Fundo
Atualmente, está bem estabelecido que o cancro surge no tecido cronicamente inflamado. Um certo número de receptores (NLRs) inflammasomes NOD forma semelhante, os complexos multiproteicos intracelulares críticos para a geração de citocinas pró-inflamatórias maduros (IL-1 e IL-18). Como a inflamação crônica da mucosa gástrica é uma consequência da infecção por Helicobacter pylori Materiais e Métodos Cinquenta e um polimorfismos genéticos foram genotipados em 310 etnia chinesa (87 casos GC não-cárdia e 223 controles com dispepsia funcional). Além disso, a expressão do gene de 84 moléculas envolvidas na via de sinalização NLR foi avaliada em células THP-1 desafiados com dois H. Resultados CARD8 Conclusões Federações Novel entre polimorfismos na via de sinalização NLR ( CARD8 Citation:. Castaño-Rodríguez N, Kaakoush NO, Goh KL, Fock KM, Mitchell HM (2014) O NOD-Like Receptor Sinalização Caminho no Helicobacter pylori Autor: David M. Ojcius, University of California Merced, Estados Unidos da América Recebido: 02 de março de 2014; Aceito: 08 de maio de 2014; Publicação: 05 de junho de 2014 Direitos de autor: © 2014 Castaño-Rodríguez et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte pelo Conselho do Câncer de Nova Gales do Sul, Austrália (Grant no.66 /04). NÃO. Kaakoush é apoiado por uma bolsa de carreira precoce do Nacional de Saúde e Pesquisa Médica do Conselho, na Austrália. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes Introdução A incidência global de câncer gástrico (GC) varia amplamente entre os países. De acordo com estatísticas de câncer globais, um total de 952,000 novos casos de GC e 723.000 mortes relacionadas com o GC são estimados para ter ocorrido em 2012, representando 6,8% do total de casos de câncer e 8,8% do total de mortes relacionadas com o cancro [1]. Mais de 70% dos novos casos e mortes ocorrem em países em desenvolvimento, com as maiores taxas de incidência que está sendo relatado no Leste da Ásia, Europa Oriental, América Central e América do Sul [2]. O patógeno bacteriano Helicobacter pylori receptores de linha germinal codificado conhecidos como receptores de reconhecimento de padrões (PRRs) fazem parte do sistema imune inato e são fundamentais para a detecção de motivos microbianas invariantes conhecido como patógeno padrões moleculares -associated (PAMPs). PRRs foram divididos em cinco subtipos genéticos e funcionais distintas: domínio de oligomerização (NOD) -como receptores (NLRs), receptores Toll-like, receptores de lectina tipo C, gene induzível-ácido retinóico (RIG) -I-like de ligação de nucleotídeos receptores e ausente em melanoma 2 (AIM2) -como receptores [5] [6]. a família NLR não só reconhecer PAMPs mas padrões moleculares também danos associados (amortece) no citoplasma, que são ligantes endógenos produzido após lesão do tecido ou morte celular [7]. A estrutura característica NLRs inclui um domínio central e oligomerização (NACHT) de ligação ao nucleótido que está presente em todos os membros da família NLR, um repetições ricas em leucina C-terminal (Lrrs) e de um recrutamento N-terminal da caspase (CARD) ou pirina (PYD ) domínio. Com base na análise filogenética de domínios Nacht, determinou-se que a família NLR compreende três subfamílias: 1) a família NOD que inclui NOD1-2, NOD 3 /NLRC3, NOD4 /NLRC5, NOD5 /NLRX1 e CIITA, 2) os NLRPs incluindo NLRP1-14 (também conhecido como NALPs), e 3) a subfamília IPAF que consiste em IPAF (NLRC4) e NAIP [7]. O inflammasome NLRP3, o inflammasome mais plenamente caracterizado, consiste da proteína andaime NLRP3, a apoptose associada proteína pontinho-like (ASC) e caspase-1. NLRP3 interage e recruta o ASC adaptador via PYD-PYD interação [8]. Esta interacção conduz ao recrutamento de caspase-1, um aspartato