PLoS One: túltermelése CD151 jósolja kórjóslatát kimetszett Gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

Cél katalógusa

A tetraspanin CD151 működik, mint egy promoter metasztázis és invázió számos daganat. Azonban a szerepe a CD151 humán gyomorrák (HGC) továbbra sem világos. Katalógusa

Módszerek

Húsz HGC példányok és kiegyenlített tumoros minták, az emberi gyomor hámsejtek (HGEC), és négy gyomorrák sejt sejtvonalakat elemzésére használt CD151 expresszióját. Rövid hajtű RNS által közvetített downregulációját CD151 expressziót HGC sejtekkel végeztük szerepét vizsgálja a CD151 szaporodásában és metasztázis /invázió HGC sejtek in vivo katalógusa és in vitro katalógusa. A kapcsolat a CD151 és integrin α3 a HGC sejtekben vizsgáltuk elhallgatva integrin α3 majd co-immunprecipitációval és immunfluoreszcens festéssel. Végül a prognosztikai értéke CD151 és az integrin α3 értékeltük immunhisztokémiai szöveti microarray 76 HGC betegeknél.

Eredmények

CD151 fejeztük magasabb szinten HGC szövetek és HGC sejtekben, mint a nem-tumoros szövetek és HGEC sejteket. Down-regulációja CD151 által vshRNA-CD151 károsodott metasztázis és invázió HGC-27 sejtekben, de nem befolyásolja a sejtek szaporodását. CD151 alakított komplex integrin α3 a HGC sejtekben. CD151-cDNS transzfekció megmentette a metasztatikus potenciál és invazivitásának HGC-27-vshCD151 sejtek, de ez nem vonatkozik a HGC-27-vshintegrin α3 sejtek in vitro katalógusa. Klinikailag CD151 túltermelése szignifikáns korrelációt mutatott magas TNM, mélysége invázió és a pozitív nyirokcsomók érintettsége ( p katalógusa < 0,05), és a magas szintű integrin α3 jártak nagy tumor mérete, magas TNM, mélysége invázió és a nyirokcsomó érintettség ( p katalógusa < 0,05). Fontos, hogy a műtét utáni 5 éves teljes túlélés betegek CD151 ^{alacsony és /vagy integrin α3 alacsony volt, magasabb, mint a betegek CD151 magas és /vagy integrin α3 magas.}

Következtetés

CD151 pozitívan társított invazivitását HGC, és CD151 vagy a kombináció a CD151 és integrin α3 egy új marker előrejelzésére prognózisát HGC betegek és lehetnek potenciális terápiás célokat.

Citation: Yang YM, Zhang ZW, Liu QM, Sun YF, Yu JR, Xu WX (2013) túltermelése CD151 jósolja kórjóslatát kimetszett gyomorrákban. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10,1371 /journal.pone.0058990 katalógusa

Szerkesztő: Yves St-Pierre, INrS, Kanada katalógusa

Beérkezett: október 7, 2012; Elfogadva: február 8, 2013; Megjelent: március 22, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Yang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta az akadémikus munkaállomás Alap Shaoxing második Népi Kórházban. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

az emberi gyomorrák (HGC) a leggyakoribb oka a rák okozta halál [1]. Az előfordulási HGC becsülték 934000 esetek száma évente 56% -a új esetek Kelet-Ázsiában, többek között 41% -kal Kínában és 11% Japánban. [2] Bár a globális előfordulása GC csökkent az elmúlt években, a halálozási arány Kínában a legmagasabb az összes daganatok 25% -át GC halálozás világszerte [3]. Jelentős előrelépések ellenére a kemoterápia és a sebészi technika, az 5 éves teljes túlélés (OS) aránya Kínában alacsony 40%. A legtöbb HGCs diagnosztizálják a színpadi III vagy IV aránya és a nyirokcsomó-metasztázis GC magas (50-75%). [4] Patogenezisében HGC multifaktoriális a genetikai hajlam és a környezeti tényezők. Számos genetikai eltérések vannak társítva a hajlam HGC, beleértve azokat, amelyek a tumor szuppresszor gének, onkogének, sejtadhéziós molekulák, növekedési faktorok, és genetikai instabilitást [5]. Ezért elérése jobb megértése a molekuláris mechanizmusok részt vevő HGC és azonosítása értékes diagnosztikai markerek és új terápiás stratégiák nagy klinikai jelentőséggel bír.

