Введение
<р> рак желудка (GC) является вторым самым фатальным злокачественное во всем мире. На его долю приходится в общей сложности около 1 миллиона новых случаев заболевания и 0,7 миллиона смертей в год, более 70% из которых происходят в развивающихся странах, особенно в Восточной Азии стран [1]. Хотя излечим, если обнаружен на ранней стадии, большинство пациентов GC диагностированы с поздней стадии заболевания. Для пациентов с исполняемой заболевания, обычные операции и комбинированные химиотерапевтические препараты показаны. Тем не менее, в целом 5-летняя выживаемость пациентов GC составляет менее 30% [1, 2]. Следует отметить, что GC часто сопровождается перитонеального распространения и метастазов в регионарных лимфатических узлах и отдаленных органах через лимфатические и венозные сосуды [3]. Таким образом, выявление молекулярных аберраций в GC может улучшить наше понимание рака желудка и помогают нам подразделять пациентов в биологически и клинически значимых подгрупп, а также разработки новых терапевтических стратегий.
MicroRNAs (миРНК) представляют собой класс эндогенной, маленький, некодирующие регуляторные РНК из примерно 20-25 нуклеотидов, которые отрицательно регулируют экспрессию генов путем ингибирования трансляции или индуцировать деградацию мРНК посредством спаривания оснований с нетранслируемой области 3 '(3'UTR) целевых информационных РНК (мРНК) [4]. Изменены уровни экспрессии микроРНК были зарегистрированы во многих видов рака и приводят к аномальным экспрессии генов-мишеней, которые влияют на злокачественное поведение, например, пролиферацию, устойчивость к апоптозу и метастазирования [5-7]. Растущие доказательства показывают, что дерегуляция микроРНК (например, микроРНК-17, микроРНК-129, микроРНК-148а, и микроРНК-378) внести свой вклад в желудочном канцерогенезе [8-10], которые указывают, что микроРНК могут быть использованы в качестве диагностических и прогностических биомаркеров в GC .
<р> микроРНК-29 семейство (MIR-29s) является сохраняющимся семейство микроРНК, которая включает в себя микроРНК-29а /B /C. Снижение экспрессии микроРНК-29s было описано в нескольких видов рака, включая GC [11-14]. Предыдущие исследования показали, что микроРНК-29s играют доминирующую роль в пролиферации клеток, GC прогрессии клеточного цикла, апоптоза и подвижности клеток [14, 15]. Потенциальные цели MIR-29s, способствующих злокачественному фенотипу GC включают Cdc42, CCND2 и ММР2 [14, 15]. Кроме того, некоторые исследования выявили MIR-29s в качестве вклада в регуляции метилирования ДНК путем охвата DNMT3s при раке легкого [13]. Кроме того, несколько генов-мишеней, таких как TCL-1, CDK6, ламинин-1 и MCL-1, также сообщалось в других рака [16]. Следует отметить, что, несмотря на доказательства, говорящие о микроРНК-29s может функционировать в качестве генов-супрессоров опухолей, один ключевой вопрос, относящийся к выражению микроРНК-29s по-прежнему остаются частично нерешенными. Каковы механизмы контроля экспрессии микроРНК-29s в GC клетки? Сообщалось, что с-Мус участвует в MIR-29а /б репрессии [17]. Определение дополнительных механизмов подавления представляет интерес.
