PLoS ONE: Гиперэкспрессия CD151 Предсказывает прогноз у больных с резецировали рака желудка

Абстрактный

Цель
<р> тетраспанины CD151 действует как промотор метастаза и инвазии в нескольких опухолей. Тем не менее, роль CD151 в рака желудка человека (HGC) остается неясным.

Методы

образцы Двадцать ТЖК и совпавшие nontumor образцы, человеческих эпителиальных клеток желудка (HGEC), а также четыре клетку рака желудка линии были использованы для анализа CD151 выражение. Короткие РНК шпилька-опосредованной подавление экспрессии CD151 в клетках ТЖК было проведено с целью изучения роли CD151 в пролиферации и метастазирования /нашествие клеток ТЖК в естественных условиях
и в пробирке
. Отношения CD151 с интегрином а3 в клетках ТЖК была исследована глушителей интегрина а3 с последующим совместным иммунопреципитации и иммунофлуоресцентного окрашивания. Наконец, прогностическое значение CD151 и интегрина а3 оценивали с помощью иммуногистохимии в ткани микрочипов из 76 больных ТЖК.

Результаты
<р> была выражена CD151 на более высоких уровнях в тканях и клетках ТЖК ТЖК, чем в nontumor тканей и клеток HGEC. Понижающей регуляции CD151 по vshRNA-CD151 ослабленным метастаза и инвазии ТЖК-27 клеток, но не влияет на клеточную пролиферацию. CD151 образуется комплекс с интегрином а3 в клетках ТЖК. CD151-кДНК трансфекции спас метастатического потенциала и инвазивность клеток ТЖК-27-vshCD151, но не те а3 клеток ТЖК-27-vshintegrin в пробирке
. Клинически, CD151 избыточная экспрессия была достоверно коррелирует с высокой стадии TNM, глубина вторжения и вовлечение положительного лимфатических узлов ( р
&л; 0,05), а также высокие уровни интегрина а3 были связаны с большим размером опухоли, высокой стадии TNM, глубина вовлечения вторжения и лимфатических узлов ( р
&л; 0,05). Важно отметить, что послеоперационный 5-летняя общая выживаемость больных с CD151 низкий и /или интегрина α3 низкий был выше, чем у пациентов с CD151 высокой и /или интегрина α3 высокая.

