Plos ONE: Čezmerno CD151 napoveduje prognozo pri bolnikih z odstranjenimi želodca Cancer

Povzetek

Namen

tetraspanin CD151 deluje kot promotor metastaz in invazije v več tumorjev. Vendar pa je vloga CD151 v človeškega raka želodca (HGC) ostaja nejasna.

Metode

Dvajset HGC vzorce in pokrite nontumor vzorcev, želodčne epitelijskih celic človeških (HGEC), in štiri želodčnim rakom linije so bile uporabljene za analizo CD151 izraz. Kratek Ostra RNA posredovano downregulation za CD 151 izražanja v HGC celic smo izvedli preučiti vlogo CD151 pri širjenju in metastaz /invazija HGC celic in vivo
in in vitro
. Odnos CD151 z integrinskih α3 v HGC celicah je preiskovala utišati integrinskega α3 sledi sočasno imuno in imunofluorescenco. Poleg tega je bil napovedni vrednosti CD151 in integrin α3 ocenila imunohistokemijo v tkivnih mikromrež od 76 bolnikov HGC.

Rezultati

CD151 je bila izražena na višjih ravneh v HGC tkiv in HGC celic kot v nontumor tkiva in HGEC celice. Dol-ureditev CD151 ga vshRNA-CD 151 okvaro metastazami in invazije HGC-27 celic, vendar ni vplival na proliferacijo celic. CD151 oblikovali kompleks z integrinskih α3 v HGC celicah. CD151-cDNA transfekciji rešil metastatskega potenciala in invazivnosti HGC-27-vshCD151 celic, ne pa tudi tistih, HGC-27-vshintegrin α3 celic in vitro
. Klinično je CD151 čezmernim značilno povezana s stopnjo visoke TNM, globina invazije in pozitivne prizadetostjo bezgavk ( p
< 0,05) in visoka stopnja integrinskih α3 je bilo povezano z velikimi velikost tumorja, stopnjo visoke TNM, globina vpletenosti invazija in bezgavk ( p
< 0,05). Pomembno je, da postoperativni 5-letno celokupno preživetje bolnikov z CD151 ^{nizka in /ali integrinskih α3 nizka je bila višja kot pri bolnikih z CD151 visoka in /ali integrinskih α3 visoka.}

Zaključek

CD151 je pozitivno povezana z invazivnosti za HGC in CD151 ali kombinacija CD151 in integrinskih α3 je nov označevalec napovedovanje prognozo bolnikov HGC in se utegnejo terapevtske tarče.

Navedba: Yang YM, Zhang ZW, Liu QM, ne YF, Yu JR, Xu WX (2013) Čezmerno CD151 napoveduje prognozo pri bolnikih z odstranjenimi rak želodca. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10,1371 /journal.pone.0058990

Urednik: Yves St-Pierre, INRS, Kanada

Prejeto: 7. oktober 2012; Sprejeto: 8. februar 2013; Objavljeno: 22 marec 2013

Copyright: © 2013 Yang et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprl akademik Workstation sklada Shaoxing drugega ljudske Hospital. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Human rak želodca (HGC) je najpogostejši vzrok smrti zaradi raka [1]. Pojavnost HGC je bila ocenjena na 934,000 primerov na leto, 56% novih primerov, ki se pojavljajo v vzhodni Aziji, vključno z 41% na Kitajskem in 11% na Japonskem [2]. Čeprav se je incidenca GC v zadnjih letih zmanjšal, njegova stopnja umrljivosti na Kitajskem je najvišja med vsemi tumorji in predstavlja 25% smrtnost GC svetu [3]. Kljub nedavnim napredkom na kemoterapijo in kirurških tehnik, 5-letno skupno preživetje (OS) stopnja na Kitajskem je nizka pri 40%. Večina HGCs so bile ugotovljene v fazi III ali IV, ter stopnjo bezgavkah metastaze GC je visoka (50-75%) [4]. Patogeneza HGC je več dejavnikov, vključno z genetsko predispozicijo in okoljskih dejavnikov. Več genetske spremembe so povezane z nagnjenost k HGC, vključno s tistimi, ki vključujejo zaviralnih genov, onkogeni, adhezije celic molekule, rastnih faktorjev in genska nestabilnost [5]. Zato je doseči boljše razumevanje molekularnih mehanizmov, ki sodelujejo pri HGC in identifikacijo dragocene diagnostična in novih terapevtskih strategij je zelo klinično pomembna.