Tetraspanins vannak sejtfelszíni fehérjék, hogy befogják a membrán négy alkalommal, és megtalálhatók számos sejttípus számos szervezetben. Ezek megjelenítéséhez számos tulajdonságait mutatja a fiziológiai jelentőségét a sejt adhézió, motilitás, aktiválódását és proliferációját, valamint ezek hozzájárulása a patológiás állapotok, mint például metasztázis, és a kóros angiogenezisben [6], [7], [8]. CD151 egy sejtfelszíni glikoprotein tartozó tetraspanin szupercsalád hogy először kimutatták, hogy elősegíti a metasztázis egy tanulmányban, amelyben egy ismeretlen antitest specifikusan gátolta a metasztázist képződés humán epidermoid karcinóma in vivo
[ 9
]. Az antitest felismerte CD151 és gátolja a sejtek migrációját befolyásolása nélkül adhéziós vagy proliferációt. Kis interferáló RNS-t (siRNS-t) által közvetített alulszabályozása CD151 expressziója primer melanociták elvesztését eredményezte, a motilitás, míg csekély hatása volt a steady state állapot az integrinek. Sőt, ezek a változtatások fordított lehet, amikor CD151-ben újra kifejezve [10]. Overexpressziója CD151-ben kimutatták, hogy aktiválja az integrin és a növekedési faktor receptor-függő jelátviteli utak, ami a fokozott motilitás és invazivitását rákos sejtek [11]. Ez a folyamat is javasolta, hogy hozzájáruljon az aktiválás utak által közvetített kis GTP, ami növeli GTP kötődését Cdc42 és Rac, a szervezők a sejt citoszkeleton. Az adhéziós-függő aktiválását Ras, ERK /MAPK1 /2 és a protein-kináz B (PKB) /Akt kimutatták, hogy modulálják CD151 [7], [12]. A széles körű funkciók a CD151, és különösen annak a részvételét a invazív és metasztatikus daganatos sejtek, azt sugallják, hogy jobban megértsék a kifejezés és szerepe HGC fontos lehet. Katalógusa

A jelen tanulmányban vizsgáltuk a kifejezés a CD151 humán gyomornyálkahártya sejtek (HGEC), HGC sejtvonalak, HGC mintákat, és a szomszédos nontumorous szövetekben. Ezen túlmenően, feltártuk a hatását siRNS csendesítése CD151 a proliferáció, invazív és metasztatikus képességét HGC-27 sejtekben, és megvizsgálták a kapcsolat a CD151 és az integrin α3. Végül, a kifejezés a CD151 és integrin α3 vizsgáltuk immunhisztokémiai egy szövetben microarray álló 76 esetben a HGC, és prognosztikai szerepét CD151 és /vagy integrin α3 a HGC vizsgáltuk.

Anyagok és Módszerek

sejtvonalak

HGEC és HGC sejtvonalak, beleértve a HGC-27, AGS, MKN28, és MGC803, kaptuk az American Type Culture Collection és tartott a laboratóriumunkban. Minden sejtvonalat Dulbecco-féle módosított Eagle-tápközegben (DMEM, Invitrogen) kiegészített, 10% borjúembrió-szérumot (Hyclone), 37 ° C-on, nedvesített inkubátorban, 5% CO _2.

