PLoS ONE: Padidėjusi CD151 prognozuoja prognozę pacientams, sergantiems rezekcijos skrandžio vėžio

Anotacija

Paskirtis

tetraspanin CD151 veikia kaip metastazių ir invazijos promotoriaus keliais navikų. Tačiau CD151 vaidmuo žmogaus skrandžio vėžiu (HGC) lieka neaišku.

Metodai

Dvidešimt HGC pavyzdžius ir suderinti nontumor mėginių, žmogaus skrandžio epitelio ląstelių (HGEC) ir keturias skrandžio vėžio ląstelių linijos buvo naudojamas analizuoti CD151 išraiška. buvo atliktas trumpas segtukas RNR tarpininkaujant downregulation iš CD151 raiškos HGC ląstelių išnagrinėti CD151 vaidmenį platinimo ir metastazių /invazija HGC ląstelių in vivo, parsisiųsti ir in vitro
. Iš CD151 santykiai su integrinu α3 į HGC ląstelių buvo tiriamas triukšmo slopinimo integrino α3 po bendradarbiavimo Imunoprecipitacijos ir imunofluorescenciniam. Galiausiai, prognostinė vertė CD151 ir integrinų α3 buvo įvertintas imunohistocheminiu audinių mikrogardelių 76 HGC pacientams.

Rezultatai

CD151 buvo išreikštas aukštesniu lygmeniu, HGC audinių ir ląstelių HGC negu nontumor audiniai ir HGEC ląstelės. Žemyn reguliavimo CD151 pagal vshRNA-CD151 yra sutrikusi metastazių ir invazijos HGC-27 ląstelių, tačiau neturėjo įtakos ląstelių proliferaciją. CD151 sudarė kompleksą su integrinu α3 į HGC ląsteles. CD151-kDNR transfekcija išgelbėjo metastazavusiu potencialą ir invazinis iš HGC-27-vshCD151 ląsteles, bet ne tų HGC-27-vshintegrin α3 ląstelių in vitro
. Kliniškai CD151 raiška buvo statistiškai patikimai koreliavo su aukštos TNM etape, gylis invazija ir teigiamą pažeidusiam limfmazgius ( P
< 0,05), o aukšto lygio integrino α3 buvo susiję su dideliu naviko dydžio, aukštos TNM etape gylis invazija ir limfmazgių dalyvavimo ( p
< 0,05). Svarbu tai, kad pooperacinis 5 metų bendras išgyvenamumas pacientų su CD151 ^{mažas ir /arba integrinu α3 mažas buvo didesnis nei pacientų, sergančių CD151 didelis ir /ar integrinu α3 didelis.}

Išvada

CD151 yra teigiamai susijęs su HGC invazijos ir CD151 ar CD151 derinys ir integrinu α3 yra naujas žymeklis prognozuoti HGC pacientų prognozę ir gali būti potencialūs terapiniai tikslai.

nurodomoji dalis: Jonas YM Zhang ZW Liu QM "Sun YF, J. JR Xu WX (2013) Padidėjusi CD151 prognozuoja prognozę pacientams, sergantiems rezekcijos skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (3): e58990. Doi: 10,1371 /journal.pone.0058990

redaktorius: Yves St-Pierre, INRS, Kanada

Įstojo: spalio 7, 2012; Priėmė: Vasario 8, 2013 m Paskelbta: Kovo 22, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Yang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė Akademikas Workstation fondo Shaoxing antrasis Liaudies ligoninė. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

žmogaus skrandžio vėžys (HGC) yra dažniausia priežastis, dėl vėžio susijusių mirties [1]. Iš HGC dažnis buvo įvertintas 934,000 atvejų per metus su 56% naujų atvejų pasitaiko Rytų Azijoje, įskaitant 41% Kinijoje ir 11% Japonijoje [2]. Nors pasaulinė dažnis GC sumažėjo pastaraisiais metais, jos mirtingumas Kinijoje yra didžiausias tarp visų navikų ir sudaro 25% GC mirtingumo pasaulyje [3]. Nepaisant pastaraisiais pažangos chemoterapijos ir chirurgijos metodus, 5 metų bendras išgyvenamumas (BI) lygis Kinijoje yra nedidelis 40%. Dauguma HGCs yra diagnozuojamas III ar IV stadijoje, o limfmazgių metastazių norma nuo GC yra didelis (50-75%) [4]. Iš HGC patogenezė yra daugiaveiksnė įskaitant genetinį polinkį ir aplinkos veiksniai. Keli genetiniai pakitimai yra susiję su polinkiu į HGC, įskaitant tas, kurios susijusios navikas slopinančias genus, onkogenų, ląstelių adhezijos molekulių, augimo faktorius, ir genetinio nestabilumo [5]. Todėl, siekiant geriau suprasti molekulinius mechanizmus, HGC ir nustatyti vertingų diagnostikos žymekliai ir naujų gydymo strategijas, yra labai klinikinės reikšmės.

