Ploche ONE: Expresia AFP a STAT3 sa podieľa na arsenitým indukovanej apoptózy a inhibíciu proliferácie v AFP produkujúce rakovina žalúdka Cells

abstraktné

Alpha-fetoproteínu (AFP) produkujúce rakovinu žalúdka (AFPGC) , zastúpená pri výrobe AFP, má oveľa agresívnejší správanie ako bežné rakoviny žalúdka. Základné mechanizmy nie sú dobre pochopené. Oxid arzenitý (ako _{2O 3) sa používa klinicky na liečbu akútnej promyelocytovou leukémie (APL) a má aktivitu in vitro
proti niekoľkým bunkových línií solídnych nádorov, s indukciou apoptózy a inhibíciu proliferácie hlavnými účinky. vysielač signálu a aktivátor transkripcie 3 (STAT3) má dôležitú úlohu pri vzniku nádorov rôznych primárnych nádorov a nádorové bunky od upregulating bunkové prežitie a downregulating supresorových proteínov. Tu sme zistili, znížená expresia AFP a STAT3 po indukcii apoptózy ako 2O 3 v bunkách AFPGC FU97. Tiež úroveň STAT3 cieľového onkogénu Bcl-2 sa znížila s As 2O 3, a to na nádorový supresor Bax bola zvýšená. Okrem toho, STAT3 expresie a hĺbkou invázie a metastáz lymfatických uzlín boli spojené. Prežitia pacientov s rakovinou žalúdka bolo nižšie, AFP a STAT3 dvojité nadmerné expresie, než sa zvýšenou expresiou buď samostatne. Zníženie expresie AFP a STAT3 výraz hrá dôležitú úlohu v As 2O 3-indukovanú apoptózu AFPGC buniek, čo naznačuje nový mechanizmus As 2O 3-indukovanej apoptózy buniek. As 2O 3, môže byť možné, činidlo pre liečbu AFPGC}

Citácia :. Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) Expresia AFP a STAT3 sa podieľa na arsenitým indukovanej apoptózy a inhibíciu proliferácie v AFP-produkovať žalúdočné rakovinové bunky. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774

Editor: Matias A. Avila, University of Navarra School of Medicine a Centra pre aplikovaný lekársky výskum (CIMA), Španielsko |

prijatá: 4. novembra 2012; Prijaté: 14.prosince 2012; Uverejnené: 30. januára 2013

Copyright: © 2013 Jia et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Táto štúdia je podporovaný Národná prírodná Science Foundation Grant Číny (NSFC, No. 81000869 a 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Alpha-fetoproteínu (AFP) je hlavný plazmový proteín produkovaný žĺtkového vaku a pečeni počas života plodu. V klinickej praxi, AFP je často používaný ako nádorový marker hepatocelulárneho karcinómu žĺtkového vaku a nádory. Niektoré štúdie preukázali, že iné nádory u človeka má vyrábať AFP a rakovina žalúdka bol jedným z najbežnejších [1] - [8]. AFP-produkujúce karcinómu žalúdka (AFPGC) má agresívnejší správanie ako spoločné rakoviny žalúdka, pretože choroba postupuje rýchlo a často metastázuje do regionálnych lymfatických uzlín a pečene [7] - [10]. Okrem toho, AFPGC je spojená s kratší interval bez pečeňových metastáz po radikálnej operácii, a miera prežitia je podstatne horšia s AFPGC ako bez produkcie AFP [1], [9], [10]. Tak, AFP môže byť pasívne nádorový marker a aktívny rast nádoru stimulátor. Downregulating AFP výraz môže byť efektívny prístup k AFP-produkujúce karcinóm