Betegek és a nyomon követés katalógusa

húsz friss tumor mintákban közeli területeken a daganat határait és illeszkedik a nem daganatos szövetekben (több mint 3 cm-re a tumor) vakon nyert egymást követő beteg HGC átesett kuratív rezekció februárja között 2009-ben és 2010. november Shaoxing második Népi Kórház (Shaoxing, Kína). Egy másik 76 gyomorrákos betegeknél, akiknél R0 reszekció kiterjesztett nyirokcsomó-eltávolítás (D2) között 2005 szeptembere és 2008. szeptember Shaoxing második Népi Kórház vontak be a vizsgálatba. Az értékelés reszekált példányok végeztük iránymutatásokkal összhangban a japán gyomorkarcinóma Egyesület (1998). Minden standard reszekció részt eltávolítása 1. és 2. csoport nyirokcsomók (tartomány 36-60, átlag 47,6). Stage besorolás szerint végeztük a TNM osztályozás az HGC (UICC). A mintákat a kiválasztott alapján a rendelkezésre álló megfelelő formalin-fixált, paraffinba ágyazott szövetek és teljes klinikai és patológiai és nyomon követése az adatokat a beteg. A jellemzői a vizsgálati alanyok voltak az 1. táblázat tartalmazza Ez a tanulmány által jóváhagyott Shaoxing második Népi Kórház Kutatásetikai Bizottsága és írásos beleegyezését adta a minden egyén. Egyik beteg kemoterápiában vagy sugárterápiában műtét előtt vagy után részeként egy adjuváns Program. A nyomon követés adatgyűjtés szüntetni 2012. szeptember A medián követési idő 43,0 hónap (6-78 hónap). Nyomon követési eljárásokat állt ideiglenes történelem, a fizikális vizsgálat értékelése tumormarkerek (CEA, CA-199), hasi ultrahang és mellkas röntgen 2-3 havonta vagy CT 6 havonta. A teljes túlélés (OS) definiálták közötti intervallum műtét és a halál között, vagy műtét, és az utolsó megfigyelés túlélő betegek. Az adatokat cenzoráltuk az utolsó követési élő betegeknek.

RNS-extraháló és reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (RT-PCR)

Teljes RNS-t extraháltunk TRI-reagens (Sigma ) szerint a gyártó protokollja. Az RNS-t ezután DNaseI (Roche Diagnostics), tisztítjuk egy RNeasy oszlopon (Qiagen) és elektroforézisnek meghatározására a integritását az RNS felhasználás előtt 5'-RACE kísérletek. Komplementer DNS (cDNS) állítottunk elő 2 ug össz-RNS alkalmazásával random hexamerek (Proligo) és Superscript III reverz transzkriptáz (Invitrogen). RT-PCR-t végeztünk egy panel sejtvonal és a tumor mintákban. Használt primerek PCR a következők voltak: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'és 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrin α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'és 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'és 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. Az RT-PCR-körülmények a következők voltak: 10 perc 94 ° C-on, denaturáció 94 ° C-on 20 s, lánckapcsolódás 59 ° C-on 30 s, és kiterjesztés 72 ° C-on 60 másodpercig. A kifejezés a CD151 és integrin α3 képest a háztartási gén GAPDH elemeztük sűrűség analízissel sáv Scan v5.0 szoftver. Minden kísérletet három párhuzamosban végeztük.

immunoblot és immunofluoreszcens teszt

teljes sejtkivonat fehérje (30 ug) elválasztottuk SDS-poliakrilamid gél-elektroforézissel, átvittük polivinilidén-difluorid membránokra, és inkubáltuk a megfelelő antitestek. A membránokat kidolgozni az erősített kemilumineszcenciás eljárással (Pierce, Rockford, IL, USA). Egér anti-humán CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK), és az anti-integrin α3 monoklonális antitestek (P1B5, 1:300; Chemicon International, Temecula, CA) alkalmaztunk, hogy észleli a expressziójának CD151 és integrin α3 rendre . GAPDH (1:5,000; Chemicon, USA) alkalmaztunk belső kontrollként. Minden kísérletet három párhuzamosban végeztük.

HGC-27 sejteket alkalmaztunk kimutatására a helyét a CD151 és integrin α3 a korábban leírtak szerint [13]. Egér anti-humán CD151 monoklonális antitest (11G5a, 1:200; Serotec, Egyesült Királyság) és egér anti-humán integrin α3 antitest (P1B5, 1:300; Chemicon International, Temecula, CA) alkalmaztunk. A szeleteket fluoreszcens mikroszkóppal (Leica Microsystems Imaging Solutions). Katalógusa

transzfektálása lentivírus vektorok kis hajtű RNS ellen CD151 és integrin α3 katalógusa