Вывод изображения <р> CD151 положительно связана с инвазивности ТЖК и CD151 или сочетание CD151 и интегрина α3 является новым маркером для предсказания прогноза больных ТЖК и могут быть потенциальные терапевтические цели.
<р> Образец цитирования: Ян Ю.М., Чжан ZW, Лю QM, вс YF, Ю. JR, Сюй WX (2013) Гиперэкспрессия CD151 предсказывает прогнозом у пациентов с резецировали рака желудка. PLoS ONE 8 (3): e58990. DOI: 10.1371 /journal.pone.0058990
<р> Редактор: Ив Сен-Пьер, INRS, Канада
<р> Поступило: 7 октября 2012 года; Принято от: 8 февраля, 2013 года; Опубликовано: 22 марта 2013
<р> Copyright: © 2013 Ян и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была поддержана фондом академика Workstation Шаосин Второго народной больницы. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> Человеческий рак желудка (ТЖК) является наиболее частой причиной связанной с раком смерти [1]. Заболеваемость ТЖК была оценена в 934,000 случаев в год с 56% новых случаев, происходящих в Восточной Азии, в том числе 41% в Китае и 11% в [2] Япония. Хотя глобальная заболеваемость GC в последние годы уменьшилась, ее уровень смертности в Китае является самым высоким среди всех опухолей и составляет 25% GC смертности во всем мире [3]. Несмотря на недавние достижения в области химиотерапии и хирургических методов, 5-летний курс общей выживаемости (ОВ) в Китае находится на низком уровне 40%. Большинство HGCs диагностируется на стадии III или IV, и скорость метастазов в лимфатических узлах с GC является высокой (50-75%) [4]. Патогенез ТЖК является многофакторной в том числе генетической предрасположенности и факторов окружающей среды. Некоторые генетические изменения связаны с предрасположенностью к ТЖК, в том числе и с участием опухолевых супрессорных генов, онкогены, молекулы клеточной адгезии, факторы роста, и генетической нестабильности [5]. Таким образом, достижение лучшего понимания молекулярных механизмов, участвующих в ТЖК и идентификации ценных диагностических маркеров и новых терапевтических стратегий имеет большое клиническое значение.
<Р> тетраспанины являются поверхностно-клеточные белки, которые охватывают мембрану четыре раза, и найдены в нескольких типах клеток во многих организмов. Они показывают многочисленные свойства, указывающие на их физиологическое значение в клеточной адгезии, подвижности, активации и пролиферации, а также их вклад в патологических состояний, таких как метастаза и патологический ангиогенез [6], [7], [8]. CD151 является клеточной поверхности гликопротеин, принадлежащий к тетраспанины надсемейства, что впервые было показано способствовать метастаз в исследовании, в котором неизвестное антитело специфически ингибирует образование метастаз в организме человека плоскоклеточного рака В естественных условиях
[ 9 <бр>]. Антитело распознает CD151 и ингибирует миграцию клеток, не затрагивая адгезию или пролиферацию. Малые интерферирующие РНК (миРНК) опосредованное подавление экспрессии CD151 в первичных меланоцитов приводит к потере подвижности, в то время как она мало влияет на установившихся уровней интегринов. Более того, эти изменения могут быть обращены вспять, когда была вновь выражена CD151 [10]. Избыточная экспрессия CD151 было показано, активирует интегрином и рецептор фактора роста зависимых сигнальных путей, что привело к увеличению подвижности и инвазии раковых клеток [11]. Этот процесс был также предложено внести свой вклад в активацию путей, опосредованных малыми ГТФаз, что увеличивает ГТФ связывание с Cdc42 и Rac, организаторы цитоскелета клетки. Адгезия-зависимой активации Ras, ЭРК /MAPK1 /2 и протеинкиназы В (РКВ) /Akt было показано, модулировать путем CD151 [7], [12]. Широкий спектр функций CD151, и в частности, его участие в инвазии и метастазирования раковых клеток, позволяют предположить, что более глубокое понимание его выражения и роли в ТЖК может иметь важное значение.
<Р> В настоящем исследовании мы исследовали экспрессию CD151 в эпителиальных клеток желудка человека (HGEC), клеточные линии ТЖК, образцы ТЖК, и прилегающих к ним неопухолевых тканей. Кроме того, мы исследовали влияние миРНК глушителей CD151 на пролиферацию, инвазии и метастазирования способности ТЖК-27 клеток, и исследовали взаимосвязь между CD151 и интегрина а3. Наконец, экспрессия CD151 и интегрина а3 исследовали с помощью иммуногистохимии в микрочипе ткани, состоящей из 76 случаев ТЖК и прогностическая роль CD151 и /или интегрина α3 в ТЖК исследовалась.

Материалы и методы

клеточные линии
<р> клеточные линии HGEC и ТЖК, в том числе ТЖК-27, АГС, MKN28 и MGC803, были получены из американской коллекции типовых культур и хранятся в нашей лаборатории. Все клеточные линии поддерживали в модифицированной среде Дульбекко Игла (DMEM, Invitrogen), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone) при 37 ° С в увлажненном инкубаторе при 5% CO <суб> 2.