protease intracelular específico de cisteína, o que subsequentemente levar à maturação e libertação de citoquinas pró-inflamatórias, tais como IL-1β e IL-18. Portanto, estudos anteriores mostram claramente que, em resposta a H. pylori Materiais e Métodos A genotipagem de polimorfismos envolvidos na instrução NOD-like Receptor Sinalização Pathway Ética. Este estudo foi aprovado pelo Comité de Ética Humana (HREC) da Universidade de Nova Gales do Sul (UNSW) (HREC 08.115 e HREC 02144). consentimento informado por escrito foi obtido de cada indivíduo recrutados para o estudo. Os sujeitos do estudo. Os indivíduos eram indivíduos de etnia chinesa que foram submetidos a endoscopia digestiva alta no Hospital Geral de Changi (Singapura) e do Hospital Universitário da Malásia (Kuala Lumpur), entre janeiro de 2004 e abril de 2007. os doentes que se sabe estarem infectados com o vírus da imunodeficiência humana, ou que havia sido prescrito não-esteróides anti-inflamatórios, agentes anti-microbianos ou supressores de ácido no período de dois meses antes do recrutamento foram excluídos. Oitenta e sete pacientes recém-diagnosticados com uma primária não-cárdia GC (Classificação Internacional de Doenças, 9 th revisão, código 151) com base na confirmação histológica foram convidados a participar na o estudo. O grupo controle foi composto de 223 indivíduos com diagnóstico de dispepsia funcional (FD), que foi definida como sintomas persistentes ou recorrentes (dor ou desconforto centrado na parte superior do abdómen), na ausência de doença orgânica (incluindo a endoscopia digestiva alta), de acordo com Roma II sistema de classificação [14]. detecção de Helicobacter pylori H. pylori selecção Polimorfismos. bases de dados eletrônicas (PubMed, Scopus, Science Direct, Ovid, Biosis Previews, bancos de dados Scirus, CINAHL, IMBIOMED, Scielo e LILACS) foram pesquisados até fevereiro de 2013 para polimorfismos envolvidos na via de sinalização NLR que foram associados com o cancro, doenças infecciosas ou eram funcionalmente relevantes. Cinqüenta e um polimorfismos em 6 genes, que foram relatados para ter uma menor freqüência do alelo >. 1% no Centro Nacional de Biotecnologia da Informação (NCBI) dbSNP, foram selecionados para análise (Tabela S1 nas Tabelas S1) técnicas de genotipagem. para a genotipagem de polimorfismos os 51 seleccionados na via de sinalização de cada indivíduo NLR incluídos no estudo, o DNA genómico foi extraído de amostras de sangue total periférico usando o kit QIAamp Blood DNA Mini como descrito pelo fabricante (Qiagen; Chadstone, Austrália). O DNA foi re-hidratadas em água estéril e normalizadas para 10 ng /ul para genotipagem de SNP personalizado por meio da aplicação de matriz de dessorção a laser assistida por ionização de tempo-de-voo (MALDI-TOF) espectrometria de massa, o Sequenom MassARRAY Iplex? Ensaio (San Diego, CA , EUA) [16], [17] no Centro australiano Genome Research Ltd, St Lucia, da Universidade de Queensland, Austrália. Um polimorfismo que não puderam ser incluídos no ensaio Sequenom MassARRAY Iplex, conhecido como NLRP3- Quatro polimorfismos ( CARD8 a análise estatística. O Student não pareado t Gene Expression de moléculas envolvidas na Receptor Sinalização Pathway cultura de células de mamíferos NOD-like a linha de células de leucemia monocítica humana THP-1 (código: TIB-202). (American Type Culture Colecção; Manassas, EUA), foi cultivada em meio RPMI 1640 suplementado com soro a 10% inactivado pelo calor fetal de bovino (FBS) (Invitrogen; Mulgrave, Austrália), piruvato de sódio 1 mM (Invitrogen), de 2500 mg /L de bicarbonato de sódio (Invitrogen ) e uma solução de 100 ug /mL de penicilina-estreptomicina (Invitrogen). As células foram mantidas em 25 cm 2 cultura frascos de tecido (Greiner-Bio-On; Frickenhausen, Alemanha).. A 37 ° C com 5% de CO 2 Cultura bacteriana O H pylori ensaio de Infecção. As células THP-1 foram semeadas numa placa de cultura de 6 poços a uma concentração de 5 × 10 5 células /ml e subsequentemente diferenciados em macrófagos com acetato de forbol myrastate (Sigma-Aldrich) durante 72 horas [24]. antes da infecção bacteriana, células de mamífero foram incubadas em meio livre de antibióticos. o H. pylori Após infecção, não-desafiado e H. pylori Para a análise de dados de expressão de genes, o método baseado em Ct ΔΔ de quantificação relativa foi implementado utilizando a RT baseado na Web 2 matriz Profiler PCR Análise de dados versão 3.5 (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). mudanças, pelo menos, de duas vezes (≥ 2, ≤0.5) e P SDS-PAGE e Western Blotting THP As células foram semeadas -1, diferenciada e infectadas a uma MOI de 1, como descrito anteriormente. As proteínas foram extraídas com tampão RIPA, separados em 12% de sulfato de poliacrilamida geles de electroforese em gel de dodecilsulfato de sódio, e transferidos para membranas tratadas com metanol polivinilideno difluoreto utilizando o sistema de transferência de célula Trans-Blot (Bio-Rad). As membranas foram immunolabeled com anticorpos de coelho anti-humanos (policlonais contra NLRX1 1:200) ou anticorpos monoclonais humanos anti-ratinho contra β-actina (1:1000) (Santa Cruz). De cabra anti-coelho e anticorpos anti-IgG de ratinho acoplado a HRP (1:2000; Bio-Rad) foram utilizados como anticorpos secundários, respectivamente. As membranas foram sondadas de acordo com o protocolo Pierce ECL Western Blotting Substrato (Thermo Scientific; Scoresby, Austrália). características clínicas As características clínicas dos sujeitos do estudo incluindo sexo, H. pylori polimorfismos em genes envolvidos na NOD-like Receptor sinalização pathway estão associados com câncer gástrico em étnicas Indivíduos chineses Cinquenta e um polimorfismos em genes envolvidos na via de sinalização NLR foram genotipados em 310 indivíduos de etnia chinesa (87 casos GC e 223 FD controles). A taxa de chamada de todos os polimorfismos selecionados foi 97-100% neste estudo. Todos os polimorfismos na via de sinalização NLR foram encontrados para estar em HWE no grupo de controle que mostra não significativa χ 2 valores, exceto para CARD8 freqüências alélicas e genotípicas como bem como RUP e os IC 95% para os restantes 27 polimorfismos são mostrados na Tabela 1 e Tabela S4 nas Tabelas S1. O CARD8 análises baseadas em haplótipos são uma abordagem poderosa para dissecar a arquitetura de doenças complexas. No estudo atual, o algoritmo EM identificados 25 haplótipos com uma frequência > 0,01 em casos GC (Tabela S5 nas Tabelas S1). Usando o principal haplótipo no grupo controle como o haplótipo de referência, dois CARD8-NLRP12 Polimorfismos em genes envolvidos na NOD-like Receptor Sinalização Caminho está relacionado com Helicobacter Pylori Uma vez que H. pylori Joint Efeito da Helicobacter Pylori análises adicionais foram realizadas para avaliar não só a presença ou ausência dos polimorfismos seleccionados mas também H. pylori Helicobacter pylori Para caracterizar ainda mais o efeito de H. pylori uma vez que a inflamação é uma característica da carcinogênese gástrica, analisamos ainda mais a expressão de citocinas pró-inflamatórias e quimiocinas após a exposição a dois H . pylori Helicobacter pylori Treze genes que codificam NLRs foram avaliados neste estudo, incluindo os membros da subfamília IPAF (NAIP, NLRC4), NLRPs (NLRP1, NLRP3-6, NLRP9, NLRP12) e acenos (NOD2, NLRC5, NLRX1 e CIITA) (Figura 1B). A expressão de genes que codificam cinco NLRs foi significativamente regulada em células de H. pylori desafiados (NLRC4, NLRC5, NLRP9, NLRP12 