PLoS ONE: Prekomjerna ekspresija CD151 predviđa Prognoza bolesnika s resekcijom rak želuca

Sažetak pregled

Svrha pregled

tetraspanin CD151 djeluje kao promotor metastazama i invaziji u nekoliko tumora. Međutim, uloga CD151 u ljudskoj raka želuca (HGC) ostaje nejasno. Pregled

Metode

Dvadeset HGC primjeraka i uskladiti nontumor uzoraka, ljudski želudac epitelne stanice (HGEC), a četiri želučane stanice raka linije su korišteni za analizu CD151 izraz. Kratki ukosnica RNA posredovana regulacija od CD151 izražavanja u HGC stanica izvedena je ispitati ulogu CD151 u proliferaciji i metastaza /invazija HGC stanica In vivo
i in vitro pregled. Odnos CD151 sa integrinom α3 u HGC stanica istražena je ušutkao integrinsko α3 zatim ko-imuno i imunofluorescencije bojenja. Konačno, prognostička vrijednost CD151 i integrina α3 procijenjena je imunohistokemijski u tkiva Microarrays od 76 HGC pacijenata. Pregled

Rezultati pregled

CD151 je izražen na višim razinama u HGC tkiva i HGC stanica nego u nontumor tkiva i HGEC stanice. Down-regulacija CD151 strane vshRNA-CD151 oslabljen metastazama i invaziji HGC-27 stanica, ali ne utječu na proliferaciju stanica. CD151 formirao kompleks s integrinom α3 u HGC stanica. CD151-cDNA transfekcija spasio metastatskog potencijala i invazivnosti HGC-27-vshCD151 stanica, ali ne i one HGC-27-vshintegrin α3 stanica in vitro
. Klinički, CD151 prekomjerna ekspresija bila je značajno povezana s visokim TNM stadiju, dubini invazije i pozitivnog uključivanja limfnih čvorova ( p izvoznici < 0,05), te visoka razina integrinskih α3 bili povezani s velikim veličine tumora, visoka TNM stadiju, dubina uključenosti invazije i limfnog čvora ( p izvoznici < 0,05). Važno je da je postoperativni 5-godišnje preživljavanje pacijenata s CD151 ^{niska i /ili integrina α3 niska bila je viša od one u bolesnika s CD151 visoka i /ili integrina α3 visoka.}

Zaključak

CD151 pozitivno je povezana s invazivnost HGC i CD151 ili kombinacija CD151 i integrina α3 je novi marker za predviđanje prognozu HGC pacijenata, a mogu biti potencijalni terapeutski ciljevi.

Izvor: Yang YM, Zhang ZW, Liu QM, Sun YF, Yu JR, Xu WX (2013.) Prekomjerna ekspresija CD151 predviđa Prognoza bolesnika s resekcijom rak želuca. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10,1371 /journal.pone.0058990 pregled

Urednik: Yves St-Pierre, INRS, Kanada pregled

Primljeno: 7. listopada 2012. godine; Prihvaćeno: 8 veljače 2013; Objavljeno: 22. ožujka 2013 pregled

Copyright: © 2013 Yang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane akademika Workstation fondu Shaoxing drugom Narodne bolnice. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Ljudski rak želuca (HGC) je najčešći uzrok smrti od raka povezane s [1]. Incidencija HGC je procijenjen na 934,000 slučajeva godišnje s 56% novih slučajeva pojavljuje u istočnoj Aziji, uključujući i 41% u Kini i 11% u Japanu [2]. Iako je globalna pojava GC je smanjen u posljednjih nekoliko godina, njegova stopa smrtnosti u Kini je najviša među svim tumorima i predstavlja 25% smrtnosti GC svijetu [3]. Unatoč nedavnim iskoracima u kemoterapiju i kirurške tehnike, 5-godišnje preživljavanje (OS) stopa u Kini je niska od 40%. Većina HGCs se dijagnosticira u fazi III ili IV, a stopa limfnih čvorova metastaza GC je visoka (50-75%). [4] Patogeneza HGC je više činilaca, uključujući i genetske predispozicije i okolišnih čimbenika. Nekoliko genetskim izmjenama povezani s predispozicije HGC, uključujući one koji se odnose tumor supresor gena, onkogeni, molekula stanične adhezije, faktore rasta, te genetski nestabilnost [5]. Dakle, postizanje bolje razumijevanje molekularnih mehanizama uključenih u HGC i identifikacije vrijedne dijagnostičke markere i nove terapijske strategije je od velikog kliničkog značaja. Pregled

