Povzetek
Ozadje
Trenutno je dobro ugotovi, da rak nastane v kronično vneto tkivo. Številni NOD-podobni receptorji (NLRs) obliko inflammasomes, intracelularni večproteinskih kompleksi kritične za ustvarjanje zrele pro-vnetnih citokinov (IL-1β in IL-18). Kot je kronično vnetje želodčne sluznice posledica Helicobacter pylori Materiali in metode Petdeset-en genetski polimorfizmi so genotipizacijo v 310 etničnih kitajski (87 primerov GC non-Cardia in 223 kontrol z funkcionalna dispepsija). Poleg tega je izražanje genov 84 molekul, vpletenih v signalne poti NLR ocenjena v celicah THP-1 preskusili z dvema H. pylori s Rezultati CARD8 Sklepi Novi zveze med polimorfizmi v signalnih poti NLR ( CARD8 Navedba. Castaño-Rodríguez N, Kaakoush NO, Goh KL, Fock KM, Mitchell HM (2014) mig-Like Receptor signalizacija Pathway v Helicobacter pylori Urednik: David M. Ojcius, University of California Merced, Združene države Amerike Prejeto: 2. marec 2014; Sprejeto: 8. maj 2014; Objavljeno: 5. junij 2014 Copyright: © 2014 Castaño-Rodríguez et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo Financiranje:. To delo bila podprta v delu The Cancer Svet New South Wales, Avstralija (Grant No.66 /04). N.O. Kaakoush podpira zgodnje Kariera štipendije iz državnega zdravje in Svetu za medicinske raziskave, Avstralija. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi Uvod skupna incidenca raka želodca (GC) pogosto giblje med državami. Glede na svetovne statistike raka, so ocenjeni skupaj 952,000 novih primerov GC in 723,000 v zvezi z GC smrti se je zgodila v letu 2012, kar predstavlja 6,8% vseh primerov raka in 8,8% vseh smrti zaradi raka [1]. Več kot 70% novih primerov in smrti zgodi v državah v razvoju, pri čemer je najvišja stopnja pojavnosti poročali v vzhodni Aziji, Vzhodni Evropi in Srednji in Južni Ameriki [2]. bakterijam Helicobacter pylori zarodne vrstice kodiran receptorji znani kot receptorji tipa razpoznavanje (PRRS), so del naravnega imunskega sistema in so ključnega pomena za odkrivanje invariant mikrobnih motivov znan kot patogen -associated molekularnih vzorcev (PAMPs). PRRS so bili razdeljeni v pet različnih genetskih in funkcionalnih genotipskih skupin: nukleotidov, ki veže oligomerizacijo domeno (NOD) podobnih receptorjih (NLRs), Toll podobnih receptorjev, lektin C-tipa receptorjev, retinojske kisline inducirajo gen (RIG) -I podobni receptorje in odsotna v melanoma 2 (AIM2) podobnih receptorjih [5] [6]. družina NLR ne le prepoznati PAMPs ampak tudi škodo, povezane molekularne vzorce (damps) v citoplazmi, ki so endogene ligande proizvedeno po tkivo poškodbe ali smrt celic [7]. NLRs značilnost struktura vključuje osrednji nukleotidno za vezavo in oligomerizacijo (Nacht) domeno, ki je prisoten v vseh družinskim članom NLR, C-terminalno levcin bogati ponavlja (LRRs) in kaspaza Izbira N-terminal (CARD) ali pirimido (PYD ) domena. Na podlagi filogenetske analize Nacht domen, je bilo ugotovljeno, da je družina NLR obsega tri poddrużin: 1) NOD družina, ki vključuje NOD1-2, NOD 3 /NLRC3, NOD4 /NLRC5, NOD5 /NLRX1 in CIITA, 2) da NLRPs vključno NLRP1-14 (znan tudi kot NALPs), in 3) IPAF podskupino, ki je sestavljena iz IPAF (NLRC4) in NAIP [7]. NLRP3 inflammasome, najbolj v celoti značilna inflammasome, sestavljena iz NLRP3 oder protein, apoptoza povezana drobec podoben protein (ASC) in kaspaze-1. NLRP3 komunicira in zaposluje adapterja PSZ preko interakcije PYD-PYD [8]. Ta interakcija vodi k zaposlovanju kaspaze-1, intracelularni aspartat specifične cistein proteaza, ki bi posledično privedlo do zorenja in sproščanja vnetnih citokinov, kot so IL-1β in IL-18. H. pylori Zato, prejšnje študije jasno kažejo, da je v odgovoru na H. pylori Materiali in metode Genotipizacija polimorfizmov, ki sodelujejo pri NOD podobno izjavo receptor Signalizacija poti, etiko. Ta študija je bila odobril odbor za humano etiko (HREC) Univerze New South Wales (UNSW) (HREC 08115 in HREC 02144). Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsakega posameznika, zaposlenega v študiji. Predmeti so etničnih kitajski posamezniki, ki so šli skozi zgornjo gastrointestinalne endoskopije v Splošni bolnišnici Changi (Singapur) in University Hospital Malezije (Kuala Lumpur), od januarja 2004 do aprila 2007. Bolnike je znano, da je okužen z virusom humane imunske pomanjkljivosti ali ki je bilo predpisano nesteroidna protivnetna zdravila, protimikrobna sredstva ali zaviralcev kisline v dveh mesecih pred zaposlitvijo so bili izključeni. Osemdeset-sedem bolnikov novo diagnosticirani s primarnim non-Cardia GC (Mednarodne klasifikacije bolezni, 9 th revizijo, številka 151), ki temelji na histološke potrditve so bili povabljeni k sodelovanju v študij. Kontrolna skupina je obsegala 223 posameznikov z diagnozo funkcionalno dispepsijo (FD), ki je bila označena kot obstojna ali ponavljajoče simptomi (bolečine ali neugodja s središčem v zgornjem delu trebuha), v odsotnosti organske bolezni (tudi na zgornjem endoskopije), v skladu s Rim II sistem razvrščanja [14]. Helicobacter pylori H. pylori izbor polimorfizmi. Elektronske baze podatkov (PubMed, Scopus, Science Direct, Ovid, Biosis predogled, podatkovne baze Scirus, CINAHL, IMBIOMED, Scielo in lilacs) smo iskali do februarja 2013 za polimorfizmov, vključenih v signalnih poti NLR ki so bili povezani z rakom, nalezljiva bolezen ali je bilo funkcionalno pomembne. Enainpetdeset polimorfizmi v 6 genov, ki so poročali, da imajo manjši alelov frekvenco >. 1% v nacionalni center za biotehnologijo informacij (NCBI) dbSNP, so bili izbrani za analizo (tabela S1 v tabelah S1) genotipizacije tehnike. za genotipizacije 51 izbranih polimorfizmov v signalnih poti NLR vsakega posameznika, vključenih v raziskavo, je bila genomsko DNA, pridobljeni iz obrobnih celih vzorcev krvi z uporabo QIAamp Blood DNA Mini Kit, kot jih je določil proizvajalec, opisanih (Qiagen, Chadstone, Avstralija). DNA je rehidrirane v sterilni vodi in normalizirana do 10 ng /ul za prilagojeno SNP genotipizacijo z uporabo matrika pomaga laser desorpcije ionizacijo časa za letom (MALDI-TOF) masne spektrometrije je Sequenom MassARRAY iPLEX? Test (San Diego, CA , ZDA) [16], [17] v instrumentu avstralski Genome Research Ltd, St Lucia, Univerza v Queenslandu, Avstralija. Ena polimorfizem, ki jih ni bilo mogoče vključiti v Sequenom MassARRAY iPLEX testom, ki je znan kot NLRP3- Štiri polimorfizmi ( CARD8 Statistična analiza. brez para Študent je t Gene Expression molekul, ki sodelujejo pri NOD-u podobnega receptorja Signalizacija poti, monocitno levkemijo celična linija človeških THP-1 (code: TIB-202). (ameriški tip kultura zbiranje, Manassas, ZDA) je bila kultivirali v RPMI 1640 mediju, dopolnjenem z 10% toplotno inaktiviramo fetalni goveji serum (FBS) (Invitrogen, Mulgrave, Avstralija), 1 mM natrijev piruvat (Invitrogen), 2500 mg /L natrijevega bikarbonata (Invitrogen ) in 100 mg /ml penicilin-streptomicinom