Пациенты и Последующие
<р> Двадцать свежих образцов опухоли из районов, близких к краю опухоли и совпадающая неопухолевой ткани (более 3-х см от опухоли) были слепо получены из последовательных пациентов с ТЖК, перенесших целебное резекцию в период с февраля 2009 и ноябре 2010 года в Шаосин Второй народной больницы (Шаосин, Китай). Еще 76 пациентов с раком желудка, перенесшие резекцию с R0 расширенной лимфодиссекции (D2) в период с сентября 2005 года по сентябрь 2008 года в Шаосин Второй народной больницы были включены в данное исследование. Оценка образцов резецированных была проведена в соответствии с руководящими принципами Японской ассоциации рака желудка (1998). Каждый стандарт резекция включал удаление группы 1 и 2 лимфатических узлов (в диапазоне 36-60, среднее 47,6). Классификация Стадия была выполнена в соответствии с классификацией TNM для ТЖК (UICC). Образцы были отобраны на основе наличия подходящих фиксированных формалином, залитых парафином тканей и полный клиникопатологическими и последующие данные пациентов. Характеристики испытуемых были приведены в таблице 1. Данное исследование было одобрено Комитетом по Шаосин Второго народной больницы по этике исследований по письменное информированное согласие было получено от всех людей. Ни один из пациентов не получали химиотерапии или лучевой терапии до или после операции в рамках адъювантной программы. Сбор данных Последующая деятельность была прекращена в сентябре 2012 г. Средний период наблюдения составил 43,0 месяцев (диапазон 6-78 месяцев). Последующие процедуры состояли из временной истории, физической экспертизы, оценки опухолевых маркеров (CEA, CA-199), УЗИ брюшной полости и рентген грудной клетки каждые 2-3 месяца или КТ каждые 6 месяцев. Общая выживаемость (OS), была определена как интервал между операцией и смертью или между операцией и последним наблюдением у выживших пациентов. Данные были подвергнуты цензуре на последнем наблюдения для живых пациентов.

Экстракция РНК и обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР)
<р> Суммарную РНК экстрагировали с помощью TRI Reagent (Sigma ) в соответствии с протоколом производителя. РНК затем обрабатывали DNAseI (Roche Diagnostics), очищают через колонку RNeasy (Qiagen) и подвергали электрофорезу для определения целостности РНК перед использованием в 5'-RACE экспериментов. Комплементарной ДНК (кДНК) синтезируют из 2 мкг тотальной РНК с использованием метода случайных гексамеров (Proligo) и выносные III обратной транскриптазы (Invitrogen). ОТ-ПЦР проводили на панели клеточных линий и образцов опухолей. Праймеры, используемые для ПЦР были следующими: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'и 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; интегрин α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'и 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'и 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. Условия-ПЦР следующим образом: 10 мин при 94 ° С, денатурация при 94 ° С в течение 20 с, отжиг при 59 ° С в течение 30 секунд и удлинение при 72 ° С в течение 60 сек. Выражение CD151 и интегрина α3 по отношению к гену домашнего хозяйства GAPDH анализировали с помощью анализа плотности с использованием программного обеспечения v5.0 диапазона сканирования. Все эксперименты проводились в трех экземплярах.

иммуноблоттинг и иммунофлуоресценции
<р> Общее содержание белка клеточного экстракта (30 мкг) разделяли с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном геле, переносили на поливинилидендифторидную мембраны, и инкубировали с соответствующие антитела. Мембраны были разработаны с методом усиленной хемилюминесценции (Pierce, Rockford, IL, USA). Мышиного антитела против человеческого CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, Великобритания) и анти-интегрин α 3 моноклональные антитела (P1B5, 1:300; Хемикон Интернэшнл, Temecula, CA) использовали для определения экспрессии CD151 и интегрином а3, соответственно , GAPDH (1:5,000; Хемикон, США) использовали в качестве внутреннего контроля. Все эксперименты проводились в трех экземплярах.
<Р> ТЖК-27 клетки были использованы для определения местоположения CD151 и интегрином а3, как описано ранее [13]. использовали мышиного антитела против человеческого CD151 моноклональное антитело (11G5a, 1:200;; Serotec, Великобритания) и мыши против человеческого интегрина, α3 антитела (Хемикон Интернэшнл, Temecula, CA P1B5, 1:300). Срезы анализировали с помощью флуоресцентной микроскопии (Leica Microsystems Imaging Solutions).