e NLRX1) (Tabela 5). Destes, NLRP12 (dobre regulamento: 0,03, p-value: 0,016298) e NLRX1 (dobre regulamento: 0,02, p-value: 0,01762) foram significativamente regulada em células de H. pylori GC026-desafiados. Como uma técnica de validação, outros ensaios de Western blot que investigam expressão NLRX1, foram conduzidos. Consistentemente, diminuição dos níveis NLRX1 foram encontrados em células THP-1 desafiados com ambos H. pylori GC026 e 26695 (Informações de Apoio Figura S3). Dado que o NF-kB é regulada negativamente por NLRP12 e NLRX1, que ainda comparado a expressão de NFKB1 Helicobacter Pylori a expressão de outras moléculas envolvidas não só no NLR via de sinalização, mas também na carcinogênese também foi analisada comparando THP-1 células respostas a ambos H. pylori Discussão GC é agora considerado um multifactorial processo, em que os fatores bacterianos, genética ambientais e de acolhimento estão envolvidos em diferentes fases da fisiopatologia do câncer. Actualmente, é bem estabelecido que o cancro surge no tecido cronicamente inflamado, e isto é particularmente notável no tracto gastrointestinal [4]. Como a inflamação crônica da mucosa gástrica é uma consequência da H. pylori Para nosso conhecimento, esta é a primeira evidência de que os polimorfismos envolvidos na via de sinalização NLR estão associados com um risco aumentado de GC numa população humana relatada. A análise estatística multivariada mostrou que o CARD8 As H. pylori
, investigamos o papel dos polimorfismos genéticos e expressão de genes envolvidos na via de sinalização NLR em H. câncer gástrico infecção e afins pylori
(GC).
trens pylori s, GC026 (GC) e 26695 (gastrite).
-rs11672725, NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 e NLRX1
-rs10790286 mostraram associações significativas com o GC. Na análise multivariada, CARD8
-rs11672725 continuou a ser um fator de risco (OR: 4,80, IC 95%: 1,39-16,58). Além disso, NLRP12-
rs2866112 aumentou o risco de H. pylori
infecção (OR: CI 2,13, 95%: 1,22-3,71). As análises estatísticas avaliar o efeito conjunto de H. pylori
infecção e os polimorfismos selecionados revelou fortes associações com GC (
CARD8, NLRP3
, CASP1
e NLRP12
polimorfismos). Em análises de expressão gênica, cinco genes que codificam NLRs foram significativamente regulada em H. pylori
células -challenged ( NLRC4
, NLRC5
, NLRP9
, NLRP12
e NLRX1
). Curiosamente, persistente aumento da regulação do NFKB1
com simultânea down-regulação da NLRP12
e NLRX1
foi observada em H. pylori
células desafiou-GC026. Além disso, os genes alvo de NF-kB que codificam citocinas pró-inflamatórias, quimiocinas e moléculas envolvidas na carcinogénese foram acentuadamente regulada para cima em H. pylori
células desafiou-GC026.
, NLRP3
, NLRP12
, NLRX1
, e CASP1
) e GC foram identificados em indivíduos chineses. Nossos polimorfismos genéticos e resultados de expressão gênica destacar a relevância da via de sinalização NLR na carcinogênese gástrica e sua estreita interacção com NF-kB
Infection and Related Câncer gástrico: A case-Control Estudo e análises de expressão gênica. PLoS ONE 9 (6): e98899. doi: 10.1371 /journal.pone.0098899
é um factor etiológico essencial para GC (IARC, 1994), no entanto, estudos anteriores sugerem que, além de H. pylori
infecção e dietéticos fatores, a genética do hospedeiro contribuir para GC [3]. polimorfismos genéticos têm surgido nos últimos anos, como determinantes da susceptibilidade e gravidade da doença, o que é particularmente verdadeiro no malignidade gastrintestinal [4]. Portanto, polimorfismos em genes envolvidos na imunidade inata e adaptativa pode desempenhar um papel importante na patogénese de H. pylori
infecção e desenvolvimento de H. pylori
complicações relacionados com incluindo GC.