Tetraspanins su proteini na površini stanice koji obuhvaćaju membrani četiri puta, a nalaze se u nekoliko tipova stanica u mnogim organizama. Oni pokazuju brojnih svojstava indikativne njihove fiziološke važnosti u stanične adhezije, pokretljivosti, aktivaciju i proliferaciju, kao i njihov doprinos patoloških stanja, kao što su metastaze i patološke angiogeneze [6], [7], [8]. CD151 je glikoprotein s površine stanice koji pripada superfamiliji tetraspanin koji je prvi put prikazano je da potpomaže metastaza u studiji u kojoj je nepoznata protutijelo specifično inhibira stvaranje metastaza u epidermskog raka ljudske in vivo pregled [ 9
]. Antitijelo prepoznao CD151 i inhibira migraciju stanica bez utjecaja na adheziju ili proliferaciju. Mali ometa RNA (siRNA) posredovana regulacija od CD151 izražavanja u osnovnoj melanocita rezultiralo gubitkom pokretljivosti, dok je imao malo utjecaja na stacionarnim razinama integrine. Osim toga, ove promjene mogu se također obrnuti kada CD151 ponovno izražava [10]. Prekomjerna ekspresija CD151 je pokazano da aktivira integrin i receptora faktora rasta ovisne signalnih putova, što je rezultiralo u povećanim motiliteta i invazivnost stanica raka [11]. Ovaj postupak također je predloženo da sudjeluju u aktiviranju puteva posredovanih malih GTP, što povećava GTP vezivanje na Cdc42 i Rac, organizatora stanica citoskeleta. Adhezija ovisna aktivacija Ras, ERK /MAPK1 /2 i protein kinaza B (PKB) /Akt dokazana je da se modulirati CD151 [7], [12]. Širok raspon funkcija CD151, a naročito njegov angažman u invazivnosti i metastaziranja stanica raka, ukazuju na to da bi bolje razumijevanje svog izražavanja i ulozi u HGC može biti važno. Pregled

U ovom istraživanju smo istraživali ekspresiju CD151 u ljudskim stanicama epitela želučanih (HGEC), HGC stanične linije, uzorci HGC i susjedne nontumorous tkiva. Osim toga, istraživali smo učinak siRNA odsutnost CD151 na proliferaciju, invazivnost i metastatski sposobnosti HGC-27 stanice, te ispitali odnos između CD151 i integrina α3. Konačno, ekspresija CD151 i integrina α3 je ispitana imunohistokemijom na mikročipa tkiva koja sadrži 76 slučajeva HGC i prognostički uloga CD151 i /ili α3 integrina u HGC je istraživana. Pregled

Materijali i metode

staničnim linijama

HGEC i HGC stanične linije, uključujući HGC-27, AGS, MKN28 i MGC803, dobiveni su od American Type Culture Collection i čuva u našem laboratoriju. Sve stanične linije su održavane u Dulbecco modificiranom Eagle mediju (DMEM, Invitrogen) dopunjen s 10% fetalnog goveđeg seruma (Hyclone), na 37 ° C u vlažnom inkubatoru u atmosferi s 5% CO _{2. Pregled}