<Р> Известно, что транскрипционный глушение генов-супрессоров опухолей (TSGs) путем CpG острова гиперметилировании является общим признаком канцерогенеза. Интересно, что похож на белок-кодирующих TSGs, значительное количество микроРНК регулируются метилирования промоторов [18-20]. Действительно, наблюдается все большее число исследований, показывающих, что микроРНК-супрессоры опухолей, такие как MIR-34b, MIR-129, и MIR-124, часто подавляются метилирования ДНК в GC [21-23]. На основе анализа программы CpG острова Searcher, наш прогноз показал, что микроРНК-29b /с содержит CpG островов в их предполагаемыми промоторной области. Тем не менее, пока не ясно, если аберрантное гиперметилирование ДНК объясняет дисрегуляции микроРНК-29b /с. Кроме того, неизвестно, существует ли регулирование обратной связи между микроРНК-29b /с и DNMT3s. В самом деле, ни предыдущее исследование не рассмотрел статус метилирования MIR-29b /с в GC клетки, и никто из них не исследовали связь между метилирования микроРНК-29b /с и уровнями экспрессии DNMT3s. В этом исследовании мы обнаружили, что микроРНК-29b /с подавляли экспрессию Dnmt3a путем пристреливать его 3'UTR, что способствовало ингибирования миграции GC клеток и вторжения. С другой стороны, Dnmt3a вниз регулируется микроРНК-29b /с помощью аберрантных гиперметилирование промотора. Таким образом, потенциальная петля обратной связи существует между микроРНК-29b /с и Dnmt3a, в котором понижающее регулирование микроРНК-29b /с отменяет подавление Dnmt3a. Между тем, повышающая регуляция Dnmt3a влияет на экспрессию микроРНК-29b /с помощью метилирования промотора. Эти данные свидетельствуют перекрестные помехи между микроРНК-29b /с и Dnmt3a. Их дисбаланс и дерегулирование является причиной с помощью эпигенетических механизмов, которые могут быть вовлечены в миграции и инвазии характеристик ГХ клеток.
Культура клеток
GC клеточные линии, в том числе АГС и КУП-823, были получены из банка клеток китайской академии наук и поддерживали в среде RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (Invitrogen, Carlsbad, CA), 100 ед /мл пенициллина и 100 мг /мл стрептомицина (Invitrogen, Carlsbad, CA) в увлажненном инкубаторе с 5% CO <югу> 2 атмосферы при 37 ° C.
образцы тканей
50 пар GC тканей и прилегающих к ним образцы без раковой ткани были собраны в период с 2011 по 2013 год из Jiangning больницы Нанкина. Клиническая информация больных с ГХ показано в таблице S1. Исследование было одобрено Комитетом по этической экспертизе исследований в Jiangning больницы Нанкина в Китае, и пациенты подписали формы информированного согласия. Все образцы ткани были получены от пациентов с GC. Они были собраны во время операции и сразу же замораживали в жидком азоте до тех пор, РНК и белка экстракции.
Трансфекция
<р> микроРНК-29b /C /ингибиторы подражает и отрицательные молекулы управления (управление скремблирования мимических и ингибитор) были синтезированы и очищены от GenePharma компании (Шанхай, Китай). Последовательности приведены в таблице S2. Они были трансфицированы в клетки в конечной концентрации 50 нМ с использованием Липофектамин-2000 трансфекции реагента (Invitrogen, Carlsbad, USA) в соответствии с протоколом производителя. Среду мен ли через 6 часов. Клетки культивировали в течение 48 часов и собирали для анализа. Эффективность процента трансфекции определяли с помощью оценки уровней экспрессии микроРНК-29b /с или нокдаун следующие трансфекциях (S1A и S1B рис). Протокол для установления стабильных Dnmt3a нокдаун клеток было описано в нашей предыдущей работе [25]. Выражение Dnmt3a резко сократилось в клетках КУП-shDNTM3A и АГС-shDNTM3A (S1C рис) по сравнению с контрольными клетками.