A pGMLV /Neo-shRNS-CD151-vektort szerint a gyártó utasításai (pGMLV, egy kis hajtű RNS (shRNS) i vektor, Shanghai Genomeditch Co. Ltd). Három shRNS-CD151 lentivírus vektorok (pGMLV-GFP-shRNS -CD151) hoztunk létre, hogy elhallgattassa a kifejezés a CD151 a HGC-27 sejtek (shRNS-CD151-HGC-27). Az shRNS célzási szekvenciákat CD151 a következők voltak:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. Az shRNS célzás sorrendet integrin α3 a következő volt: 5'CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 '(Shanghai Genomeditech, Shanghai, Kína). Stabilan transzfektált klónokat jellemezte RT-PCR és analizáltuk immunoblot az expressziós szintjét a CD151 és integrin α3 fehérjéket.

MTT vizsgálat, sejtmigráció és Matrigel inváziós vizsgálatok

A sejteket 96-lyukú lemezeken (2000 per 200 ul-üreg), és inkubáltuk 24, 48 és 72 órán át. Egy 20 ul térfogatú MTT-oldatot adtunk hozzá a jelzett időpontokban, és inkubáltuk 4 órán át. A tápközeget (200 ul DMEM, amely 10% borjúembrió-szérum) ezután helyettesítjük 150 ul DMSO-ban, a lemezeket 10 percig rázzuk, majd a fényelnyelést 490 nm-en mértük, hogy meghatározzák a életképes sejtek számát minden egyes lyukban. Minden kísérletet háromszor.

sejtmigrációt alkalmazásával értékeltük sebgyógyító vizsgálattal. A sejteket 80-90% -os összefolyásig 24 mérőhelyes lemezeken. A seb készült húzásával egy műanyag pipetta hegyét az egész sejt felszínén. A megmaradt sejteket háromszor mostuk, hogy a sejttörmeléket eltávolítsuk, és inkubáljuk 37 ° C-on szérummentes tápközegben. Majd a jelzett időpontokban, vándorló sejtek a seb elülső lefényképezzük és hasonlítottuk össze. Három külön kísérletet végeztünk.

sejtek invázióját vizsgálatokat végeztünk 24 lyukú transwell (8 jim pórusméretű; Millipore) előzetesen bevont Matrigel (Falcon 354.480; BD Biosciences). Összesen 1 × 10 ^{5 sejt ezután szuszpendáljuk 500 ul DMEM, amely 1% FBS-t, és hozzáadjuk a felső kamrába, míg a 750 ul DMEM 10% FBS tartalmú helyeztünk az alsó kamrába. Az elegyet 48 óra inkubálás Matrigel és sejtek maradt a felső kamrában eltávolítjuk pamut törlőkendő. A sejteket az alsó felületén a membrán fixáltuk 4% paraformaldehid és megfestettük Giemsa. A sejteket 5 látómezőket (nagyítás, × 200) megszámoltuk, és fényképezett. Minden kísérletet három párhuzamosban végeztük.}

In Vivo Metastasis Assay

Az in vivo metasztázis vizsgálatokban MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 és MGC-803-vshRNA CD151-cDNS-t CD151 sejteket ültettünk csupasz egerek (5-hetes BALB /c-nu /nu, 5 per csoport, 1 × 10 ^{6 sejt minden egyes egér) keresztül az oldalsó farokvénába [14]. Miután 7 hetes egereket leöltük. A tüdőket eltávolítottuk és alá, hematoxilin-eozin (H &E) festéssel. Minden kutatás állatok bevonásával végeztük megfelelően protokollok által jóváhagyott Shaoxing második Népi Kórház Animal Care Bizottság. Katalógusa}

Co-immunprecipitációs (Co-ip) Vizsgálatok katalógusa

A sejteket RIPA lízis pufferrel kiegészített 40 mM nátrium-fluorid, 100 nM Na _{3VO 4, és teljes proteáz inhibitor (Roche). Eltávolítása után az oldhatatlan anyagot centrifugálással 12,000 x g, a előtisztítottuk lizátumokat inkubáltuk primer mAb pre-abszorbeált proteint A- és G-Sepharose gyöngyökhöz (Pierce Biotechnology) egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. A csapadékot háromszor mostuk lízis pufferrel, főtt 2 × SDS mintapufferben 5 percig, és a fehérjéket SDS-PAGE-on 10% -os gradiens gélen. Későbbi immunfoltokat próbaként a megfelelő antitesttel és észlelte ECL. Katalógusa}