raztopino (Invitrogen). Celice so se ohranili v 25-cm 2 tkivne kulture bučk (Greiner-Bio-On, Frickenhausen, Nemčija).. Pri 37 ° C s 5% CO 2 Bakterijska kultura H pylori okužbe test. THP-1 celice smo zasejali v gojitvenem plošči 6 vdolbinami pri koncentraciji 5 x 10 5 celic /ml ter nato ločiti na makrofage z forbol myrastate acetat (Sigma-Aldrich) za 72 ur [24]. pred bakterijsko infekcijo, je bilo sesalske celice inkubirali v mediju brez antibiotikov. H. pylori Po okužbe, ne izpodbija, in H. pylori Za analizo podatkov izražanja genov, je bila izvedena metoda relativne kvantifikacije na osnovi Ct ΔΔ uporabo spletnega RT 2 Profiler PCR Array Analiza podatkov različica 3.5 (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). Vsaj dva-krat spremembe (≥ 2, ≤0.5) in P SDS-PAGE in western-blot THP -1 celice zasejali, diferencirane in okuženih na MOI 1, kot je prej opisano. Proteini so bili pridobljeni s pomočjo Ripa buffer, ki je razdeljena na 12% NaDS poliakrilamidnih gel elektroforeza geli in se prenesejo v-metanola obdelan polyvinylidine ditluoridne membran s pomočjo sistema za prenos celic Trans-blot (Bio-Rad). Membrane so immunolabeled z zajec anti-človeških poliklonskih protiteles proti NLRX1 (1:200) ali miško anti-človeške monoklonskih protiteles proti beta-aktin (1:1000) (Santa Cruz). Goat anti-zajec in anti-mouse protitelesa IgG skupaj s HO (1:2000, Bio-Rad), so bili uporabljeni kot sekundarnih protiteles, oz. Membrane so preizkusimo v skladu s protokolom Pierce ECL Western blot Podlaga (Thermo Scientific, Scoresby, Avstralija). klinične značilnosti klinične značilnosti študijskih predmetov vključno spol, H. pylori polimorfizmi v genov, ki sodelujejo pri NOD podobnih receptorjev signalizacijo Pathway so povezane z želodčnim rakom v etničnih kitajskih posameznikov enainpetdeset polimorfizmov v genih, ki so vključeni v signalnih poti NLR bilo genotipizacijo v 310 etničnih kitajski posameznikov (87 primerih GC in 223 FD kontrol). Stopnja klic vseh izbranih polimorfizmov so v tej študiji je bila 97-100%. Vse polimorfizmi v signalnih poti NLR je bilo ugotovljeno, da je v HWE v kontrolni skupini, ki prikazuje nepomembne χ 2 vrednosti, razen za CARD8 alel in genotipov kot tudi so najbolj oddaljene regije in 95% interval zaupanja za preostalih 27 polimorfizmi prikazano v tabeli 1 in tabeli S4 v tabelah S1. CARD8 analize, ki temeljijo na haplotip so močan pristop k razklati arhitekturo kompleksnih bolezni. V sedanji raziskavi, EM algoritem opredelila 25 haplotipov s frekvenco > 0.01 v primerih, GC (preglednica S5 v tabelah S1). Uporaba velik haplotip v kontrolni skupini kot referenčno haplotipom, dva CARD8-NLRP12 polimorfizmi v genov, ki sodelujejo pri NOD podobnih receptorjev signalizacijo Pathway so povezane s Helicobacter pylori Glede na to, da je H. pylori Skupno Učinek Helicobacter pylori Nadaljnje analize so bile opravljene za oceno ne le prisotnost ali odsotnost izbranih polimorfizmov ampak tudi H. pylori Helicobacter pylori za nadaljnjo opredelitev učinka H. pylori Glede na to, da je vnetje znak želodca rakotvornosti, smo dodatno analizirali izražanje vnetnih citokinov in kemokini ob izpostavljenosti dveh H . pylori Helicobacter pylori Trinajst geni, ki kodirajo NLRs so ocenili v tej študiji, vključno s člani IPAF poddružine (NAIP, NLRC4), NLRPs (NLRP1, NLRP3-6, NLRP9, NLRP12) in pokima (NOD2, NLRC5, NLRX1 in CIITA) (slika 1B). Izraz pet genov, ki kodirajo NLRs je