Tetraspanins yra ląstelių paviršiniai baltymai, kurie apima membranos keturis kartus, o randami kelių tipų ląstelių daugelyje organizmų. Jie rodyti daug savybių, būdingų jų fiziologinės reikšmės ląstelių adhezijos, judrumas, proliferaciją ir, taip pat prisidėti prie patologinių būklių, pavyzdžiui, metastazių ir patologinio angiogenezę [6], [7], [8]. CD151 yra glikoproteinas ląstelės paviršiaus priklausanti tetraspanin superfamily, kad pirmą kartą buvo įrodyta, kad skatinti metastazių į tyrimo, kurio metu nežinomas antikūnas specifiškai slopina metastazių susidarymas žmogaus vyravo plokščialąstelinis vėžys vivo
[ 9
]. Antikūnų pripažinta CD151 ir slopina ląstelių migraciją nepaveikiant sukibimą arba platinimu. Sirnr (siRNR) tarpininkaujant downregulation iš CD151 išraiškos pradinėse melanocitų lėmė judrumas praradimo, o tai turėjo mažai įtakos pusiausvyrinė lygių integrinų. Be to, šie pakeitimai gali būti panaikintas, kai CD151 buvo pakartotinai išreiškė [10]. Padidėjusi CD151 buvo parodyta aktyvuoti integrino ir augimo faktoriaus receptorių priklausomas signalizacijos kelius, o tai lėmė padidėjęs judrumas ir invaziškumo vėžio ląstelių [11]. Šis procesas taip pat buvo pasiūlyta prisidėti prie kelių tarpininkaujant mažų GTPases aktyvavimo, kuri padidina GTP privalomą į Cdc42 ir RAC, organizatorių ląstelių citoskeleto. Sukibimas priklauso nuo aktyvavimo anksčiau, ERK /MAPK1 /2 ir baltymų kinazės B (PKB) /Akt buvo įrodyta, kad būti moduliuojama CD151 [7], [12]. Platus funkcijų CD151, ir ypač į jo dalyvavimas invazijos ir metastazių vėžio ląstelių, rodo, kad geriau suprasti savo išraiška ir vaidmenį HGC gali būti svarbu.

Šiame tyrime mes tyrė CD151 išraiška žmogaus skrandžio epitelio ląstelių (HGEC), HGC ląstelių linijas, HGC mėginiai, ir gretimų nontumorous audiniai. Be to, mes tyrinėjo siRNA nuslopinami iš CD151 poveikis dauginimosi, invazijos ir metastazavusiu gebėjimas HGC-27 ląstelių ir išnagrinėjo tarp CD151 ir integrinų α3 santykius. Galiausiai CD151 ir integrino α3 išraiška buvo nagrinėjama imunohistocheminiu į audinių microarray sudaro 76 atvejus HGC ir prognostinė vaidmuo CD151 ir /arba integrinu α3 į HGC buvo tiriami.

Medžiagos ir metodai

Mobilaus ryšio linijos

HGEC ir HGC ląstelių linijas, įskaitant HGC-27, AGS, MKN28 ir MGC803, buvo gauti iš Amerikos tipas kultūros kolekcijos ir saugomi mūsų laboratorijoje. Visi mobilieji linijos buvo prižiūrimi Dulbecco modifikuota Eagle terpėje (DMEM, Invitrogen) papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (Hyclone) 37 ° C drėgnoje inkubatoriuje 5% CO _2.