Oxid arzenitý (As _{2O 3) bol úspešne použitý na liečbu leukémie [11] -. [13] a je aktívna v niektorých solídnych nádorov, vrátane rakoviny žalúdka [14]. Mechanizmus účinku ako 2O 3 obsahuje ovplyvňujú činnosti Akt, JNK kinázy, NF-kB, glutatión, signalizácia vápenatý, reaktívnych foriem kyslíka (ROS), a kaspázy, rovnako ako pro- a anti -apoptotic proteíny [15] - [18]. Žiadna štandardná chemoterapia je k dispozícii pre AFPGC, aj keď niektoré režimy preukázali účinnosť v malom počte prípadov [19] - [21]. Tiež účinky a mechanizmus ako 2O 3 proti AFPGC zostávajú nejasné.}

prevodník signálu a aktivátor transkripcie 3 (STAT3) sa podieľa jednak prenosu signálu a aktivácia transkripcie a má dôležitú úlohu v rôznych biologických procesov, ako je metabolizmus a vzniku nádorov [22], [23]. STAT3 je konštitutívne aktivovaný v širokej škále typov rakoviny [24], [25]. Cielenie STAT3 môže byť efektívny prístup k riešeniu progresii nádoru. Tento STAT3 účinok je sprostredkovaný prostredníctvom regulácie rôznych STAT3 cieľových génov, vrátane inhibítorov apoptózy a regulátorov bunkového cyklu, ako je Bcl-2, MCL-1, survivin, p53, c-myc, cyklin D1 [26] - [31], a vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), [32]. Avšak role STAT3 v AFPGC je zle pochopený.

Tu sme skúmali účinok ako _{2O 3 na proliferáciu a AFP a STAT3 expresie v AFPGC FU97 bunkách. Hodnotili sme následné udalosti STAT3 signalizácie, Bcl-2 a Bax prejavu, aby preskúmala možné základné mechanizmy tohto javu. Ďalej sme hodnotili expresiu AFP a STAT3 imunohistochemicky v ľudských vzorkách s karcinómom žalúdka. Zníženie expresie AFP a STAT3 výraz prispel k ako 2O 3-indukovanej apoptózy a inhibíciu proliferácie v AFPGC.}

materiáloch a metódach

Ethics Prehlásenie

protokol štúdie bol schválený andHuman Trial výboru Lekárska etika klinickej Ústredná nemocnice Jinan. Písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých pacientov.

Cell Culture and Drug liečba

Ľudská bunková línia AFPGC FU97 bola získaná z japonského Zbierke Research Bioresources (Japonsko), a bola udržiavaná v DMEM ( Invitrogen) doplnenom 10% fetálnym hovädzím (FBS;. Invitrogen), 1% antibiotík, pri 37 ° C v 5% CO _{2 zvlhčenom vzduchu}

_{2O 3 ( Sigma) bol rozpustený vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS) na 1 mol /l vo forme zásobného roztoku a uloží sa pri teplote 4 ° C. Za in vitro
použitie sa zásobný roztok sa zriedi na vhodnú koncentráciu v rastovom médiu bez FBS. Exponenciálne rastúce bunky boli ošetrené ako 2O 3 na konečnú koncentráciu 1, 5 alebo 10 umol /L. Kontrolné kultúry boli ošetrené s destilovanou PBS na konečnú koncentráciu 0,1% v médiu kultúry. Všetky experimenty boli vykonávané v triplikátech.}

MTT testu cytotoxicity

Vplyv As _{2O 3 na inhibíciu in vitro
rast FU97 buniek bola stanovená meraním MTT (3- [4,5-dimetyl-thiazol-2-yl] -2,5-difenyltetrazoliumbromid) farbivo absorbancia živých buniek. FU97 bunky boli schovať na 96-jamkové doštičky v 1,6 x 10 ^{3 buniek na jamku v 100 ul DMEM s obsahom 10% FBS cez noc. Po vystavení rôznym koncentráciám ako 2O 3 po dobu 24, 48 a 72 h, 20 ul (5 g /l), MTT (Sigma, St. Louis, MO), roztok bol pridaný do každej jamky a doštičky boli inkubujú počas ďalších 4 hodín pri teplote 37 ° C. Formazin sa rozpustí v 150 ul /jamku dimetylsulfoxidu (DMSO) a bola zistená absorbancia pri 490 nm. Miera inhibície (%) = (1-A hodnota v experimentálnej skupine /A hodnota v kontrolnej skupine) x 100%. /L skupina 0 umol bol použitý ako slepá kontrola.}}

