Plos ONE: Izražanje AFP in stat3 je vpleten v arzenov trioksid, inducirane apoptoze in zaviranje proliferacije pri AFP-produkcijo Rak želodca Cells

Povzetek

Alpha-fetoproteina (AFP) -producing raka želodca (AFPGC) z izdelavo AFP zastopa ima bolj agresivno vedenje kot skupni rak želodca. Med mehanizmi niso dobro razumeli. Arzenov trioksid (V _{2O 3) se uporablja klinično za zdravljenje akutno promielocitno levkemijo (APL) in ima aktivnost vitro
zoper več trdnih tumorskih celic, z indukcijo apoptoze in zaviranje proliferacije predsedniki učinki. Signal pretvornik in aktivator transkripcije 3 (stat3) ima pomembno vlogo pri tumorigeneze različnih primarnih raka in raka celice s navzgornje regulacije mobilnega preživetje in downregulating zaviralnih proteinov. Tu smo ugotovili zmanjšano izražanje AFP in stat3 po indukcijo apoptoze s As 2O 3 v AFPGC FU97 celic. Tudi višina ciljne stat3 onkogena Bcl-2 se je zmanjšala z As 2O 3, in da od zaviralnih Bax je povečala. Poleg tega so bile povezane stat3 izražanja in globina invazije in bezgavkah metastaze. Preživetje bolnikov z rakom želodca je bila nižja pri AFP in stat3 dvojno prekomerno kot s prekomerno bodisi samostojno. Downregulation za AFP in stat3 izraz igra pomembno vlogo kot 2O 3-inducirano apoptozo od AFPGC celic, ki predlaga nov mehanizem As 2O 3-inducirano apoptozo celic. Kot 2O 3 je lahko možno sredstvo za zdravljenje AFPGC}

Navedba. Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) Izražanje AFP in stat3 je vpleten v arzenov trioksid, inducirane apoptoze in zaviranje proliferacije pri AFP-Proizvodnja želodca rakavih celic. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774

Urednik: Matias A. Avila, University of Navarra School of Medicine in Centra za uporabno medicinske raziskave (CIMA), Španija

Prejeto: 4. november 2012; Sprejeto: 14. december 2012; Objavljeno: 30 januar 2013

Copyright: © 2013 Jia et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija podpira National Nature Science Foundation Grant Kitajske (NSFC, št 81000869 in 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Alpha-fetoproteina (AFP) je glavni plazemski protein, ki ga proizvaja hranilni mešiček in jetrih v času življenja ploda. V klinični praksi se AFP pogosto uporablja kot tumorski marker hepatocelularnega karcinoma in hranilni mešiček tumorje. Nekatere študije so pokazale, da lahko drugi tumorjev pri človeku proizvajajo tudi AFP in rak želodca je eden izmed najpogostejših [1] - [8]. AFP proizvajajo raka želodca (AFPGC) ima bolj agresivno vedenje kot skupni raka želodca, saj bolezen hitro napreduje in pogosto metastazira v regionalnih bezgavkah in jetra [7] - [10]. Poleg tega je AFPGC povezana s krajšim intervalom brez metastaz jeter po radikalni operaciji, in stopnja preživetja je bistveno slabša z AFPGC kot brez proizvodnje AFP [1], [9], [10]. Tako lahko AFP biti pasivni tumorski marker in aktivni spodbujevalec rasti tumorja. Downregulating AFP izraz je lahko učinkovit pristop k AFP proizvodnjo raka

Arzen trioksid (V _{2O 3) je bila uspešno uporablja za zdravljenje levkemije [11] -. [13] in je aktivna v več solidnih tumorjev, vključno z rakom želodca [14]. Mehanizem delovanja As 2O 3 vključuje vpliva na dejavnost Akt, JNK kinaz, NF-κB, glutation, kalcijev signalizacijo, reaktivnih kisikovih spojin (ROS), in kaspazah, kakor tudi pro- in anti -apoptotic beljakovine [15] - [18]. Ne standardni kemoterapiji je na voljo za AFPGC, čeprav so nekateri režimi dokazali učinkovitost pri majhnem številu primerov [19] - [21]. Tudi učinke in mehanizem za As 2O 3 proti AFPGC ostajajo nejasne.}