pacijenata i Follow-up pregled

Dvadeset svježi uzorci tumora iz područja koja su blizu ruba tumora i uskladiti ne-tumorskih tkiva (više od 3 cm udaljen od tumora) su slijepo dobiven od uzastopnih bolesnika s HGC koji su se podvrgnuli ljekovito resekcija između veljače 2009 i studeni 2010 u Shaoxing Drugog Narodne bolnice (Shaoxing, Kina). Još 76 pacijenata s rakom želuca koji su podvrgnuti R0 resekcija s produženim limfnog čvora disekcija (D2) između rujna 2005. i rujna 2008. godine u Shaoxing Drugog Narodne bolnice su bili upisani u ovoj studiji. Procjena reseciranih uzoraka provedena je u skladu sa smjernicama japanskom rak želuca Association (1998.). Svaki standard resekcija uključeni uklanjanje skupina 1 i 2 limfne čvorove (raspon 36-60, znači 47.6). Faza klasifikacija je izveden prema klasifikaciji TNM za HGC (UICC). Uzorci su odabrani na temelju dostupnosti prikladnih formalinom fiksna, parafin-ugrađen tkiva i potpune kliničko i follow-up podataka iz pacijenata. Karakteristike ispitanika prikazani su u tablici 1. Istraživanje je odobrilo drugom Narodne Hospital Research etičkog povjerenstva Shaoxing i pismeni informirani pristanak dobiven je od svih pojedinaca. Nijedan od pacijenata primili kemoterapiju ili radijacijsku terapiju prije ili nakon operacije, kao dio adjuvansa programa. Prikupljanje podataka Praćenje je završena u rujnu 2012. Medijan praćenja bio je 43.0 mjeseci (raspon 6-78 mjeseci). Follow-up procedure koja se sastoji od privremenog povijesti, fizikalnog pregleda, ocjene tumorskih markera (CEA, CA-199), u trbuhu ultrazvuk i radiološkoj svakih 2-3 mjeseci ili CT svakih 6 mjeseci. Ukupno preživljenje (OS) definirana je kao interval između kirurškog zahvata i smrti, ili između kirurškog zahvata i posljednji promatranja preživljavanje bolesnika. Podaci su cenzurirani u posljednjem praćenja za život pacijenata. Pregled

RNA ekstrakcija i reverznom transkripcijom lančana reakcija polimeraze (RT-PCR) pregled

Ukupna RNA je ekstrahirana korištenjem TRI reagensa (Sigma ) u skladu s protokolom proizvođača. RNA je zatim obrađena sa DNaseI (Roche Diagnostics), pročišćena kroz kolonu RNeasy (Qiagen) i elektroforetski odrediti cjelovitost RNA prije upotrebe u 5'-race eksperimenata. Komplementarne DNA (cDNA) je sintetiziran iz 2 ug ukupne RNA korištenjem slučajnih heksamera (Proligo) i eksponent III reverzne transkriptaze (Invitrogen). RT-PCR je provedena na panelu linija stanica tumora i uzoraka. Primeri korišteni za PCR su kao što slijedi: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'i 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrin α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'i 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'i 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. RT-PCR uvjeti su bili kao što slijedi: 10 min na 94 ° C, denaturacije na 94 ° C 20 sekundi, Žarenje 59 ° C tijekom 30 sekundi i ekstenzijom na 72 ° C za 60 s. Izraz CD151 i integrina α3 odnosu na domaćem genu GAPDH je analiziran pomoću analize gustoće korištenjem Band skeniranja V5.0 softvera. Svi pokusi su provedeni u triplikatu. Pregled

Imunobloting i eseja imunoflorescencije pregled

ekstraktom Proteini stanice (30 ug) je odvojen pomoću SDS-poliakrilamid gel elektroforeze, preneseni na polivinilidenfluorid membrane, i inkubirane s odgovarajuća antitijela. Membrane su razvijene uz poboljšanu metodu kemiluminiscencijskim (Pierce, Rockford, IL, USA). Mišji anti-humani CD151 (11G5a, 1:200, Serotec, UK) i anti-integrinska α3 monoklonska antitijela (P1B5, 1:300; Chemicon International, Temecula, CA) korišteni su za otkrivanje ekspresije CD151 i integrina α3, odnosno , GAPDH (1:5,000, Chemicon, USA) je korišten kao internom kontrolom. Svi pokusi su provedeni u triplikatu. Pregled