pomembno urejeno v H. pylori-izpodbijanih celic (NLRC4, NLRC5, NLRP9, NLRP12 in NLRX1) (tabela 5). Od teh, NLRP12 (raztegljiv ureditev: 0,03, p-vrednost: 0.016298) in NLRX1 (raztegljiv ureditev: 0,02, p-vrednost: 0.01762) so izrazito navzdol urejeno v H. pylori GC026-izpodbijanih celic. Kot tehniko potrjevanja, so bile izvedene dodatne Western Blot testi preiskovalni NLRX1 izraz. Dosledno, zmanjšanje stopnje NLRX1 so našli v celicah THP-1 izpodbijati tako s H. pylori GC026 in 26695 (dodatne informacije Slika S3). Glede na to, da je NF-κB negativno ureja NLRP12 in NLRX1, bomo še naprej v primerjavi izraz NFKB1 Helicobacter Pylori Izražanje drugih molekul, ki sodelujejo ne le v NLR signalne poti, ampak tudi na rakotvornost smo analizirali tudi s primerjavo THP-1 celice odzive na oba H. pylori Pogovor GC se zdaj šteje več dejavnikov proces, v katerem sodelujejo bakterij, okolje in gostijo genetika dejavniki v različnih fazah raka patofiziologije. Trenutno se tudi ugotovljeno, da rak nastane v kronično vneto tkivo, in to je še posebej opazen v traktu prebavnem [4]. Kot kroničnega vnetja želodčne sluznice je posledica H. pylori Kolikor nam je znano, je to prvič poročali dokaze, da so polimorfizmi vključeni v signalnih poti NLR povezano s povečanim tveganjem za GC v populaciji ljudi. Multivariatna statistična analiza je pokazala, da je CARD8 V H. pylori
okužba, smo raziskovali vlogo genetskih polimorfizmov in izražanje genov, ki so vključeni v signalnih poti NLR v H. pylori
okužbe in s tem povezano rak želodca (GC).
vlaki, GC026 (GC) in 26.695 (gastritis).
-rs11672725, NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 in NLRX1
-rs10790286 pokazala pomembne zveze z GC. Na multivariatne analize, CARD8
-rs11672725 ostal dejavnik tveganja (OR: 4,80, 95% CI: 1.39-16.58). Nadalje, NLRP12-
rs2866112 poveča tveganje za H. pylori
okužbe (OR: 2,13, 95% IZ: 1,22-3,71). Statistični analize oceni skupni učinek H. pylori
okužbe in so izbrani polimorfizmi pokazala močne zveze z GC ( CARD8
, NLRP3
, CASP1
in NLRP12
polimorfizmi). V analizah izražanje genov, je bilo pet genov, ki kodirajo NLRs precej urejeno v H. pylori
-challenged celice ( NLRC4
, NLRC5
, NLRP9
, NLRP12
in NLRX1
). Zanimivo je, da vztrajna up-regulacija NFKB1
s hkratnim zmanjšanjem števila NLRP12
in NLRX1
opazili v H. pylori
-GC026 izpodbija celice. Poleg tega so bili NF-κB ciljni geni, ki kodirajo pro-vnetnih citokinov, kemokinov in molekule, ki sodelujejo pri rakotvornosti izrazito reguliran v H. pylori
-GC026 izpodbija celice.
, NLRP3
, NLRP12
, NLRX1
in CASP1
) in GC so bile ugotovljene v kitajskih posameznikov. Naši genetski polimorfizmi in genske rezultati izraz poudarjajo pomembnost signalnih poti NLR v želodcu rakotvornosti in tesno sodelovanje z NF-κB
okužba in sorodnih želodca raku: primera-Control Study in izražanje genov analize. PLoS ONE 9 (6): e98899. doi: 10,1371 /journal.pone.0098899
je bistven etiološko dejavnik za GC (IARC, 1994), pa je prejšnje študije kažejo, da je poleg H. pylori
okužbe in prehranskih dejavnikov, gostiteljice genetika prispevajo k GC [3]. Genetski polimorfizmi so se pojavile v zadnjih letih kot determinant občutljivosti in resnosti bolezni, ki je še posebej velja za maligne bolezni prebavil [4]. Zato se lahko polimorfizmi v genih, ki sodelujejo pri prirojene in adaptivne imunosti igrajo pomembno vlogo pri patogenezi H. pylori
okužbe in razvoj H. pylori
-povezana komplikacije vključno z GC.