Трансфекция лентивирусов векторов с малым Шпилька РНК против CD151 и интегрином α3
<р> Вектор pGMLV /Neo-shRNA-CD151 был построен в соответствии с инструкциями изготовителя (pGMLV, небольшая шпилька РНК (shRNA) я Вектор, Шанхай Genomeditch Co. Ltd). были созданы три shRNA-CD151 лентивирусов векторы (pGMLV-GFP-shRNA -CD151), чтобы заглушить экспрессию CD151 в клетках ТЖК-27 (shRNA-CD151-ГГК-27). Целевые последовательности shRNA для CD151 были следующими:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. Последовательность нацеливание shRNA для интегрина а3 распределились следующим образом: 5'- CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 '(Shanghai Genomeditech, Шанхай, Китай). Стабильно трансфицированные клоны характеризовались ОТ-ПЦР и анализировали с помощью иммуноблоттинга для уровней экспрессии CD151 и интегрина а3 белки.

МТТ, миграция клеток, и Матригель вторжения АНАЛИЗЫ
<р> Клетки высевают в 96-луночные планшеты (2000 в 200 мкл-лунку) и инкубировали в течение 24, 48 и 72 ч. Объем 20 мкл раствора МТТ добавляли в указанные моменты времени, и инкубировали в течение 4 часов. Носитель (200 мкл DMEM, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки) был затем заменен на 150 мкл ДМСО, планшеты встряхивали в течение 10 мин и оптическую плотность при 490 нм измеряли с целью определения количества жизнеспособных клеток в каждую лунку. Все эксперименты проводились три раза.
<Р> Миграция клеток оценивали с помощью ранозаживляющим анализа. Клетки выращивали до 80-90% слияния в 24-луночных планшетах. Рана была сделана путем перетаскивания пластиковый наконечник пипетки по всей поверхности клетки. Остальные клетки промывали три раза для удаления остатков клеток и инкубировали при 37 ° C с бессывороточной средой. В течение указанных периодов времени, мигрирующие клетки на фронте раны были сфотографированы и сравнены. Три отдельных эксперимента были проведены
<р> инвазии клеток анализы были проведены с использованием 24-луночного transwells (размер 8 мкм пор; Millipore). Матригель с предварительно покрытых (Falcon 354480; BD Biosciences). В общей сложности 1 × 10 5 клеток затем суспендировали в 500 мкл среды DMEM, содержащей 1% FBS и добавляли в верхнюю камеру, в то время как 750 мкл DMEM, содержащей 10% FBS, помещали в нижнюю камеру. После 48 часов инкубации, Матригель и клеток, оставшихся в верхней камере были удалены ватным тампоном. Клетки на нижней поверхности мембраны, фиксировали в 4% параформальдегида и окрашивали Гимза. Клетки в 5 микроскопических полей (увеличение, × 200) были подсчитаны и фотографировали. Все эксперименты проводились в трех экземплярах.

В естественных условиях
метастазы Анализы <р> Для анализов метастазирование в естественных условиях, MGC-803-Мок, MGC-803-vshRNACD151 и MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 клетки были пересажены в голых мышей (5-недельных мышей BALB /C-Nu /Nu, 5 на группу, 1 × 10 6 клеток для каждой мыши) через боковую хвостовую вену [14]. Через 7 недель забивали мышей. Их легкие извлекали и подвергали гематоксилином и эозином (H &Amp; E) окрашивание. Все исследования с участием животных проводили в соответствии с протоколами, утвержденными Shaoxing Второго народной больницы животных комиссия по уходу.

Со-иммунопреципитации (Co-IP) АНАЛИЗЫ
<р> Клетки лизируют с РПСО лизис буфера с добавлением с 40 мМ NaF, 100 мкМ Na <суб> 3VO <югу> 4 и полной ингибиторов протеаз (Roche). После удаления нерастворимого материала центрифугированием при 12000 • g, то precleared лизаты инкубировали с первичным мАт предварительно абсорбируют белок A- и G-сефарозы (Pierce Biotechnology) в течение ночи при 4 ° С. Осадок трижды промывают буфером для лизиса, отваривают в 2 × SDS буфера для образца в течение 5 минут, и белки разделяли с помощью SDS-PAGE на 10% градиентном геле. Последующие иммуноблоты зондировали с соответствующим антителом и обнаруживаться ЭСЛ.