Signal pretvornik in aktivator transkripcije 3 (stat3) je vključena tako signalov in aktivacijo transkripcije in ima pomembno vlogo v različnih bioloških procesih, kot so metabolizem in tumorigeneze [22], [23]. Stat3 je konstitutivno aktivirano v različnih vrst raka [24], [25]. Ciljanje stat3 je lahko učinkovit pristop k reševanju napredovanje tumorja. Ta stat3 učinek se posreduje z regulacijo različnih stat3 ciljnih genov, vključno z zaviralci apoptoze in regulatorjev celičnega ciklusa, kot Bcl-2, MCL-1, survivin, p53, c-myc, ciklin D1 [26] - [31], in vaskularni endotelni rastni faktor (VEGF) [32]. Vendar pa je vloga stat3 v AFPGC slabo razumljen.

Tukaj smo proučevali vpliv As _{2O 3 o širjenju in AFP in stat3 izražanja v AFPGC FU97 celicah. smo ovrednotili na nižji stopnji dogodkov stat3 signalizacijo, Bcl-2 in Bax izražanja, naj preuči možne mehanizme, ki podpirajo ta pojav. Poleg tega smo ocenili izražanje AFP in stat3 s imunohistokemijo s človeškimi želodca vzorcih raka. Downregulation AFP in stat3 izraz prispeval k As 2O 3-inducirano apoptozo in zaviranje širjenja v AFPGC.}

Etika Izjava materiale in metode

študija protokol je bil odobren z medicinsko etiko andHuman Trial odbora Kliničnem Jinan Central Hospital. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vseh bolnikih.

Cell Culture and Drug Treatment

AFPGC celično linijo človeških FU97 je bila pridobljena iz japonskega zbirke raziskovalnih BioResources (Japonska) in se je ohranilo v DMEM ( Invitrogen), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (FBS;. Invitrogen), z 1% antibiotikov pri 37 ° C v 5% CO _{2 navlaženem zraku}

Kot _{2O 3 ( Sigma) smo raztopili v fosfatnem pufrom (PBS), na 1 mol /L kot raztopine in shranili pri 4 ° C. Za vitro
uporaba je raztopina bila razredčena z ustrezno koncentracijo v gojišču brez FBS. Eksponentno so rastoče celice zdravijo z As 2O 3 pri končnih koncentracijah 1, 5 ali 10 umol /L. Kontrolne kulture smo obdelali z destilirano PBS pri končni koncentraciji 0,1% v gojišča. Vse poskuse smo izvajali v treh izvodih.}

MTT citotoksičnosti testu

Učinek As _{2O 3 na inhibicijo in vitro
bila določena rast FU97 celic z merjenjem MTT (3- [4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-difeniltetrazolijevega bromida) barvanje absorbanco živih celic. FU97 celice smo zasejali v 96 vdolbinami pri 1,6 x 10 ^{3 celic na vdolbino v 100 ml DMEM, ki vsebujejo 10% FBS preko noči. Po izpostavitvi različnim koncentracijam kot 2O 3 24, 48 in 72 ur, 20 ul (5 g /L) MTT (Sigma, St. Louis, MO) raztopino dodamo v vsako jamico in plošč bilo inkubiramo dodatne 4 ure pri 37 ° C. Formazine smo raztopili v 150 ml /tudi dimetilsulfoksida (DMSO) in absorbanco bil odkrit pri 490 nm. Zaviralni stopnja (%) = (1-A vrednost v poskusni skupini /A vrednost v kontrolni skupini) × 100%. /L skupina 0 mol je bil uporabljen kot slepe kontrole.}}