DNA fragmentácie Analýza elektroforézou

celkom 10 ^{6 bunky sa opatrne zoškrabnutie z misiek, dvakrát premyté v studenom PBS, a centrifugovány pri 15000 otáčkach za minútu počas 10 minút, potom boli lyžovanie v 200 ul lyzačného pufru (1 ml 1 M Tris-HCl pufra, pH 7,4, 0,2 ml 0,5 M kyseliny etyléndiamíntetraoctovej [EDTA], 0,5 ml 10% Tritonu X-100 ). Lyžovaných buniek sa udržiava na teplote 4 ° C počas 10 minút a supernatanty boli inkubované s 2 ul RNázy A (10 mg /ml v Tris-EDTA pufri) pri teplote 50 ° C počas 30 minút, potom sa 2 ul proteinázy K (10 mg /ml v destilovanej vode) po dobu 45 minút pri teplote 50 ° C. Vzniknutý roztok sa zmieša s 5 M chloridu sodného (20 ul) a 2-propanolu (120 ul), inkubuje sa pri teplote 20 ° C počas 24 hodín, potom sa centrifúguje pri 15000 otáčkach za minútu po dobu 20 minút. Vyzrážaná DNA bola rozpustená v Tris-EDTA (5 ul) pufra a podstúpil elektroforézy s 2% agarózovom géle a Tris acetát-EDTA pufri pri 50 V. fragmentácie DNA vzorka bola vizualizovaný s použitím UV svetlom.}

Hoechst 33258 Farbenie Analýza apoptózu

buniek pestovaných na sklenených krycích-sklíčka boli fixované 4% paraformaldehydom /PBS po dobu 30 minút, premyté počas 15 minút v 0,1% Triton X-100 /PBS a inkubované v tme s Hoechst 33258 (10 ug /ml) po dobu 15 min. Potom, čo sa krycie-pásky boli premyté v PBS, pozitívne jadrá boli počítané. Normálne jadra a apoptotické jadrá (kondenzované alebo fragmentovaný chromatínu) boli ľahko rozlíšiť.

Kvantitatívne PCR v reálnom čase

Bunky boli kultivované s As _{2O 3 (5 pmol /l ) po dobu 72 hodín. Celková RNA bola extrahovaná za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a kvantifikovať spektrofotometricky. Prvý reťazec cDNA bol pripravený s použitím náhodných primerov nasledujúcich inštrukcií súpravy (Takara, Japonsko). V reálnom čase kvantitatívne PCR z AFP, STAT3 a jeho následné génov podieľajúcich sa na 7300 real-time PCR systém (ABI, USA) s Takara SYBR Premix Ex Taq činidiel (Takara, Japonsko). Primery boli navrhnuté a overené spoločnosťou Invitrogen. Informácie primer je v tabuľke 1. PCR reakcie boli vykonávané trojmo v objeme 20 ul po dobu 2 minút pri 94 ° C počas počiatočnej denaturácie, nasledovalo 30 cyklov pri 94 ° C počas 30 s a pri teplote 60 ° C počas 45 s. Gen GAPDH kontrolná upratovanie bol použitý ako vnútorná kontrola. Každá sada primérov bola najprv testovaná na stanovenie optimálnych koncentrácií, a produkty boli na 1% agarosovém gélu pre potvrdenie vhodnú veľkosť. Následne ABI disociačná krivky softvér bol použitý na riadenie pre viac druhov v každom PCR amplifikácie. cDNA z buniek FU97 bez As 2O 3 liečba bola použitá pre konštrukciu štandardnej krivky pre každý gén.}

