PLoS ONE: Expression af AFP og STAT3 er involveret i arsentrioxid-induceret apoptose og hæmning af spredning i AFP-producerende Gastric Cancer Cells

Abstrakt

Alpha-fetoprotein (AFP) producerende gastrisk cancer (AFPGC) ved produktionen af ​​AFP, har en mere aggressiv adfærd end fælles mavekræft. De underliggende mekanismer er ikke godt forstået. Arsentrioxid (Som _{2O 3) anvendes klinisk til behandling af akut promyelocyt leukæmi (APL) og har aktivitet in vitro
mod flere cellelinjer fra solide tumorer, med induktion af apoptose og hæmning af spredning de vigtigste virkninger. Signal transducer og aktivator af transkription 3 (STAT3) har en vigtig rolle i tumorigenese af forskellige primære cancere og kræft celle ved opregulering af celle-overlevelse og nedregulering tumorsuppressorproteiner. Her fandt vi nedsat ekspression af AFP og STAT3 efter induktion af apoptose ved Som 2O 3 i AFPGC FU97 celler. Også niveauet af STAT3 target oncogenet Bcl-2 blev reduceret med AS 2O 3, og den for tumor suppressor Bax blev forøget. Endvidere blev STAT3 ekspression og dybden af ​​invasion og lymfeknudemetastase forbundet. Overlevelse af patienter med gastrisk cancer var lavere med AFP og STAT3 dobbelt overekspression end med overekspression af enten alene. Nedregulering af AFP og STAT3 ekspression spiller en vigtig rolle i As 2O 3-induceret apoptose af AFPGC celler, hvilket tyder på en ny mekanisme for Som 2O 3-induceret celle apoptose. Som 2O 3 kan være en mulig agent for AFPGC behandling}

Henvisning:. Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) Ekspression af AFP og STAT3 er involveret i arsentrioxid-induceret apoptose og hæmning af spredning i AFP-producerende Gastrisk cancerceller. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774

Redaktør: Matias A. Avila, University of Navarra School of Medicine og Center for Anvendt Medical Research (CIMA), Spanien

Modtaget: November 4, 2012; Accepteret: December 14, 2012; Udgivet: januar 30, 2013 |

Copyright: © 2013 Jia et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Denne undersøgelse er støttet af National Nature Science Foundation Grant Kina (NSFC, nr 81.000.869 og 81.272.588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Alpha-fetoprotein (AFP) er et stort plasma protein produceret af blommesækken og lever under fosterlivet. I klinisk praksis er AFP anvendes ofte som en tumormarkør af hepatocellulært carcinom og blommesækken tumorer. Nogle undersøgelser har vist, at de andre tumorer hos mennesker også kunne producere AFP og gastrisk cancer var en af ​​de mest almindelige [1] - [8]. AFP-producerende gastrisk cancer (AFPGC) har en mere aggressiv adfærd end fælles mavekræft fordi sygdommen udvikler sig hurtigt og metastaserer hyppigt i de regionale lymfeknuder og lever [7] - [10]. Endvidere er AFPGC forbundet med kortere interval-fri levermetastaser efter radikal kirurgi, og overlevelsesraten er betydeligt dårligere med AFPGC end uden AFP produktion [1], [9], [10]. Således kan AFP være en passiv tumormarkør og en aktiv tumor stimulator. Nedregulering AFP udtryk kan være en effektiv metode til AFP-producerende kræft

Arsentrioxid (Som _{2O 3) er blevet anvendt til behandling af leukæmi [11] -. [13] og er aktiv i flere faste tumorer, herunder gastrisk cancer [14]. Virkningsmekanismen af ​​As 2O 3 indbefatter påvirker aktiviteter Akt, JNK-kinaser, NF-KB, glutathion, calcium signalering, reaktive oxygenarter (ROS), og caspaser, samt pro- og anti -apoptotic proteiner [15] - [18]. Ingen standard kemoterapi er tilgængelig for AFPGC, selv om nogle regimer har vist effekt i et lille antal tilfælde [19] - [21]. Også virkningerne og mekanisme af As 2O fortsat uklare 3 mod AFPGC.}

Signal transducer og aktivator af transkription 3 (STAT3) er involveret i både signal transduktion og transskription aktivering og har vigtige roller i forskellige biologiske processer, såsom metabolisme og tumorigenese [22], [23]. STAT3 konstitutivt aktiveret i en lang række cancertyper [24], [25]. Målretning STAT3 kan være en effektiv metode til at løse tumor progression. Denne STAT3 virkning medieres gennem regulering af forskellige STAT3 målgener, herunder apoptoseinhibitorer og cellecyklus-regulatorer, såsom Bcl-2, Mcl-1, survivin, p53, c-myc, cyclin D1 [26] - [31], og vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF) [32]. Imidlertid er den rolle, STAT3 i AFPGC dårligt forstået.