Pacientai ir tolesnės

Dvidešimt švieži navikų mėginiuose iš zonose, esančiose netoli naviko marža ir suderinti ne navikų audiniuose (daugiau nei 3 cm atstumu nuo naviko), buvo aklai gauta iš eilės pacientams, sergantiems HGC, kuriems buvo atlikta gydomoji rezekcija nuo vasario 2009 ir 2010 Lapkritis Shaoxing Antrojo Liaudies ligoninė (Shaoxing, Kinija). Dar 76 pacientų, sergančių skrandžio vėžiu, kuriems buvo atlikta R0 rezekcijų su išplėsta limfmazgių skrodimo (D2) nuo 2005 rugsėjo iki 2008 m rugsėjo mėn Shaoxing Antrojo Liaudies ligoninės buvo įtraukti į šį tyrimą. Iš rezekcijos egzempliorių vertinimas buvo atliktas laikantis Japonijos skrandžio vėžio asociacijos (1998) gaires. Kiekvienas standartas rezekcija dalyvauja apie 1 grupės ir 2 limfmazgių pašalinimą (diapazonas 36-60, vidutinis 47,6). Klasifikavimo etapu buvo atlikta pagal TNM klasifikaciją pagal HGC (UICC). Mėginiai buvo atrinkti remiantis tinkamų formalinu fiksuotos, parafino-embedded audinių ir visiškai clinicopathologic ir tolesnius duomenis iš pacientų prieinamumo principu. Iš studijų dalykų charakteristikos buvo apibendrinti 1. Šis tyrimas patvirtino Shaoxing antrasis Liaudies ligoninės tyrimų etikos komiteto lentelėje ir raštu informuoti sutikimas buvo gautas iš visų asmenų. Nė vienas iš pacientų chemoterapija ar radioterapija prieš arba po operacijos kaip viena iš sudedamųjų adjuvantu programos. Tolesni duomenų rinkimas buvo nutrauktas 2012 rugsėjo mediana tolesnių buvo 43,0 mėnesių (nuo 6-78 mėnesiai). Tolesnės procedūros sudarė tarpinę istorijos, fizinio tyrimo, vertinimo naviko žymenų (CEA, CA-199), pilvo echoskopija ir krūtinės ląstos rentgeno kas 2-3 mėnesius arba CT kas 6 mėnesius. Bendras išgyvenamumas (BI) buvo apibrėžiama kaip skirtumas tarp operacijos ir mirties arba tarp operacijos ir paskutinio stebėjimo išgyventi pacientams intervalas. Duomenys buvo cenzūruojamas paskutinę tolesnių veiksmų siekiant gyvenimo pacientus.

RNR gavyba ir atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandininė reakcija (PGR)

Viso RNR išskirta naudojant TRI reagento ( "Sigma ) pagal gamintojo protokolą. tada RNR buvo gydomi DNaseI (Roche diagnostika), išgrynintas per RNeasy kolonėlę (Qiagen) ir elektroforezė, prieš taikant 5'-RACE eksperimentų, siekiant nustatyti RNR vientisumą. Papildoma DNR (kDNR) buvo susintetintas iš 2 mikrogramų visų RNR naudojant heksamerų (Proligo) ir viršuje III atvirkštinės transkriptazės (INVITROGEN). RT-PGR buvo atliktas nuo ląstelių linijų ir navikų mėginiuose skydelyje. Pradmenys naudojamas PGR buvo taip: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'ir 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrino α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'ir 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'ir 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. RT-PGR sąlygos buvo taip: 10 min esant 94 ° C, denatūraciją 94 ° C, 20 S, atkaitinimo, esančio 59 ° C temperatūroje 30 S, ir pratęsimą 72 ° C temperatūroje 60 s. Iš CD151 išraiška ir integrinu α3, palyginti su namų ruošos genų GAPDH buvo analizuojami tankio analizę, naudojant Band "Scan 5.0 programinę įrangą. Visi eksperimentai buvo pakartotas tris kartus.

imunopernašos ir imunofluorescentiniu tyrimu

Iš viso ląstelių ekstraktas baltymų (30 mikrogramų) buvo atskirtas SDS-poliakrilamido gelyje, perkeliamas ant polivinilideno difluoridą membranų, ir inkubuojami su atitinkantis antikūnus. Membranos buvo sukurta su sustiprinto cheminės liuminescencijos metodas (Pierce, Rockford, IL, JAV). Pelės anti-žmogaus CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, Jungtinė Karalystė) ir anti-integrino α3 monokloniniai antikūnai (P1B5, 1:300; Chemicon International ", Temecula, Kalifornija), buvo naudojamas aptikti CD151 ir integrino α3 išraišką, atitinkamai , GAPDH (1:5,000; Chemicon, JAV) buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės. Visi eksperimentai buvo pakartotas tris kartus.