Analýza Western Blot

Bunkové pelety sa homogenizujú v extrakčného pufra (50 mmol /l Tris-HCl, pH 6,8, 0,1% SDS, 150 pmol /l chloridu sodného, ​​100 mg /l fenylmetylsulfonyl fluorid, 1 mg /l aprotinínu, 1% NP-40 a 0,5% orthovanadičnan sodný), inkubuje sa pri teplote 4 ° C po dobu 30 minút a centrifugována po dobu 20 minút pri 12 000 g /min. Celkového proteínu v bunkovom lyzátu bola meraná s použitím kolorimetrického súpravy Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Pre Western blot analýzu, celková bielkovina sa oddelí na 10% SDS-PAGE a prenesené na nitrocelulózové membrány (0,45 um, Millipore, Billerica, MA, USA), ktoré boli inkubované po dobu 24 hodín pri teplote 4 ° C s protilátkami pre AFP (1 : 500, R &D), STAT3 (1: 1000), kaspázy 3 (1: 500), Bcl-2 (1: 500), Bax (1: 500) a GAPDH (1: 1000; všetky Bunková signalizácia technológie) , potom chrenovej peroxidázy konjugovanej s anti-myšou /králičie IgG protilátka (Santa Cruz Biotechnology) po konečnom premytí. Reakcie boli vyvinuté za použitia 4-chlór-1-naftol (Sigma) a H 2O _{2. Signály boli detekované s použitím zvýšenej chemiluminiscencie kitu (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, UK). Úroveň GAPDH bola vnútorný štandard.}

Immunoassay z AFP koncentrácia v supernatante

Supernatant FU97 bunky boli zhromaždené po ošetrení ako _{2O 3 alebo negatívna kontrola pre 24, 48 a 72 koncentrácie h.AFP v supernatante bola stanovená pomocou dvoch-site EIA v systéme TOSOH AIA (Japonsko). Hodnota cut-off pre AFP bola 10 ng /ml.}

Pacienti

Skúmali sme dáta z chirurgických a patologických záznamy počas 24 pacientov s AFPGC a 24 náhodne vybraných pacientov s normálnymi hladinami sérového AFP a prispôsobiť AFPGC pacientom žalúdka štádiu rakoviny. Pacienti, ktorí podstúpili chirurgickú resekciu v klinickej nemocnici Shandong University, Číny, od januára 1996 do decembra 2011. pacientom AFPGC ukázali zvýšené hladiny v sére AFP ale žiadne sprievodné ochorenia pečene. Histopatologické prítomnosť AFP pozitívnosti bola potvrdená pomocou imunohistochémia. Kontaktovali sme každému pacientovi na potvrdenie prežitie alebo dátum smrti.

Imunohistochémia

Imunohistochémia zapojený použitie biotín-streptavidín-peroxidáze so sadou Vectastain ABC (Vector Laboratories, CA, USA). Stručne povedané, tkanivové rezy (4 mm) boli pripravené zo vzoriek parafínových tkanív. Rezy boli zbavené voskov s xylénom s následnou dehydratáciou v odstupňované alkohole. Rezy sa zahrieva v mikrovlnnej rúre po dobu 2 min pri 900 W pre získanie antigénu, a potom inkubované s 0,3% _{2O 2 H roztoku v metanole po dobu 30 minút k zablokovaniu endogénnej peroxidázy. Po 3 premytí phosphatebuffered fyziologickým roztokom (PBS) boli rezy inkubované s 10% normálnym konským sérom na blokovanie nešpecifickej farbenie pozadia, a potom inkubované s primárnymi protilátkami králičie anti-AFP (1: 100 riedenie) a anti-STAT3 (1: 200) v vlhkej komore pri teplote 4 ° C cez noc. Po premytí PBS boli rezy inkubované s biotinylizované-konských protilátok anti-myších po dobu 30 minút, premyté 3 krát s PBS a inkubované sa streptavidín konjugovaný s peroxidázou po dobu 30 min. Rezy boli vizualizované inkubáciou s 3, roztok 3'-Diaminobenzidine (0,3% H 2O 2 a 0,05% 3, 3'-Diaminobenzidine) a kontrastne hematoxylínom. Vynechanie primárnej protilátky bola negatívna kontrola. Každý beh zahŕňala pozitívne kontroly a negatívne kontroly. U negatívnej kontroly sa primárne protilátka bol nahradený PBS.}

Štatistická analýza

Dáta sú vyjadrené ako priemer ± SD a boli analyzované s použitím SPSS v11.5 (SPSS Inc., Chicago , IL, USA). Združenie patologickým premenných a AFP a STAT3 expresie bola stanovená pomocou testu chí-kvadrát a Yate je oprava bola použitá v malom počte vzoriek. Chi-kvadrát test alebo dvojchvostý študenta t
test bol použitý pre vyhodnotenie rozdielov medzi skupinami. Analýza prežitie podieľa na log-rank testu, s Kaplan-Meierove krivky. P < 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú

Výsledky

inhibícia rastu a indukcia apoptózy v FU97 bunkách ako _{2O 3}

FU97 bunky boli ošetrené. rôzne koncentrácie As _{2O 3 (1, 5 a 10 pmol /l) pri 24, 48 a 72 hodín. Ako 2O 3 inhibuje proliferáciu FU97 koncentrácie a času buniek v závislosti na (obr. 1a). V bunkách ošetrených s 5 pmol /l a 10 umol /l ako 2O 3 po dobu 72 h, inhibícia rastu bola 56,27 ± 3,91% a 73,46 ± 4,64%, resp. fragmentácia DNA je charakteristickým znakom apoptotické procesu. Typické DNA fragmentácia rebríky boli detekované v FU97 bunkách ošetrených 5 umol /l a 10 umol /l ako 2O 3 (obr. 1b). Tu sme ďalej študovať morfologické zmeny apoptotické bunky. FU97 bunky ošetrené 5 umol /l a 10 umol /l ako 2O 3 po dobu 72 h boli zafarbené za použitia Hoechst 33258 a pozorovať pod žiarivkami výsledky microscope.The ukázala, že Ako 2O 3 indukovanú apoptózu FU97 buniek v závislosti od koncentrácie, ako je uvedené nejednotné a kondenzovaných jadier (obr. 1C). K objasneniu ďalšie vplyvy ako 2O 3 na bunkovej apoptózy, caspase3 bola meraná pomocou západnom blot.The výsledky z Obr. 1D jasne ukázala, že kaspázy 3 Expresia proteínu významne zvýšil v FU97 cells.Therefore, As 2O 3 môže inhibovať rast buniek a indukuje apoptózu AFPGC FU97 buniek.}

inhibičný efekt ako 2O 3 na expresiu AFP a STAT3 v bunkách FU97

na objasnenie úlohy AFP a STAT3 v As _{2O 3 indukovanej inhibícia proliferácie a apoptózy, vplyv As 2O 3 na AFP a STAT3 expresie bola skúmaná pomocou kvantitatívnej real-time PCR a western blot. Bunky boli ošetrené 1, 5 a 10 umol /l ako 2O 3 za 72 h.The mRNA a proteín expresiu AFP a STAT3 a fosforyláciu STAT3 bol významne downregulated s As 2O 3. ošetrenie v závislosti od koncentrácie (obr. 2, obr. 7).}

AFP Koncentrácia Spojené s inhibíciu rastu a apoptózy v FU97 supernatantu bunkovej kultúry

pre ďalšie potvrdenie inhibičný účinok ako _{2O 3 na AFP, sme merali hladinu AFP proteínu v supernatantu FU97 buniek. Ako 2O 3 by mohla znížiť koncentráciu AFP hladiny proteínu v závislosti na (obr. 3, obr. 7). Tento výsledok súhlasí s inhibičnou pomer bunkového rastu (viď obr. 1A), apoptózy FU97 buniek (Obr. 1B, C, D), a zníženie expresie mRNA AFP a STAT3 (obr. 2A) a proteínové expresie AFP, STAT3 a pSTAT3 (obr. 2B).}

zníženej hladiny STAT3 cielenie génov, Bcl-2 a Bax, s As _{2O 3 liečbu v FU97 buniek}

Ak chcete preskúmať expresiu STAT3 cielenie génov, sme skúmali expresiu anti-apoptického Bcl-2 a pre-apoptotického Bax v FU97 buniek ošetrených As _{2O 3. Expresie mRNA a proteínu Bcl-2 bola downregulated v As 2O 3 ošetrených buniek (Obr. 4), ale to Bax bola up-regulovaná, čo naznačuje, že účinok ako 2O 3 v bunkovej apoptózy bolo sprostredkované inhibíciu konštitutívne aktivovaného STAT3 (obr. 7).}

