PLOS ONE: Uma Nova Polimorfismo Biomarcador rs629367 associadas com risco aumentado and Poor Sobrevivência de Câncer Gástrico em chinês por sobre-regulada miRNA-deixá-7a Expression

Abstract

Fundo

Variant no pri -miRNA poderia afetar a expressão miRNA e processo maduro ou eficiência splicing, alterando assim a susceptibilidade hereditária e prognóstico do câncer. Nós teve como objetivo avaliar miRNA-let-7 polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) associados ao risco e prognóstico de câncer gástrico (GC) como a previsão biomarcadores e, além disso, seus possíveis mecanismos.

Métodos

Um estudo de caso-controle de dois estágios foi projetada para a tela de quatro miRNA SNPs (pri-let-7A-2 rs629367 e rs1143770, pri-let-7A-1 rs10739971, pri-let-7F-2 rs17276588) em 107 pacientes GC , 107 gastrite atrófica (AG), e combinados utilizando 124 controlos de PCR-RFLP. Dois SNPs promissores foram validados em mais de 1949 amostras independentes (incluindo 579 pacientes de câncer gástrico, 649 gastrite atrófica e 721 controles) que utilizam a plataforma Sequenom MassARRAY e sequenciamento.

Resultados

Nós descobrimos que pri-let 7.º-2 rs629367 CC genótipo variante foi associada com aumento do risco de câncer de estômago e gastrite atrófica por 1,83 vezes e 1,86 vezes, respectivamente. Para prognóstico do câncer gástrico, pacientes com rs629367 CC genótipo apresentaram sobrevida significativamente mais pobres do que os pacientes com genótipo AA (log-rank P
= 0,004). Nós investigamos ainda mais os níveis de expressão let-7A no soro e descobriram que a expressão let-7a elevada gradualmente para AA rs629367, CA, o genótipo CC no grupo gastrite atrófica ( P
= 0,043). Além disso, confirmou esses achados em estudo in vitro pela superexpressão deixá-7a transportando pri-deixá-7a-2 do tipo selvagem A ou do tipo polimórfico alelo C ( P Art < 0,001).

Conclusões

pri-deixá-7a-2 rs629367 genótipo CC poderia aumentar os riscos de câncer gástrico, bem como gastrite atrófica e também foi associado com pior sobrevida do câncer gástrico, o que possivelmente afetando o madura deixe-7a expressão, e pode servir como um biomarcador previsão para de alto risco e mau prognóstico do câncer gástrico

Citation:. Xu Q, Dong Q, Ele C, Liu W, Sun L, Liu J, et al. (2014) A New Polimorfismo Biomarcador rs629367 associadas com risco aumentado and Poor Sobrevivência de Câncer Gástrico em chinês por sobre-regulada Expressão miRNA-let-7-A. PLoS ONE 9 (4): e95249. doi: 10.1371 /journal.pone.0095249

editor: Qing-Yi Wei, Cancer Institute, Duke, Estados Unidos da América

Recebido: 26 Janeiro, 2014; Aceito: 24 de março de 2014; Publicação: 23 de abril de 2014

Direitos de autor: © 2014 Xu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho é apoiada por doações do Key Programa Nacional de Pesquisa básica da China (973 Programa REF. 2010CB529304), a National Science Foundation Natural da China (Ref No. 31200968), e do Projeto Ciência Tecnologia na província de Liaoning (Ref No. 2011225002) . Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Os microRNAs (miRNAs) são 18-25 nucleotídeos (nt) -long, RNA não-codificante de cadeia simples [1]. Qualquer variação na pri-miARN, pré-miARN ou madura miARN pode afectar o processo maduro e função de miARN, o que poderia afectar ainda mais a expressão de centenas de proteínas na via de interacção [2]. Até certo ponto, a variante de miARN desempenhou um papel como um "oncogene" ou "gene supressor de tumor" indirectamente [3].