HGC-27 stanice se koristi za otkrivanje lokacije CD151 i integrinom α3 kao što je opisano [13]. Upotrijebljeni su mišji antihumani CD151 monoklonsko protutijelo (11G5a, 1:200; Serotec, UK) i mišjeg antihumanog integrin α3 antitijelo (Chemicon International, Temecula, CA P1B5, 1:300). Odresci su analizirani fluorescentnom mikroskopijom (Leica Microsystems slikovnih rješenja). Pregled

Transformacija lentivirasni vektora s malim oštrim RNA protiv CD151 i integrin α3 pregled

pGMLV /neo-shRNA-CD151 vektor je konstruiran u skladu s uputama proizvođača (pGMLV, mali hairpin RNA (shRNA) ja Vector, Šangaj Genomeditch Co Ltd). Tri shRNA-CD151 lentivirasni vektori (pGMLV-GFP-shRNA -CD151) ostvareni su na šutnju ekspresiju CD151 u HGC-27 stanica (shRNA-CD151-HGC-27). U shRNA sekvence ciljanja za CD151 su kako slijedi:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. Ciljanje slijed shRNA za integrin α3 je kako slijedi: 5'CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 '(Shanghai Genomeditech, Šangaj, Kina). Stabilno Transfektirani klonovi su karakterizirani pomoću RT-PCR i analizirani pomoću imunoblot jer razinama ekspresije iz CD151 i integrina α3 proteina. Pregled

MTT test, Migracija stanica i ispitivanja Matrigelove invazije

Stanice su posađene u 96 ploča (2000 po 200 ul jažici) i inkubira tijekom 24, 48 i 72 sata. Volumen od 20 ul MTT otopine doda se u naznačenim vremenskim točkama i inkubira tijekom 4 sata. Medij (200 ul DMEM koji sadrži 10% fetalnog telećeg seruma) je zatim zamijenjen 150 ul DMSO, ploče se tresla 10 minuta, a apsorbancija pri 490 nm mjerena je za određivanje broja za život sposobnih stanica u svaku jažicu. Svi pokusi su izvedeni tri puta. Pregled

migracija stanica je ocijenjena pomoću ispitivanja za liječenje rana. Stanice su rasle do 80-90% konfluentnosti u pločicama s 24 jamice. Rana je napravljen povlačenjem plastične pipete preko površine stanice. Preostale stanice su isprane tri puta da se ukloni stanični talog i inkubira na 37 ° C s medijem bez seruma. U naznačenim vremenima, Migrirajuće stanice na prednjoj rane fotografirani i uspoređuju. Tri odvojena eksperimenti su provedeni pregled

invazije stanica testovi se izvode u 24-i transwells (veličina pora 8 um; Millipore). Oblože s Matrigel (Falcon 354480, BD Biosciences). Ukupno 1 x 10 ^{5 stanice se zatim suspendira u 500 ul DMEM koji sadrži 1% FBS i dodani u gornju komoru, a 750 ul DMEM koji sadrži 10% FBS je stavljen u donje komore. Nakon 48 sati inkubacije, a stanice Matrigel ostaju u gornjoj komori se uklone pamuka za obuću. Stanice na donje površine membrane, su fiksirane u 4% paraformaldehidu i bojene sa Giemsa bojom. Stanice u 5 mikroskopskih polja (uvećanja, × 200) su izbrojani i fotografirali. Svi pokusi su provedeni u triplikatu. Pregled}

In vivo određivanje aktivnosti metastaza

in vivo testovima metastaza, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 i MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 stanice transplantirane su u miševa (5 tjedana stari BALB /c-nu /nu, 5 po skupini, 1 × 10 ^{6 stanice za svakog miša) putem lateralne repne vene [14]. Nakon 7 tjedana, miševi su žrtvovani. Njihova pluća uklonjena i podvrgnuti hematoksilinom i eozinom (H &E) obojenja. Sva istraživanja koja uključuje životinje je provedena u skladu s protokolima odobren od strane Shaoxing drugom Narodne Hospital Animal Care komisije. Pregled}