DNK Razdrobljenost Analiza z elektroforezo

skupaj 10 ^{6 celic je rahlo postrgamo jedi, dvakrat speremo z mrzlo PBS, in centrifugiramo pri 15000 obratih na minuto za 10 minut, nato lizirali v 200 p.L lize blažilnik (1 ml 1 M Tris-HCl pufru, pH 7,4, 0,2 ml 0,5 M etilendiamintetraocetne kisline [EDTA], 0,5 ml 10% Triton X-100 ). Liziranih celic so potekala pri 4 ° C za 10 minut, in supernatante inkubiramo 2 ul RNase A (10 mg /ml v Tris-EDTA buffer) pri 50 ° C za 30 minut, nato pa z 2! Li proteinaze K (10 mg /ml v destilirani vodi) 45 minut pri 50 ° C. Raztopino smo zmešali s 5 M NaCl (20 ul) in 2-propanolom (120 ul), inkubirali pri 20 ° C 24 h, nato centrifugiramo pri 15000 obratih na minuto za 20 minut. Oborjeni DNA smo raztopili v Tris-EDTA (5 ul) medpomnilnik in doživel elektroforeza z 2% agaroznem gelu in Tris-acetat-EDTA pufrom pri 50 V. vzorec razdrobljenost DNA smo vizualizirali z uporabo UV transilluminator.}

Hoechst 33.258 obarvanje Analiza apoptoza celic

celic, gojenih na steklene lažnimi listih so bile določene s 4% paraformaldehida /PBS 30 minut, sprani 15 minut v 0,1% Triton X-100 /PBS in inkubiramo v temi s Hoechst 33258 (10 mg /ml) 15 minut. Potem ko so se pokrov-zdrsne sprali v PBS, so bili prešteti pozitivne jedra. Normalni jedra in apoptotske jedra (kondenzirane ali razdrobljeni kromatina) je bilo jasno razlikujejo.

Kvantitativna Real-time PCR

smo celice gojili z As _{2O 3 (5 mol /L ) za 72 h. Celotno RNA smo ekstrahirali z uporabo Trizol reagenta (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) in količinsko s spektrofotometrijo. Prvi sklop cDNA smo pripravili z uporabo naključnih začetnih oligonukleotidov naslednjimi navodili kit (Takara, Japonska). Realnem času kvantitativne PCR AFP, stat3 in njenih nadaljnjim genov vključenih 7300 Real-Time PCR System (ABI, ZDA) z Takara SYBR krmil Ex Taq reagentov (Takara, Japonska). Temeljni premazi so bili zasnovani in potrjeni s Invitrogen. Premaz podatki v Tabeli 1. PCR reakcije smo izvedli v treh izvodih v volumnu 20! Li 2 minuti pri 94 ° C za začetno denaturiranje, čemur sledi 30 ciklov pri 94 ° C 30 sekund in pri 60 ° C 45 pobrati. Kontrolni vzdrževalni gen GAPDH smo uporabili kot notranje kontrole. Vsak primer niz bila prvič testirana za določanje optimalne koncentracije in produkti so bile izvedene na 1% agaroznem gelu za potrditev ustrezne velikosti. Nato je ABI programska disociacija krivuljo uporabijo za krmiljenje za različne vrste v vsakem PCR. cDNA iz FU97 celic brez As 2O 3 Zdravljenje je bila uporabljena za gradnjo standardno krivuljo za vsak gen.}

Western Blot Analiza

Cell pelete smo homogenizirali v ekstrakcijskega pufra (50 mmol /L Tris-HCI, pH 6,8, 0,1% SDS, 150 mol /L NaCI, 100 mg /L fenilmetilsulfonil fluorid, 1 mg /l aprotinina, 1% NP-40 in 0,5% natrijevega ortovanadata), inkubirali pri 4 ° C 30 minut in centrifugiramo 20 minut pri 12 000 g /min. Skupno beljakovin v celičnem lizatu smo merili z uporabo kolorimetričnega kompleta Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Za zahodni blot analizo, je skupna protein ločili na 10% SDS-PAGE in prenesli na nitrocelulozne membrane (0,45 um, Millipore, Billerica, MA, ZDA), ki smo inkubirali 24 ur pri 4 ° C s protitelesi za AFP (1 :500, R &D), stat3 (1:1000), kaspaza 3 (1:500), Bcl-2 (1:500) BAX (1:500) in GAPDH (1:1000; vsi mobilni signalnih tehnologija) nato hrenovo peroksidazo konjugiranih anti-miš /zajca IgG protitelesa (santa Cruz Biotechnology) po zadnjem izpiranju. Reakcije so bile razvite z uporabo 4-kloro-1-naftol (Sigma) in H _{2O 2. Signali so bile ugotovljene z uporabo okrepljenega kemiluminiscentnim komplet (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, UK). Stopnja GAPDH je interni standard.}

