheng ble funnet mellom pri-la-7a-1 rs10739971 og magekreft eller atrofisk gastritt risiko i noen stratifisert analyse.}

Sammenheng mellom pri-la-7a-2 rs629367 polymorfi og clinicopathologic parametere og lengde for å overleve av magekreftpasienter

på grunn av observasjon av statistisk signifikant sammenheng mellom rs629367 og magekreft og atrofisk gastritt risiko i den viktigste effekten analyserer og stratifiserte analyser, vi videre undersøkt om risikoen-forbundet rs629367 korrelerer med clinicopathologic fenotype og prognostisk overlevelse av magekreft. Resultatene viste at ingen signifikant korrelasjon av denne SNP ble funnet med clinicopathological parametere inkludert tumorstørrelse, tumor plassering, Borrmann typen, histologisk type Lauren type TNM trinn, vekstmønster, dybden av invasjon, lymfatisk metastase, h.pylori
smittestatus, røyking, drikking og familiens historie ( P
> 0,05, se Utfyllende tabell S4), men dette SNP ble funnet i forbindelse med magekreft overlevelse. CC genotypen bærere viste ugunstig overlevelse (CC vs AA: 22,2 måneder versus 32,0 måneder) og økte timer for mage kreftpasienter i univariat analyse (CC vs AA: P
= 0,011, HR [95% CI] = 3,39 [1,33 til 8,65]; CC vs AA + AC: P
= 0,005, HR [95% CI] = 3,51 [1,45 til 8,49]; tabell 3 og figur 1-A og - B). Ved å justere for flere clinicopathological parametere som var potensielle konfunderende faktorer korrelert med magekreft overlevelse ( P
≤0.0001 for tumorstørrelse, Borrmann type, TNM stadium, dybden av invasjonen og lymfatiske metastase, se Utfyllende tabell S5), statistisk økt HRS ble også oppnådd for CC operatører i multivariat analyse (CC vs AA: P
= 0,004, HR [95% CI] = 4,48 [1,60 til 12,60]; CC vs AA + AC: P
= 0,001, HR [95% CI] = 4,69 [1,84 til 11,95], Tabell 3).

Sammenheng mellom rs629367 og modne la-7a uttrykk i serum og Selge mage vev

for å studere den mulige mekanisme for rs629367 polymorfisme knyttet til magekreft, vi videre undersøkt modne la-7a ekspresjon in vivo og vitro. Pasientenes egenskaper som er valgt for studiet av ekspresjon i serum og vev er vist i Tabell Tilsetnings S6. I serum nivå, stratifisert på ulike sykdommer, fant vi at i atrofisk gastritt gruppe, moden la-7a uttrykk for rs629367 AA, CA, CC genotype viste en tendens til gradvis økende, og denne forskjellen hadde en statistisk signifikant (3,30 ± 0,56 Vs . 3.52 ± 0.55 Vs. 3,76 ± 0,34, P
= 0,043, Tabell 4, Figur 2-A). I vev nivå, analyserte vi virkningen på la-7a SNP genotyper på sin modne la-7a uttrykk i magekreft vev, og fant rs629367 AA, CA, CC genotype viste også en tendens til gradvis økende, selv om denne forskjellen ikke statistisk betydning (tabell 4).

Den modne la-7a uttrykk for pCMV-MIR-pri-la-7a-2 rs629367-A og C

Først kandidatcellelinjer ble sekvensert å genotype pri-la-7a-2 rs629367 stedet og funnet at disse kandidat cellelinjer ble alle rs629367 villtype (se Utfyllende Figur S3). I vitro nivå, ble SGC-7901 og AGS cellelinjer transinfected i to plasmider, pCMV-MIR-pri-la-7a-2 rs629367-A og pCMV-MIR-pri-la-7a-2 rs629367-C. Etter 72 timer, modne la-7a uttrykk hadde statistisk signifikans i SGC-7901 cellelinje ( P
< 0,001, Figur 2-B). Varianten C-allelet uttrykt et høyere la-7a sammenlignet med den gamle A-allelet. Den AGS cellelinje fikk ingen statistisk signifikans og bare viste tendens i samsvar med SGC-7901 (se Utfyllende figur S4).