Építőipari Szöveti microarray és immunhisztokémiai katalógusa

A szöveti microarray épültek a korábban leírtak szerint [15]. Röviden, az összes mintát HGC beteget értékeltek szövettanilag hematoxilin & eozin festéssel, és reprezentatív területek bejelölt a parafintömböket, távol nekrotikus és vérzéses anyagokat. Azonosak 1 mm átmérőjű henger két különböző területeken, a tumor-központ és a legközelebbi jóindulatú árrés (kijelölt tumorba és peritumor, illetve, összesen négy ütések) vontunk be minden esetben, valamint a különböző kontrollok, annak biztosítása érdekében, a reprodukálhatóság és homogén festés a diák (Shanghai Biochip Co. Ltd., Shanghai). Így négy különböző szöveti microarray blokkok épültek, melyek mindegyike 140 henger. Fejezet 4 um vastag kerültek diák bevonva 3-aminopropyltriethoxysilane. A monoklonális egér anti-humán CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, Egyesült Királyság) és egér anti-humán integrin α3 (P1B5, 1:300; Chemicon International, Temecula, CA) antitesteket használtunk detektálására expressziójának CD151 és integrin α3 . A képeket a Leica QWin Plus v3 szoftver. Az intenzitás a pozitív festődés mértük a leírtak szerint. Az intenzitás a CD151 és az integrin α3 sorolták két expressziós szinteket szerinti átlagos terület a pozitív festődés a cutoff érték a következő: CD151 ^{magas, > 50% a tumor részben; és az integrin α3 magas, > 25% a tumor részben; CD151 alacsony, < 50%, és integrin α3 alacsony, < 25% [15]. Katalógusa}

Statisztikai elemzés katalógusa

A statisztikai elemzést az SPSS 16.0 szoftver ( SPSS). Értékek formájában fejeztük ki az átlag ± standard deviáció. Immunhisztokémiai markerek, a cutoff meghatározására alcsoportot medián intenzitás értéke. A χ ^{2-teszt és a Student t-tesztet használtunk összehasonlítás a csoportok között. OS úgy definiáltuk, mint a korábban leírt [15]. Prognosztikai alkalmazásával vizsgáltuk Kaplan-Meier túlélési becslések és log-rank teszt. Cox-féle arányos kockázati regressziós modellt alkalmaztunk, hogy elemezze a független prognosztikai tényezők. Minden teszt két farkú és p katalógusa < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

CD151 túlzottan kifejeződik HGC katalógusa

CD151 expresszióját vizsgáltuk RT-PCR és immunoblot a HGC tumor és kiegyenlített a nem-tumoros szövetekben. CD151 fejeztük alacsony szinten a nem-tumoros szövetekben képest HGC szövetekben. Ábrán látható. 1A, B és C, a relatív expresszióját a CD151 fehérje HGC mintákban volt 2,95 ± 0,21 (tartomány: 1,13-3,59), mint a 1,30 ± 0,09 (tartomány: 1,00-1,81) a nem-tumoros mintákban, és a különbség statisztikailag szignifikáns volt ( p katalógusa < 0,01). Továbbá, CD151 expressziós szintek szignifikánsan alacsonyabbak voltak HGEC mint HGC-27-AGS, MKN28 és MGC803 sejtek (p < 0,05). Nincs különbség a CD151 expressziós szint detektáltunk között HGC sejtek (ábra. 1D, E és F). Immunohistochemstry (IHC) vizsgálatok megerősítették, hogy a CD151 fehérje kifejezve magasabb szinten HGC szövetekben mint a párosított tumoros szövetekben (ábra. 1 g). Katalógusa