let-7 é a segunda miARN identificado após a descoberta da primeira miARN, Lin -4 [4] - [6]. A família deixou-7 tem 10 membros, incluindo deixá-7a para deixá-7g, deixe-7i, miR-98 e miR-202. A família let-7 desempenha um papel crucial na manutenção da função fisiológica normal do ser humano. Por exemplo, a pri-miARN de deixá-7 família pode combinar com LIN28 e suprimir o processo de splicing de Drosha e Dicer, duas enzimas de restrição importantes envolvendo no processo maduro para todos miARN [7]. Além disso, ao derrubar a enzima Drosha para suprimir todo o processo maduro miRNA de forma abrangente, Kumar et al descobriram que a principal razão para a ativação e promoção da transformação maligna de células foi a regulação negativa da expressão let-7 família [8]. Apesar de muitos estudos anteriores contribuíram amplamente para ilustrar as funções biológicas da família deixou-7, poucos estudos têm-se centrado nas variações genéticas de membros da família. Na verdade, se dois indivíduos foram seleccionados aleatoriamente, seus genomas podem demonstrar cerca de 0,1% a diversidade, dos quais o mais comum era diversidade SNP [9]. Por causa da existência destas diversidades, o mesmo gene pode levar a diferentes produtos de expressão do gene que pode resultar em diferentes susceptibilidade à doença, fenótipo hereditário e prognóstico da doença [10].

Estudos anteriores demonstraram que a pri-miARN SNPs podem ser utilizados como marcadores genéticos para prever o risco de cancro. Por exemplo, pri-miR-185 rs2008591 foi associado com o risco de câncer de mama [11]; pri-miR-34b /c rs4938723 foi associada a risco de cancro hepatocelular [12]. No presente estudo, utilizando dados de bancos de dados de bioinformática NCBI, nós analisamos todos os SNPs na área precursor principal de let-7 família (± 600 pb), e descobriu que apenas 4 SNPs (pri-let-7A-1 rs10739971, pri rs629367 e rs1143770 -let-7A-2, pri-let-7F-2 rs17276588) tiveram menor alelo Frequency (MAF) > 5% da população chinesa, e todos eles eram tagSNPs na base de dados HapMap. Até agora, poucos estudos têm indicado a relação entre os quatro tagSNPs e previsão de doença de risco, exceto para doença esquizofrênica [13], o cancro do pulmão de não pequenas células [14] e nefropatia diabética [15]. Seu papel potencial na previsão do risco de câncer permanece em grande parte desconhecido

O câncer gástrico é a segunda principal causa de morte por câncer em todo o mundo e um dos cancros mais frequentes na Ásia Oriental e populações chinesas [16] - [18].. Estudos têm mostrado que vários miARN SNPs foram associados com o risco do cancro gástrico [19] - [22]. No entanto, se os acima mencionados quatro tagSNPs em genes de deixá-7 pri-miARN foram associados com o risco de cancro gástrico e gastrite atrófica na população chinesa, se pode ser utilizado como um biomarcador genético preditivo para o cancro gástrico, e o específico mecanismo de como eles regulam o risco doença ainda precisam ser esclarecidos.

neste estudo, avaliou-se pela primeira vez a associação entre essas quatro tagSNPs candidatos em pri-let-7a e susceptibilidade de câncer gástrico e seu precursor através da realização um estudo de caso-controle de dois estágios em chinês. Enquanto isso, nós investigamos se o polimorfismo associado ao risco contribui para a sobrevivência dos pacientes com câncer gástrico. Além disso, examinou-se o efeito do polimorfismo associado risco de regulação da sua expressão em tecido de miARN maduro soro e gástrica assim como a sua possível explorado mecanismo regulador na modulação do risco de doença e sobrevivência. Através da realização do presente estudo, esperamos propor a perspectiva potencial aplicação do SNP estudada como um biomarcador de pré-aviso para os indivíduos com alto risco de câncer gástrico e sua doença pré-cancerosa (gastrite atrófica).