Diskusjoner

Basert på ulike studier om modne mirnas funksjoner [30], det har vært godt akseptert at miRNA spiller en viktig rolle i utvikling av kreft som en "onkogen" eller "tumorsuppressorgen" [31]. Men fortsatt må forholdet mellom miRNA varianter og kreftrisiko samt prognose avklares [32]. I denne studien har vi rapportert, for første gang, distribusjons frekvenser av fire miRNA tagSNPs (pri-la-7a-1 rs10739971, pri-la-7a-2 rs629367 og rs1143770, pri-la-7F-2 rs17276588) i Nord-kinesisk. Vi ytterligere validert lovende polymorfi steder i selvstendige og utvidet prøver og funnet variant CC genotype av pri-la-7a-2 rs629367 økte risikoen for magekreft og atrofisk gastritt til 1,83 og 1,86 ganger, samt assosiert med dårlig overlevelse av magekreftpasienter. Vi har utforsket ytterligere virkningen av pri-la-7a-2 rs629367 på sin ekspresjon og de mulige mekanismer, og indikerte at mekanismen kan på grunn av den vekslingen av modne la-7a uttrykk, som til slutt kan endre følsomheten og prognose for gastrisk kreft. Så vidt vi vet, er dette den første rapporten om forholdet mellom rs629367 SNP med følsomhet og prognose for magekreft.

Som vi vet, genetiske variasjoner som oppstår i miRNA gener, inkludert deres pri- og pre-miRNA regioner vil ha mulighet til å påvirke flere biologiske trasé og påvirkning sykdom forekomst [33]. Således kan pri- og pre-miRNA polymorfismer anvendes som genetiske markører for å forutsi risikoen for kreft [32], [34], som har flere fortrinn og styrke enn kodende gen-polymorfismer ved å forutsi potensiell fordi mirnas ofte plassert i kreft-assosiert genomisk regioner [35] og kunne regulere nesten alle de kodende genene [36]. Nylig ulike studier fokusert på de pre-miRNA polymorfismer ligger på stilk-løkke, for eksempel pre-mir-196a2 rs11614913 [37], pre-mir-146a rs2910164 [38], forhånds mir-499 rs3746444 [39], [40], pre-mir-149 rs2292832 [41], pre-mir-27a rs895819 [42]. På grunn av kompleksiteten i RNA plass struktur, hadde økt oppmerksomhet er betalt til SNP på pri-miRNA. Representanten pri-miRNA SNPs var pri-MIR-185 rs2008591 assosiert med brystkreft [11], pri-MIR-34b /c rs4938723 forbundet med leverkreft [12], pri-MIR-30c rs928508 [22] og pri-MIR -938 rs2505901 [43] forbundet med magekreft. la-7 familier var mest tidligere identifiserte mirnas [4] og spiller en avgjørende rolle i å opprettholde normal fysiologisk funksjon av menneskelig. Ved å bruke NCBI bioinformatikk databaser, fant vi 4 SNPs i primær forløper området la-syv familie (pri-la-7a-1 rs10739971, pri-la-7a-2 rs629367 og rs1143770, pri-la-7F-2 rs17276588) hadde Minor allelfrekvens (MAF) > 5% i kinesiske befolkningen, som var alle tagSNPs men deres potensielle forutsi roller var uklart. I denne studien, ved screening og validere to etapper studie vi først fant at blant 4 tagSNPs, pri-la-7a-2 rs629367 polymorfisme var assosiert med mottakelighet av magekreft (varianten CC genotype av pri-la-7a-2 rs629367 økte risikoen for magekreft og atrofisk gastritt til 1,83 og 1,86 ganger). Dette pri-la-7a-2 rs629367 SNP ble plassert i nedstrøms 3'-UTR, som var nærmeste SNP med modne miRNA gener blant de fire screening SNPs, og det ville være en ny biomarkør i å forutsi magekreftrisiko.

Vi utførte ytterligere univariat og multivariat Cox regresjonsanalyse av oppfølgingsdata for å utforske de sammenslutninger av pri-la-7a-2 rs629367 SNP med total overlevelse av mage kreftpasienter. Konsekvent betydelige resultater ble observert fra univariate og multivariate Cox modeller (Tabell 3). Den pri-la-7a-2 rs629367 variant CC genotypen bærere viste økt HR med en P
-verdi på 0,011 (HR = 3,39) og 0,005 (HR = 3,51) sammenlignet med AA villtype og AA + AC genotype henholdsvis i univariat analyse. Fordi flere clinicopathological parametere bidratt vesentlig til generelle magekreft overlevelse ( P
≤0.0001 for tumorstørrelse, Borrmann type, TNM stadium, dybden av invasjonen og lymfatiske metastase), utførte vi analyse med justering for de potensielle konfunderende faktorer i den multivariate analysen. Til slutt fant vi P
-verdi av dette rs629367 SNP var mer betydelig og statistiske HRS ble også økt (CC vs AA: P
= 0,004, HR = 4,48; CC vs. AA + AC: P
= 0,001, HR = 4,69, henholdsvis), noe som tyder på at pri-la-7a-2 rs628367 kan være en uavhengig risikofaktor for magekreft prognose