CD151 promotált invázió és metasztázis a HGC Cells in vitro és in vivo Matton

a betöltött szerepének vizsgálatára CD151 a HGC sejtekben, módosítottuk a kifejezés a CD151 a HGC-27 sejtek RNS interferencia és cDNS-CD151 transzfekciós (2A.). Az eredmények a sebgyógyulási vizsgálat azt mutatta, egy késés a seb lezárását aránya shRNS-CD151-HGC-27 sejteket 48 óra képest HGC-27-Mock sejtek, amelyek úgy különítettük el, cDNS-CD151 transzfekció (ábra. 2b). Leszabályozza CD151 nem volt jelentős hatása a sejtburjánzás ( p katalógusa > 0.05 ábra. 2C). Azonban a downregulációját CD151 kifejezés rontotta a invazivitásának HGC-27 sejtek (ábra. 2D, E). Katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a szerepe a CD151 a tumor metasztázis in vivo, MGC-803-Mock, MGC- 803-vshRNACD151 és MGC-803-vshRNACD151-cDNS-CD151 sejteket ültettünk nude egerek keresztül az oldalsó farokvénába. Szövettani elemzés egerek tüdejében megerősítette, hogy a down-regulációja CD151 elfojtott tüdő metasztázis képződés. A számok és méretét tüdő metasztázis csomók szignifikánsan csökkent az MGC-803-vshRNACD151 csoport összehasonlítva MGC-803-Mock és MGC-803-vshRNACD151-cDNS-CD151 sejtek (ábra. 2 F, G). Összegezve, eredményeink arra utalnak, hogy CD151 pozitív szabályozója gyomorrák áttét. Katalógusa

CD151 komplexet képez az integrin α3 és elhallgattatása integrin α3 befolyásolja a HGC Cell invázió által kiváltott CD151 túltermelése katalógusa

A bevonása tetraspanins az integrin-mediált szabályozása rákmetasztázis kimutatták, és α3β1 integrin kimutatták, hogy elősegíti a GC invázió és metasztázis. [16] Ezért megvizsgáltuk viszonyának integrin α3 és CD151 a HGC sejtekben. Ábrán látható. 3A, integrin α3 fejeztük magasabb szinten HGC sejtekben, mint a HGEC sejtekben. Co-immunprecipitációs kísérletek azt mutatták, hogy CD151 képződött komplexet integrin α3 a HGC-27 sejtek (ábra. 3B, C). Sőt, CD151 és integrin α3 co-lokalizált plazmamembrán HGC-27 sejteket, amint immunfluoreszcens (ábra. 3D). Katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálja bevonásával CD151 az integrin α3 funkció sejteket kitéve RNS-interferencia vagy cDNS-t a transzfekciót és analizáljuk Transwell kísérletek cseréje után a mátrix gél laminin-332 [17]. Az eredmények azt mutatták, hogy hangtompító integrin α3 jelentősen gátolta az invázió HGC-27 sejtekben, és CD151 cDNS transzfekció mentettek invazív képességét HGC-27-vshRNACD151, de nem a HGC-27-vshRNA integrin α3 sejteket. Továbbá integrin α3 antitest gátolja az invázió HGC-27-vshRNACD151-cDNS-CD151 sejtek (ábra. 3E, F). Ezek az eredmények azt sugallták, összehangolt funkciója a CD151-integrin α3 komplex, és jelezte, hogy a magas szintű CD151 és integrin α3 társított megnövekedett metasztatikus potenciálját GC sejteket.

expressziója CD151 vagy integrin α3 pozitív összefüggést A malignus fenotípus HGC immunhisztokémiai eljárással katalógusa

A kifejezés a CD151 és integrin α3 fehérjét vizsgálták 76 primer HGC használó betegek szöveti microarray (TMA). CD151 protein immunreaktivitást lokalizálódik a sejtmembrán (ábra. 4A). A tumor szövetben, CD151 kifejezés megmutatta jelentős heterogenitást a különböző mintákban (ábra. 4a1, b1, c1 és d1). CD151 ^{magas át 50% (38/76), a teljes csoportra. Amint az 1. táblázatban látható, CD151 magas szignifikáns korrelációt mutatott a tumor mérete ( p = 0,021 katalógusa), mélysége invázió ( p = 0,004 katalógusa), nyirokcsomó érintettség ( p = 0,028 katalógusa) és a nagy tumor stádium ( p = katalógusa 0,002). Azonban más klinikai jellemzői, beleértve a kor, a nem és a tumor differenciálódásának, nem voltak szignifikáns összefüggésben a kifejezés a CD151.}