so celice površinske beljakovine, ki obsegajo membrana štirikrat, in jih najdemo Tetraspanins v več tipov celic v mnogih organizmih. Izkazujejo številne lastnosti, ki kažejo njihovo fiziološkega pomena v celične adhezije, gibljivost aktivacijo in proliferacijo, kot tudi njihov prispevek k bolezenskih stanj, kot so metastaze in patološko angiogenezo [6] [7], [8]. CD151 je celična površinska glikoprotein pripada tetraspanin superdružine, ki je bil najprej prikazan na spodbujanje metastaz v študiji, v kateri neznano protitelo specifično zaviral tvorbe metastaz pri človeškem epidermoidni karcinom vivo
[ 9
]. Protitelo priznana CD151 in zaviral migracije celic brez vplivanja na adhezijo ali širjenju. Mala motečih RNA (siRNA) posreduje downregulation za CD 151 izražanja v primarnih melanocite povzročila izgubo gibljivost, medtem ko je imel majhen učinek na stanju dinamičnega ravni integrinov. Poleg tega bi te spremembe lahko obrne, ko je bil CD151 ponovno izrazil-[10]. Čezmerno CD151 je bilo dokazano, da aktivirate integrin in rastnega faktorja receptorjev odvisnih signalnih poti, kar je povzročilo večjo gibljivost in invazivnosti rakavih celic [11]. Ta proces se je tudi, da prispeva k aktiviranju poti, ki jih povzroča majhne GTPases, ki povečuje GTP zavezujoč za CDC42 in RAC, organizatorji celic citoskeleta. Oprijem odvisni aktivacija Ras, ERK /MAPK1 /2 in protein kinaza B (PKB) /Akt Dokazano je treba prilagoditi s CD151 [7], [12]. Širok nabor funkcij CD151, zlasti njegovo sodelovanje v invazivnosti in metastaz rakavih celic, kažejo, da je lahko boljše razumevanje njenega izražanja in vlogo v HGC pomembno.

V tej študiji smo raziskovali izražanje CD151 v želodčnih epitelijskih celic človeških (HGEC), celične linije HGC, HGC vzorci, in sosednje nontumorous tkiva. Poleg tega smo raziskali vpliv siRNA utišanje CD151 o širjenju, invazivnosti in metastatskega sposobnosti HGC-27 celic, in preučila odnos med CD151 in integrin α3. Nazadnje je bila izraz CD151 in integrina α3 pregledal imunohistokemijo v mikromrež tkiva, ki sestoji iz 76 primerov HGC in napovedni vloga CD151 in /ali integrinskih α3 v HGC bila raziskana.

Materiali in metode

Cell Lines

HGEC in HGC celične linije, vključno HGC-27, AGS, MKN28 in MGC803, smo dobili od American Type Culture Collection in se hranijo v našem laboratoriju. Vse celične linije smo ohranjali in Dulbeccovem spremenjenimi medij Eagle je (DMEM, Invitrogen), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (Hyclone) pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju pod 5% CO _2.