imunski za AFP Koncentracija v supernatanta

supernatant FU97 celic so bili zbrani po zdravljenju z As _{2O 3 ali negativna kontrola za 24, 48 in 72 h.AFP koncentracija v supernatanta je bila določena z dvema mesta immunoenzymometric testom v sistemu TOSOH AIA (Japonska). Mejna vrednost za AFP, je bila 10 ng /ml.}

Bolniki

preučila smo podatke iz kirurške in patoloških podatkov za 24 bolnikov z AFPGC in 24 naključno izbranih bolnikih z normalnimi vrednostmi serumskega AFP in ujemajo z AFPGC bolnikov po stopnji raka želodca. Bolniki, ki so opravili kirurško resekcijo na Kliničnem bolnišnici Shandong University, Kitajska, od januarja 1996 do decembra 2011. bolnikov AFPGC pokazala povišano serumsko raven AFP, vendar ne sočasno bolezni jeter. Histopatološka prisotnost AFP pozitivnosti je bila potrjena z imunohistokemijo. Obrnili smo se vsakemu bolniku potrditi preživetje ali datum smrti.

Imunohistokemija

Imunohistokemija vključena uporaba biotina-streptavidina-peroksidaze z Vectastain ABC kit (Vector Laboratories, CA, ZDA). Na kratko, smo pripravili odseki tkiva (4 mm) iz vzorcev tkiva, parafin vgrajeni. Oddelki so deparaffinized z ksilena sledi dehidracije stopenjski alkohola. Odseki segrevamo v mikrovalovni pečici za 2 min pri 900 W za pridobivanje antigen, in nato inkubiramo z 0,3% H _{2O 2 raztopine v metanolu za 30 minut, da blokira endogenega peroksidazo. Po 3 opere z fosfatni fiziološko raztopino (PBS), so diapozitivi inkubirali z 10% normalno konjskega seruma blokirati nespecifično obarvanje ozadja, nato inkubirali s primarno protitelesa kunčjega anti-AFP (1:100 redčenje) in anti-stat3 (1:200) v vlažno komoro pri 4 ° C preko noči. Po spiranju s PBS smo sekcije inkubirali s Biotinilirana konjskih protiteles anti-mišje 30 minut, 3-krat izperemo s PBS in inkubiramo s streptavidinom-konjugiranim peroksidaze 30 min. Odseki vizualiziramo z inkubacijo s 3 raztopino 3'-diaminobenzidine (0,3% H 2O 2 in 0,05% 3, 3'-diaminobenzidine) in jih nasprotno s hematoksilinom. Opustitev primarnega protitelesa bila negativna kontrola. Vsak tek vključen pozitivno kontrolo in negativno kontrolo. Za negativno kontrolo, je bila primarna protitelesa nadomesti s PBS.}

Statistična analiza

Podatki so izraženi kot povprečje ± SD in so bili analizirani z uporabo SPSS v11.5 (SPSS Inc., Chicago , IL, USA). Združenje clinicopathologic spremenljivk in AFP in stat3 izražanja je bila določena s hi-kvadrat testa, in popravek yate je bila uporabljena pri majhnem številu vzorcev. Hi-kvadrat test ali dva zimske študenta t
testu je bila uporabljena za ocenjevanje razlik med skupinama. Analiza preživetja vključeni test log-rang, s Kaplan-Meier krivulj. P < 0.05 smo imeli statistično značilno