Строительство тканей микрочипов и Immunohistochemistry

тканевых микрочипов были построены, как описано ранее [15]. Если коротко, то все образцы пациентов ТЖК были рассмотрены гистологическое гематоксилином &Amp; эозином и репрезентативные участки были premarked в парафиновые блоки, вдали от некротических и геморрагических материалов. Дубликат цилиндров 1 мм диаметром от двух различных областей, в центре опухоли и ближайшей доброкачественное краем (обозначается как внутриопухолевой и peritumor, соответственно, в общей сложности четыре пуансонов), были включены в каждом конкретном случае, наряду с различными элементами управления, чтобы обеспечить воспроизводимость и гомогенный окрашивание слайдов (Shanghai биочипа Co. Ltd, Шанхай). Таким образом, четыре различных блоков ткани микрочипов были построены, каждый из которых содержит 140 цилиндров. Срезы толщиной 4 мкм, помещали на предметные стекла, покрытые 3-аминопропилтриэтоксисилана. Мышиные моноклональные антитела к человеческому CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, Великобритания) и мышиного антитела против человеческого интегрина, α3 (P1B5, 1:300; Хемикон Интернэшнл, Temecula, CA), антитела использовали для определения экспрессии CD151 и интегрином а3 , Изображения были захвачены v3 программного обеспечения Leica QWin Plus. Интенсивность положительного окрашивания измеряли, как описано. Интенсивность CD151 и интегрина а3 был классифицирован на два уровня экспрессии в зависимости от средней площади положительное окрашивание в качестве значения среза следующим образом: CD151 ^{высокий, &GТ; 50% от секции опухоли; и интегрин α3 высокий, и Гт 25% участка опухоли; CD151 низкий, &л; 50%, и интегрина α3 низкий, &л; 25% [15]}

Статистический анализ
<р> Статистический анализ проводили с SPSS 16,0 программного обеспечения (. SPSS). Величины выражены как среднее ± стандартное отклонение. Для иммуногистохимических маркеров, отсечка для определения подгрупп было медианное значение интенсивности. Χ ^{2-тест и т-тест Стьюдента использовались для сравнений между группами. ОС была определена, как описано ранее [15]. Прогностическая значимость оценивали с использованием оценок выживаемости Каплана-Мейера и лог-ранговый тесты. пропорционального риска регрессионной модели Кокса была использована для анализа независимых прогностических факторов. Все тесты были двусторонними и р
&л; 0,05 считалось статистически значимым}

Результаты

CD151 избыточно экспрессируется в выражении CD151 HGC
<р> анализировалась. с помощью оТ-ПЦР и иммуноблоттинга в опухоли HGC и совпадающим nontumor тканей. Была выражена CD151 на низких уровнях в nontumor тканях по сравнению с тканями ТЖК. Как показано на рис. 1А, В и С, относительная экспрессия белка CD151 в образцах ТЖК был 2,95 ± 0,21 (диапазон, 1,13 - 3,59) по сравнению с 1,30 ± 0,09 (диапазон 1.00-1.81) в nontumor образцах, а различие было статистически значимым ( р
&л; 0,01). Кроме того, уровни экспрессии CD151 были значительно ниже, чем в HGEC ТЖК-27, АГС, MKN28 и MGC803 клеток (р &л; 0,05). Каких-либо различий в уровне экспрессии CD151 не были обнаружены среди ТЖК клеток (рис. 1D, E и F). Immunohistochemstry (IHC) анализы подтвердили, что было выражено белок CD151 на более высоких уровнях в тканях ТЖК, чем в подобранных nontumor тканях (рис. 1G).