Pacienti in nadaljnji

Dvajset svežih vzorcih tumorjev iz območja v bližini robu tumorja in izravnane ne-tumorske tkiva (več kot 3 cm stran od tumorja) so slepo pridobljeni iz zaporednih bolnikov z HGC ki so doživeli kurativno resekcijo med februarjem 2009 in novembra 2010, ob Shaoxing druge ljudske Hospital (Shaoxing, Kitajska). Še 76 bolnikov z rakom želodca, ki so med septembrom 2005 in septembrom 2008, so šli skozi R0 resekciji z razširjeno na bezgavkah seciranje (D2) na Shaoxing druge ljudske bolnišnici so bili vključeni v to študijo. Vrednotenje odstranjenimi osebkov je bila izvedena v skladu s smernicami iz japonskega želodca Cancer Association (1998). Vsaka standardna resekcija vključevala odstranitev skupina 1 in 2 bezgavk (razpon 36-60, pomeni 47,6). Razvrstitev faza je bila izvedena v skladu s klasifikacijo TNM za HGC (UICC). Osebki so bili izbrani na podlagi razpoložljivosti ustreznih-formalin določen,-parafinskih vgrajeni tkiv in popolno clinicopathologic in nadaljnjimi podatkov pacientov. Značilnosti študijskimi predmeti so bili povzeti v tabeli 1. Ta študija je odobril odbor za Shaoxing drugega ljudske Hospital raziskovalno etiko in pisno privolitev je bila pridobljena iz vseh posameznikov. Nobeden od pacientov pred ali po operaciji kot del programa adjuvantno kemoterapijo ali radioterapijo. Nadaljnje zbiranje podatkov je bil zaključen septembra 2012. Mediana spremljanje bila 43,0 mesecev (razpon 6-78 mesecev). Nadaljnji postopki so sestavljali vmesnega zgodovine, fizični pregled, oceno tumorskih označevalcev (CEA, CA-199), v trebuhu ultrazvokom in rentgensko slikanje prsnega koša vsakih 2-3 mesece ali CT vsakih 6 mesecev. Celokupno preživetje (OS) je bil opredeljen kot interval med operacijo in smrt ali med operacijo in zadnje ugotovitve v preživelih bolnikov. Podatki so bili cenzurirani na zadnjem spremljanju za živi bolnikov.

RNA Pridobivanje in Reverse Transcription-verižna reakcija s polimerazo (RT-PCR)

Total RNA je bila vzeta z TRI Reagent (Sigma ) po protokolu proizvajalca. RNK smo nato obdelali z DNaseI (Roche Diagnostics), očistili skozi RNeasy kolono (Qiagen) in elektroforezo za določanje neoporečnosti RNA pred uporabo v 5'dirko eksperimentov. Komplementarne DNA (cDNA), smo sintetizirali z 2 ug celotne RNA z uporabo naključne heksamerov (Proligo) in nadpisano III reverzne transkriptaze (Invitrogen). RT-PCR smo izvedli na plošči celičnih linij in vzorcev tumorjev. Primerji, uporabljeni za PCR so bili naslednji: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'in 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrin α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'in 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'in 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. Pogoji RT-PCR so bili naslednji: 10 min pri 94 ° C, denaturacijo pri 94 ° C za 20 sekund, žarjenje pri 59 ° C za 30 sekund, in podaljšanje pri 72 ° C za 60 sekund. Izraz CD151 in integrinskih α3 glede na gospodinjstvo gena GAPDH smo analizirali z analizo gostote uporabo Band Scan 5.0 software. Vse poskuse smo izvajali v treh izvodih.

imunoblot in imunofluoroscenca

Skupaj izvleček celične beljakovine (30 mikrogramov) ločimo s SDS-poliakrilamidnem gelsko elektroforezo, prenese na poliviniliden ditluoridne membrane in inkubiranih z ustrezna protitelesa. Membrane so bili razviti z izboljšano metodo kemiluminiscentnim (Pierce, Rockford, IL, USA). Miš anti-humanega CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK) in anti-integrin α3 monoklonska protitelesa (P1B5, 1:300; Chemicon International Temecula, CA) so bile uporabljene za odkrivanje ekspresije CD151 in integrina α3 oz . GAPDH (1:5,000, Chemicon, ZDA) je bila uporabljena kot notranji nadzor. Vse eksperimente smo izvedli v treh izvodih.

HGC-27 celice so bile uporabljene za odkrivanje lokacije CD151 in integrin α3 kot je opisano predhodno [13]. so bili uporabljeni Mouse proti humanemu CD151 monoklonsko protitelo (11G5a, 1:200;; Serotec, UK) in miško protitelesa proti človeškim integrin α3 (Chemicon International, Temecula, CA P1B5, 1:300). Rezine smo analizirali s fluorescenčno mikroskopijo (Leica Microsystems Imaging Solutions).