infecção, as quatro primeiras barreiras físico-químicas são a camada de muco, as células epiteliais gástricas, os TLR e as NLRs. Um número limitado de estudos avaliaram a interação entre a via de sinalização NLR e H. pylori
. Por exemplo, um estudo inicial por Basak et al. [9] mostrou que não só H. pylori
lipopolissacárido (LPS) activa da caspase-1, mas que esta activação da caspase-1 está envolvida na maturação induzida por LPS de IL-1β. Mais tarde, Hitzler et ai. [10] mostraram que H. pylori
activa da caspase-1, levando a IL-1β /IL-18 de processamento e secreção, tanto em células dendríticas em cultura (DCs) e In vivo
. Consistentemente, dois estudos recentes, utilizando linhas de células humanas gástricas, confirmou a expressão aumentada de caspase-1, IL-1β e IL-18 em H. pylori
células infectadas pelo [11], [12]. Além disso, um estudo recente realizado por Kim et al. [13] demonstraram que a secreção de IL-1β por DCs infectadas com H. pylori
requer TLR2, NOD2 eo inflammasome NLRP3.
, caspase-1-activação dependente inflamassoma é crítica para a geração de citocinas pró-inflamatórias maduras que são cruciais para as respostas Th1 associados a imunopatologia gástrico. Uma vez que pouco é conhecido sobre o papel de inflammasomes e outras moléculas envolvidas na sinalização de via NLR em resposta a H. pylori
infecção, e que os polimorfismos em genes funcionalmente relevantes de este braço do sistema imunitário têm o potencial de afectar a magnitude e direcção da resposta do hospedeiro contra a infecção, foi investigado o papel da via de sinalização NLR, incluindo inflammasome- moléculas relacionadas, em H. pylori
desenvolvimento GC -relacionados avaliando 51 polimorfismos genéticos em indivíduos chineses, uma população de alto risco conhecido para GC, e abordar a expressão gênica de 84 moléculas envolvidas na NLR vias de sinalização em uma linha de células monocíticas após a exposição a H . pylori
.
.
anticorpos IgG nestes indivíduos chineses foram determinadas usando um in-house enzima-imunoensaio [15] e immunoblot (MPD Helico Blot 2.1, MP Biomedicals, Austrália).
42 bp-VNTR, foi genotipados através da PCR padrão. Os iniciadores foram concebidos com Software Análise Oligo Primer versão 6.71 (Insights Biologia Molecular, Inc; Colorado Springs, EUA). Os experimentos foram realizados usando o 2720 Termociclador (Applied Biosystems, Foster City, EUA). Os produtos de PCR foram submetidos a electroforese em gel de agarose a 1,5% e visualizado sob transiluminação UV utilizando o Sistema de Gel Doc 2000 (Bio-Rad; Hercules, EUA). As sequências dos iniciadores e condições de ciclos térmicos para genotipagem desse polimorfismo estão descritos na Tabela S2, em nas Tabelas S1.
-rs2043211, CARD8
-rs6509368 , CARD8
-rs12984929 e NLRP3
-rs10754558) genotipados por espectrometria de massa MALDI-TOF foram selecionados aleatoriamente para confirmação dos resultados usando PCR em tempo real. As sequências dos iniciadores e condições de ciclos térmicos são descritos na Tabela S2 nas Tabelas S1. Como uma validação da metodologia implementada para a genotipagem de NLRP3-
42 bp-VNTR, análises de sequenciação foram realizadas em 10% das amostras de estudo selecionadas aleatoriamente, no Centro Ramaciotti, UNSW, Austrália.