Flere studier. avslørte at miRNA polymorfismer forringe miRNA behandling og ekspresjon av moden miRNA og spille en rolle i karsinogenese [12], [33]. For å studere den mulige mekanisme for rs629367 polymorfisme knyttet til magekreft, i denne studien undersøkte vi effekten av pri-la-7a SNP på den modne la-7a uttrykk både in vivo og vitro. Kontrollere for sykdommen faktor, vi fant i serum atrofisk gastritt gruppe, moden la-7a uttrykk for rs629367 AA, CA, viste CC genotype en betydelig gradvis øke ( P
= 0,043, Tabell 3). Dette kan delvis forklare fenomenet at varianten CC genotypen til rs629367 hadde en høyere frekvens fordeling i atrofisk gastritt gruppe enn i kontrollgruppen (6,2% mot 3,9%, tabell 1). Forholdet av rs629367 CC genotype med økt atrofisk gastritt risiko indikerte at dette SNP var forbundet med atrofisk gastritt og til og med magekreft muligens ved veksling av det modne miRNA uttrykket, som derved påvirker mottakelighet for magekreft. På grunnlag av ekspresjonsnivået in vivo, vi videre konstruerte uttrykt plasmid innehold pri-la-7a-2 rs629367 vill-type A-allel og variant C-allel for å observere den modne la-7a ekspresjon av de to forskjellige allelet. Vi fant at etter transinfection, SGC-7901 celler som inneholder pCMV-MIR-pri-la-7a-2 rs629367-C-allelet demonstrerte høyere modne la-7a uttrykk enn for A-allelet ( P
< 0,001, Figur 1). Den oppnådde fra vitro eksperiment resultat ble accordant med den til vivo, som også viser at pri-la-7a-2 rs629367 polymorfisme kan påvirke den modne la-7a ekspresjon og endre mottakelighet for magekreft. Flere studier har rapportert at la-7a var tumor suppressor [44], [45]. Vi har spekulert på at variasjonen fra A til C kanskje tap sin opprinnelige funksjon av tumor undertrykkende, noe som kan endre magekreft følsomhet og fører til dårlig overlevelse for prognose.

Magekreft er en multi-faktoriell sykdom forårsaket av genetisk predisposisjon så vel som miljømessige faktorer [46]. For å undersøke potensialet påvirkning av alder, kjønn og miljømessige faktorer som status for h.pylori
infeksjon, røyking og alkohol drikking på genetisk effekt, vi videre analysert virkningene av mulige påvirkningsfaktorer på denne pri-la-7a -2 rs629367 SNP, og fant pri-la-7a-2 rs629367 ble bare forbundet med sykdomsrisiko i H. pylori
serologi-negative pasienter gruppe og i ikke-drikking gruppe. I H. pylori
serologiske-negative pasienter, ORS for foreningen av rs629367 SNP og atrofisk gastritt og mage kreft risiko forhøyet til å være 2,12 og 1,97 ganger, noe som var høyere enn ORS i hele tilfeller (1,83 og 1,86 ganger i henholdsvis) . Men det var ingen statistisk signifikans i H. pylori
serologiske-positive pasienter. Tilsvarende dette fenomenet ble også observert i stratifisert analyse av drikkevann: i ikke-drikking gruppe, eller for foreningen av rs629367 SNP og atrofisk gastritt risiko forhøyet til å være 2,39 ganger, mens det ikke var noen statistisk signifikans i gruppen som drakk. Dette kan være fordi h.pylori Hotell og drikking var assosiert med forekomst av magekreft. Brenner et al. hadde en hypotese om at h.pylori
var en nødvendig årsak til magekreft [47], og Tramacere et al. fant ut at det var en sterk sammenheng mellom drikking og forekomst av magekreft [48], [49]. Derfor er fjerning av disse to miljøfaktorer tatt opp ORS høyere enn å analysere hele prøvene.

• PLoS ONE: The NOD-like receptor Signale Pathway i Helicobacter pylori infeksjon og relaterte Gastric Cancer: En case-control studie og genuttrykk Analyser
• PLoS ONE: laparoskopisk Spleen bevarmilt hilar lymphadenectomy utføres ved å følge den Perigastric Beslag og Intrafascial Space for Advanced Øvre tredjedel Gastric Cancer