HGC-27 ląstelės buvo naudojamas siekiant nustatyti, ar CD151 vietą ir integrino α3, kaip aprašyta anksčiau [13]. buvo naudojamas pelės anti-žmogaus CD151 monokloninis antikūnas (11G5a, 1:200;; Serotec, Jungtinė Karalystė) ir pelės anti-žmogaus integrino α3 antikūnas (Chemicon International ", Temecula, Kalifornija P1B5, 1:300). Griežinėliai buvo analizuojami fluorescencijos mikroskopijos (Leica Microsystems vaizdavimo sprendimų).

transfekciją lentiviruso Vektoriai su mažais segtukas RNR prieš CD151 ir integrino α3

pGMLV /Neo-shRNR-CD151 vektorius buvo pastatytas pagal gamintojo instrukcijas (pGMLV, mažas segtukas RNR (shRNR) i vektorius, Šanchajus Genomeditch Co Ltd). Trys shRNR-CD151 lentiviruso vektoriai (pGMLV-GFP-shRNR -CD151) buvo sukurtas nutildyti apie CD151 išraišką HGC-27 ląstelių (shRNR-CD151-HGC-27). Kad shRNR taikymo sekų CD151 buvo taip:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. ShRNR nukreipimas seka integrinu α3 buvo taip: 5'-CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 "(Šanchajus Genomeditech, Šanchajus, Kinija). Stabiliai Transfekuoti klonai buvo būdingas RT-PGR ir analizuojami munoblotingu sintagmos lygių CD151 ir integrinu α3 baltymus.

MTT, ląstelių migraciją ir Matrigel invazija tyrimai

Ląstelės buvo pasėjamos į 96-duobučių lėkštelėse (2000 už 200 pL-šulinio) ir inkubuojami 24, 48, ir 72 h. A nuo 20 mikrol, tūris MTT tirpalą buvo pridėta kartą nustatytu laiku kiekis ir inkubuojami 4 h. Vidutinės (200 mikrol, DMEM, kurių sudėtyje yra 10% vaisiaus jaučio serumu), tada buvo pakeistas 150 mikrol, DMSO, plokštelės buvo purtomas 10 min ir esant 490 nm bangos ilgiui, absorbcija, buvo išmatuoti, siekiant nustatyti gyvybingų ląstelių kiekvienas skaičių gerai. Visi eksperimentai buvo atliekamas tris kartus.

ląstelių migraciją buvo įvertintas naudojant žaizdų gijimo testą. Ląstelės buvo auginamos iki 80-90% santakoje į 24-duobučių lėkštelėse. Žaizdų buvo vilkdami plastikinį pipetės galiuką visoje ląstelių paviršiaus. Likusios ląstelės tris kartus buvo plaunamos pašalinti ląstelių nuolaužų ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje su terpėje serumo neturinčioje. Tuo nurodyto laiko, migruojantys ląstelės iš žaizdos priekyje buvo fotografuotas ir palyginti. Buvo atlikti trys atskiri eksperimentai

Mobilusis invazija tyrimai buvo atliekami naudojant 24 šulinėlių transwells (8 mkm akučių dydis; MILLIPORE). precoated su Matrigel (Falcon 354480; BD Biosciences). Iš viso 1 × 10 ^{tada 5 ląstelės buvo sustabdyta 500 mikrol DMEM sudėtyje yra 1% FBS ir įtraukta į aukštutinį kambarį, o 750 mikrol DMEM sudėtyje turintys 10% FBS buvo perkeltas į apatinę kamerą. Po 48 h inkubacijos, Matrigel ir likusios viršutinės kameros ląstelės buvo pašalintas medvilniniais tamponais. Ląstelės dėl apatinio paviršiaus membranos buvo fiksuoti 4% paraformaldehido ir nudažomi su Giemsa. Ląstelės 5 mikroskopinių srityse (priartinimas, x 200) buvo skaičiuojami ir fotografavo. Visi eksperimentai buvo atliekami tris kartus.}

In vivo metastazių tyrimai

in vivo metastazės tyrimus, MSV-803-tyčiotis, MSV-803-vshRNACD151 ir MSV-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 ląstelės buvo persodinami į nuogas pelėmis (5 savaičių senumo BALB /c-NS /nu, 5 vienai grupei, 1 × 10 ^{6 ląstelės kiekvienam pele) per šoninio uodegos venos [14]. Po 7 savaičių, pelėms buvo paaukota. Jų plaučiai buvo pašalintas ir veikiamas hematoksilinu ir eozinu (H & E) dažymo. Visi tyrimai įtraukiant gyvūnus buvo atliekami tikrinant atitiktį Shaoxing antrasis Liaudies ligoninė gyvūnų globos komisijos patvirtintas protokolus.}