okužba, prve štiri fizikalno-kemijske ovire sluz sloj epitelnih celic želodca so TLR in NLRs. Omejeno število študij je ocenil interakcijo med signalnih poti NLR in H. pylori
. Na primer, začetna študija Basak et al. [9] je pokazala, da ne le, H. pylori
lipopolisaharid (LPS) aktivira kaspaze-1, ampak da je ta aktivacija kaspaze-1 vključeni v LPS-inducirane IL-1β zorenje. Kasneje Hitzler sod. [10] je pokazalo, da je H. pylori
okužba aktivira kaspaze-1, ki vodi do IL-1β /IL-18, predelavo in izločanje, tako v kulturi dendritične celice (DCS) in in vivo
. Dosledno dve nedavni študiji, so uporabili človeške želodčne celičnih linij, potrdil povečano izražanje kaspaze-1, IL-1β in IL-18 v H. pylori
okuženimi celicami [11], [12]. Poleg tega je nedavna študija Kim et al. [13] je pokazala, da je izločanje IL-1β, ki so DC, okuženih z H. pylori
zahteva TLR2, NOD2 in NLRP3 inflammasome.
, inflammasome odvisna od aktivacije kaspaze-1 je ključnega pomena za ustvarjanje zrele pro-vnetne citokine, ki so ključnega pomena za Th1 odgovorov, povezanih z želodčno imunopatologija. Glede na to, da je malo znanega o vlogi inflammasomes in drugih molekul, ki sodelujejo v NLR signalne poti v odgovor na H. pylori
okužbe in da je funkcionalno ustrezne polimorfizmi v genih tej veji imunskega sistema imajo potencial, da vpliva na velikost in smer odziva gostiteljice pred okužbo, smo raziskovali vlogo NLR signalnih poti, vključno inflammasome- sorodne molekule, v H. pylori
-povezana razvoj GC z oceno 51 genetskih polimorfizmov v kitajskih posameznikov, znano populacijo visoko tveganje za GC, in obravnavanju izražanje genov 84 molekul, ki sodelujejo v NLR signalnih poti v celični liniji monocitnega po izpostavitvi H . pylori
.
Študijski predmeti.
odkrivanje.
IgG protiteles v teh kitajskih posameznikov, so bile določene z uporabo in-house encim vezan imunsko preiskovalno metodo [15] in imunoblot (MPD Helico Blot 2.1 MP Biomedicals, Avstralija).
42 bp-VNTR je genotipizacijo s standardno PCR. Temeljni premazi so bili oblikovani z Oligo Primer Analiza Software različico 6,71 (Molecular Biology Insights, Inc; Colorado Springs, ZDA). Poskusi so bili izvedeni s pomočjo 2720 Termalna ciklerja (Applied Biosystems, Foster City, ZDA). PCR produkti so bili izpostavljeni na 1,5% agaroznem gelu in vizualizirali pod UV presvetlitvijo pomočjo sistema Gel Doc 2000 (Bio-Rad; Hercules, ZDA). V začetnih oligonukleotidov zaporedja in termo kolesarske pogoji za genotipizacije tega polimorfizma so opisani v tabeli S2 leta v tabelah S1.
-rs2043211, CARD8
-rs6509368 CARD8
-rs12984929 in NLRP3
-rs10754558), ki ga MALDI-TOF genotipizacijo bili naključno izbrani za potrditev rezultatov z uporabo PCR v realnem času. V začetnih oligonukleotidov zaporedja in termo kolesarske pogoji so opisani v tabeli S2 v tabelah S1. Kot potrditev metodologije izvaja za genotipizacije NLRP3-
42 bp-VNTR so analize zaporedja izvedemo v 10% naključno izbranih študijskih vzorcev v Ramaciotti center, UNSW, Avstralija.