Métodos

pacientes e desenho do estudo

o projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética da Primeira Affiliated Hospital da Universidade de Medicina de China e o estudo foi dividido em três partes independentes, mas relacionados, incluindo risco, prognóstico e mecanismos de pesquisa . A parte risco era duas etapas projetadas, um é triagem palco e o outro é validado palco. Para elucidar a associação de SNPs candidatos com câncer gástrico e riscos gastrite atrófica, a fase de análise retrospectivamente recrutados amostras incluindo 338 casos, constituído de 107 pacientes com câncer gástrico, 107 casos gastrite atrófica e 124 controles pareados do Primeiro Hospital Afiliado da China Medical University entre 2005 e 2010. na etapa de validação, que investigou um total de 1949 casos, incluindo 579 câncer gástrico, 649 gastrite atrófica e 721 controles saudáveis ​​a partir de um programa de verificação de saúde para o rastreio do cancro gástrico em Zhuanghe da província de Liaoning, China ou a partir dos pacientes no primeiro Hospital Afiliado da China Medical University, entre 2002 e 2013. Todos os sujeitos deste estudo foram por via endoscópica e histologicamente confirmada. A classificação do câncer gástrico foi dividido em intestinal-tipo e do tipo difuso de análise de subgrupo que foi baseado na classificação de Lauren [23], [24]. A classificação e classificação de gastrite foi baseado no Sistema de Sydney Atualizado [25], [26]. Indivíduos que foram por via endoscópica e histologicamente confirmados com mucosa normal ou gastrite apenas o mínimo, sem outra doença sistêmica ou outras doenças do estômago serviram como controles. consentimentos informados por escrito foram colhidas dos pacientes, e histórias médicas (incluindo idade, sexo, tabagismo e consumo de álcool) obtidos por questionário e os registros foram informatizados como descrito anterior [24].

Para investigar mais a associação do polimorfismo associado ao risco com os parâmetros clínico-patológicas e sobrevida em pacientes com câncer gástrico, foram utilizados dados de 150 casos de câncer gástrico, cuja informação de morte ou sobrevivência estava disponível. O grau histológico do tumor foi avaliada por critérios da Organização Mundial de Saúde e os tumores foram encenado usando a 7ª edição do sistema de estadiamento TNM da União Internacional Contra o Câncer (UICC) /Comité Misto Americana do Câncer (AJCC) (2010), com base em exame patológico pós-operatório . Pacientes (I) com metástases à distância encontrada no pré-operatório, (ii) que foram submetidos a radioterapia pré-operatória ou quimioterapia, ou (iii) com entradas de dados patológicos incompletos foram excluídos da análise de sobrevivência. O acompanhamento foi concluído em Agosto de 2013. Finalmente, 150 pacientes foram incluídos na análise de sobrevivência.

Para a avaliação da correlação entre o polimorfismo associado ao risco e sua expressão miRNA no soro, 364 casos, incluindo 164 câncer gástrico, 100 foram examinados gastrite atrófica e 100 controlos saudáveis. As características dos indivíduos incluídos foram apresentados na Tabela Suplementar S1. Além disso, para a avaliação da correlação entre o polimorfismo associado ao risco e sua expressão miRNA no tecido gástrico, 97 espécimes não-canceous e 94 amostras cancerosas gástricas foram obtidos de 97 pacientes que foram submetidos a gastrectomia no Primeiro Hospital Affilicated da China Medical University, entre 2009 e 2013.

o Assunto genotipagem

DNA genômico foi extraído como descrito anteriormente com algumas modificações [27]. O ensaio de genotipagem foi realizada por CapitalBio (Pequim, China), utilizando a plataforma Sequenom MassARRAY (Sequenom, San Diego, CA, EUA) como previamente descrito [24]. 5% do total, as amostras foram genotipados repetidamente, e se uma concordância de 100%, demonstrando que a genotipagem foi correcto. Os materiais foram detalhados mostrado nos métodos suplementares.

A detecção de soro de H. pylori título de IgG

De acordo com o método descrito na literatura [28], soro H. pylori
título de IgG foi detectada por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA, Helicobacter pylori kit; Biohit, Helsínquia, Finlândia). Os materiais foram detalhados mostrado nos métodos suplementares.

extracção de ARN e em tempo real da reacção de PCR para expressão in vivo de miARN

Foi utilizado o método de miARN extraída a partir do soro e tecido, tal como descrito pela literatura [29], com algumas modificações. Foi utilizada a reação de transcrição reversa One Step Prime Script miRNA cDNA (Perfeito Tempo Real) Kit (TAKARA Biotechnology Co., Ltd, Dalian, China) e em tempo real reação de PCR foi utilizado kit de detecção miRcute miRNA qPCR (SYBR) (TIANGEN Biotech Co ., Ltd., Beijing, China). Os materiais detalhados foram mostrados nos métodos suplementares.