Her undersøgte vi effekten af ​​As _{2O 3 på proliferation og AFP og STAT3 udtryk i AFPGC FU97 celler. Vi evaluerede nedstrøms begivenheder i STAT3 signalering, Bcl-2 og Bax udtryk, for at udforske de mulige mekanismer bag dette fænomen. Endvidere evalueres vi ekspressionen af ​​AFP og STAT3 ved immunohistokemi i humane gastriske cancer prøver. Nedregulering AFP og STAT3 udtryk bidrog til Som 2O 3-induceret apoptose og hæmning af spredning i AFPGC.}

Materialer og metoder

Etik Statement

undersøgelse protokollen blev godkendt af Medical Ethics andHuman Clinical Trial Komité Jinan Central Hospital. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter.

Cell Culture and Drug Treatment

Den humane AFPGC cellelinje FU97 blev opnået fra den japanske Collection of Research Bioressourcer (Japan) og blev opretholdt i DMEM ( Invitrogen) suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS;. Invitrogen), med 1% antibiotika ved 37 ° C i 5% CO _{2 befugtet luft}

Som _{2O 3 ( Sigma) blev opløst i phosphatbufret saltvand (PBS) ved 1 mol /l som en stamopløsning og opbevaret ved 4 ° C. For in vitro
brug, stamopløsningen blev fortyndet til den passende koncentration i vækstmedium uden FBS. Eksponentielt voksende celler blev behandlet med Som 2O 3 ved endelige koncentrationer på 1, 5 eller 10 pmol /L. Kontrolkulturer blev behandlet med destilleret PBS i en slutkoncentration på 0,1% i dyrkningsmediet. Alle forsøg blev udført tre gange.}

MTT Cytotoksicitet Assay

Effekten af ​​Som _{2O in vitro
vækst FU97 celler blev bestemt 3 om at hæmme ved måling MTT (3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazoliumbromid) farvestof absorbans af levende celler. FU97 celler blev podet i 96-brønds plader med 1,6 × 10 ^{3 celler per brønd i 100 pi DMEM indeholdende 10% FBS natten over. Efter eksponering for forskellige koncentrationer af As 2O 3 i 24, 48 og 72 timer, 20 pi (5 g /L) MTT (Sigma, St. Louis, MO) opløsning blev tilsat til hver brønd og pladerne var inkuberet i yderligere 4 timer ved 37 ° C. Formazine blev opløst i 150 uL /​​brønd dimethylsulfoxid (DMSO), og absorbansen blev detekteret ved 490 nm. Inhiberingsgrad (%) = (1-A værdi i forsøgsgruppe /En værdi i kontrolgruppen) × 100%. 0 pmol /L gruppe blev anvendt som blank kontrol.}}

DNA Fragmentation Analyse ved elektroforese

I alt 10 ^{6 celler blev forsigtigt skrabet fra skåle, vasket to gange i kold PBS, og centrifugeret ved 15000 rpm i 10 min, derefter lyseret i 200 pi lysepuffer (1 ml 1 M Tris-HCI-buffer, pH 7,4, 0,2 ml 0,5 M ethylendiamintetraeddikesyre [EDTA], 0,5 ml 10% Triton X-100 ). blev holdt lyserede celler ved 4 ° C i 10 min, og supernatanter blev inkuberet med 2 pi RNase A (10 mg /ml i Tris-EDTA-buffer) ved 50 ° C i 30 minutter, derefter med 2 pi proteinase K (10 mg /ml i destilleret vand) i 45 minutter ved 50 ° C. Opløsningen blev blandet med 5 M NaCl (20 pi) og 2-propanol (120 pi), inkuberet ved 20 ° C i 24 timer, derefter centrifugeret ved 15000 rpm i 20 min. Det udfældede DNA blev opløst i Tris-EDTA (5 pi) buffer og undergik elektroforese med 2% agarosegel og Tris-acetat-EDTA-buffer ved 50 V. DNA fragmentation mønster blev visualiseret med anvendelse af en UV-transilluminator.}