A membránokat tumorsejtek pozitívan festődnek integrin α3 (ábra. 4A2, B2, C2, és d2). Az összes elemzett szövetben, a magas integrin α3 expresszió kimutatható volt 27 HGC szövetminták (35.52%). Összhangban az eredmények a korábbi tanulmányok [16], [18], a betegek magas integrin α3 kifejezés, nagyobb valószínűséggel mutatnak agresszív funkciókat. Az integrin α3 ^{magas betegnél nagyobb daganatok ( p = katalógusa 3.46E-4), mélyebb invázió ( p = 0,001 katalógusa), magasabb a daganat stádiuma ( p =
0,005), és több nyirokcsomó érintettség ( p = 0,040 katalógusa), mint betegek alacsony integrin α3 kifejezés (1. táblázat). katalógusa}

túltermelése CD151 és /vagy integrin α3 függetlenek tényezők előrejelzése prognózisát HGC Betegek katalógusa

akár az utolsó utánkövetés, a 3-as és az 5 éves OS arány a teljes lakosság 53,0 volt, és 40,78%, az 5 éves OS a CD151 ^{alacsony csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint az CD151 nagy csoport (68,42% vs. katalógusa 23,68% -kal, p = 0,007 katalógusa, Fig. 4B), és a posztoperatív 5 éves OS HGC betegek esetében magasabb volt az integrin α3 alacsony, mint az integrin α3 nagy csoport (66,67% vs.
13,51%, p = 6.67 katalógusa E-6). Értékelése az együttes hatása CD151 és integrin α3 a prognózisa HGC azt mutatta, hogy az 5 éves OS a CD151 magas /integrin α3 nagy beteg (csoport III, n = 23) volt 17,40% volt, ami lényegesen alacsonyabb, mint a CD151 alacsony /integrin α3 alacsony beteg (77,78% I csoport, n = 27), és vagy alacsony beteg (betegek akár alacsony CD151 vagy alacsony integrin α3 egyedül) (23.08%, csoport II , n = 26, ábra. 4C és D). katalógusa}

az egyváltozós elemzés kimutatta, hogy a daganat mérete, mélysége invázió, nyirokcsomó érintettség, nagy tumor stádiuma, nagy CD151 kifejezés, magas szintű integrin α3 és együtt- a CD151 és integrin α3 volt előrejelzője OS. Egyéb jellemzők, beleértve a kor, a nem és a differenciálás nem volt prognosztikai jelentősége OS (2. táblázat). Többváltozós Cox modell azt mutatta, hogy a mélysége invázió független prognosztikai tényező az OS (táblázat. 2). Katalógusa

Vita katalógusa

Az eredmények a jelenlegi tanulmány kimutatta, hogy CD151 fejezte magasabb szinten GC-sejtek és a tumoros szövetek, mint HGEC sejtekben és a nem-tumoros szövetekben, ami összhangban van a korábbi jelentéseket CD151 expresszióját a különböző tumorok, beleértve a intrahepatikus cholangiocarcinoma, HCC, emlő-, tüdő-, vastagbél- és prosztatarák [15], [19] [20], [21]. Továbbá, a mi tanulmány kimutatta, hogy a CD151 képez funkcionális komplexet integrin α3, és alulszabályozása CD151 vagy integrin α3 expresszióját jelentősen gátolta az invázió és metasztázis a HGC sejtek in vitro. Klinikailag eredményeink azt mutatták, hogy a magas szintű CD151 kifejezés vagy az együttes túltermelése CD151 és integrin α3 lehetnek kedvezőtlen prognosztikai jelentősége a betegek GC. Katalógusa