transfecção transitória e em tempo real reação de PCR para a expressão miRNA in vitro

O plasmídeo de expressão comercial pCMV-MIR-deixá-7a-2 rs629367- C foi comprado de Origene Company (Origene Biotech Co., Ltd, Shanghai, China). Este plasmídeo foi realizado um mutagénese específica a -216 de C para A (pCMV-deixá-7a-2 rs629367-A) por Sainuo Company (Sainuo Biotech Co., Ltd, Beijing, China) e confirmada por sequenciação. E as linhas de células candidatos foram sequenciados ao genótipo do site rs629367 pri-deixá-7a-2 para explorar se houve qualquer variante deste site polimorfismo rs629367. Em seguida, as linhas de células do tipo selvagem e também o menor expressão dois deixá-7a, SGC-7901 e AGS, foram selecionados para a transfecção (Mais detalhes consulte Métodos complementares e suplementares figura S2). A linha celular de carcinoma gástrico humano, AGS foi adquirido da ATCC, American Type Culture Collection, EUA e SGC-7901 foi adquirido a partir do Banco celular da Academia Chinesa de Ciências, Xangai, China. Após 72 horas, o ARN total de células foi extraído e PCR em Tempo Real foi utilizado para detectar a expressão let-7a após a transcrição inversa, a fim de comparar o madura let-7a produzido por pCMV-let-7a-2-rs629367 A vs. pCMV-deixá-7a-2 rs629367-C.

Estatísticas

os estudadas quatro polimorfismos de miRNA foram testados para Hardy-Weinberg (HWE) entre os controles. As variáveis ​​contínuas foram apresentados como média desvio ± padrão (SD) e comparados por análise de variância, enquanto as variáveis ​​discretas foram representadas por frequências e percentuais e comparadas pelo teste de χ2 [24]. A regressão logística multivariada com ajustes para idade, sexo e H. pylori
foi utilizado para avaliar a associação entre os polimorfismos de miRNA e os riscos de doença. Porque fumar e consumo de álcool teve quase um terço dados em falta não eram adequados como fatores de ajuste, únicos fatores como estratificados para análise da associação entre os polimorfismos de miRNA e os riscos de doença. sobrevida univariada e multivariada foram realizadas pelo teste de log-rank eo modelo de riscos proporcionais de Cox. As curvas de sobrevivência foram mapeados usando o método de Kaplan-Meier. A análise multivariada foi realizada pela adição de SNP a todos os parâmetros clínico com P Art < 0,05. Além disso, as cópias de miARN foram usadas valor de Ig para uma distribuição normal, e o efeito de polimorfismos de miARN, nos seus níveis de expressão foram testados por análise de variância (ANOVA). A correlação de expressão let-7a no soro e tecido foi mostrado como coeficiente de correlação por meio da análise de correlação. A análise estatística foi realizada usando SPSS versão 16.0 (SPSS, Chicago, IL, EUA) e na fase de triagem, valor de p < 0,10 foi considerado significativo, enquanto todas as outras análises foi considerado valores de p <. 0,05 como significativo

resultados

efeito principal de polimorfismos de miRNA em câncer gástrico e gastrite atrófica risco

as freqüências genotípicas do SNP estudou na fase de rastreio foram apresentados na Tabela 1 e a eletroforetograma e sequenciamento figura de estes quatro polimorfismos de miARN genótipos foram mostrados na Figura suplementar S1. pri-let-7F-2 rs17276588 foi excluído da análise posterior porque ele desviou da HWE. Dois SNPs foram considerados promissora para ser associado com riscos de doenças: as frequências de genótipo variante de pri-let-7a-1 rs10739971 entre gastrite atrófica e grupo controle apresentou diferença estatística (27,1% vs. 13,7%, P
= 0.018, Tabela 1), ea variante freqüências genotípicas de pri-let-7a-2 rs629367 entre câncer gástrico e grupo controle diferença também mostrou (1,9% vs.6.5%, P
= 0,094, Tabela 1) . Consideramos p valor < 0,10 como significativo e seleccionado este dois promissores locais SNP para a fase de validação