Transfekcija lentivirusni vektorjev z majhnim Ostra RNA proti CD151 in integrin α3

pGMLV /Neo-shRNA-CD151 vektor je bila zgrajena v skladu z navodili proizvajalca (pGMLV, majhno Ostra RNA (shRNA) i Vector, Shanghai Genomeditch Co Ltd). Tri shRNA-CD151 lentivirusni vektorji (pGMLV-GFP-shRNA -CD151) so bili ustvarjeni za utišanje izražanja CD151 v HGC-27 celic (shRNA-CD151-HGC-27). Ciljanja sekvence shRNA za CD151 so bili naslednji:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. Ciljanje zaporedje shRNA za integrinskih α3 je bil naslednji: 5'CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 "(Shanghai Genomeditech, Šanghaj, Kitajska). Stabilno bile transficirane klonov značilna RT-PCR in analizira imunoblotanju za raven izražanja CD151 in integrinskih α3 proteine.

zasejemo MTT testom, celične migracije, in poskusa vdora v Matrigel

Cells v 96-vdolbinami (2.000 na 200 ul-jamico) in inkubirali 24, 48 in 72 h. Dodamo volumen 20 ul raztopine MTT v označenih časovnih točk in inkubirana 4 ure. medij (200 ul DMEM, ki vsebuje 10% fetalnega govejega seruma) smo nato nadomestijo z 150 ul DMSO smo plošče stresali 10 minut in absorbanco pri 490 nm smo merili za določitev števila življenja sposobnih celic v vsaki vdolbini. Vse poskuse smo izvedli trikrat.

Cell migracije je bil ovrednoten z celjenje rane testa. Celice smo gojili na 80-90% konfluence v 24-vdolbinami. Rana je bila narejena tako, da povlečete plastično vrh pipete po površini celice. Preostale celice smo spirali trikrat za odstranitev ostankov celic in inkubirali pri 37 ° C z mediju brez seruma. V navedenih časih smo se selijo celice na sprednji rane fotografirali in primerjali. Trije ločeni eksperimenti so bili izvedeni

Cell invasion teste smo izvedli s pomočjo 24-ter transwells (velikost 8 mikrometrov por; Millipore). Predhodno prevlečene z Matrigel (Falcon 354480; BD bioznanosti). Skupaj 1 x 10 ^{5 celicah, smo nato suspendirali v 500 ul DMEM, ki vsebuje 1% FBS in dodali zgornjo komoro, medtem ko je 750 ul DMEM, ki vsebuje 10% FBS, smo dali v spodnji komori. Po 48 urah inkubacije so Študiie in celice ostanejo v zgornji komori odstranimo z bombažnimi blazinicami. Celice na spodnji površini membrane so bile določene v 4% paraformaldehida in obarvamo z Giemsa. Celice v 5 mikroskopskih polj (povečava, × 200) so bili prešteti in fotografirali. Vse poskuse smo izvajali v treh izvodih.}

vivo metastaze testih

Za in vivo metastazami testih, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 in MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 celice presadijo v nude miši (5 tednov stare BALB /c-nu /nu, 5 na skupino, 1 x 10 ^{6 celic za vsako miš) skozi stranske repno veno [14]. Po 7 tednih smo žrtvovali miši. Njihova pljuča so bila odstranjena in izpostavimo hematoksilinom in eozinom (H &E) obarvanje. Vse raziskave, ki vključujejo živali, je bila opravljena v skladu s protokoli, ki jih Komisija Care Hospital živali, ki Shaoxing drugi ljudske odobrenih.}