Bendras imunoprecipitacijos (Co-IP) tyrimai

Ląstelės buvo lizuoti su Ripa lizės buferiniame tirpale papildyta su 40 mm Naf "," 100 mikromolių Na _{3VO 4, ir užbaigti proteazių inhibitorius (Roche). Nuėmus netirpią medžiagą centrifuguojant 12000 × g, o precleared Lizatai inkubuojamos su pirmine mAb anksto absorbuojamas baltymo, kad A ir G-Sepharose karoliukų (Pierce biotechnologijos) per naktį 4 ° C temperatūroje. Metu nuosėdos tris kartus buvo plaunamos su lizės buferiniame tirpale, virti 2 × SDS pavyzdžių buferio 5 minutes, ir baltymai buvo išspręstas SDS-PAGE dėl 10% koeficientu geliai. Vėlesni immunoblots buvo tyrinėjo su atitinkamu antikūnų ir aptinka ECL.}

Statybinės audinio mikrogardelių ir imunohistocheminis

audinių mikrogardelių buvo pastatyti taip, kaip aprašyta anksčiau [15]. Trumpai tariant, visi mėginiai iš HGC pacientų buvo peržiūrėtas histologiškai iki hematoksilinu & eozinas dažymo ir veiklos sritis buvo premarked į parafino blokus, atokiau nuo nudžiūvusiuose ir hemoraginių medžiagų. Dublikatai iš 1 mm skersmens balionai iš dviejų skirtingų sričių, naviko centro ir artimiausio noncancerous marža (paskirtas intratumor ir peritumor, atitinkamai; keturių štampus iš viso) buvo įtrauktos į kiekvienos bylos, kartu su įvairiais kontrolės, siekiant užtikrinti atgaminimas ir homogeniška dažymo skaidres (Šanchajus biochip Co Ltd ", Šanchajus). Taigi, keturios skirtingos audinių mikrogardeliq blokai buvo pagaminti, kurių kiekvienoje yra 140 cilindrus. Profiliai 4 mkm storio buvo pateikti skaidres, padengtais 3-aminopropiltrietoksisilano. Monokloninis pelės anti-žmogaus CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, Jungtinė Karalystė) ir pelės anti-žmogaus integrino α3 (P1B5, 1:300; Chemicon International ", Temecula, Kalifornija) antikūnai buvo naudojamas aptikti CD151 ir integrino α3 išraiška , Vaizdai buvo užfiksuoti Leica QWin Plus v3 programinės įrangos. Pozityvaus dažymo intensyvumas buvo matuojamas kaip aprašyta. Iš CD151 ir integrinų α3 intensyvumas buvo suskirstyti į du lygius išraiškos pagal vidutinį plotą teigiamą dažymo kaip ribinei vertei taip: CD151 ^{aukštą, > 50% naviko skirsnyje; ir integrino α3 didelis, > 25% naviko skirsnyje; CD151 mažas, < 50%, o integrinu α3 mažas, < 25% [15]}

Statistinė analizė

Statistinė analizė atlikta SPSS 16.0 programos (. SPSS). Vertės buvo išreikštas vidurkis ± standartinis nuokrypis. Dėl Imunohistocheminiais žymekliais, už Pogrupis apibrėžimą Apipjaustymas buvo vidutinis intensyvumas vertė. Χ ^{2-testas ir Stjudento t-testas buvo naudojamas palyginimams tarp grupių. OS buvo apibrėžtas kaip aprašyta anksčiau [15]. Prognostinė reikšmė buvo įvertintas naudojant Kaplan-Meier išgyvenimo vertinimus ir log-rank bandymus. Cox proporciniai pavojai regresijos modelis buvo naudojamas analizuoti nepriklausomus prognozinius veiksnius. Visi testai buvo du-tailed ir P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas}

Rezultatai

CD151 ekspresija į HGC

CD151 išraiška buvo analizuojami. RT-PGR ir munoblotingu į HGC naviko ir suderintų nontumor audiniuose. CD151 buvo išreikštas žemoje lygių nontumor audinių, palyginti su HGC audiniuose. Kaip parodyta Fig. 1A, B ir C, santykinis išraiška CD151 baltymų HGC mėginių buvo 2,95 ± 0,21 (nuo 1.13 - 3.59), palyginti su 1,30 ± 0,09 (diapazonas, 1.00-1.81) į nontumor mėginių, ir šis skirtumas buvo statistiškai reikšmingas ( p
< 0,01). Be to, CD151 ekspresijos lygis buvo žymiai mažesnis HGEC nei HGC-27, AGS, MKN28 ir MGC803 ląstelių (p < 0,05). Nėra CD151 ekspresijos lygio skirtumai buvo aptikti tarp HGC ląstelių (pav. 1D, E ir F). Immunohistochemstry (IHC) analizė patvirtino, kad CD151 baltymas buvo išreikštas aukštesniu lygmeniu, HGC audinių nei suderintų nontumor audinių (1G pav.).