-test je bila uporabljena za analizo kliničnih značilnosti. Metoda neposredne število je bila uporabljena za oceno genotipom in alel frekvence. Odstopanje od Hardy-Weinberg ravnotežju (HWE) smo testirali z bog-of-fit testa hi-kvadrat (χ 2). Določitev genetsko neravnostežje (LD) temelji na testu razmerju verjetnosti v kateri je pomen opazovanega razmerja verjetnosti ugotovljeno z izračunom ničelno porazdelitev tega razmerja pod hipotezo zgibnim ravnotežju z uporabo postopka permutacijske [18]. Haplotip sklepanje smo izvedli s pomočjo-Večanje pričakovanjem (EM) algoritem za multi-locus genotipskimi podatkov [19]. Razmerja obetov (OR) in intervali 95% zaupanja (CI) smo izračunali s pomočjo Fisher testu točno verjetnosti (dve zimske p
-values). Da bi popravili za zavajajočih dejavnikov, binarna logistična regresija (LR) popravite s H. pylori
status in spol je bila izvedena. P
-values < 0,05 je štela kot statistično značilne. Kvalitetni filtri za izključitev polimorfizmov iz statistične analize vključeni pokličite stopnjah pod 95% in odstopanje od HWE. Podatki so bili analizirani s pomočjo različice programov Arlequin 3.1 [20], GraphPad Prism različica 5.02 (GraphPad Software Inc, San Diego, ZDA) in SPSS verzija 19.0.0. (SPSS Inc., Chicago, ZDA)
sesalske celične kulture
sev GC026 ( cagA
+, Cage
+, CAGL
+, cagT
+ Váca
s1 m1 +, baba
+, oipA
+, dupa
+ in SABA
+) smo izolirali iz GC bolnik na Univerzitetni kliniki Malezije, Kuala Lumpur [21], [22]. H. pylori
sev 26.695 ( cagA
+ in Váca
s1m1 +) smo izolirali iz bolnika z gastritisom [23] (oznaka ATCC 700392). Oba H. pylori
sevi so zrasla za dva dni na agar konjske krvi plošče (Blood Agar zbirke No.2 dopolnjene s 6% sterilno defibrinated konjske krvi (Oxoid, Heidelberg West, Vic., Avstralija) pri 37 ° C v anaerobni kozarec, ki vsebuje proizvodna plin kit (Oxoid), da se zagotovi microaerobic vzdušje 6% o 2, 10% CO 2 in 84% N 2.
sevov GC026 in 26.695 nato dodamo k mediju pri množico okužbe 1 in inkubiramo 6 ur pri 37 ° C ° C in 5% CO 2. doda se bakterijski koncentracija je bila določena na podlagi standardne krivulje in optične gostote (oD) odčitavanje pri 595 nm z uporabo Bio-Rad bralnika mikroplošča modela 550 (Bio-Rad). Dejanska koncentracija je bila dodana potrdili s štetjem enot, ki tvorijo kolonije (CFU), ki rastejo na agar ploščah konjske krvi po serijski razredčenju bakterijske suspenzije.
ekstrakcijo RNA, pripravo cDNA in PCR nize.
-challenged celic THP-1 so bili uporabljeni za izolacijo mRNA uporabo Qiagen RNeasy Mini Kit, po podatkih proizvajalca (Qiagen) opisal. Za analizo genske ekspresije 84 molekul, vpletenih v NLR signalne poti je bila cDNA sintetiziramo iz 0,8 ug celotne RNA z uporabo RT 2 Prvi sklop cDNA Kit (Qiagen) in nadalje analizirani z uporabo Human Inflammasome RT 2 Profiler PCR array (PAH-097R) (Qiagen), ki ga priporoča proizvajalec. Izražanje genov profili so bili pridobljeni iz treh neodvisnih poskusih H. pylori
GC026 okuženih, H. pylori
26.695 okuženo in ustrezne ki niso okuženi (nadzor) vzorcev. Poskuse smo izvedli zaposluje ciklerja Rotor-Gene Q (Corbett Life Sciences; Doncaster, Avstralija).
-values. ≪ 0,05 je štela kot statistično značilne
Rezultati
stanje okužbe in srednja starost, so prikazani v tabeli S3 v tabelah S1. Moški spol je bilo ugotovljeno, da prevladujejo pri bolnikih GC kot v kontrolni skupini FD, ki kažejo pozitivno povezavo z razvojem GC v tej etnično kitajskega prebivalstva (OR: 2,15, 95% CI: 1.29-3.58, P
-vrednost: 0,0036). H. pylori
okužba je bilo ugotovljeno, da je prisoten pri 68,7% posameznikov v tej študiji (73/87 GC bolnikov in 140/223 FD kontrol). Primerjava razširjenosti H. pylori
okužba GC bolnikov in kontrol FD je pokazala, da H. pylori
okužba je dejavnik tveganja za razvoj GC (OR: 2,38, 95% CI: 1,41-3,99, P
-vrednost: < 0,0001). Čeprav so bili predmeti v tej študiji ujemajo po 5-let starostnih skupinah je bila povprečna starost bolnikov GC (65,3 let) bistveno višja od kontrol FD (54.3 let) ( P
-vrednost: <. 0,0001)
-rs12984929 (χ 2: 35,98), CARD8-
rs4802445 (χ 2: 5,87) in CARD8-
rs6509368 (χ 2: 5.43). Enaindvajset polimorfizmi v NLRP3
(n = 5), NLRP12
(n = 3), NLRX1
(n = 3), ASC
(n = 4) in CASP1
(n = 6), je bilo ugotovljeno, da niso polimorfno tem etnično kitajskega prebivalstva (tabela S1 v preglednic S1).