Para confirmar a associação de pri-let-7a-1 rs10739971 e rs629367 polimorfismos pri-deixá-7a-2. com câncer gástrico e /ou riscos de gastrite atrófica, nós re-avaliou esses dois SNPs em outro de 1949 casos em fase de validação ampliada. As frequências dos polimorfismos em todas as amostras foram apresentados na Tabela Complementar S2. controles saudáveis ​​foram frequência correspondente ao câncer gástrico e para casos gastrite atrófica por idade (± 5 anos) e sexo (01:01). Depois de correspondência frequência, apenas a 501 câncer gástrico e 501 controlos para análise do risco de câncer gástrico e 612 gastrite atrófica e 612 controles para análise de risco de gastrite atrófica foram finalmente incluídos. Na etapa de validação ampliada, as frequências de genótipo variante de pri-deixou-7A-2 rs629367 entre câncer gástrico e grupo controle foram estatisticamente diferentes (6,4% vs. 4,0%, Tabela 1). Quando comparado com o genótipo AA comum, o genótipo variante CC foi associada com um 1,83-vezes maior risco de cancro gástrico ( P
= 0,048, IC de 95% = 1,01-3,32, Tabela 1), e era igualmente associado com um 1,86 vezes maior risco de gastrite atrófica ( P
= 0,032, IC 95% = 1,06-3,28, Tabela 1). Além disso, o genótipo variante CC foi associado com um aumento de 1,93 vezes o risco de gastrite atrófica em comparação com os genótipos (AC AA +) ( P
= 0,021, IC de 95% = 1,11-3,36, Tabela 1) , no entanto, não foi observada associação estatisticamente significativa entre a deixar-7a-1 pri rs10739971 e doença riscos na fase validado.

a análise estratificada e análise interação

Para investigar mais a influência potencial da idade, sexo e fatores ambientais, como o status de H.pylori
infecção, fumar e beber álcool em efeito genético, realizamos análises estratificadas por pri-let-7a-1 rs10739971 e pri-deixá-7a-2 polimorfismos rs629367 com base nesses fatores (Tabela 2). Observamos diferentes efeitos de pri-deixou-7A-2 rs629367 sobre o risco da doença em diferentes subgrupos. associação estatística entre o genótipo CC e aumento do risco gastrite atrófica foram encontrados em mulheres ( P
= 0,025, OR [IC 95%] = 2,59 [1,13-5,92]), H. pylori
subgrupo sorologia negativa ( P
= 0,036, OR [IC 95%] = 1,97 [1,05-3,73]), e no subgrupo não-potável ( P = 0,023
, OR [IC 95%] = 2,44 [1,13-5,26]). Além disso, o genótipo CC foi encontrado para ser associado com um risco aumentado de câncer gástrico em pacientes com idade ≦ 50 anos de idade ( P
= 0,026, OR [IC 95%] = 6,02 [1,24-29,10]) e H. pylori
subpopulação sorologia negativa ( P
= 0,036, OR [IC 95%] = 2,02 [1,05-3,90]). No entanto, quando foi realizada a análise de interação entre SNP rs629367 e H. pylori
beber infecção, tabagismo e álcool, sem efeito de interação estatística foi encontrada ( P
_{interação = 0,786 e 0,382, respectivamente, ver Tabela Complementar S3). Nenhuma associação significativa foi encontrada entre pri-let-7A-1 rs10739971 e câncer gástrico ou riscos gastrite atrófica em qualquer análise estratificada.}

Correlação entre pri-deixá-2-7a-rs629367 parâmetros polimorfismo e clínico-patológicas e tempo de sobrevida de pacientes com câncer gástrico