Rezultati

rast zavira in apoptoza Indukcijsko v FU97 celice, ki jih As _{2O 3}

FU97 celice so zdravili z. različne koncentracije As _{2O 3 (1, 5 in 10 mol /L) pri 24, 48 in 72 ur. Kot 2O 3 inhibira proliferacijo FU97 koncentracije in časa celic v odvisnosti od (sl. 1A). V celicah, obdelanih s 5 mol /L in 10 mol /L V 2O 3 72 h, zaviranje rasti je bila 56,27 ± 3,91% in 73,46 ± 4,64%, v tem zaporedju. fragmentacije DNK je značilnost apoptoze. drobljenja lestve tipičen DNK bili odkriti v FU97 celicah, zdravljenih s 5 mol /L in 10 mol /L V 2O 3 (sl. 1B). Tukaj smo nadalje preuči morfološke spremembe apoptotske celice. FU97 celice, zdravljenih s 5 mol /L in 10 mol /l, 2O 3 saj so bili 72 h obarvajo z uporabo Hoechst 33258, in opazuje pod fluorescenčnimi rezultatov microscope.The pokazala, da je kot 2O 3 povzroča FU97 celic apoptoze v odvisnosti od koncentracije, kot je navedeno v razdrobljenih in zgoščenih jeder (sl. 1C). Za pojasnitev nadaljnji vpliv kot 2O 3 na celično apoptozo, je caspase3 merjena z zahodne blot.The rezultatov iz Sl. 1D jasno pokazala, da kaspaze 3 protein izraz v FU97 cells.Therefore znatno povečal, kot 2O 3 bi lahko zavirajo rast celic in inducira apoptozo AFPGC FU97 celic.}

Inhibitorni učinek As 2O 3 o izražanju AFP in stat3 v FU97 celice

za razjasni vlogo AFP in stat3 v As _{2O 3 povzroča zaviranje proliferacije in apoptoze učinek As 2O 3 o AFP in stat3 izraz je preučila uporabo kvantitativnega PCR v realnem času in Western blot. Celice so bili zdravljeni z 1, 5 in 10 mol /L V 2O 3 za 72 h.The mRNA in proteina izraz AFP in stat3 in fosforilacije stat3 so znatno navzdol reguliranih z As 2O 3 obdelava v odvisnosti od koncentracije (sl. 2, sl. 7).}

AFP Koncentracija povezane z rastjo Zaviranje in apoptoze v FU97 supernatanta celične kulture

Za dodatno potrditev inhibitornega učinka kot _{2O 3 o AFP, smo izmerili raven AFP beljakovin v supernatanta FU97 celic. Kot 2O 3 lahko zmanjša AFP koncentracijo ravni beljakovin odvisnosti (sl. 3, sl. 7). Ta rezultat je dogovorjeno z razmerjem celični rasti inhibicije (sl. 1A), apoptozo FU97 celic (sl. 1B, C, D) in znižano mRNA izražanja AFP in stat3 (sl. 2A) in proteinsko ekspresijo AFP, stat3 in pSTAT3 (sl. 2B).}

Znižane Ravni stat3 Osredotočenje genov, Bcl-2 in Bax, z As _{2O 3 Zdravljenje v FU97 celice}

raziskovanje izraz od stat3 ciljanja genov, smo pregledali izražanje anti-apoptotske Bcl-2 in pro-apoptoze Bax v FU97 celicah tretiranih z As _{2O 3. MRNA in proteinov izraz Bcl-2 je navzdol reguliranih kot 2O 3 obdelane celice (sl. 4), ampak za Bax bilo molekul, ki kažejo, da je učinek As 2o 3 v celici apoptoze je posredovano z inhibicijo konstitutivno aktivnega stat3 (sl. 7).}

Klinična Značilnosti izbranih prebivalcev

je bilo 34 moških (70,8%) in 14 žensk (29,2%) bolnikov, s srednjo starostjo 66 let (razpon, 45-83 let). V clinicopathological značilnosti bolnikov so povzeti v tabeli 2. je bilo 48 bolnikov je imelo popolne nadaljnjih podatkov in spremljanje je bilo obdobje od 3 mesecev do 60 mesecev, s povprečno dobo 33,7 mesecev. Skupni čas preživetja je bila opredeljena kot mesecih od datuma operacije do dneva smrti ali izgube nadaljnje ukrepanje.