Klinické charakteristiky zvolených obyvateľov

boli tam 34 muži (70,8%) a 14 žien (29,2%) pacienti s priemerným vekom 66 rokov (rozmedzie 45-83 rokov). V klinicko-patologické charakteristiky pacientov boli zhrnuté v tabuľke 2. Tam bolo 48 pacientov malo kompletnú nadväzné dát a následná doba bola od 3 mesiacov do 60 mesiacov, s priemernú dobu 33,7 mesiacov. Celková doba prežitia bola definovaná ako mesiacov odo dňa chirurgia odo dňa úmrtia alebo strata sledovanie.

imunohistochemické Vyjadrenia STAT3

Pretože nám chýbajú údaje o vyjadrenie STAT3 v AFPGC, sme dospeli k záveru svojej vyjadrenie imunohistochemickým farbením tkaniva pacienta AFPGC. V 24 AFPGC primárnych nádorov, 11 boli pozitívne (46%) a 13 boli negatívne (54%) pre expresiu STAT3. V 24 AFP-negatívnych vzoriek s karcinómom žalúdka, 8 (33%), primárne nádory boli pozitívne a 16 (67%) boli negatívne na expresiu STAT3. Okrem toho, aj napriek relatívne malým počtom pacientov s úplnou dát, STAT3 nadmerná expresia sa významne spojená s hĺbkou invázie a lymfatických uzlín (p menšie ako 0,05). V AFP-pozitívnych a negatívnych skupín (obr 5, Tabuľka 2, Obr . 7).

Vyjadrenie AFP a STAT3 súvisiacich so zlou prognózou na žalúdočné rakovinu

Stredná doba prežitia AFP-pozitívnych pacientov bol 23 mesiacov (95% interval spoľahlivosti, 16-30 mesiacov ). čo bolo výrazne kratšie ako v AFP-negatívnych pacientov, 53 mesiacov (95% interval spoľahlivosti, 47-59 mesiacov) (P menšie ako 0,05) .v medián prežitie v STAT3-pozitívnej skupiny bol 38 mesiacov (95% interval spoľahlivosti , 29-47 mesiacov), čo je podstatne kratšia ako v STAT3-negatívnej skupine, 54 mesiacov (95% interval spoľahlivosti, 47-61 mesiacov), (P. < 0,05, obr 6A a B, obrázok 7) .Furthermore. , prežitie bola nižšia pre AFP a STAT3 dvojito pozitívnych pacientov než s expresiou alebo AFP STAT3 samotného (P menšia ako 0,05, obr 6C a D, obr. 7) .. U pacientov s AFP a STAT3 double-pozitívnym výrazom stredná doba prežitia bola 22 mesiacov (95% interval spoľahlivosti 11-33 mesiacov). Pre porovnanie, u pacientov s jediným expresiu AFP a STAT3, stredná doba prežitia 54 mesiacov (95% interval spoľahlivosti 44-64 mesiacov) a 59 mesiacov (95% interval spoľahlivosti 47-71 mesiacov).

diskusie

AFPGC bolo ťažké liečiť a to najmä kvôli sklonu k metastázy a odolnosťou voči konvenčnej terapii. Je naliehavo potrebné alternatívne terapie špecificky riešenie týchto problémov. Ako _{2O 3 bola použitá v klinických štúdiách APL po celé roky, a 10 mg /deň as 2O bolo zistené 3 efektívny v navodenie kompletnej remisie u pacientov s novo diagnostikovanou a relapsu APL [ ,,,0],33]. Ako 2O 3 inhibovala proliferáciu buniek a indukovanú apoptózu v hepatocelulárny karcinóm ľudskej bunkové línie HepG2 [34], ktorý bol ďalej podporený klinické štúdie ukazuje ako 2O 3, aby bola účinná a bezpečná u pacientov s pokročilou primárnou karcinóm pečene [35], toxicita bola mierna a v sére na úrovni AFP bola znížená. Preto sa skúmalo, či Ako 2O 3 tiež indukované inhibíciu bunkového rastu a apoptózu hepatoid adenokarcinóm žalúdka AFPGC FU97 buniek a zistil, že vlastnosti protinádorová As 2O 3 v AFPGC bunkách.}

doložiť, že Ako _{2O 3 má silné anti-proliferačnej účinok na FU97 buniek v závislosti od koncentrácie a času. Plazmatická hladina arzénu v klinickej liečbe akútnej promyelocytovou leukémie môže dosiahnuť 5.5-7.3 mM [36]. V našej štúdii, všetky výsledky ukázali, že 5 pmol /l Čo 2O 3 účinne inhiboval proliferáciu indukovanú apoptózu buniek a na 72 hodín. Táto dávka je klinicky významné, čo naznačuje, že AFPGC bunky sú citlivé na ako 2O 3.}