микроРНК-29b /с требуется и достаточное для миграции GC клеток Для дальнейшего изучения влияния измененного зер- 29б /с выражением на CDH1, мы трансфицированы Мирского-29b /C имитирует или отрицательный контроль имитировать в клетки BGC-823. По сравнению с контрольной группой, форсированной экспрессии микроРНК-29b /с значительно повышало экспрессию CDH1 как на мРНК и уровня белка (рис 4E и 4F). Впоследствии статус метилирования промоторной области CDH1 исследовали с использованием анализа BGS в MIR-29b /с мимикой или отрицательного контроля имитируют трансфицированы клетки BGC-823. Результаты показали, что частота CDH1 метилирования промотора в сверхэкспрессией клетках микроРНК-29B /С составляла 5,2% или 12,9%, что было значительно ниже, чем уровень, измеренный в контрольных клеток (88,2%; рис 4G). Эти данные согласуются с тем результатом, что Dnmt3a нокдаун опосредует повышающей регуляции CDH1 и свидетельствует о том, что де-регуляция микроРНК-29b /с и Dnmt3a участвуют в миграции GC клеток и вторжения. Выражение признательности
<р> Предыдущие исследования предполагают, что микроРНК-29b /с имеет решающее значение для вторжения GC клетки. Для дальнейшей оценки того, является ли ответственность за миграцию клеток GC микроРНК-29b /с, ап были выполнены в пробирке
царапина заживления ран и анализа Transwell анализа. После того, как скоротечно трансфекции MIR-29b /с мимику или отрицательного контроля в клетки BGC-823, ранозаживляющее анализ показал, что клетки с принудительной экспрессии микроРНК-29b /с проявляли заметно медленное восстановление по сравнению с контрольными клетками (рис 1А). Точно так же анализа миграции Transwell показали, что избыточная экспрессия микроРНК-29b /с было связано со значительно меньшим количеством миграции по сравнению с контрольной ( P
&л; 0,05, фиг.1В). Кроме того, в соответствии с другими данными в HGC-207 и MGC-803 GC клеток [14], что микроРНК-29b /с избыточная экспрессия клетки также показали значительное снижение инвазивной способности в анализе Матригель инвазии ( P &
л; 0,05, рис 1C). Эти результаты свидетельствуют о том, что микроРНК-29b /с является важным не только для вторжения GC клетки, но и для миграции клеток. Для дальнейшего подтверждения подавляющих эффекты микроРНК-29b /с на миграцию клеток GC и инвазии, клетки КУП-823 были трансфицированы с ингибиторами микроРНК-29b /С или отрицательного контроля. Удаление MIR-29b /с значительно увеличили миграционные и инвазивные возможности ГЦ клеток, которые оценивали путем заживления ран (рис 1D) и анализа Transwell ( P
&л; 0,05, рис 1E и рис 1F). В совокупности эти результаты указывают на то, что микроРНК-29b /с эффективно отменили миграцию GC клеток и вторжение, которое таким образом внесли свой вклад в ранних стадиях злокачественной прогрессии GC.
Dnmt3a является прямой мишенью транскрипции MIR-29b /с в GC
<р> Чтобы понять механизм, лежащий в основе эффекта микроРНК-29b /с на клеточной миграции и вторжения, мы исследовали целей микроРНК-29b /с. Dnmt3a 3'UTR дополняет микроРНК-29b /с и является прямой целевой ген микроРНК-29b /с, таким образом, мы провели анализ репортера в клетках BGC-823. Dnmt3a мРНК 3'-UTR был вставлен в выходной области репортерным геном люциферазы из вектора PGL-3 (а именно Dnmt3a 3'-UTR-Luc). Конструкции были затем котрансфицируют с ПРЛ-TK и микроРНК-29B /с мимикой или отрицательным мимике контроля в клетки BGC-823. Как показано на фиг.2А, относительная активность люциферазы была значительно снижена в векторах PGL-3 с Dnmt3a 3'-UTR ( P
≪ 0,05). Тем не менее, конструкции трансфицировали с ингибитором микроРНК-29b /с не влияет на активность люциферазы векторов PGL-3 с Dnmt3a 3'UTR по сравнению с конструкциями котрансфицирована с ингибитором отрицательного контроля (фиг.2В). Для дальнейшей проверки этой микроРНК-мишень взаимодействия, количественный ОТ-ПЦР (QRT-ПЦР) и Вестерн-блоты были выполнены, чтобы подтвердить регулирование Dnmt3a по микроРНК-29b /с. Мы трансфицированы с MIR-29b /с мимику или отрицательные мимику контроля в клетки КУП-823. Увеличение микроРНК-29b /с снижала экспрессию Dnmt3a на мРНК (рис 2С) и уровни белка (рис 2E, lane1-3). С другой стороны, микроРНК-29b /с понижающей регуляции его ингибитором усиливает экспрессию Dnmt3a на мРНК (рис 2D) и уровни белка (рис 2E, lane4-6). В совокупности эти результаты показывают, что Dnmt3a является прямым транскрипционный мишенью микроРНК-29b /с и отрицательно связана с микроРНК-29b экспрессии /с в GC клетки.