Imunohistokemično Izražanje stat3

Ker nimamo podatkov o izražanju stat3 v AFPGC, smo ugotovili njegovo izražanje imunohistokemičnim barvanjem AFPGC bolnikov tkiva. V 24 AFPGC primarnih tumorjev, 11 so bili pozitivni (46%) in 13 sta bila negativna (54%) za stat3 ekspresijo. V 24 AFP negativnih želodčnih vzorcev rakom, je bilo 8 (33%) primarni tumorji pozitivna in 16 (67%) so bili negativni stat3 ekspresijo. Poleg tega, kljub relativno majhnega števila bolnikov z popolne podatke, stat3 čezmernim signifikantno povezana z globino invazije in bezgavkah metastaze (p 0.05). V AFP pozitivnih in -negativno skupine (slika 5, tabela 2, sl . 7).

Izražanje AFP in stat3 v zvezi s slabo prognozo želodčnega raka

The srednji čas preživetja AFP-pozitivnih bolnikov je bila 23 mesecev (95% interval zaupanja, 16-30 mesecev ). kar je bistveno krajši, kot je v AFP-negativnih bolnikih, 53 mesecev (95% interval zaupanja, 47-59 mesecev) (P < 0,05) je bil .The Mediana časa preživetja v stat3 pozitivnih skupine 38 mesecev (95% interval zaupanja , 29-47 mesecev), kar je bistveno krajši kot v stat3 negativni skupini, 54 mesecev (95% interval zaupanja, 47-61 mesecev) (P <. 0.05, slika 6A in B, slika 7) .Furthermore. je bilo preživetje nižje za AFP in stat3 dvojno pozitivnih bolnikih kot z ekspresijo AFP ali stat3 samega (P < 0,05, slika 6C in D, slika 7.).. Pri bolnikih z AFP in stat3 dvakrat pozitiven izraz je bil čas, mediana preživetja 22 mesecev (95% interval zaupanja 11-33 mesecev). Za primerjavo, pri bolnikih z eno samo prijavo AFP ali stat3, je bil čas, mediana preživetja 54 mesecev (95% interval zaupanja 44-64 mesecev) in 59 mesecev (95% interval zaupanja 47-71 mesecev).

razprava
je

AFPGC bilo težko zdraviti predvsem zaradi nagnjenostjo k metastaz in odpornosti na običajne terapije. Nujno potrebujemo alternativne terapije posebej obravnavajo ta vprašanja. V _{2O 3 je bil uporabljen v kliničnih preskušanjih APL za let, in 10 mg /dan kot 2O 3 je bila učinkovita pri spodbujanju popolno remisijo pri bolnikih z na novo diagnosticirano in se ponovila APL [ ,,,0],33]. Kot 2O 3 proliferacijo zaviral celice in povzroča apoptozo v hepatocelični karcinom človeške celične linije HepG2 [34], ki je bil podprt tudi s klinično preskušanje, ki prikazuje kot 2o 3 za učinkovito in varno pri bolnikih z napredovalim primarnega raka jeter [35], je bila toksičnost je zmanjšala blagi in serum ravni AFP. Zato smo raziskovali, ali kot 2O 3 sprožilo tudi zaviranje rasti celic in apoptozo hepatoid adenokarcinomom želodca AFPGC FU97 celic in ugotovil protitumorsko lastnosti kot 2O 3 v AFPGC celicah.}