Az első bizonyíték arra, hogy CD151 elősegíti áttét jött egy tanulmány azt mutatja, hogy egy ismeretlen specificitású antitest gátolta a metasztázist képződését egy humán epidermoid karcinóma vonal in vivo katalógusa. Az antitest felismerte CD151 és gátolja a sejtek migrációját befolyásolása nélkül adhéziós vagy proliferáció [22]. Overexpressziója CD151 kimutatták számos tumortípusban, és a megnövekedett CD151 expresszióját összefüggésbe hozták egy rossz prognózist emlő-, hasnyálmirigy-, és a nem-kissejtes tüdőrák, valamint a HCC. Továbbá, CD151 kimutatták, hogy egy jobb előrejelzője a prognózis betegeknél a prosztatarák, mint szövettani osztályozás [23]. A jelen tanulmányban két sor bizonyíték azt mutatja, hogy túltermelése CD151 van klinikai jelentősége HGC. Először CD151 túlexpressziót gyakrabban figyeltek HGC betegek rossz prognózissal. Másodszor, fokozott expressziója CD151 fokozott az invázió és metasztázis a HGC sejteket. Ezen felül a klinikai jellegű adatok azt igazolták, hogy a megemelkedett CD151 kifejezés felülmúlta más általánosan használt klinikai paraméterek, mint a fokozott tumor mérete és gyenge differenciálódás előrejelzésére HGC prognózist. Mindent összevetve, ezek a megállapítások jelzik, hogy CD151 játszik fontos szerepet a progresszió HGC. A jelen tanulmányban azt mutatják, hogy a CD151 kölcsönhatásba integrin α3 a HGC sejtekben. Expresszálásának modulálásán szintek integrin α3 a HGC-27-vshCD151-cDNS-CD151 sejteket feltárta a kialakulása egy funkcionális CD151-integrin α3 komplex és kimutatta, hogy a társ-overexpressziója CD151 és integrin α3 társult megnövekedett metasztatikus potenciálját HGC sejtek . Figyelembe véve a megállapított szerepét integrin α3 a HGC [16], ésszerű azt feltételezni, hogy CD151 túltermelése elősegítheti metasztázis /invázió GC. Katalógusa

Mivel a hidrofób jellegű, tetraspanins társult egymással és más membránnal fehérjék [24]. Valóban, jól megalapozott, hogy tetraspanins olyan jelzési platform a plazmamembrán keresztül a kialakulását tetraspanin dúsított mikrodomének (TEMS) [6], [7]. A mai napig, a különböző típusú membrán proteinek, beleértve a növekedési faktor receptorok, integrinek, immunglobulin-domének és EWI-F (a alcsaládja lg protein) találtak TEMS [25]. Sőt, a funkciók ezen membránfehérjék számoltak kell bensőségesen társított TEMS. Például különböző kombinációi tetraspanins alakítás TEMS találták funkcióját befolyásoló növekedési faktor receptorok és az integrin. Még fontosabb, hogy az expressziós szintet az egyes tetraspanins a TEMS is jelentős hatást gyakorol a kapcsolódó fehérjék [26], [27]. A legfrissebb vizsgálatok szerint a knock-down CD151 kimutatták, hogy rontja a kialakulását szerek és CD151 törlés gátolta a funkció számos membrán fehérjék, jelezve, hogy CD151 játszik kritikus szerepet TEM kialakulását és működését [7], [26]. Továbbá blokkolását CD151 jelentősen károsodott a malignitás és metasztatikus potenciálját tumorsejtek és a célzás a CD151 fehérje vagy rek vált ígéretes terápiás stratégiát [23]. A jelen vizsgálatban, a kifejezés a CD151-ben kimutatták, hogy egy független előrejelzője az OS. Azonban a kombinált expressziójának CD151 és integrin α3 volt egy megbízhatóbb előrejelzője az OS mint CD151 vagy integrin α3 kifejezés egyedül, támogatja az elképzelést, hogy mind a CD151 és integrin α3 játszanak fontos szerepet HGC. Ezért, eredményeink jelentős és azt sugallják, hogy CD151 vagy a CD151-integrin α3 komplex fontos lehet célokat a betegek kezelésében GC.

Összefoglalva, CD151 túltermelődése előrejelzője szegény a betegség kimenetelét HGC és CD151 vagy a CD151-integrin α3 komplex lehet potenciális célpontok kezelésére HGC. katalógusa

• PLoS One: PKG II Gátolja EGF /EGFR által kiváltott migráció gyomorrák sejtek
• PLoS One: helyreállítása miR-1228 * Expression Megszünteti Epithelialis-mesenchymalis Transition gyomorrákban