CD151 Пропагандировал инвазию и метастазирование из ТЖК клеток в пробирке и в естественных условиях

<р> Чтобы исследовать роль CD151 в клетках ТЖК, мы модифицировали экспрессию CD151 в ТЖК-27 клеток с помощью РНК-интерференции и кДНК-CD151 трансфекции (рис. 2А). Результаты ранозаживляющих анализа показали задержку в скорости закрытия раны от shRNA-CD151-ТЖК-27 клеток на 48 ч по сравнению с ТЖК-27-Мок клеток, которые извлекали кДНК-CD151 трансфекции (фиг. 2B). Понижающей регуляции CD151 не оказало существенного влияния на пролиферацию клеток ( р
> 0,05, рис 2С.). Тем не менее, подавление экспрессии CD151 нарушение инвазивность ТЖК-27 клеток (рис. 2D, Е).
<Р> Для дальнейшего изучения роли CD151 в метастазирования опухолей в естественных условиях, MGC-803-Мок, MGC- 803-vshRNACD151 и MGC-803-vshRNACD151-кДНК-CD151 клетки были пересажены в голых мышей через боковую хвостовую вену. Гистологический анализ легких мышей подтвердили, что понижающее регулирование CD151 подавляется образование метастазов в легких. Число и размер Метастазы в легких узелков по сравнению с MGC-803-Mock и клеток МГЦ-803-vshRNACD151-кДНК-CD151 (рис. 2 F, G) были существенно уменьшились в группе МГЦ-803-vshRNACD151. Взятые вместе, наши результаты свидетельствуют о том, что CD151 является положительным регулятором желудка метастазирование рака.

CD151 образует комплекс с интегрина а3 и Сайленсинг интегрина а3 Ослабляет ТЖК инвазии клеток индуцируется сверхэкспрессией CD151

участие тетраспанины в интегрин-опосредованной регуляции раковых метастаз было продемонстрировано, и α3β1 интегрин было показано содействовать GC инвазию и метастазирование [16]. Поэтому мы исследовали зависимость между интегрином а3 и CD151 в клетках ТЖК. Как показано на рис. 3А, была выражена интегрина α3 на более высоких уровнях в клетках ТЖК, чем в клетках HGEC. Со-иммунопреципитации эксперименты показали, что CD151 образовали комплекс с интегрином α 3 в ТЖК-27 клеток (фиг. 3б, в). Кроме того, CD151 и интегрин α3 колокализуются на плазматической мембране ТЖК-27 клеток, как это показано с помощью иммунофлуоресценции (рис. 3D).
<Р> Для дальнейшего изучения вовлечение CD151 в интегрина функции а3, клетки были подвергнуты РНК-интерференции или кДНК трансфекции и анализировали с помощью экспериментов Transwell после замены гель матрицы с ламинина-332 [17]. Результаты показали, что глушителей интегрина а3 заметно тормозило вторжение в ТЖК-27 клеток, и CD151 кДНК трансфекции спасли инвазивной способность HGC-27-vshRNACD151, но не то, что из HGC-27-vshRNA интегрина а3 клетки. Кроме того, интегрина а3 антитела ингибируют инвазию ТЖК-27-vshRNACD151-кДНК-CD151 клеток (рис. 3Е, F). Эти результаты свидетельствуют о том согласованную функцию CD151-интегрин а3 комплекса, и указал, что высокие уровни CD151 и интегрина а3 связаны с увеличением метастатического потенциала клеток GC.