Co-imuno (Co-ip) Testi

Celice smo lizirali z RIPA lize buffer dopolni z 40 mM NaF, 100 uM Na _{3VO 4, ter Celotno inhibitor proteaze (Roche). Po odstranitvi netopnega materiala s centrifugiranjem pri 12000 x g, so precleared lizati inkubirana z osnovno mAb vnaprej absorbira proteina A- in G-Sepharose kroglic (Pierce Biotechnology) preko noči pri 4 ° C. Precipitate smo sprali trikrat z liznega pufra, kuhana v 2 x SDS vzorčnem pufru za 5 minut in proteine ​​smo rešiti z SDS-PAGE na 10% gradientnih gelih. Kasnejši immunoblots bilo zaznati z ustrezno protitelesa in odkriti z ECL.}

bili zgrajeni Gradnja tkiva mikromrež in Imunohistokemija

tkiva mikromrež kot prej [15] opisano. Na kratko, so bili vsi vzorci iz bolnikov HGC histološko pregledali hematoksilinom & eozin barvanje in reprezentativne površine so premarked v parafinskih blokov stran od odmrlih in hemoragičnih materialov. Dvojniki valjev 1 mm premera iz dveh različnih področij, na tumorja centra in najbližje noncancerous marže (označen kot intraperitonealna in peritumor, oziroma, skupno štiri udarce) so bile vključene v vsakem primeru skupaj z različnimi kontrolami, da je zagotovljena ponovljivost in homogena obarvanje diapozitive (Shanghai biochip Co Ltd, Šanghaj). Tako so bili zgrajeni štirje različni tkivo mikromrež bloki, ki vsebujejo 140 jeklenk. Oddelki 4 m debele so bili dani na diapozitivih prevlečene s 3-aminopropiltrietoksisilanu. Monoklonsko miš anti-humanega CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK) in miško anti-humanega integrina α3 (P1B5, 1:300; Chemicon International Temecula, CA) protitelesa so bile uporabljene za odkrivanje ekspresije CD151 in integrina α3 . Slike so bile posnete s v3 programska oprema Leica QWin Plus. Intenziteta pozitivnega obarvanja smo izmerili kot je opisano zgoraj. Intenziteta CD 151 in integrina α3 so razdeljeni v dve ravni ekspresije po srednjem območju pozitivnega obarvanja kot mejno vrednostjo, kot sledi: CD151 ^{visoka, > 50% odseka tumorja; in integrin α3 visoka, > 25% odseka tumorja; CD151 nizka, < 50%, in integrinskih α3 nizka, < 25% [15]}

Statistična analiza

Statistična analiza je bila opravljena z SPSS 16,0 programsko opremo (. SPSS). Vrednosti so bili izraženi kot povprečje ± standardno odstopanje. Za Imunohistokemične označevalcev je bila mejna za opredelitev podskupin srednja vrednost intenzivnost. Χ so ^{2-test in t-test se uporablja za primerjave med skupinami. OS je bila opredeljena kot prej [15] opisano. Prognostični pomen je bila ocenjena na podlagi ocen preživetja po Kaplan-Meier in preskuse log-ranga. Cox je sorazmernih tveganj regresijski model smo uporabili za analizo neodvisnih napovednih dejavnikov. Vsi testi so bili dva repa in p
< 0.05 smo imeli statistično značilno}

CD151 je prekomerno v HGC

CD 151 izražanja smo analizirali Rezultati
. RT-PCR in imuno na HGC tumorja in izravnanih nontumor tkiva. CD151 je bila izražena na nizkih ravneh nontumor tkiva v primerjavi z HGC tkiva. Kot je prikazano na sliki. 1A, B in C, relativna izražanje proteina CD 151 pri HGC vzorcih je bila 2,95 ± 0,21 (razpon 1,13-3,59) v primerjavi z 1,30 ± 0,09 (razpon, 1.00-1.81) v nontumor vzorcih, razlika je bila statistično signifikantna ( p
< 0,01). Poleg tega so bile CD151 stopnje izraženosti v HGEC precej nižja kot v HGC-27, AGS, MKN28 in MGC803 celic (p < 0,05). smo zaznali nobenih razlik v nivojih izražanja CD151 med HGC celic (sl. 1D, E in F). Immunohistochemstry (IHK) analize so potrdili, da je bila CD151 protein izražen na višjih ravneh v HGC tkivih kot v izravnanih nontumor tkivih (sl. 1G).