-rs11672725 TT genotipa pokazala močne povezave z GC v Dvomjerni statistična analiza (OR: 4,80, 95% CI: 1.39-16.58). Poleg CARD8
-rs11672725, še štiri polimorfizmi pokazala mejne rezultate v Dvomjerni analizo ( NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 in NLRX1
-rs10790286) (tabela 1). Nadaljnje multivariatne statistične analize, prilagoditev za H. pylori
okužba in moški spol, je pokazala, da je CARD8
-rs11672725 TT genotipa ostal dejavnik tveganja za GC v tej etnično kitajskega prebivalstva (tabela 2).
(Hap1 in Hap8), en NLRP3
(Hap3) in tri NLRX1-CASP1
(Hap21, 23 in 24) je bilo ugotovljeno, haplotipov, da poveča tveganje za GC v tej etnično kitajskega prebivalstva. Zanimivo je, da Hap1 skriva v CARD8
-rs11672725 alel T, in Hap21 in Hap23 gostijo NLRX1
-rs10790286 C alel, ki prikazuje skladnost z rezultati, pridobljenimi iz alel in genotipa analiz.
okužba v etničnih kitajskih posameznikov
je znano, da je glavni dejavnik tveganja, povezana z GC, so bile izvedene dodatne analize za ugotavljanje povezave med genetskih polimorfizmov, vključenih v signalnih poti NLR in H. pylori
okužbe. Zanimivo je, da je naša etnična kitajski študiji primerov in kontrol je pokazala, da je NLRX1
-rs10790286, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163 in ASC
-rs8056505 so bili povezani z bistveno povečanim tveganjem za H. pylori
okužbe pri teh posameznikov (preglednica S6 v tabelah S1). Multivariatna statistična analiza je potrdila, da je NLRP12
-rs2866112 je bila povezana s povečanim tveganjem za H. pylori
v kitajskih posameznikov (OR: 2,13, 95% CI: 1.22-3.71)
okužbe in genetskih polimorfizmov izrazito povečuje tveganje Rak želodca v. etnične kitajski Posamezniki
stanje v zvezi s tveganjem za GC, v poskusu, da ugotovi obstoj biološke interakcije v obliki sinergizma ali antagonizma. Presenetljivo, posamezniki zatočišča deset izbranih polimorfizmov ( CARD8
-rs10405717, NLRP3
-rs12079994, NLRP3
-rs3806265, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163, NLRX1
-rs10790286, CASP1
-rs2282659, CASP1
-rs530537 in CASP1
-rs61751523) in okužene s H. pylori
so opazili, da so najbolj ogrožene GC, večino teh najbolj oddaljenih regij v območju 4.0-5.0 (tabela 3). Nasprotno, v odsotnosti H. pylori
okužba, CARD8
-rs2043211 bistveno zmanjšalo tveganje za GC (OR: 0,19, 95% IZ: 0,06-0,63)
vplivi. izražanje več molekul, vpletenih v NOD podobnih receptorjev signalizacijo Peš-pot
na molekule, ki sodelujejo pri signalne poti NLR, smo ocenili ekspresijo 84 genov kodira NLRs, druge komponente inflammasome, negativne regulatorje, pro-vnetnih citokinov, pro-vnetnih kaspazi in molekul, ki sodelujejo v prodajnem signalizacijo, v THP-1 -derived makrofagov naslednje izpostavljenosti dveh različnih H. pylori
sevi (GC026 in 26695). V H. pylori
-GC026 izpodbijala THP1 celice so bile 49 genov različno izražena v primerjavi s kontrolno skupino (tabela S7 v tabelah S1 in sliki S1 na slikah S1). Od tega je bila statistično značilna up-regulacije in navzdol ureditev vsaj dvakrat, na voljo v 17 in 28 genov, v tem zaporedju (preglednici 4 in 5). Trideset pet geni so različno izražena med kontrolni skupini in skupini izpostavljeni H. pylori
26695 (Tabela S7 v tabelah S1 in slika S2 na sliki S1). Od tega je bila statistično značilna up-regulacije in navzdol ureditev vsaj dvakrat, na voljo v 5 in 23 genov, v tem zaporedju (preglednici 4 in 5).