Выражение CD151 или интегрина а3 является благоприятствующие Злокачественные с фенотипами ТЖК иммуногистохимическим
<р> выражение CD151 и интегрина α3 белок был исследован в 76 первичных больных ТЖК с использованием микрочипов ткани (ТМА). CD151 белок иммунореактивности локализованным на клеточной мембране (рис. 4, а). В опухолевых тканях, экспрессия CD151 показали значительную гетерогенность в различных образцах (рис. 4A1, B1, C1 и D1). CD151 высокая составила 50% (38/76) из всей когорты. Как показано в таблице 1, CD151 высоко значимо коррелировали с размером опухоли (<ЕМ> р = 0,021
), глубина инвазии (<ЕМ> р = 0,004
), вовлечение лимфатических узлов ( р = 0,028
) и стадии высокой опухоли ( р = 0,002
). Тем не менее, другие клинические характеристики, в том числе возраст, пол и дифференцировки опухоли, не были в значительной степени связано с выражением CD151.
<Р> мембранах опухолевых клеток окрашивали положительно для интегрина а3 (рис. 4а2, b2, c2, и d2). Во всех анализируемых тканях, высокие уровни экспрессии интегрина а3 были обнаружены в 27 образцах ткани ТЖК (35,52%). В соответствии с результатами предыдущих исследований [16], [18], у пациентов с высоким выражением а3 интегрина были более склонны проявлять агрессивные черты. Интегринзависимая α3 высокие пациенты показали большие опухоли ( р =
3.46E-4), большая глубина инвазии ( р = 0,001
), более высокая стадия опухоли ( р =
0,005), а также более активное участие лимфатических узлов ( р = 0,040
), чем у пациентов с низким выражением а3 интегрина (таблица 1).

оверэкспрессия CD151 и /или интегрина а3 являются независимыми Факторы предсказания прогноза ТЖК Пациенты
<р> до последнего наблюдения, 3- и 5-летние показатели ОС в целом населения составляли 53,0 и 40,78%, 5-летняя выживаемость в CD151 ^{низкая группа была значительно выше, чем в CD151 высокой группы (68,42% против.
23,68%, соответственно, р
= 0,007, рис. 4Б) и послеоперационный 5-летняя выживаемость пациентов ТЖК была выше в интегрина а3 низкий, чем в интегрина а3 высокой группы (66,67% против.
13,51%, р = 6,67
Е-6). Оценка комбинированного действия CD151 и интегрина а3 на прогноз ТЖК показал, что 5-летняя ОС CD151 высоко /интегрина α3 высокие пациентов (группа III, п = 23) было 17,40%, что было значительно ниже, чем у CD151 низкая /интегрина α3 низких пациентов (77,78% группы I, п = 27) и либо низкие пациентов (пациенты с любой низкой CD151 или только низким интегрина а3) (23,08%, группы II , п = 26, рис. 4C и D).
<р> Одномерный анализ показал, что размер опухоли, глубина инвазии, поражения лимфатических узлов, стадия высокой опухоли, высокий уровень экспрессии CD151, высокий уровень интегрина а3 и коэкспрессии из CD151 и интегрина а3 были прогностическими OS. Другие характеристики, включая возраст, пол и дифференциации не имели прогностического значения для OS (таблица 2). Многофакторный Кокса модель показала, что глубина инвазии был независимым прогностическим индикатором для ОС (табл. 2).}