микроРНК-29b /с подавляется Dnmt3a в метилирование ДНК-зависимым образом
<р> Учитывая, что аберрантное гиперметилирование имеет решающее значение для микроРНК вниз регулирования, мы предположили, что отрицательная обратная связь существует между микроРНК-29b /с и Dnmt3a. Чтобы проверить эту гипотезу, присутствие CpG острова метилирования в промоторной области микроРНК-29b /с, оценивали с помощью анализа БГС в Dnmt3a-нокдаун клеток. Как показано на рис 3А, 7 отдельных сайтов CpG в пределах островных регионов CpG (5 кб вверх по течению от MIR-29b /с) секвенировали для выявления метилированных остатков цитозина. Частота микроРНК-29b /с метилирования промотора в Dnmt3a-нокдауна клеток был 34,2%, что значительно ниже, чем контрольные клетки (58,6%; фиг.3В). Этот результат указывает на то, что транскрипционный глушение микроРНК-29b /с в GC клеток связано с наличием CpG острова гиперметилированием, что было подтверждено измерением зрелого MIR-29b /с помощью QRT-PCR. Там была значительно увеличена микроРНК-29b /с выражение в клетках AGS-shDNMT3A и КУП-shDNMT3A по сравнению с их контролем (рис 3C). Эти данные указывают на важную молекулярную основу для miR29-б /с понижающую регуляцию и подтверждают гипотезу о том, что существует наводок между микроРНК-29b /с и Dnmt3a.
Dnmt3a способствует клеточной миграции GC
<р> молекулярная связь между микроРНК-29b /с и Dnmt3a поднял вопрос о причастности Dnmt3a в миграции GC клеток. Мы также применяется в пробирке
анализы для определения функциональных изменений в поведении клеток после измененной экспрессии Dnmt3a. Ранозаживляющих анализ показал заметно более медленное восстановление в клетках КУП-shDNMT3A по сравнению с контрольными клетками (Фиг.4А, вверху), но лишь умеренное восстановление в клетках АГС-shDNMT3A по сравнению с контрольными клетками (Фиг.4А, внизу). Эти результаты указывают на то, что Dnmt3a имеет важное значение для подвижности клеток. Учитывая, что молекулы клеточной адгезии играют важную роль в подвижности клеток, экспрессию CDH1 и Виментин были исследованы Qrt-PCR и вестерн-блоттинга. Нокдаун экспрессии Dnmt3a значительно повышал экспрессию CDH1 как на уровне мРНК и белок, но не имел замечательный эффект на экспрессию Виментин (рис 4В и 4С), предполагая, что CDH1 может быть мишенью Dnmt3a-опосредованного нарушения регуляции клетки моторики. Кроме того, мы провели анализ BGS на гене CDH1 в Dnmt3a-нокдаун клеток. Как показано на фиг 4D, процент метилированных CpGs, расположенных в пределах CDH1 был в Dnmt3a обедненного клеток ниже, чем в контрольных клетках (35,8% против 94,1%). Эти результаты указывают на то, что аномальная экспрессия Dnmt3a приводит к эпигенетической глушителей CDH1.