Nudimo dokaze, da ima v _{2O 3 močan anti-proliferativni učinek na FU97 celic v odvisnosti od koncentracije in časa. Plazemska koncentracija arzena v kliničnem zdravljenje akutne promielocitno levkemijo lahko doseže 5.5-7.3 mm [36]. V naši raziskavi, so rezultati pokazali, da 5 mol /L V 2O 3 učinkovito inhibira proliferacijo in inducira apoptozo celic po 72 urah. Ta odmerek je klinično pomembna, kar kaže, da so AFPGC celice občutljive na As 2O 3.}

AFPGC, kot je proizvodnja AFP zastopa, kaže večjo proliferacije dejavnost, šibkejši apoptozo in bogatejši neovaskularizacija od AFP-negativnih želodčnega raka. Po drugi strani pa so visoke vrednosti AFP v celoti razvito najetrih ali v serumu gostitelja, povezane z bolj agresivnega obnašanja in povečana anaplasia [37], [38]. Študije AFP s siRNA rasklapanje našel proliferacijo inhibirana celic v hepatomas [39]. Zato se lahko AFP deluje v temeljni korak v napredovanju AFP-pozitivnega raka. Downregulation za AFP izražanja lahko predstavlja pomemben terapevtski strategijo. Ugotovili smo, da kot _{2O 3 bi lahko upocasnjujejo AFP mRNA in izražanja proteinov. Tudi downregulation AFP, ki jih As 2O 3 bi lahko inhibira celično proliferacijo in inducira apoptozo celic v AFPGC FU97 celicah. Poleg tega je bil AFP izločanje kot 2O 3 zdravijo-celice odmerka in časovno odvisno znižal v supernatant. Downregulation za AFP izražanja lahko prispevajo k As 2O 3-povzroča zaviranje rasti celic in apoptoze. Tako, ti podatki kažejo, da se AFP izraz navzdol reguliranih odgovor na As 2O 3 zdravljenja. AFP lahko igrajo pomembno vlogo pri širjenju in apoptozo AFPGC.}

Poleg tega, da je točka konvergence za številne onkogenih signalnih poti, stat3 sodeluje tudi na celično rast in preživetje. V celice levkemije, kot _{2O 3 aktivira številne znotrajcelične signalov poti, kar ima za posledico indukcijo apoptoze [40]. Kot 2O 3 zaviranje stat3, pred inhibicijo celične proliferacije, je bila opisana v več mielomom celic [41]. Prav tako, kot 2O 3 zavira protein tirozin-kinazo, s tem pa posredno zmanjšuje aktivacijo STAT proteinov [42] .Zato je bila upoštevana downregulation of stat3 enega od mehanizmov delovanja kot 2O 3 v akutno promielocitno levkemijo (APL) Mi je pokazala stat3 aktivira v AFPGC celicah, in kot 2O 3 bi lahko upocasnjujejo stat3 mRNA izražanja in stat3 in pSTAT3 beljakovin izraz. Še posebej, je navzdol reguliranih izraz stat3 in pSTAT3 skladu z navzdol reguliranih izražanje AFP, ki jih As 2O 3. Stat3 se lahko zavirajo nekatere faktorjem med njeno aktiviranje v odgovor na As 2O 3. v AFPGC. Ne glede možnih mehanizmov, ki sodelujejo pri regulaciji stat3, lahko visoka AFP izraz v AFPGC ima pomembne posledice. Prejšnje študije so tudi pokazale, da lahko AFP dimerize z drugimi proteini, kot jedrnih receptorjev (to je, retinojska receptorja), transkripcijskimi faktorji in kaspaz, od katerih so vsi lahko spodbujajo rast tumorskih celic [43], [44]. To pa je privedlo do špekulacij, da bi AFP dimerize z transkripcijskih faktorjev stat3 za spodbujanje rasti AFPGC. Potrebne so nadaljnje raziskave urejanja stat3 izražanja v zvezi s AFP.}