CD151 spodbujati invazijo in metastaze HGC Celice in vitro in in vivo

Da bi preučili vlogo CD151 v HGC celicah, smo spremenili izražanje CD151 v HGC-27 celic z RNA interference in cDNA-CD 151 transfekciji (sl. 2A). Rezultati celjenje ran testu pokazali zamudo pri stopnji rane zaprtju shRNA-CD151-HGC-27 celic po 48 urah v primerjavi z HGC-27-Mock celic, ki so izterjali cDNA-CD 151 transfekciji (sl. 2B). Dol-ureditev CD151 ni pomembno vplival na proliferacijo celic ( p
> 0,05, slika 2C.). Vendar pa je downregulation za CD 151 izražanja oslabljeno invazivnosti HGC-27 celic (sl. 2D, E).

Da bi še dodatno raziskati vlogo CD151 tumorske metastaze in vivo, MGC-803-Mock, MGC- 803-vshRNACD151 in MGC-803-vshRNACD151-cDNA CD151 celice so presajeni v golih miših skozi stransko repno veno. Histološko analizo pljuč miši so potrdili, da navzdol ureditev CD151 zatreti nastanek pljučnega metastaz. Število in velikost pljuč metastazami gomoljev so bili v primerjavi z MGC-803-Mock in MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 celic (sl. 2 F, G), znatno zmanjšal v skupini MGC-803-vshRNACD151. Skupaj, naši rezultati kažejo, da je CD151 pozitivni regulator želodca metastaz raka.

CD151 tvori kompleks s popolno α3 in dušenje zvoka integrinskih α3 Škoduje HGC Cell Invasion s CD 151 Čezmerno
inducirane

The vključenost tetraspanins v-integrin posredovana ureditvi raka metastaz bila dokazana, in α3β1 integrin dokazano je, da pospeševanje GC invazijo in metastaze [16]. Zato smo raziskovali odnos med integrin α3 in CD151 v HGC celicah. Kot je prikazano na sliki. 3A je integrinskih α3 izražena na višjih ravneh v HGC celicah kot v HGEC celicah. Co-imunoprecipitacije poskusi so pokazali, da CD151 tvori kompleks z integrina α3 v HGC-27 celice (sl. 3B, C). Poleg tega, CD151 in integrin α3 co-lokalizirani na plazemski membrani 27 HGC celic, kot je prikazano imunofluorescencno (sl. 3D).

Da bi še dodatno preuči sodelovanje CD151 v integrinskih funkcijo α3, celice pa so bili opravljeni interference RNA ali cDNA transfekciji in analizira Transwell poskusi po zamenjavi matriko gel z laminina-332 [17]. Rezultati so pokazali, da utišanje integrinskih α3 močno zaviral invazijo HGC-27 celic in CD151 cDNA transfekciji rešil invazivno sposobnost HGC-27-vshRNACD151, ne pa tudi HGC-27-vshRNA integrinskih α3 celice. Poleg tega integrin α3 protitelesa zaviral invazijo HGC-27-vshRNACD151-cDNA-CD151 celic (sl. 3E, F). Ti rezultati predlagal usklajeno funkcijo CD 151-integrin α3 kompleksa, in navedla, da se visoka stopnja CD151 in integrina α3 povezana s povečanim metastatskega potenciala GC celic.

Izražanje CD 151 ali integrin α3 je pozitivno povezana z malignim fenotipi HGC s imunohistokemija

izraz CD151 in integrinskih α3 protein smo raziskovali v 76 osnovnih bolnikih HGC uporabo tkiv mikromrež (TMA). CD151 protein radioinkorporacijo lokalizirani na celično membrano (sl. 4A). V tumorskih tkivih, CD151 izraz pokazala veliko heterogenost v različnih vzorcih (sl. 4A1, B1, C1 in D1). CD151 ^{visoka znašal 50% (38/76) v celi skupini. Kot je prikazano v tabeli 1, CD151 visoka je bila značilno povezana z velikostjo tumorja ( p =
0,021), globina invazije ( p =
0.004), vključevanje bezgavko ( p =
0.028) in faza visoko tumor ( p =
0,002). Vendar pa drugi klinični značilnosti, vključno starosti, spola in diferenciacijo tumorja, niso bistveno povezana z izražanjem CD151.}