CD151 skatino invazija ir metastazes HGC Ląstelės in vitro ir in vivo

Jei išnagrinėti CD151 vaidmenį HGC ląstelių, mes pakeitė CD151 išraišką HGC-27 ląstelių RNR trukdžių ir kDNR-CD151 transfekciją (pav. 2A). Žaizdos gijimo tyrimo rezultatai parodė, vėlavimą į žaizdų uždarymui norma shRNR-CD151-HGC-27 ląstelių 48 h, palyginti su HGC-27-maketas ląstelių, kurios buvo susigrąžintos kDNR-CD151 transfekciją (2b pav.). Žemyn reguliavimo CD151 neturėjo reikšmingos įtakos ląstelių proliferaciją ( P
> 0,05, 2C pav.). Tačiau CD151 išraiškos downregulation sutrikusi dėl HGC-27 ląstelių (Figos. 2D, E) invazinis.

Jei toliau tirti CD151 vaidmenį naviko metastazių in vivo, MSV-803-tyčiotis, MGC- 803-vshRNACD151 ir MSV-803-vshRNACD151-kDNR-CD151 ląstelės buvo persodinami į nuogas pelių per šoninio uodegos venos. Histologinę analizę pelių plaučiuose patvirtino, kad žemyn reguliavimas CD151 slopino plaučių metastazės išsidėstymą. Skaičiai ir dydis plaučių metastazės mazgelių buvo žymiai sumažėjo MSV-803-vshRNACD151 grupės, palyginti su MGC-803-Mock ir MSV-803-vshRNACD151-kDNR-CD151 ląstelių (Figos. 2 F, G). Kartu paėmus, mūsų rezultatai rodo, kad CD151 yra teigiamas reguliatorius skrandžio vėžio metastazių.

CD151 sudaro kompleksus su integrino α3 ir Triukšmo slopinimo ir integrino α3 susilpnina HGC Mobilusis invazija sukeltos CD151 raiška

dalyvavimas tetraspanins į integrinų tarpininkaujant reguliavimo vėžio metastazių buvo įrodyta, ir α3β1 integrino buvo įrodyta, kad skatinti GC invazija ir metastazes [16]. Taigi, mes ištirti ryšį tarp integrinų α3 ir CD151 santykį HGC ląsteles. Kaip parodyta Fig. 3A, integrinu α3 buvo išreikštas aukštesniu lygmeniu, HGC ląstelių negu HGEC ląsteles. Bendras Imunoprecipitacijos eksperimentai parodė, kad CD151 sudarė kompleksą su integrinu α3 į HGC-27 ląstelių (Figos. 3B, C). Be to, CD151 ir integrino α3 bendrai lokalizuota ant membranos HGC-27 ląstelių plazmos, kaip parodyta imr.rnofluorescencija (3D pav.).

Jei toliau nagrinėti CD151 dalyvavimą integrinu α3 funkciją, ląstelės buvo atliktas RNR interferencija arba kDNR transfekcija ir analizuojami Transwell eksperimentų pakeitus matricą gelis su lamininu-332 [17]. Rezultatai parodė, kad triukšmo slopinimo ir integrinu α3 labai slopino HGC-27 ląstelių invaziją, ir CD151 kDNR transfekcija išgelbėjo invazinių gebėjimas HGC-27-vshRNACD151, bet ne kad HGC-27-vshRNA integrinu α3 ląsteles. Be to, integrino α3 antikūnai slopino HGC-27-vshRNACD151-kDNR-CD151 ląstelių (Figos. 3E, F), invaziją. Šie rezultatai rodo, koordinuotą funkciją CD151-integrino α3 komplekso, ir nurodė, kad didelis CD151 ir integrino α3 yra susijęs su padidėjusiu metastazavusiu potencialo GC ląsteles.