-test foi utilizado para analisar as características clínicas. O método de contagem direta foi utilizado para estimar as freqüências genotípicas e alélicas. Desvio de Hardy-Weinberg (HWE) foi testada utilizando o teste de bondade de ajuste qui-quadrado (χ 2). Determinação de desequilíbrio de ligação (LD) baseou-se num teste de rácio de probabilidade em que o significado da razão de probabilidade observada é encontrado pelo cálculo da distribuição nula deste rácio sob a hipótese de equilíbrio de ligação, usando um procedimento de permutação [18]. inferência de haplótipos foi realizada por meio da Expectativa-Maximização (EM) algoritmo para dados genotípicos multi- locus de [19]. As odds ratio (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC) foram calculados por meio de teste de probabilidade exato de Fisher (bicaudal p
-Valores). A fim de corrigir os fatores de confusão, uma regressão logística binária (LR) ajustado por H. foi realizada pylori
status e gênero. P
-Valores < 0,05 foram considerados como estatisticamente significativos. filtros de qualidade para a exclusão de polimorfismos da análise estatística incluiu chamar taxas abaixo de 95% e desvio da HWE. Os dados foram analisados por meio do programa Arlequin versão 3.1 [20], GraphPad Prism versão 5.02 (GraphPad Software Inc; San Diego, EUA) e SPSS versão 19.0.0. (SPSS Inc; Chicago, EUA)
estirpe GC026 ( cagA
+, gaiola
+, CAGL
+, cagT
+ , vacA
s1 m1 +, babA
+, oipA
+, dupA
+ e sabA
+) foi isolado de um paciente GC no Hospital Universitário da Malásia, Kuala Lumpur [21], [22]. O H. pylori
estirpe 26695 ( cagA
+ e vacA
s1m1 +) foi isolado de um paciente com gastrite [23] (código ATCC 700392). Ambos H. pylori
estirpes foram cultivadas durante dois dias em placas de agar de sangue de cavalo (Blood Agar Base No.2 suplementadas com 6% estéril sangue de cavalo desfibrinado (Oxoid, Heidelberg Oeste, Vic., Austrália) a 37 ° C numa jarra de anaerobiose contendo um kit gerador de gás (Oxoid) para proporcionar uma atmosfera microaeróbia de 6% O 2, 10% de CO 2 e 84% N 2.
estirpes GC026 e 26695 foram, em seguida, adicionado ao meio a uma multiplicidade de infecção de 1, e incubou-se durante 6 horas a 37 ° C e 5% de CO 2. A concentração de bactérias adicionado foi determinada com base numa curva padrão e densidade óptica (OD) leituras a 595 nm usando um leitor de microplacas modelo Bio-Rad 550 (Bio-Rad). A concentração real adicionado foi confirmada pela contagem de unidades formadoras de colónias (CFU) cultivados em placas de agar de sangue de cavalo depois de diluição em série da suspensão bacteriana.
extracção do ARN, preparação de cDNA e PCR matrizes.
-challenged células THP-1 foram usadas para o isolamento de ARNm utilizando o Qiagen RNeasy Mini Kit tal como descrito pelo fabricante (Qiagen). Para a análise da expressão do gene de 84 moléculas envolvidas na via de sinalização NLR, o ADNc foi sintetizado a partir de 0,8 ug de ARN total, utilizando a RT 2 primeira cadeia de cDNA Kit (Qiagen) e analisadas utilizando o inflammasome humano RT 2 Profiler PCR matriz (HAP-097R) (Qiagen), como recomendado pelo fabricante. perfis de expressão de genes foram obtidos a partir de três experiências independentes de H. pylori
GC026-infectados, H. pylori
26695-infectado e amostras não-infectados (controle) correspondente. As experiências foram realizadas utilizando o termociclador Rotor Gene-Q (Corbett Life Sciences; Doncaster, Austrália).
-Valores. < 0,05 foram considerados como estatisticamente significativos
Resultados
estado de infecção e idade média são apresentados na Tabela S3 nas Tabelas S1. O sexo masculino foi encontrado para ser mais predominante em pacientes GC do que nos controles FD, mostrando uma associação positiva com o desenvolvimento da GC nesta população de etnia chinesa (OR: CI 2,15, 95%: 1,29-3,58, P
-valor: 0,0036). H. pylori
foi encontrado para estar presente em 68,7% dos indivíduos neste estudo (73/87 pacientes do GC e 140/223 FD controles). A comparação da prevalência de H. pylori
infecção em pacientes GC e controles FD mostrou que H. pylori
foi um fator de risco para o desenvolvimento de GC (OR: CI 2,38, 95%: 1,41-3,99, P
-valor: < 0,0001). Embora sujeitos deste estudo foram pareados de acordo com a 5 anos os grupos etários, a idade média dos pacientes do GC (65,3 anos) foi significativamente maior do que a dos controles FD (54,3 anos) ( P
-valor: <. 0,0001)
-rs12984929 (χ 2: 35.98), CARD8-
rs4802445 (χ 2: 5,87) e CARD8-
rs6509368 (χ 2: 5,43). Vinte e um polimorfismos em NLRP3
(n = 5), NLRP12
(n = 3), NLRX1
(n = 3), ASC
(n = 4) e CASP1
(n = 6) foram encontrados para ser não-polimórfico nesta população de etnia chinesa (Tabela S1 nas Tabelas S1).