Co-imunotaloženje (Co-ip) testovi

Stanice su lizirane s Ripa pufer lizina dopunjen s 40 mM Naf, 100 uM Na _{3VO 4, i potpuni inhibitora proteaze (Roche). Nakon uklanjanjem netopivog materijala centrifugiranjem na 12.000 × g, a prethodno izbistreni lizati su inkubirani s primarnim mAb prethodno apsorbira proteina A-a G-Sepharose kuglica (Pierce Biotechnology) preko noći na 4 ° C. Talozi su isprani tri puta s puferom za lizu, prokuha u 2 × SDS uzorku pufera kroz 5 minuta, a proteini se mogu razdvojiti pomoću SDS-PAGE na 10% gradijent gel. Naknadne imunobugačenja istraživani s odgovarajućim antitijela i detektirati ECL. Pregled}

Izgradnja tkiva Microarrays i imunohistokemijski pregled

tkiva Microarrays su konstruirane kako je ranije [15] što je opisano. Ukratko, svi uzorci iz HGC bolesnika pregledao histološki hematoksilinom & eozinom bojenje i reprezentativni prostori su premarked u parafinske blokove, daleko od nekrotične i hemoragijskih materijala. Duplikati cilindara 1 mm promjera iz dva različita područja, u središtu tumora i najbliže noncancerous margini (označen kao intratumorsko i peritumor, odnosno, ukupno četiri udaraca) su uključene u svakom slučaju, zajedno s različitim kontrolama, kako bi se osigurala ponovljivost i homogeni bojenje od slajdova (Shanghai biočip Co Ltd, Šangaj). Dakle, četiri različite microarray tkiva blokovi su izrađeni, od kojih svaka sadrži 140 cilindara. Sekcije od 4 um debeli postavljeni su na slajdovima obložene sa 3-aminopropiltrietoksisilana. Monoklonsko mišje anti-ljudski CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK) i miš anti-humani integrin α3 (P1B5, 1:300; Chemicon International, Temecula, CA) antitijela su korišteni za otkrivanje ekspresiju CD151 i integrina α3 , Slike su snimljene od strane Leica QWin Plus v3 softvera. Intenzitet pozitivnim bojanjem je mjerena kao što je opisano. Intenzitet CD151 i integrina α3 je podijeljena u dvije razine ekspresije prema srednjem području pozitivnim bojanjem kao vrijednost kritična kako slijedi: CD151 ^{visoke, > 50% dijela tumora; i integrina α3 visok do 25% od dijela tumora; CD151 niska, < 50%, a integrina α3 niska, < 25% [15] pregled}

Statistička analiza pregled

Statistička analiza je provedena pomoću SPSS 16.0 softverom (. SPSS). Vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± standardna devijacija. Za imunohistokemijski biljezi, gušeći za definiranje podgrupa je srednja vrijednost intenziteta. Χ ^{2-test i t-test se koristi za usporedbe između skupina. OS je definirana kao prethodno [15] opisano. Prognostički značaj procijenjena je pomoću procjene Kaplan-Meier preživljavanja i log-rank test. Cox je proporcionalnih rizika regresijski model je korišten za analizu neovisnih prognostički čimbenici. Svi testovi su bili dva kraka i p izvoznici < 0,05 smatrana je statistički značajna pregled}

CD151 je izraženo u HGC pregled

izražavanja CD151 analiziran Rezultati pregled. RT-PCR i imunoblotingom u HGC tumora i podudarne nontumor tkiva. CD151 je izražena na niskim razinama u nontumor tkiva u usporedbi s HGC tkiva. Kao što je prikazano na slici. 1A, B i C, relativna ekspresija CD151 proteina u uzorcima HGC je 2,95 ± 0,21 (raspon od 1,13 do 3,59) u odnosu na 1,30 ± 0,09 (raspon 1.00-1.81) u nontumor uzorcima, a razlika je bila statistički značajna ( p pregled < 0,01). Nadalje, CD151 ekspresijske razine su značajno niže u odnosu na HGEC HGC-27, AGS, MKN28 i MGC803 stanica (p < 0.05). otkrivene su među HGC stanicama (sl. 1d, e i f) razlika u CD151 razina ekspresije. Immunohistochemstry (IHH) analiza je potvrdila da je CD151 proteina je izražena na višim razinama u HGC tkivima nego u podudarnih nontumor tkivima (Sl. 1 g). Pregled