por causa da observação da associação estatisticamente significativa entre rs629367 e câncer gástrico e risco de gastrite atrófica na principal efeito análises e análises estratificadas, nós investigado se o rs629367 associada ao risco correlaciona-se com o fenótipo clínico-patológico e sobrevivência prognóstico do câncer gástrico. Os resultados mostraram que não houve correlação significativa deste SNP foi encontrado com os parâmetros clínico, incluindo o tamanho do tumor, localização do tumor, tipo de Borrmann, tipo histológico, tipo de Lauren, estágio TNM, padrão de crescimento, profundidade de invasão, metástase linfática, H.pylori estatuto
infecção, fumar, beber, e história familiar ( P Art > 0,05, ver suplementar Tabela S4), mas este SNP foi encontrado associado com a sobrevivência câncer gástrico. Os portadores do genótipo CC mostrou sobrevivência desfavorável (CC vs AA: 22,2 meses versus 32,0 meses) e aumento de horas para pacientes com câncer gástrico em análise univariada (CC vs AA: P
= 0,011, HR [95% CI] = 3,39 [1,33-8,65]; CC vs AA + AC: P
= 0,005, HR [IC 95%] = 3,51 [1,45-8,49]; Tabela 3 e Figura 1-A e - B). Ao ajustar para vários parâmetros clínico que eram potenciais fatores de confusão correlacionados com a sobrevivência de câncer gástrico ( P
≤0.0001 para o tamanho do tumor, tipo Borrmann, estágio TNM, profundidade de invasão e metástase linfática, consulte Suplementar Tabela S5), estatisticamente aumento dos RHs também foram obtidos para portadores de CC na análise multivariada (CC vs AA: P
= 0,004, HR [IC 95%] = 4,48 [1,60-12,60]; CC vs AA + AC: P
= 0,001, HR [IC 95%] = 4,69 [1,84-11,95], Tabela 3).

Correlação entre rs629367 e amadurecer deixe-7a expressão no soro e tecido gástrico

a fim de estudar o possível mecanismo de polimorfismo rs629367 relacionadas com câncer gástrico, investigamos ainda mais a madura expressão let-7-in vivo e in vitro. As características dos pacientes selecionados para o estudo de expressão no soro e tecido foram apresentados na Tabela Complementar S6. Em nível sérico, estratificados por diferentes doenças, verificou-se que no grupo gastrite atrófica, a expressão let-7a maduro de AA rs629367, CA, CC genótipo mostraram uma tendência de aumentar gradualmente, e esta diferença tinha uma significância estatística (3,30 ± 0,56 Vs . 3,52 ± 0,55 vs. 3,76 ± 0,34, P
= 0,043, Tabela 4, Figura 2-A). No nível do tecido, analisamos o efeito em genótipos de SNP deixá-7A na sua madura expressão deixá-7a no tecido câncer gástrico, e encontrou rs629367 AA, CA, CC genótipo também mostrou uma tendência de aumentar gradualmente, embora esta diferença não alcançou estatística significância (Tabela 4).

O madura expressão deixá-7a de pCMV-MIR-pri-let-7 ° 2 rs629367-A e -C

Em primeiro lugar, as linhas celulares candidatos foram sequenciados para genotipar o local rs629367 pri-let-7a-2 e verificou que estas linhas celulares candidatas foram todos rs629367 de tipo selvagem (ver Figura suplementar S3). No nível vitro, SGC-7901 e linhas de células AGS foram transinfected em dois plasmídeos, pCMV-MIR-pri-deixá-7a-2 rs629367-A e pCMV-MIR-pri-let-7 ° 2 rs629367-C. Após 72 horas, maduro expressão-7a deixe teve significância estatística na linha de células SGC-7901 ( P Art < 0,001, Figura 2-B). O alelo variante C expressaram uma maior deixe-7a quando comparado com o antigo alelo. A linha de células AGS não tem significância estatística e só mostrou tendência de acordo com SGC-7901 (ver Figura Suplementar S4).

Discussão

Com base em diversos estudos relativos às funções miRNAs maduros [30], foi bem aceite que miARN desempenham um papel importante no desenvolvimento do cancro como um "oncogene" ou "gene supressor de tumor" [31]. No entanto, a relação entre variantes de miRNA e risco de câncer, bem como o prognóstico ainda precisa ser esclarecida [32]. No presente estudo, nós relatamos, pela primeira vez, as frequências de distribuição de quatro miRNA tagSNPs (pri-let-7A-1 rs10739971, pri-let-7A-2 rs629367 e rs1143770, pri-let-7F-2 rs17276588) no norte chinês. Nós ainda validados os locais polimorfismo promissores em independente e amostras expandida e encontrou o genótipo variante CC de pri-let-7a-2 rs629367 aumentou os riscos de câncer gástrico e gastrite atrófica para 1,83 e 1,86 vezes, bem como associada a uma menor sobrevida de pacientes com câncer gástrico. Nós exploramos ainda mais o efeito de pri-let-7a-2 rs629367 em sua expressão e os possíveis mecanismos e indicou que o mecanismo pode, devido à alternância da expressão let-7a maduro, que podem, eventualmente, alterar a susceptibilidade e prognóstico para gástrica Câncer. Para nosso conhecimento, este é o primeiro relatório sobre a relação de SNP rs629367 com a susceptibilidade e prognóstico do câncer gástrico.