membrane tumorskih celic barvanega pozitivna za integrina α3 (sl. 4A2, b2, c2, in d2). V vseh tkivih analiziranih, so odkrili visoke ravni integrin α3 izražanja v 27 vzorcih tkiva HGC (35,52%). V skladu z rezultati predhodnih študij [16], [18], so bili bolniki z visokim integrin α3 izražanja bolj verjetno, da kažejo agresivnih funkcije. Integrin α3 ^{visoka bolniki so pokazali večje tumorje ( p =
3.46E-4), večja globina invazije ( p =
0,001), višja stopnja tumor ( p =
0,005), in večja udeležba bezgavk ( p =
0,040) kot pri bolnikih z nizko integrin α3 izražanja (tabela 1).}

čezmernim CD151 in /ali integrin α3 Independent dejavniki predvidevanje prognoza HGC Bolniki

do zadnjega spremljanja so bile 3- in 5-letne stopnje OS v celotnem prebivalstvu 53,0 in 40,78%, 5-letno OS v CD151 Znak ^{nizka skupina je bila bistveno višja kot v CD 151 visoke skupine (68,42% vs.
23,68%, v tem zaporedju, p
= 0.007, sl. 4B), in pooperativna 5-letno OS bolnikov HGC je bila višja v integrin α3 nizka kot v integrin α3 visoka skupina (66.67% vs.
13,51%, p
= 6.67 E-6). Ocena skupnega učinka CD151 in integrina α3 na prognozo HGC je pokazala, da je 5-letno OS CD151 visoka /integrinskih α3 visoke bolnikov (skupina III, n = 23) je bila 17,40%, kar je bistveno nižje kot pri CD151 nizka /integrinskih α3 nizkih bolnikov (77,78% skupine I, n = 27), ki so bodisi nizke bolniki (bolniki z bodisi nizko CD151 ali samo nizko integrin α3) (23.08%, skupine II , n = 26, sl. 4C in D).}

Univariatna analiza je pokazala, da je velikost tumorja, globina invazije, sodelovanje bezgavko, stopnja visoka tumor, visoki CD151 izraz, visoka stopnja integrinskih α3 in sodelovanje izraz za CD151 in integrinskih α3 bili napovedujejo za OS. Druge značilnosti, vključno starosti, spolu in razlikovanje ni imel napovedni pomen za OS (tabela 2). Multivariatno Cox sorazmernih tveganj model, je pokazala, da je bila globina invazije neodvisen prognostični indikator za OS (tabela. 2).

Diskusija

Rezultati te študije so pokazali, da je CD151 izražena pri višjih nivojih v GC celic in tumorskih tkivih kot v HGEC celic in nontumor tkiva, kar je v skladu s prejšnjimi poročili o CD 151 izražanja v različnih tumorjev, vključno intrahepatska holangiokarcinom, HCC, dojke, pljuč, debelega črevesa in raka na prostati [15], [19] [20], [21]. Poleg tega je naša raziskava pokazala, da CD151 tvori funkcionalno kompleks s popolno α3 in downregulation za CD151 ali integrinskih α3 izraz izrazito zaviral invazijo in metastaze HGC celic in vitro. Klinično, naši rezultati so pokazali, da ima lahko visoka raven CD 151 izražanja ali sodelovanja čezmerni CD151 in integrina α3 neugodno prognostičnih posledice za bolnike z GC.