-rs11672725 genótipo TT mostrou uma forte associação com a GC na análise estatística bivariada (OR: CI 4,80, 95%: 1,39-16,58). Além de CARD8
-rs11672725, mais quatro polimorfismos apresentou resultados limítrofes na análise bivariada ( NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 e NLRX1
-rs10790286) (Tabela 1). Outras análises de estatística multivariada, ajustando para H. pylori
infecção e sexo masculino, mostraram que o CARD8
-rs11672725 genótipo TT permaneceu um fator de risco para GC nesta população de etnia chinesa (Tabela 2).
(Hap1 e Hap8), um NLRP3
(Hap3) e três NLRX1-CASP1
(Hap21, 23 e 24) haplótipos foram encontrados para aumentar o risco de GC nesta população de etnia chinesa. Curiosamente, Hap1 abriga o CARD8
-rs11672725 alelo T, e Hap21 e Hap23 abrigar o NLRX1
-rs10790286 C alelo, o que demonstra a coerência com os resultados obtidos com o alelo eo genótipo analisa.
Infecção em étnicas indivíduos chinês
é conhecido por ser um importante fator de risco associado com GC, novas análises foram realizadas para avaliar a associação entre os polimorfismos genéticos envolvidos na via de sinalização NLR e H. pylori
infecção. Curiosamente, o nosso estudo de caso-controle de etnia chinesa mostrou que NLRX1
-rs10790286, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163 e ASC
-rs8056505 foram associados com um risco significativamente aumentado de H. pylori
infecção nesses indivíduos (Tabela S6 nas Tabelas S1). A análise estatística multivariada confirmou que NLRP12
-rs2866112 foi associado com um risco aumentado de H. pylori
em indivíduos chineses (OR: CI 2,13, 95%: 1,22-3,71)
Infecção e polimorfismos genéticos aumenta significativamente o risco de câncer gástrico em. indivíduos étnicos chineses
estado em relação ao risco de GC, numa tentativa para determinar a existência de interacção biológica, sob a forma de sinergismo ou antagonismo. Surpreendentemente, os indivíduos que abrigam dez dos polimorfismos selecionados ( CARD8
-rs10405717, NLRP3
-rs12079994, NLRP3
-rs3806265, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163, NLRX1
-rs10790286, CASP1
-rs2282659, CASP1
-rs530537 e CASP1
-rs61751523) e infectados com H. pylori
foram observadas como sendo de maior risco de GC, a maioria destes RUP estando no intervalo de 4,0-5,0 (Tabela 3). Em contraste, na ausência de H. pylori
, CARD8
-rs2043211 diminuiu significativamente o risco de GC (OR: 0,19, 95% CI: 0,06-0,63)
influências. a expressão de vários moléculas envolvidas na NOD-like Receptor Sinalização Pathway
de moléculas envolvidas na via de sinalização NLR, avaliou-se a expressão de 84 genes que codificam NLRs, outros componentes inflammasome, reguladores negativos, citocinas pró-inflamatórias, as caspases pró-inflamatórias e as moléculas envolvidas na sinalização a jusante, em células THP-1 macrófagos -derived após a exposição a dois diferentes H. pylori
cepas (GC026 e 26695). Em H. pylori
células THP1 desafiou-GC026, 49 genes foram diferencialmente expressos quando comparado com o grupo controle (Tabela S7 nos quadros S1 e Figura S1 nas Figuras S1). Destes, estatisticamente significante sobre-regulação e a sub-regulação de pelo menos duas vezes foi encontrado em 17 e 28 genes, respectivamente (Tabelas 4 e 5). Trinta e cinco genes foram diferencialmente expressos entre o grupo controle e o grupo exposto a H. pylori
26695 (Tabela S7 nas Tabelas S1 e S2 nas Figuras Figura S1). Destes, estatisticamente significante aumento da regulação e infra-regulação de pelo menos duas vezes foi encontrada em 5 a 23 genes, respectivamente (Tabelas 4 e 5).