Como sabemos, as variações genéticas, que surgem nos genes miRNA incluindo suas regiões primário e pré-miRNA , teriam oportunidade de afetar várias vias biológicas e incidência da doença influência [33]. Assim, primário e polimorfismos pré-miARN podem ser utilizados como marcadores genéticos para prever o risco de cancro [32], [34], que tem mais vantagens e fortes do que os polimorfismos do gene que codifica para o potencial de predição porque miARNs frequentemente localizadas na genómica associada a cancro regiões [35] e pode regulam quase todos os genes de codificação [36]. Recentemente, vários estudos focada nos polimorfismos pré-miARN localizados na haste-laço, tais como pré-mir-196a2 rs11614913 [37], rs2910164 pré-miR-146 A [38], pré-miR-499 rs3746444 [39], [40], pré-mir-149 rs2292832 [41], pré-mir-27A rs895819 [42]. Devido à complexidade da estrutura do espaço RNA, cada vez mais atenção foi paga ao SNP em pri-miRNA. O representante pri-miRNA SNPs foram pri-miR-185 rs2008591 associado com câncer de mama [11], pri-miR-34b /c rs4938723 associada com o câncer hepatocelular [12], rs928508 pri-miR-30c [22] e pri-miR -938 rs2505901 [43] associados com câncer gástrico. let-7 famílias foram miRNAs mais anteriores identificados [4] e desempenham um papel crucial na manutenção da função fisiológica normal do ser humano. Usando bancos de dados de bioinformática NCBI, encontramos 4 SNPs na área precursor principal de let-7 família (pri-deixá-7A-1 rs10739971, pri-let-7A-2 rs629367 e rs1143770, pri-let-7F-2 rs17276588) teve Frequency Minor alelo (MAF) > 5% da população chinesa, que eram todos tagSNPs mas seus papéis previsão do potencial não estavam claras. No presente estudo, através do rastreio e validação de duas fases de estudo que primeiro descobriram que, entre 4 tagSNPs, pri-deixá-2-7a rs629367 polimorfismo foi associado com susceptibilidade de câncer gástrico (o genótipo variante CC de pri-deixá-7a-2 rs629367 aumentou os riscos de câncer gástrico e gastrite atrófica para 1,83 e 1,86 vezes). Este pri-let-7a-2 SNP rs629367 foi localizado a jusante em 3'-UTR, que foi o mais próximo de SNP com os genes de miARN maduros entre os quatro SNPs de rastreio, e que seria um novo biomarcador de predizer o risco de cancro gástrico.

Foi realizada uma análise mais aprofundada de riscos proporcionais regressão uni e multivariada Cox dos dados de acompanhamento para explorar as associações de pri-deixá-7a-2 rs629367 SNP com sobrevida global de pacientes com câncer gástrico. Consistentemente resultados significativos foram observados a partir de modelos de Cox univariada e multivariada (Tabela 3). O rs629367 portadores do genótipo variante CC 2 pri-let-7a-mostrou aumento da FC com um P
-valor de 0,011 (HR = 3,39) e 0,005 (HR = 3,51), quando comparado com AA de tipo selvagem e AA genótipo + AC, respectivamente, na análise univariada. Porque vários parâmetros clínico contribuiu significativamente para a sobrevivência global câncer gástrico ( P
≤0.0001 para o tamanho do tumor, tipo Borrmann, estágio TNM, profundidade de invasão e metástase linfática), foi realizada a análise com ajuste para os potenciais fatores de confusão em a análise multivariada. Eventualmente, encontramos o P
-valor deste SNP rs629367 foi mais significativa e RHs estatísticos foram também aumentadas (CC vs AA: P
= 0,004, HR = 4,48; CC vs. AA + AC: P
= 0,001, HR = 4,69, respectivamente), sugerindo que a pri-let-7a-2 rs628367 pode ser um fator de risco independente para o prognóstico de câncer gástrico