išraiška CD151 ar integrino α3 turi teigiamos įtakos piktybiniais fenotipus HGC imunohistocheminiu

iš CD151 išraiška ir integrinu α3 baltymų buvo ištirtas 76 pirminių HGC pacientams, vartojantiems audinių mikrogardelių (PMA). CD151 baltymo reaktyvumas lokalizuota prie ląstelės membranos (pav. 4A). Be navikų audiniuose, CD151 išraiška parodė, didelis nevienalytiškumas skirtingose ​​mėginių (Figos. 4A1, B1, C1 ir D1). CD151 ^{aukštos sudarė 50% (38/76) visos kohortos. Kaip parodyta 1 lentelėje, CD151 aukštos reikšmingai koreliavo su naviko dydį (, p =
0,021), gylis invazijos (, p =
0,004), limfmazgių dalyvavimas ( p = 0,028
) ir didelės naviko stadija (, p =
0,002). Tačiau kiti klinikiniai ypatumai, įskaitant amžių, lytį ir naviko diferenciacijos nebuvo reikšmingai susijęs su CD151 išraiška.}

naviko ląstelių membranos tamsintas teigiamas integrinu α3 (Figos. 4A2, B2, C2 ir D2). Visose analizuojamose audinių, didelis integrinų α3 išraiška buvo aptikta 27 HGC audinių mėginių (35,52%). Suderinamas su ankstesniais tyrimais [16], [18] rezultatus, pacientai, sergantys didelio integrinų α3 išraiška buvo labiau linkę demonstruoti agresyvių bruožų. Integrino α3 ^{aukšti pacientų parodė didesnius navikus (, p =
3.46E-4), didesnis gylis invazijos (, p =
0,001), didesnis navikas etapas (, p =
0,005), ir dar daugiau limfmazgių dalyvavimas (, p = 0,040
) negu pacientams, sergantiems mažo integrinų α3 išraiškos (1 lentelė).}

padidėjusi CD151 ir /arba integrino α3 yra nepriklausomi veiksniai, prognozuoti HGC Pacientai

iki paskutinio tolesnių, 3- ir 5-metų OS normos visų gyventojų buvo 53,0 ir 40,78%, 5 metų "OS CD151 ^{mažas grupė buvo gerokai didesnis nei, kad CD151 aukštos grupėje (68,42% vs.
23,68%, atitinkamai p
= 0,007, 4B pav.), o pooperacinis 5 metų OS HGC pacientams buvo didesnis integrinų α3 mažas nei integrinų α3 aukštos grupė (66.67% vs.
13.51% p
= 6.67 E-6). Vertinimas bendrąjį poveikį CD151 ir integrino α3 dėl HGC prognozės parodė, kad 5 metų OS CD151 Aukšta /integrinu α3 aukšti pacientų (III grupė, n = 23) buvo 17,40%, kuris buvo gerokai mažesnė nei CD151 žema /integrinu α3 mažas pacientų (77,78% I grupės, n = 27) ir gali būti mažo pacientų (pacientams, kuriems yra žemas CD151 ar vien mažos integrinų α3) (23.08%, II grupės n = 26, figos. 4C ir d).}

vienmatės analizė parodė, kad auglys dydis, gylis invazija, limfmazgių dalyvavimas, aukštos auglio stadijos, aukštos CD151 išraiška, aukšto lygio integrinu α3 ir bendradarbiavimą išraiška iš CD151 ir integrino α3 buvo prognozuoti OS. Kitos savybės, įskaitant amžių, lytį ir diferenciacijos neturėjo prognostinę reikšmę OS (2 lentelė). Daugiamatė Cox proporcinės pavojai modelis parodė, kad gylis invazijos buvo nepriklausoma prognostinė rodiklis OS (lentelė. 2).

Diskusijos

Šio tyrimo rezultatai parodė, kad CD151 buvo išreikštas aukštesniu lygiu GC ląstelių ir navikų audiniuose, negu HGEC ląstelių ir nontumor audiniuose, kurios yra suderintos su ankstesnėmis ataskaitomis apie CD151 išraiškos a navikų įvairovė, įskaitant intrahepatinė cholangiokarcinomos, HCC, krūties, plaučių, storosios žarnos ir prostatos vėžio [15], [19] , [20], [21]. Be to, mūsų tyrimas parodė, kad CD151 formuoja funkcinį kompleksą su integrinų α3 ir downregulation iš CD151 ar integrinu α3 išraiška labai slopino invazija ir metastazes HGC ląstelių in vitro. Kliniškai, mūsų rezultatai rodo, kad aukšto lygio CD151 išraiškos ar bendro Padidėjusi CD151 ir integrino α3 gali nepalankiai prognozinius poveikį pacientams, sergantiems GC.