Обсуждение
<р> Результаты настоящего исследования показали, что было выражено CD151 на более высоких уровнях в GC клетках и опухолевых тканях, чем в клетках HGEC и nontumor тканях, что согласуется с предыдущими сообщениями о экспрессии CD151 в различных опухолей, в том числе внутрипеченочный холангиокарцинома, НСС, молочной железы, легких, толстой кишки и рака предстательной железы [15], [19] , [20], [21]. Кроме того, наше исследование показало, что CD151 образует функциональный комплекс с интегрином а3 и понижающая регуляция CD151 или экспрессии интегринов α3 заметно ингибирует инвазию и метастазирование клеток ТЖК в пробирке. Клинически, наши результаты показали, что высокий уровень экспрессии CD151 или со-оверэкспрессии CD151 и интегрина а3 может иметь неблагоприятное прогностическое значение для пациентов с GC.
<Р> Начальное доказательство того, что CD151 способствует метастаз пришли из исследования, показывающие, что антитело с неизвестной специфичностью ингибирует образование метастаз человеческим плоскоклеточный рак линии в естественных условиях
. Антитело признал CD151 и ингибирует миграцию клеток, не затрагивая адгезию или пролиферацию [22]. Сверхэкспрессия CD151 был обнаружен во многих типах опухолей, а также повышенная экспрессия CD151 было связано с плохим прогнозом при раке молочной железы, поджелудочной железы и рака легких немелкоклеточного-клеток, а также ЖСК. Кроме того, CD151 было показано, что лучшим показателем прогноза у пациентов с раком простаты, чем гистологической классификации [23]. В настоящем исследовании, две линии доказательств показали, что избыточная экспрессия CD151 имеет клиническое значение в ТЖК. Во-первых, CD151 избыточная экспрессия чаще наблюдалось у больных ТЖК с плохим прогнозом. Во-вторых, повышенная экспрессия CD151 усиливает инвазию и метастазирование клеток ТЖК. Кроме того, клинические данные показали, что повышенная экспрессия CD151 превзошла другие обычно используемые клинические параметры, такие, как увеличение размера опухоли и плохой дифференциации для прогнозирования ТЖК прогноз. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что CD151 играет важную роль в прогрессировании ТЖК. В настоящем исследовании мы показали, что CD151 взаимодействует с интегрином а3 в клетках ТЖК. Модуляция уровней экспрессии интегрина а3 в клетках ТЖК-27-vshCD151-кДНК-CD151 выявили формирование функционального CD151-интегрин а3 комплекса и показал, что совместное избыточная экспрессия CD151 и интегрина а3 был связан с увеличением метастатического потенциала клеток ТЖК , Учитывая установленную роль интегрина а3 в ТЖК [16], то разумно предположить, что избыточная экспрессия CD151 может способствовать метастазирования /вторжение в GC.
<Р> Из-за их гидрофобной природы, тетраспанины ассоциировать друг с другом и с другими мембраной белки [24]. Действительно, хорошо известно, что тетраспанины обеспечивают платформу сигнализации в плазматической мембране путем формирования тетраспанины обогащенного микродоменах (TEMS) [6], [7]. На сегодняшний день различные типы мембранных белков, в том числе рецепторов фактора роста, интегрины, иммуноглобулиновые домены и EWI-F (подсемейство белков Ig) были обнаружены в ПЭМ [25]. Кроме того, функции этих мембранных белков, как сообщается, тесно связано с ПЭМ. Например, были обнаружены различные комбинации тетраспанины образующих ТОИ влиять на функцию рецепторов фактора роста и интегрином. Что еще более важно, уровень экспрессии отдельных тетраспанины в ПЭМ также оказывает значительное влияние на ассоциированных белков [26], [27]. В недавних исследованиях, нокдауна из CD151 было показано, что ухудшает образование ПЭМ и CD151 удаление ингибирует функцию нескольких мембранных белков, что свидетельствует о том, что CD151 играет важную роль в формировании и функции ТЭМ [7], [26]. Кроме того, блокирование CD151 заметно снижало инвазивности и метастатического потенциала опухолевых клеток, а также ориентации белок CD151 или ТОИ стала многообещающей терапевтической стратегии [23]. В настоящем исследовании, экспрессия CD151 было показано, что независимым прогностическим фактором для OS. Тем не менее, в сочетании экспрессия CD151 и интегрина α3 был более надежным показателем, чем OS CD151 или экспрессии интегринов а3 в покое, поддерживая идею, что и CD151 и интегрина α3 играют важную роль в ТЖК. Таким образом, наши результаты имеют большое значение и предполагают, что CD151 или CD151-интегрин α3 комплекс может быть важными целями в лечении больных с GC
<р> В заключение., CD151 избыточная экспрессия является предиктором неблагоприятного исхода у больных с ТЖК и CD151 или CD151-интегрин α3 комплекс может быть потенциальной мишенью для лечения ТЖК.

• PLoS ONE: PKG II Тормозит EGF /EGFR-индуцированный миграции рака желудка Cells
• PLoS ONE: Восстановление MIR-1228 * Expression Подавляет эпителиально-мезенхимальных перехода в желудочном Cancer