Vários estudos. revelou que os polimorfismos de miARN impedir o processamento e expressão de miARN miARN maduro e desempenhar um papel na carcinogénese [12], [33]. A fim de estudar o mecanismo possível de polimorfismo rs629367 relacionadas com o cancro gástrico, no presente estudo, nós investigamos o efeito do SNP pri-let-7a sobre a expressão madura let-7a tanto in vivo como in vitro. Controlando o fator doença, encontramos no grupo gastrite atrófica soro, a madura expressão let-7-A da AA rs629367, CA, CC genótipo mostraram uma significativa aumentar gradualmente ( P
= 0,043, Tabela 3). Isto poderia explicar parcialmente o fenômeno que o genótipo variante CC de rs629367 tinha uma frequência de distribuição maior no grupo gastrite atrófica do que no grupo controle (6,2% vs. 3,9%, Tabela 1). A relação de rs629367 genótipo CC com risco aumentado gastrite atrófica indicou que esta SNP foi associada à gastrite atrófica e câncer gástrico, mesmo possivelmente pela alternância da expressão miRNA maduro, que, assim, influencia a susceptibilidade ao câncer gástrico. Com base no nível de expressão in vivo, ainda construído o plasmídeo expressas contendo pri-let-7a-2 rs629367 do tipo selvagem Um alelo C alelo e variante, a fim de observar o madura expressão let-7a dos dois alelos diferentes. Descobrimos que após transinfection, SGC-7901 células contendo pCMV-MIR-pri-deixá-7a-2 rs629367-C alelo demonstrou maturidade maior expressão deixá-7a do que a do alelo A ( P Art < 0,001, Figura 1). O resultado obtido a partir da experiência in vitro foi concordantes com o da in vivo, o que também revelam que a pri-let-7a-2 rs629367 polimorfismo poderia afectar a expressão madura let-7a e alterar a susceptibilidade para o cancro gástrico. Vários estudos relataram que deixá-7a foi tumor supressor [44], [45]. Nós especulamos que a variação de A a C pode Perda de sua função original de supressor de tumor, o que poderia alterar a susceptibilidade câncer gástrico e levando a pior sobrevida para o prognóstico.

O câncer gástrico é uma doença multi-factorial causada por predisposição genética bem como os fatores ambientais [46]. Para investigar a influência potencial da idade, sexo e fatores ambientais, como o status de H.pylori
infecção, fumar e beber álcool em efeito genético, foram analisados ​​mais profundamente os efeitos de possíveis fatores de influência sobre este pri-deixá-7a -2 rs629367 SNP, e encontrou pri-let-7A-2 rs629367 só foi associado com riscos de doenças em H. pylori
grupo de pacientes com sorologia negativa e no grupo não-potável. Em H. pylori
pacientes sorologia negativa, as RUP para a associação do SNP rs629367 e gastrite atrófica e os riscos de câncer gástrico elevados para ser 2,12 e 1,97 vezes, que foi maior do que as RUP em todo o casos (1,83 e 1,86 vezes, respectivamente) . No entanto, não houve significância estatística em H. pylori
pacientes sorologia positiva. Da mesma forma, este fenômeno também foi observado na análise estratificada por beber: no grupo não-potável, o OR para a associação de SNP rs629367 e risco de gastrite atrófica elevado a ser 2,39 vezes, enquanto não houve significância estatística no grupo de beber. Isso pode ser porque o H.pylori
e beber foram associados com a incidência de câncer gástrico. Brenner et ai. havia a hipótese de que H.pylori
era uma causa necessária para câncer gástrico [47], e Tramacere et al. constatou que houve uma forte associação entre beber e incidência de câncer gástrico [48], [49]. Portanto, a remoção destes dois factores ambientais feita RUP mais elevada do que a análise das amostras inteiras.

• PLoS ONE: O NOD-Like Receptor Sinalização Caminho na Helicobacter pylori Infecção e relacionadas ao câncer gástrico: Um Estudo de Caso-Controle e expressão do gene Análises
• PLOS ONE: laparoscópica do Baço-Preservar Esplênica Hilar Lymphadenectomy Interpretada por Após a Perigastric fáscias e do Espaço Intrafascial for Advanced Superior Terceiro Câncer Gástrico