Prvi dokaz, da CD151 spodbuja metastaze prišel iz študije, ki kažejo, da protitelo z neznano specifičnosti zaviral nastajanje metastaz s epidermoidnega karcinoma skladu človeško vivo
. Protitelo priznan CD151 in inhibira migracijo celic brez vplivanja na adhezijo ali proliferacijo [22]. Čezmernim CD151 bila zaznana v mnogih vrst tumorjev in povečano izražanje CD151 je povezano s slabo prognozo v prsi, in pljučnega raka nemajhnih celic kot tudi HCC. Poleg tega CD151 se je izkazalo, da je boljši napovedovalec prognozo pri bolnikih z rakom prostate, kot histološko razvrščanje [23]. V tej raziskavi, dve vrsti dokazov, je pokazala, da je čezmernim CD151 klinično pomembna pri HGC. Najprej je bil CD151 čezmernim pogosteje kot pri bolnikih HGC s slabo prognozo. Drugič, povečano izražanje CD151 okrepljeno invazijo in metastaze HGC celic. Poleg tega klinični podatki so pokazali, da povišana CD151 izraz prekosila druge pogosto uporabljene klinične parametre, kot so povečana velikost tumorja in slabe diferenciacije za napovedovanje HGC prognozo. Skupaj, te ugotovitve kažejo, da ima CD151 pomembno vlogo pri napredovanju HGC. V tej raziskavi smo pokazali, da CD151 komunicira z integrinskih α3 v HGC celicah. Modulacija vsebnosti izražanjem integrina α3 v HGC-27-vshCD151-cDNA CD151 celic pokazala tvorbe funkcionalne CD 151-integrina α3 kompleks in se je pokazalo, da je sočasno čezmernim CD151 in integrina α3 povezana s povečanim metastatskega potenciala HGC celic . Glede na uveljavljeno vlogo integrinskih α3 v HGC [16], je razumno pričakovati, da lahko CD151 overexpression spodbujanje metastaz /invazijo v GC.

Zaradi svoje hidrofobne narave, tetraspanins pridruženo s seboj in z drugimi membrano beljakovine [24]. Dejansko je dobro ugotovljeno, da tetraspanins zagotavlja platformo signaliziranja v plazemski membrani s tvorbo-tetraspanin obogatenega mikrodomen (mov) [6] [7]. Do sedaj so bile različne vrste membranskih proteinov, vključno z receptorji rastnega faktorja, integrinov, imunoglobulina domen in EWI-F (podskupino Ig beljakovin), najdemo v TEMS [25]. Poleg tega so poročali funkcije teh membranskih proteinov, ki se tesno povezana z TEMS. Na primer, je bilo ugotovljeno, različne kombinacije tetraspanins ki TEMS, da vpliva na delovanje receptorja rastnega faktorja in integrin. Še pomembneje je, ima pomemben vpliv na povezanih proteinov [26], [27] tudi nivo izražanja posameznih tetraspanins v TEMS. V zadnjih študijah, knock-down od CD151 je bilo dokazano, da vpliva na nastanek TEMS in CD151 izbris zaviral funkcijo več membranskih proteinov, kar kaže, da ima CD151 ključno vlogo pri TEM oblikovanju in delovanju [7], [26]. Poleg tega je blokiranje CD151 močno oslabljeno invazivnosti in metastatskega potenciala tumorskih celic in ciljati na CD151 protein ali TEMS postala obetavno terapevtsko strategijo [23]. V tej študiji je bila ekspresija CD151 izkazalo, da je neodvisen napovednik za OS. Vendar pa je bil skupni izraz CD151 in integrinskih α3 bolj zanesljiv napovedovalec OS kot CD151 ali integrinskih α3 izraz sam podpira idejo, da tako CD151 in integrinskih α3 igrajo pomembno vlogo pri HGC. Torej, naši rezultati so pomembne in kažejo, da lahko CD151 ali CD151-integrin α3 kompleks pomembni cilji pri zdravljenju bolnikov z GC.

Na koncu CD151 čezmernim je napovedovalec slabega izida pri bolnikih z HGC lahko in CD151 ali CD151-integrin α3 kompleks so možni cilji za zdravljenje HGC.

• Plos ONE: PKG II zavira EGF /-EGFR povzročena Migracije želodca raka celic
• Plos ONE: Obnova pokoj-1228 * Expression Zavira epitelijskih-mezenhimskih Prehod iz želodca Cancer