микроРНК-29b /С участвует в подавлении CDH1
Снижение экспрессии микроРНК-29b и микроРНК-29с в GC тканях
<р> выражение микроРНК-29b /с в 50-GC опухолей и парными тканей неопухолевыми исследовали QRT-PCR. По сравнению с парными тканей неопухолевых, частота MIR-29b и 29с MIR-понижающую регуляцию (определяется как уменьшение больше, чем в два раза), составила 66% (33/50) и 60% (30/50), соответственно (рис 5А и 5В). Среднее изменение складка MIR-29b и MIR-29с была значительно ниже в опухолевых тканях, чем в тканях неопухолевыми ( P
&л; 0,01, рис 5C и 5D). Изучить клинико-патологическими значимость микроРНК-29B и микроРНК-29C паттернов экспрессии в GC онкогенеза, были проанализированы клинические особенности больных GC. Все 43 пациентов были проанализированы разделены на две группы в соответствии с MIR-29b и уровни экспрессии микроРНК-29C. Снижение микроРНК-29b сильно коррелирует со степенью дифференцировки опухолевых клеток и инвазии, в то время как уменьшились MIR-29с только коррелировала с опухолевой инвазии (таблица 1). Кроме того, связь между экспрессией микроРНК-29b /с выражением и Dnmt3a был испытан в 33 случаях GC. Исследование ассоциации показали, что экспрессия Dnmt3a отрицательно коррелировала с MIR-29b ( R
= -0,640, P
&л; 0,01, рис 5E) и микроРНК-29c ( R
= -0,349, P
&л; 0,05, рис 5F). В совокупности эти данные указывают на то, что микроРНК-29b /с может играть важную роль в прогрессии рака желудка.
Обсуждение
<р> Консервативный микроРНК-29 семьи, в том числе микроРНК-29а, зер- 29b и микроРНК-29c, участвует в нескольких подвальных процессов, таких как пролиферации, дифференцировки, апоптоза и метастазированию, что делает их хорошо проанализирован семейство микроРНК в онкогенеза [16]. Предыдущие исследования показали, что повышенная экспрессия микроРНК-29а связано с более общей выживаемости в стадии II рака толстой кишки у пациентов [27] и более низкие уровни микроРНК-29b может способствовать метастазирования рака простаты путем регулирования эпителиальные-мезенхимальных перехода сигнальных путей [28] , Кроме того, микроРНК-29С функционирует как метастаз глушителем, который ингибирует адгезию клеток рака легкого к внеклеточного матрикса и миграции в пробирке
и В естественных условиях
[29]. В GC, значительно пониженные уровни микроРНК-29b и MIR-29с, в частности, наблюдались по сравнению с микроРНК-29а [14], предполагая, что микроРНК-29b /с может играть более важную роль. Таким образом, микроРНК-29b /с был выбран для анализа в данном исследовании. В настоящем исследовании мы показали увеличение микроРНК-29b /с подавляет миграцию и инвазию клеток BGC-823 с использованием раневого заживления анализа и анализа Transwell. Эти результаты согласуются с другими данными, полученными из SGC-7901, ГГК-27 и MGC-803 GC клеток [14, 15]. Учитывая, что микроРНК-29b /C также играют роль в пролиферации и апоптоза в GC, мы оценивали способность роста клеток и уровни клеточного апоптоза в клетках BGC-823. Результаты показали, что нет никакой разницы в пролиферации в течение 48 часов для СИК-29B /с мимике или ингибиторы трансфецированных клеток, по сравнению с клетками отрицательного контроля ( P
> 0,05, S2A и S2B рис). Кроме того, аннексина-V окрашивание не показали резкое увеличение уровня апоптоза в микроРНК-29b /с подражает-трансфецированных клеток после 48 ч инкубации (S2C рис). Кроме того, анализ клеточного цикла не показал никаких существенных различий в G1, S, G2 /фазы M после обработки с MIR-29b /с мимикой или отрицательным мимике управления в течение 48 часов ( P
> 0,05, S2D Инжир). Эти данные свидетельствуют о том, что микроРНК-29b /с намотана замедляет восстановление зоны на 48 часов, главным образом, из-за уменьшенных способности клеток моторики.