CD151 promovirao invazije i metastaziranja HGC Stanice in vitro i in vivo

Da bi se ispitala uloga CD151 u HGC stanica, modificirani smo ekspresiju CD151 u HGC-27 stanica po RNA interferencije i cDNA-CD151 transfekcije (sl. 2a). Rezultati testa zacjeljivanja pokazalo je kašnjenje stope zatvaranje rane od shRNA-CD151-HGC-27 stanica na 48 sata u usporedbi s HGC-27-Mock stanica, koje je dobiven cDNA-CD151 transfekcije (Sl. 2B). Down-regulacija CD151 nije imao značajan učinak na proliferaciju stanica ( p izvoznici > 0,05, slika 2C).. Međutim, podreguliranje CD151 izražavanja narušilo invazivnosti HGC-27 stanice (Sl. 2D, E). Pregled

Kako bi se dodatno istražiti ulogu CD151 u metastaza tumora in vivo, MGC-803-Mock, MGC- 803-vshRNACD151 i MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 stanice transplantirane u golim miševima kroz bočnu repnu venu. Histološka analiza plućima miševa potvrdila da je down-regulacije CD151 potiskuje stvaranje metastaza pluća. Brojevi i veličina plućnih metastaza kvržica značajno su smanjeni u MGC-803-vshRNACD151 skupini u usporedbi sa MGC-803-Mock i MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 stanice (Sl. 2 F, G). Uzeti zajedno, naši rezultati pokazuju da CD151 je pozitivan regulator želučane metastaza raka. Pregled

CD151 tvori kompleks s integrinskog α3 i odsutnost integrinskog α3 narušava HGC invazije stanice inducirana CD151 prekomjernom ekspresijom Netlogu

uključenost tetraspanins na integrinom posredovanog regulaciju metastaziranja raka je pokazano, i α3β1 integrina se pokazalo da promoviraju GC invaziju i metastaziranje [16]. Stoga smo istraživali odnos između integrina α3 i CD151 u HGC stanica. Kao što je prikazano na slici. 3A, integrina α3 izražena na višim razinama u HGC stanicama nego u HGEC stanica. Ko-imunoprecipitacijom eksperimenti su pokazali da CD151 formirao kompleks s integrinom α3 u HGC-27 stanicama (Sl. 3b, C). Štoviše, CD151 i integrina α3 lokalizirani na plazma membrani HGC-27 stanice, kao što je prikazano imunofluorescencijom (Sl. 3d). Pregled

dalje ispitati uključenost CD151 na integrin α3 funkcija, stanice su podvrgnute RNA interferencije ili cDNA transfekcije i analizirani pomoću transjažičnim pokusima nakon zamjene matrici gela s lamininom 332 [17]. Rezultati su pokazali da utišavanje integrina α3 značajno inhibira invaziju HGC-27 stanica, a CD151 cDNA transfekcija spasio invazivnu sposobnost HGC-27-vshRNACD151, ali ne i da od HGC-27-vshRNA integrina α3 stanice. Nadalje, integrin α3 antitijela inhibira invaziju HGC-27-vshRNACD151-cDNA-CD151 stanice (Sl. 3e, F). Ovi rezultati ukazuju na koordinirano funkciju CD151-integrin α3 kompleksa, kao i to da su visoke razine CD151 i integrina α3 povezana s povećanim metastatskim potencijalom GC stanicama. Pregled

Izražavanje CD151 ili integrinskog α3 je pozitivno povezan s malignim fenotipova HGC imunohistokemijski Netlogu

izraz CD151 i integrina α3 proteina ispitano je u 76 bolesnika osnovnim HGC koriste microarrays tkiva (TMA). CD151 proteina imunoreaktivnost lokaliziran na staničnoj membrani (Sl. 4A). U tumorskim tkivima, CD151 izraz pokazala značajnu heterogenost u različitim uzorcima (Sl. 4a1, B1, C1 i D1). CD151 ^{visoka iznosio 50% (38/76) od cijele skupine. Kao što je prikazano u tablici 1, CD151 visoka je značajno korelira s veličinom tumora ( p = 0,021 pregled), dubina invazije ( p = pregled 0,004), zahvaćeni limfni čvorovi ( p = 0,028 pregled) i stupnja visokog tumora ( p = pregled 0,002). Međutim, druge kliničke značajke, uključujući dob, spol i diferencijacije tumora, nisu bili značajno povezani s izrazom CD151. Pregled}