stat3 lahko sproži apoptozo celic, ki jih transkripcijsko downregulating Bcl-2 izraz [45]. Bcl-2 je pred efektor molekula v apoptotske poti in močan supresor apoptoze. To lahko oligomerize Bax, ki je pozneje depolarizes membranski potencial mitohondrijske sprostiti citokrom c in povzroči apoptozo [46]. Razmerje Bcl-2, Bax je pomembna pri odločanju, ali bo celicah poteče apoptoza ali preživetja. Ugotovili smo, zmanjšano izražanje Bcl-2 skupaj z blokiranem stat3 izražanja z As _{2O 3 zdravljenja v AFPGC celicah. V nasprotju s tem se je povečala ekspresijo Bax. Skupaj z ugotovitvami v drugih celičnih sistemih, kjer je bila ugotovljena zaviral raven stat3 za zmanjšanje Bcl-2 izražanja in inducira apoptozo [45] je kot 2O 3-inducirane učinke smo ugotovili, se lahko posredujejo z zaviranjem konstitutivno aktivirana stat3.}

Da bi še dodatno dokazati, ali stat3 igra ključno vlogo pri AFPGC, smo pregledali bolnike AFPGC v smislu stat3 izražanja. Stat3 pozitivnost pri AFP-pozitivnimi tumorji je bila 46% in v AFP negativnih tumorji 33%. Bolniki z AFPGC imeli višjo stopnjo stat3 izražanja, čeprav niso pomembne morda zaradi majhnega števila bolnikov. Vendar pa je stat3-pozitiven izraz, povezan s tkivom raka, globina invazije in bezgavkah metastaze v AFPGC. Klinično, bolniki z AFPGC imajo slabo prognozo [1], [9], [10]. Potrdili smo, da je prognoza slabša pri bolnikih z kot brez AFP, ki so se ujema s stopnjo raka. Poleg tega je bilo preživetje bolnikov z obema AFP in stat3 pozitivnosti bistveno slabši od tistih, ki s samim AFP ali stat3 pozitivnosti. Tako je v tej posebne vrste raka želodca, se zdi stat3, da ima pomembno vlogo pri preživetju celic in proliferacijo. Stat3 izraz v AFPGC lahko pojasni klinično agresivno obnašanje AFPGC in stat3 izraz je lahko uporaben kazalnik napredovanje, če obsežni prospektivnih študijah potrjena v večjih generacij. Downregulation za AFP in stat3 izražanja lahko predstavlja pomemben terapevtski strategijo AFPGC. Glede razmerja med proizvodnjo AFP in stat3 izražanja, ni na voljo poročilo, ki opisuje osnovne mehanizme za date.It so poročali, da je AFP izraz v raka želodca zaradi pomanjkanja prepis faktorja ATBF1 [47]. Poleg tega ATBF1, kot zaviralnih genov, enhancesthe zatiranje stat3 signalizacijo, ki ga interakciji z PIAS3 [48] .Zato, je smiselno, da menijo, da inaktivacija gena ATBF1 v AFPGC, skozi mutacijo ali zmanjšane pojav, se lahko dovoli AFPGC celice za proizvodnjo AFP beljakovin in overexpres stat3. Pojasniti, kateri dejavniki so vključeni v AFP proizvodnje in stat3 izražanja, je potrebna nadaljnja študija.

Na koncu, kot _{2O 3 lahko zavirajo AFPGC celične linije FU97 rast in povzroči apoptozo. Možni mehanizmi so bili povezani z downregulation za AFP in stat3 in stat3 ciljanje anti-apoptotske gen Bcl-2 in navzgornje regulacije na tumor dušenje gen Bax (sl. 7). Izraz stat3 v AFPGC igra pomembno vlogo pri tumorski invazije in prognozo. Kot 2O 3 je lahko morebitna nova adjuvans zdravilo pri zdravljenju AFPGC. Sedanja študija navaja nekaj teoretične osnove za njegovo klinično uporabo vredna nadaljnje raziskave.}

• Plos ONE: microRNA-9 Zavira širjenju, invazijo in metastaze želodca raka celic skozi ciljanje ciklin D1 in Ets1
• Plos ONE: roman Proteomika-Based Klinična diagnostika Tehnologija Prepozna Heterogenost v aktiviranih signalnih poti v želodčnih rakov