AFPGC, ako je reprezentované na výrobu AFP vykazuje vyššiu proliferačnej aktivity, slabšie apoptózu, a bohatšie neovaskularizácie než AFP-negatívnych karcinómov žalúdka. Na druhej strane, vysoká hladina AFP v plne rozvinutej karcinómu pečene alebo v sére hostiteľa sú spojené s viac agresívne správanie, a zvýšená anaplazie [37], [38]. Štúdia AFP Knockdown podľa siRNA našiel inhibujú proliferáciu buniek v hepatómy [39]. Z tohto dôvodu sa môžu AFP fungovať v základným prvkom progresie AFP-pozitívnym karcinómom. Downregulaci AFP expresia môže predstavovať relevantný terapeutickú stratégiu. Zistili sme, že Ako _{2O 3 by mohla znižuje expresiu AFP mRNA a expresiu proteínu. Tiež zníženie expresie AFP AS 2O 3 môže inhibovať bunkovú proliferáciu a indukovať apoptózu v AFPGC FU97 bunkách. Okrem toho, sekrécia AFP v As 2O 3-ošetrené bunky bol na dávke a v závislosti na čase v supernatantu sa znížil. Downregulaci AFP vyjadrenia by mohli prispieť k As 2O 3-indukovaná inhibícia bunkového rastu a apoptózy. Tak, tieto údaje naznačujú, že AFP výraz je downregulated v reakcii na As 2O 3 liečby. AFP môžu hrať dôležitú úlohu v proliferácii a apoptóze AFPGC.}

Okrem toho, že je miestom konvergenciu mnohých onkogénnych signálnych dráh, STAT3 sa tiež podieľa na bunkovom raste a prežitie. V leukemických buniek, ako _{2O 3 aktivuje rad intracelulárnych signálnych dráh, čo vedie k indukcii apoptózy [40]. As 2O 3 inhibícia STAT3, než inhibícia bunkovej proliferácie, bola popísaná v niekoľkých myelómových buniek [41]. Tiež, ako 2O 3 inhibuje proteín tyrozínkinázy, a tým nepriamo klesajúci aktivácia STAT proteínov [42] .Preto, downregulaci STAT3 bol považovaný za jeden z mechanizmov pôsobenia ako 2O 3 u akútnej promyelocytovou leukémie (APL) WE nájdený STAT3 aktivuje v AFPGC bunkách, a As 2O 3 by mohla znižuje expresiu expresiu STAT3 mRNA a expresiu proteínu STAT3 a pSTAT3. Zvlášť, downregulated vyjadrenie STAT3 a pSTAT3 bolo v súlade s downregulated expresie AFP AS 2O 3. STAT3 by mohlo byť obmedzovaná nejakým faktorom pri jeho aktivácii v odozve na ako 2O 3. V AFPGC. Bez ohľadu na možných mechanizmov zapojených do regulácie STAT3, vysoké AFP výraz v AFPGC môže mať závažné dôsledky. Predchádzajúce štúdie tiež ukázali, že AFP by dimerizovat s ďalšími proteínmi, ako je napríklad nukleárnych receptorov (tj., Retinovej receptora), transkripčných faktorov a kaspázy, z ktorých všetky môžu podporiť rast nádorových buniek [43], [44]. To zase vedie k špekulácii, že AFP by dimerizovat s transkripčných faktorov STAT3 pre podporu rastu AFPGC. Je potrebné ďalšie skúmanie regulácia STAT3 výraz spojený AFP.}