Helicobacter pylori
Sevi pridruženimi z želodca Rak in gastritis privedejo do različnih ekspresivnih nivoji citokinov in kemokini
sevi. Izraz devet genov, ki kodirajo pro-vnetnih citokinov ( IFNB1
, IL1B
, IL12B
, IL6
, IL33
in TNF
) in kemokini ( CXCL1
, CXCL2, CCL5
) so bili občutno navzgor urejena v celicah THP-1 izpodbijati tako s H. pylori
GC026 in 26695 sevi (tabela 4). Poleg tega intenzivno imunski odziv ( CXCL1
, CXCL2
, CCL5
, IL6
, IL12B
, TNF
in IFNB1
) se je začel zoper H. pylori
GC026 (slika 1A). Zanimivo je, da število genov, ki kodirajo kemokinov ( CCL2
in CCL7
) in citokinov ( IL18
, TNFSF11
in CD40LG
) so dol-urejeno v H. pylori
-challenged THP-1 celice (Tabela 5).
okužba Rezultati v Up-regulacijo NFKB1
s simultano zanj že-uredbo NLRP12
in NLRX1
in rela
med H. pylori
GC026- in 26.695-izpodbija celice. Presenetljivo, čeprav Rela
pokazala znižane vrednosti v celicah THP-1, ki so izpostavljeni tako H. pylori
sevi (raztegljiv ureditev: 0.49, p
-vrednost: 0,044673 in krat ureditev: 0.26, p
-vrednost. 0,131017 za H pylori
GC026 in 26695, v tem zaporedju), statistično značilno up-regulacija NFKB1
opazili le v H. pylori
-GC026 izpodbijati celice (raztegljiv ureditev: 2.50, p
-vrednost: 0,006825). (slika 1C)
Poveča Podajanje PTGS2
in BIRC3
sevi. Zanimivo je, PTGS2
je precej up-urejena v THP-1 celic po izpostavitvi tako H. pylori
sevi, H. pylori
-GC026 izpodbijati celice (raztegljiv predpis: 54.03, p
-vrednost: 0,0247) kaže bistveno višje nivoje izražanja, ko v primerjavi s H. pylori
26.695-izpodbijane celic (raztegljiv predpis: 19.56, p
-vrednost: 0,016089) (slika 1d). Poleg tega drugi gen vključen v rakotvornosti BIRC3
, je izključno up-urejena v H. pylori
-GC026 izpodbijati celice (raztegljiv ureditev: 12.28, p
-vrednost: 0.001638). (slika 1D)
okužbe in to bakterijo je najprej usmerjen PRRS, smo raziskovali vlogo molekul, vključenih v signalnih poti NLR v H. pylori
okužbe in s tem povezane GC.
-rs11672725 TT genotipa dosledno dejavnik tveganja za GC v kitajskih posameznikov. CARD8
, ki se nahaja na 19q13, kodira kaspazne zaposlovanje domene proteina 8 (CARD8), znan tudi kot Tucan, ki je poročal, da interakcijo z NLRP3, zatreti NF-κB aktiviranje signale in izraženi pri človeških tkiv raka vključno jajčnikov, pljuč in rak dojke tkiva [25] - [27]. Do sedaj, samo eni od študij, ki poteka v nemškem prebivalstvu, je ocenila vlogo tega polimorfizma v bolezni [28]. Ti avtorji obravnavati povezavo med CARD8
-rs11672725 in kolorektalnega raka, vendar pa ni pokazal nobene pomembne rezultate (ali: 1,02, 95% CI: 0,86-1,21) [28]. Razlike v vrsti raka in študijske populacije lahko predstavljajo te nasprotujoče si rezultate.