<Р> микроРНК осуществляют свои функции в основном ориентированных на 3'UTRs различных генов. Тем не менее, детальные молекулярные механизмы микроРНК-29b /с, связанные с развитием злокачественного GC плохо изучены. Следует отметить, что микроРНК-29b /с акций той же комплементарность к сайтам в 3'UTR из Dnmt3a, предсказанный программами прогнозирования целевых включая TargetScan, Miranda и miRBase. Пока не известно, регулирует ли микроРНК-29b /с ненормальной метилирование генов, ассоциированных с метастазами, взаимодействуя с Dnmt3a в процессе разработки GC. Поэтому мы провели люциферазы репортер и обнаружили, что выражение высокой Dnmt3a было связано с низким микроРНК-29b экспрессии /с в GC клеток, что указывает на Dnmt3a является прямым транскрипционный мишенью микроРНК-29b /с. Тем не менее, молекулярная основа, что приводит к дисбалансу MIR-29b /с в GC остается неизвестным. микроРНК-29 проксимальных промоутеры имеют сайты связывания нескольких факторов транскрипции, таких как с-Мус и CEBPA, которые способствуют дерегулированию MIR-29s [30, 31]. Тем не менее, исследования по эпигенетической регуляции микроРНК-29s не сообщалось.
<Р> В эукариотических клетках существуют три ферментативно активные метилтрансферазы ДНК (ДНК-метилтрансфераз), DNMT1, Dnmt3a и DNMT3b. Выражение Dnmt3a в GC значительно выше, чем у DNMT3b [32, 33]. Более того, только повышенная экспрессия Dnmt3a в значительной степени связано с более короткой безрецидивной выживаемости в период GC [34], что указывает на Dnmt3a играет более важную роль в желудочном канцерогенезе. Таким образом, мы стремились исследовать, существуют ли правила отрицательной обратной связи между микроРНК-29b /с и Dnmt3a. В данном исследовании мы использовали анализ BGS для анализа состояния метилирование ДНК микроРНК-29b /с в клетках Dnmt3a RNAi GC. Действительно, уменьшилось микроРНК-29b /с было частично связано с Dnmt3a-опосредованной гиперметилированием. Кроме того, мы подтвердили, что Dnmt3a участвует в продвижении миграции GC клеток с помощью понижающего регулирования CDH1. Между тем, мы также показали, что микроРНК-29b /С участвует в подавлении CDH1. Отличительной чертой раковых метастаз является потеря экспрессии CDH1 [35], и гиперметилированием в промоторной области CDH1 наблюдается также в GC [36]. Таким образом, наши результаты показывают, что оба микроРНК-29b /с и Dnmt3a связаны с CDH1 понижающей регуляции через Dnmt3a опосредованной гиперметилированием промотора. Роль других DMNTs, например DNMT3b, в регуляции MIR-29b /с необходимо изучить в будущих исследованиях.
<Р> В образцах GC, мы исследовали характер экспрессии микроРНК-29b /с в 50 пар GC ткани. Снижение микроРНК-29b /с (откидные изменение отсечки: 2,0) была достоверно коррелировали с дифференциацией и инвазии степени в GC, который наводит на мысль, что микроРНК-29b /с играет критическую роль в GC злокачественного обслуживания и непосредственно демонстрирует клиническую значимость MIR -29b /с в прогрессии GC. Таким образом, наше исследование показывает, что там может быть наводок между микроРНК-29b /с и Dnmt3a. Дисбаланс этих факторов могут быть вовлечены в GC миграции и инвазии фенотипов. Этот дисбаланс может включать в себя выражение низкого уровня микроРНК-29b /с может отменить подавление Dnmt3a и высокий уровень Dnmt3a дополнительно влияет на экспрессию микроРНК-29b /с помощью эпигенетического механизма. Эти данные могут быть полезны для разработки новых вариантов лечения для GC, которые нацелены на микроРНК-29b /с и его вниз по течению гена Dnmt3a.
Поддержка Информация
S1 Рис. Эффективность процент трансфекция была представлена оценка уровней микроРНК-29b /с или Dnmt3a.