membrane tumorskih stanica obojene pozitivno za integrin α3 (Sl. 4a2, B2, C2, a d2). U svim analiziranim tkivima, visoka razina ekspresije integrina α3 nađene su u 27 uzoraka HGC tkiva (35.52%). U skladu s rezultatima prethodnih studija [16], [18], bolesnici s visokim integrinskog izražavanja α3 su više vjerojatno da pokazuju agresivne značajke. Integrinskih α3 ^{visoka pacijenti su pokazali veće tumore ( p = pregled 3.46E-4), veća dubina invazije ( p = pregled 0,001), viši stadij tumora ( p = pregled 0,005), i više zahvaćeni limfni čvorovi ( p = pregled 0.040) od bolesnika s izrazom niska integrinskog α3 (Tablica 1).}

Prekomjerna ekspresija CD151 i /ili integrinskog α3 su neovisni čimbenici koji predviđaju prognozi HGC Pacijenti

do posljednjeg nastavka, 3 i 5-godišnje OS stope u cijeloj populaciji bile su 53,0 i 40,78%, 5-godišnje OS u CD151 ^{niska skupina bila je značajno viša nego u CD151 visoka skupine (68,42% vs. pregled 23.68%, odnosno, p pregled = 0,007, sl. 4 B) i postoperativnog 5 godina OS HGC bolesnika bila je veća u integrina α3 niska u odnosu na integrina α3 visoka skupina (66,67% vs.
13.51%, p pregled = 6.67 E-6). Procjena kombinirani učinak CD151 i integrina α3 o prognozi HGC je pokazala da je 5-godišnji operativni sustav CD151 visoka /integrina α3 visoka bolesnika (skupina III, n = 23) bio je 17,40%, što je znatno niža od one CD151 niska /integrina α3 niskim bolesnika (77,78% skupini i, n = 27) i bilo nisko bolesnika (bolesnici s bilo nisko CD151 ili samo niske integrinskog α3) (23.08%, grupa II , n = 26, Sl. 4C i D). pregled}

Jednosmjerna analiza pokazala je da je tumor, dubina invazije, zahvaćeni limfni čvorovi, visoki tumor faza, visoka CD151 izražavanja, visoka razina integrina α3 i suradnju izraz od CD151 i integrinskih α3 su prediktori za OS. Ostale karakteristike uključuju dob, spol i diferencijaciju imao prognostički značaj za OS (tablica 2). Multivarijatna Cox proporcionalnih rizika model pokazao da je dubina invazije je bila samostalna prognostički pokazatelj za OS (Tablica 2.). Pregled

Rasprava pregled

Rezultati ovog istraživanja pokazali su da CD151 je izražena na višim razinama u GC stanica i tumorskog tkiva nego u HGEC stanicama i nontumor tkiva, što je u skladu s ranijim izvještajima o CD151 izražavanja u različitim tumorima, uključujući intrahepatičnog kolangiokarcinom, HCC, dojke, pluća, debelog crijeva i raka prostate [15], [19] [20], [21]. Nadalje, naša studija pokazala je da CD151 formira funkcionalnu kompleks s integrinskog α3 i podreguliranje CD151 ili integrina α3 izraz značajno inhibira invaziju i metastaziranje HGC stanica in vitro. Klinički, naši rezultati pokazuju da visoka razina CD151 izraz ili ko-prekomjernu ekspresiju CD151 i integrina α3 mogu imati nepovoljno prognostičke implikacije za bolesnike s GC. Pregled