pradinis įrodymų, kad CD151 skatina metastazių atėjo iš tyrimu, rodančiu, kad susitarimas su nežinoma specifiškumo antikūnas slopina metastazes susidarymą žmogaus plokščialąstelinis vėžys linija in vivo
. Antikūnų pripažinta CD151 ir slopina ląstelių migraciją nepaveikiant sukibimą arba platinimu [22]. Padidėjusi CD151 buvo aptikta daug auglių tipų ir padidino CD151 išraiška buvo susijęs su prasta prognoze krūties, kasos, ir ne smulkiųjų ląstelių plaučių vėžio, taip pat HCC. Be to, CD151 buvo įrodyta, kad būti geriau prognozuoti prognozės pacientams, sergantiems prostatos vėžiu nei histologinio rūšiavimo [23]. Šioje studijoje, dvi eilutės įrodymais nustatyta, kad padidėjusią CD151 yra kliniškai reikšmingas HGC. Pirma, CD151 raiška buvo dažniau pastebėti HGC pacientams, sergantiems blogos prognozės. Antra, padidėjo išraiška CD151 sustiprintas invazija ir metastazes HGC ląsteles. Be to, klinikinių tyrimų duomenys parodė, kad padidėjusi CD151 išraiška aplenkė kitus dažniausiai naudojami klinikinių parametrų, kaip antai padidėjęs naviko dydžio ir prastos diferencijavimo prognozuoti HGC prognozę. Kartu paėmus, šie duomenys rodo, kad CD151 vaidina svarbų vaidmenį HGC progresavimą. Šioje studijoje, mes parodome, kad CD151 sąveikauja su integrinu α3 į HGC ląsteles. Moduliacija ekspresijos lygio integrinu α3 į HGC-27-vshCD151-kDNR-CD151 ląstelių atskleidė funkcinio CD151-integrino α3 komplekso formavimas ir parodė, kad bendrai padidėjusią CD151 ir integrino α3 buvo susijęs su padidėjusia metastazavusiu potencialo HGC ląstelių , Atsižvelgiant į nustatytą vaidmenį integrinu α3 į HGC [16], tai galima manyti, kad CD151 raiška gali skatinti metastazes /invaziją į GC.

Dėl savo hidrofobinių pobūdžio, tetraspanins asocijuotos tarpusavyje ir su kitomis membrana baltymai [24]. Iš tiesų, jis yra gerai nustatyta, kad tetraspanins suteikti signalinio perdavimo platforma plazminės membranos per tetraspanin-praturtintas microdomains formavimo (mos) [6], [7]. Iki šiol įvairių tipų membranos baltymų, įskaitant augimo faktoriaus receptorius, integrinų, imunoglobulino domenus ir EWI-F (iš Ig baltymų pošeimiui) buvo rasta mos [25]. Be to, šių membranos baltymų funkcijos buvo pranešė, kad turi būti glaudžiai susijęs su mos. Pavyzdžiui, buvo rasta įvairių derinių tetraspanins sudarančių mos įtakos augimo faktoriaus receptorius ir integrinu funkciją. Dar svarbiau, kad išraiška lygis atskirų tetraspanins į mos taip pat turi didelį poveikį susijusių baltymų [26], [27]. Pastaraisiais tyrimų, trankyti-žemyn CD151 buvo įrodyta, kad pakenkti mos formavimas ir CD151 išbraukta slopino kelių membraninių baltymų funkciją, nurodant, kad CD151 vaidina lemiamą vaidmenį SER formavimas ir funkcijos [7], [26]. Be to, blokavimas CD151 gerokai sutrikusi, yra invazinis ir metastazavusiu potencialą vėžinių ląstelių, ir orientuojantis į CD151 baltymų arba mos tapo daug žadančią gydymo strategiją [23]. Šioje tyrime CD151 išraiška buvo įrodyta, kad būti nepriklausoma prognozuoti OS. Tačiau kartu išraiška CD151 ir integrinu α3 buvo labiau patikimas prognozuoti OS nei CD151 ar integrinu α3 išraiška vienas, remti idėją, kad tiek CD151 ir integrinu α3 suvaidinti svarbų vaidmenį HGC. Todėl, mūsų rezultatai yra reikšmingi ir rodo, kad CD151 ar CD151-integrino α3 kompleksas gali būti svarbūs tikslai pacientams, sergantiems GC gydymą.

Taigi, CD151 raiška yra prastos rezultatus prognozuoti pacientams, sergantiems HGC ir CD151 ar CD151-integrino α3 kompleksas galėtų būti potencialūs taikiniai iš HGC gydymą.

• PLoS ONE: PKG II slopina "EGF /EGFR sukelta migracija skrandžio vėžys Cells
• PLoS ONE: Restauravimas miR-1228 * išraiška Stabdo epitelio-mezenchiminių perėjimas skrandžio vėžio