Helicobacter Pylori
estirpes associadas com câncer gástrico e gastrite levar a diferentes níveis de expressão de citocinas e quimiocinas
estirpes. A expressão de nove genes que codificam citocinas pró-inflamatórias ( IFNB1
, IL1B
, IL12B
, IL6
, IL33
e TNF
) e quimiocinas ( CXCL1
, CXCL2, CCL5
) foram significativamente sobre-regulada em células THP-1 desafiados com ambos H. pylori
GC026 e 26695 estirpes (Tabela 4). Além disso, uma resposta imune intensa ( CXCL1
, CXCL2
, CCL5
, IL6
, IL12B
, TNF
e IFNB1
) foi iniciado contra o H. pylori
GC026 (Figura 1A). Curiosamente, um número de genes que codificam quimiocinas ( CCL2
e CCL7
) e citocinas ( IL18
, TNFSF11
e CD40LG
) foram regulados negativamente em H. pylori
-challenged THP-1 células (Tabela 5).
infecção resulta em aumento da regulação do NFKB1
com simultânea marcado para baixo-Regulamento de NLRP12
e NLRX1
e RELA
entre H. pylori
GC026- e as células 26695-desafiado. Notavelmente, embora RELA
mostrou diminuição dos níveis em células THP-1 expostos a ambos H. pylori
cepas (dobre regulamento: 0,49, p
-valor: 0,044673 e dobre regulamento: 0,26, p
-valor:. 0,131017 para H pylori
GC026 e 26695, respectivamente), estatisticamente significante aumento da regulação do NFKB1
só foi observado em H. pylori
células desafiou-GC026 (dobre regulamento: 2,50, p
-valor: 0,006825). (Figura 1C)
aumenta a expressão de PTGS2
e BIRC3
estirpes. Curiosamente, PTGS2
foi significativamente up-regulamentada em THP-1 células após a exposição a ambos H. pylori
cepas, H. pylori
células desafiou-GC026 (dobre regulamento: 54.03, p
-valor: 0,0247) mostrando os níveis de expressão significativamente mais elevados quando comparado ao H. pylori
células 26695-desafiados (dobre regulamento: 19.56, p
-valor: 0,016089) (Figura 1d). Além disso, um segundo gene envolvido na carcinogênese, BIRC3
, era exclusivamente regulado para cima em H. pylori
células desafiou-GC026 (dobre regulamento: 12,28, p
-valor: 0,001638). (Figura 1D)
infecção e esta bactéria é inicialmente alvo de PRRs, investigamos o papel das moléculas envolvidas na via de sinalização NLR em H. pylori
infecção e GC relacionada.
-rs11672725 genótipo TT é um fator de risco consistente para GC em indivíduos chineses. CARD8
, localizado em 19q13, codifica a proteína do domínio de recrutamento de caspase 8 (CARD8), também conhecido como TUCAN, o que tem sido relatado para interagir com NLRP3, suprimir os sinais de activação de NF-kB e de ser sobre-expresso em tecidos de cancro humanos incluindo os tecidos do ovário, pulmão e cancro da mama [25] - [27]. Até à data, apenas um estudo, conduzido em uma população alemã, avaliou o papel desse polimorfismo na doença [28]. Estes autores abordaram a associação entre CARD8
-rs11672725 e câncer colorretal, mas não conseguiu mostrar resultados significativos (OR: CI 1,02, 95%: 0,86-1,21) [28]. Diferenças no tipo de câncer e população do estudo podem explicar esses resultados conflitantes.