Početni dokazi da CD151 promiče metastaza je došao iz studija pokazuje da je antitijelo s nepoznatim specifičnosti inhibira formaciju metastaziranje linije ljudskog epidermalni karcinom in vivo pregled. Antitijelo prepoznao CD151 i inhibira migraciju stanica bez utjecaja na adheziju ili proliferaciju [22]. Prekomjerna ekspresija CD151 otkriven je u mnogim tipovima tumora, a povećana ekspresija CD151 je povezana s lošom prognozom u karcinomu dojke, gušterače i karcinoma pluća ne-malih stanica, kao i HCC. Nadalje, CD151 je pokazala da je bolji prediktor prognozom u bolesnika s rakom prostate nego histološku ocjenjivanje [23]. U ovom istraživanju, dvije linije dokaza pokazuju da prekomjerna ekspresija CD151 je klinički značaj u HGC. Prvo, CD151 prekomjerna ekspresija je češća kod HGC bolesnika s lošom prognozom. Drugo, povećana ekspresija CD151 pojačan invaziju i metastaziranje HGC stanica. Osim toga, klinički podaci pokazuju da je povišena CD151 izraz nadmašuje druge često korištene kliničke parametre kao što su povećanje veličine tumora i slabe diferencijacije za predviđanje HGC prognozu. Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da CD151 igra važnu ulogu u napredovanju HGC. U ovom istraživanju, pokazali smo da CD151 u interakciju s integrinom α3 u HGC stanicama. Moduliranje razine ekspresije integrina α3 u HGC-27-vshCD151-cDNA-CD151 stanica je pokazala formiranje funkcionalnog CD151-integrin α3 kompleksa i pokazali da je ko-prekomjerna ekspresija CD151 i integrina α3 povezan je s povećanom metastatskim potencijalom HGC stanice , S obzirom na utvrđenu ulogu integrina α3 u HGC [16], razumno je pretpostaviti da CD151 pojačana ekspresija može promovirati metastaza /invaziju u GC. Pregled

Zbog svoje hidrofobne prirode, tetraspanins spajaju jedna s drugom i sa druge membrane proteini [24]. Štoviše, dobro je utvrđeno da tetraspanins pružaju signalnu platformu u plazma membranu kroz formiranje tetraspanin obogaćenog mikrodomena (sustave) [6], [7]. Do danas, različite vrste membranskih proteina, uključujući receptora faktora rasta, integrini, imunoglobulin domenama i EWI-F (potporodice Ig proteina) su pronađeni u sustave [25]. Osim toga, djelovanje tih membranskih proteina su izvijestili da se blisko povezana s sustave. Na primjer, pronađeno različite kombinacije tetraspanins formiraju nim utječu na funkciju receptora faktora rasta i integrina. Što je još važnije, razina ekspresije pojedinih tetraspanins u TEMS također ima značajan utjecaj na povezanih proteina [26], [27]. U nedavnim istraživanjima, knock-down CD151 je pokazala da narušava formiranje sustave i CD151 brisanje inhibira funkciju nekoliko membranskih proteina, što znači da CD151 igra ključnu ulogu u formiranju i funkcioniranju TEM [7], [26]. Nadalje, blokiranje CD151 značajno umanjilo invazivnosti i metastatskog potencijala tumorskih stanica, a ciljanje CD151 proteina ili TEMS postao obećavajući terapijska strategija [23]. U ovom istraživanju, izraz CD151 pokazalo se da je neovisan prediktor za OS. Međutim, u kombinaciji izraz CD151 i integrina α3 bio pouzdaniji pokazatelj OS nego CD151 ili integrina izraz α3 sama, podupire ideju da su i CD151 i integrina α3 igraju važnu ulogu u HGC. Dakle, naši rezultati su značajni i ukazuju na to da CD151 ili CD151-integrin α3 kompleks mogu biti važni ciljevi u liječenju bolesnika s GC. Pregled

U zaključku, CD151 prekomjerna ekspresija je preduvjet za loš ishod u bolesnika s HGC i CD151 ili CD151-integrin α3 kompleksa mogu biti potencijalni ciljevi za tretiranje HGC. pregled

• PLoS ONE: PKG II Sprječava EGF /EGFR-inducirane migracije želučanog raka Cells
• PLoS ONE: Obnova Mir-1228 * Expression Potiskuje epitelnih-mczcnhimnog tranzicije u želučani Cancer