(А и В) QRT-ПЦР проводили для определения относительной экспрессии микроРНК-29b /с в BGC-823 клеток с имитаторов (А) или ингибиторы (б) после 48-часовой трансфекции. (C) RT-PCR и Вестерн-блоттинг проводили для определения эффективности Dnmt3a нокдауна в BGC и AGS клеток. β-актина
был использован в качестве контроля загрузки
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0123926.s001
(TIF)
S2 Рис. Роль MIR-29b /с в пролиферации клеток BGC-823, апоптоза и клеточного цикла.
(A) Темпы роста клеток микроРНК-29b /с повышенной экспрессией были обнаружены ССК-8 анализа пролиферации. микроРНК-29b /с суперэкспрессия не показал заметную разницу в 48 часов по сравнению с отрицательными контрольными клетками ( P
> 0,05). (Б) Скорости роста клеток микроРНК-29b торможения /с были обнаружены ССК-8 анализа пролиферации. Подавление микроРНК-29b /с не показали каких-либо существенных изменений на 48 часов по сравнению с отрицательными контрольными клетками ( P
> 0,05). (C) Апоптоз анализ не показывая драматическое индукции апоптоза микроРНК-29b /с избыточной экспрессии на 48 часов по сравнению с отрицательными контрольными клетками. Biparametric гистограмма показывает ячейку в начале (нижний правый квадрант) и поздние апоптотических состояния (верхний правый квадрант). (D) Анализ клеточного цикла проводили с помощью проточной цитометрии на клетках КУП-823 после того, как микроРНК-29b /с мимике или отрицательного контроля лечения имитирует в течение 48 часов. Проценты микроРНК-29B /с повышенной экспрессией или контрольных клеток в G1, S и G2 /M, показаны на гистограмме в виде среднего значения ± s.d. из трех независимых экспериментов. По сравнению с контрольными клетками, не было никакого существенного влияния на клеточный цикл после того, как микроРНК-29b /с избыточной экспрессией
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0123926.s002
(TIF)
S1 Метод. Рост клеток и апоптоз анализ
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0123926.s003
(DOC)
Метод S2. . Анализ клеточного цикла
DOI: 10.1371 /journal.pone.0123926.s004
(DOC)
Таблица S1. Клинические особенности у пациентов с раком желудка
DOI: 10.1371. /Journal.pone.0123926.s005
(DOC)
S2 таблицы. . МикроРНК мимика и ингибитор последовательностей и праймеров, используемых в данном исследовании
DOI: 10.1371 /journal.pone.0123926.s006
(DOC)
<р> Мы благодарим д-р Ган Чэнь из Нанкин Jiangning больницы для сбора образцов. Мы благодарим профессора Шэн Чжуна из капитала медицинского университета за помощь, чтобы изменить рукопись.
Зачем мне нужна колоноскопия?
Кофе способствует развитию здоровых кишечных микробов и способствует опорожнению кишечника.
Как массовые обследования помогли выявить больше случаев глютеновой болезни у детей
Пробиотики как адъювантная терапия для пациентов с COVID-19
Анти-коронавирусные молекулы микробов могут стать ключом к новым методам лечения
Диета и питание влияют на микробиом слизистой оболочки толстой кишки
Исследователи используют фаговую терапию для успешного лечения алкогольной болезни печени.
В первый раз, исследователи успешно использовали бактериофаговую (фаговую) терапию для устранения связанного с алкоголем заболевания печени на животных моделях. Кредит изображения:Кристоф Б
Новый инструмент для расшифровки микробиома кишечника
Миллионы бактерий, обитающих в кишечнике, играют очень важную роль в здоровье и болезнях. Тем не мение, Постоянной проблемой было отсутствие понимания фактического состава микробиома здорового кишечни
Бактериальные изменения кишечника влияют на результаты лечения волчанки во время беременности
Течение беременности, как настоящая любовь, не всегда проходит гладко, когда у вас волчанка, правильно называется системной красной волчанкой (СКВ). Это аутоиммунное заболевание иногда бывает сильным,