STAT3 môže vyvolať bunkovú apoptózu transkripčný downregulating Bcl-2 expresie [45]. Bcl-2 je proti prúdu efektora v apoptotické dráhy a silný potláčajúci apoptózy. To môže oligomerize Bax, ktorý následne depolarizuje mitochondriálnej membránový potenciál k uvoľneniu cytochrómu c a apoptózu [46]. Pomer Bcl-2 Bax, je dôležitá pre určenie, či bunky podliehajú apoptóze alebo prežitie. Zistili sme, zníženú expresiu Bcl-2 spolu s zablokovanom STAT3 výrazom sa ako _{2O 3 zaobchádzanie v AFPGC bunkách. Na rozdiel od toho expresie Bax bola zvýšená. Spolu s nálezmi v iných bunkových systémoch, kde bola zistená potlačené úroveň STAT3 znížiť Bcl-2 expresie a indukujú apoptózu [45], je ako 2O 3-indukovanej účinky sme zistili, môžu byť sprostredkované inhibíciou konštitutívne aktivovanej STAT3.}

Aby sa ďalej preukázalo, či STAT3 hrá kľúčovú úlohu v AFPGC sme skúmali pacientov AFPGC, pokiaľ ide o expresiu STAT3. STAT3 pozitivita v AFP-pozitívnych nádorov bola 46% a AFP-negatívne nádory 33%. Pacienti s AFPGC mali vyššiu mieru expresie STAT3, aj keď nie významný možno z dôvodu malého počtu pacientov. Avšak, STAT3-pozitívna expresia bola spojená s rakovinou tkaniva, hĺbku invázie a metastáz lymfatických uzlín v AFPGC. Klinicky, pacienti s AFPGC majú zlú prognózu [1], [9], [10]. Potvrdili sme, že prognóza bola horšia ako u pacientov s bez AFP, ktorí boli kompenzované fáze rakoviny. Okrem toho je prežitie pacientov s ako AFP a STAT3 pozitivity bol podstatne horší, než so samotným alebo AFP STAT3 pozitivity. Tak, v tomto špecifickom type rakoviny žalúdka, STAT3 vyzerá, že má dôležitú úlohu v bunkovej prežitie a proliferácie. STAT3 vyjadrenie v AFPGC môže vysvetliť klinicky agresívne správanie AFPGC a STAT3 expresie môže byť užitočným ukazovateľom progresie, ak je potvrdená rozsiahlymi prospektívnych štúdiách vo väčších kohorty. Downregulaci AFP a STAT3 vyjadrenie môže predstavovať relevantný terapeutickú stratégiu AFPGC. Pokiaľ ide o vzťah medzi výrobou AFP a STAT3 vyjadrenie, nie je k dispozícii správa popisuje základné mechanizmy pre date.It bolo hlásené, že expresia AFP v karcinómu žalúdka, je v dôsledku nedostatku transkripčného faktoru ATBF1 [47]. Okrem toho, ATBF1, ako tumor supresorového génu, enhancesthe potlačenie STAT3 signalizácia interakcií s PIAS3 [48] .Preto, je vhodné vziať do úvahy, že inaktivácia génu ATBF1 v AFPGC, mutácií alebo zníženej expresie, je možné povoliť AFPGC bunky produkovať AFP bielkovín a nadexpresiou STAT3. Objasniť, aké faktory sa podieľajú na výrobe a AFP STAT3 prejavu, je potreba ďalšie štúdie.

Na záver Ako _{2O 3 môže inhibovať AFPGC bunkové línie FU97 rastu a apoptózu. Možné mechanizmy boli v súvislosti s downregulace AFP a STAT3 a STAT3 cielenie anti proapoptotický génu Bcl-2 a upregulating génu tumor supresorové Bax (obr. 7). Expresie STAT3 v AFPGC hrá dôležitú úlohu v nádorovej invázie a prognózou. Ako 2O 3 môže byť prípadná nová pomocná látka liek na liečbu AFPGC. Táto štúdia poskytuje určitý teoretický základ pre jeho klinické použitie hodné ďalšieho štúdia.}

• Ploche ONE: microRNA-9 Potláča proliferácie, invázie a metastázy Žalúdočné nádorových buniek prostredníctvom zacielenia na cyklin D1 a Ets1
• Ploche ONE: Román proteomiky-Based Clinical Diagnostics technológie Identifikuje Heterogenita v aktivovaných signálnych dráh v karcinómov žalúdku