Hoechst 33258 Farvning Analyse af celleapoptose

Celler dyrket på glas cover-sedler blev fikseret med 4% paraformaldehyd /PBS i 30 min, vasket i 15 min i 0,1% Triton X-100 /PBS og inkuberes i mørke med Hoechst 33258 (10 ug /ml) i 15 min. Efter cover-sedler blev vasket i PBS, blev positive kerner tælles. Normale kerner og apoptotiske kerner (kondenserede eller fragmenteret kromatin) var let skelnes.

kvantitativ real-time PCR

Celler blev dyrket med Som _{2O 3 (5 mmol /l ) i 72 timer. Totalt RNA blev ekstraheret med anvendelse af Trizol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og kvantificeret ved spektrofotometri. Første streng cDNA blev fremstillet med anvendelse af vilkårlige primere efter de kit instruktioner (Takara, Japan). Real-time kvantitativ PCR af AFP, STAT3 og dens downstream gener involveret 7300 Real-time PCR System (ABI, USA) med Takara SYBR Premix Ex Taq reagenser (Takara, Japan). Primere blev designet og valideret af Invitrogen. Primeren information i tabel 1. PCR-reaktioner blev udført i tre eksemplarer i et volumen på 20 pi i 2 minutter ved 94 ° C i indledende denaturering, efterfulgt af 30 cykler ved 94 ° C i 30 s og ved 60 ° C i 45 s. En husholdning kontrol gen GAPDH blev anvendt som en intern kontrol. Hver primer sæt blev først testet for at bestemme optimale koncentrationer, og produkterne blev kørt på en 1% agarosegel for at bekræfte den korrekte størrelse. Efterfølgende blev ABI dissociationskurve software anvendes til at kontrollere for flere arter i hver PCR-amplifikation. cDNA fra FU97 celler uden Som 2O 3 behandling blev anvendt til at konstruere en standardkurve for hvert gen.}

Western blot analyse

Cellepellets blev homogeniseret i ekstraktionsbuffer (50 mmol /L Tris-HCI, pH 6,8, 0,1% SDS, 150 pmol /l NaCl, 100 mg /l phenylmethylsulfonylfluorid, 1 mg /l aprotinin, 1% NP-40 og 0,5% natriumorthovanadat), inkuberet ved 4 ° C i 30 min og centrifugeret i 20 min ved 12 000 g /min. Totalt protein i cellelysatet blev målt med anvendelse af Bio-Rad kolorimetrisk kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Til Western blot-analyse blev samlet protein separeret på 10% SDS-PAGE og overført til nitrocellulosemembraner (0,45 um, Millipore, Billerica, MA, USA), som blev inkuberet i 24 timer ved 4 ° C med antistofferne for AFP (1 :500, R &D), STAT3 (1:1000), caspase 3 (1:500), Bcl-2 (1:500), BAX (1:500) og GAPDH (1:1000, alle Cell signalering teknologi) så peberrodsperoxidase-konjugeret anti-muse /kanin-IgG-antistof (Santa Cruz Biotechnology) efter en sidste vask. Reaktioner blev udviklet med anvendelse af 4-chlor-1-naphthol (Sigma) og H _{2O 2. Signaler blev påvist med anvendelse af et forøget kemiluminescens (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, UK). GAPDH niveau var en intern standard.}

Immunoassay af AFP Koncentration i Supernatant

Supernatanten af ​​FU97 celler blev opsamlet efter behandling med Som _{2O 3 eller negativ kontrol for 24, 48 og 72 h.AFP koncentrationen i supernatanten blev bestemt ved to-site immunoenzymometric assay i et TOSOH AIA-system (Japan). Cut-off værdi for AFP var 10 ng /ml.}

Patienter

Vi undersøgte data fra kirurgiske og patologiske journaler i 24 patienter med AFPGC og 24 tilfældigt udvalgte patienter med normale niveauer af serum AFP og matches til AFPGC patienter med mavekræft scenen. Patienterne havde gennemgået kirurgisk resektion ved Klinisk Hospital i Shandong University, Kina, fra januar 1996 til december 2011. AFPGC patienter viste forhøjet serum AFP niveau, men ingen samtidige leversygdomme. Histopatologisk tilstedeværelse af AFP positivitet blev bekræftet ved immunhistokemi. Vi kontaktede hver patient for at bekræfte overlevelse eller dødsdagen.

Immunhistokemi

Immunhistokemi involverede brug af biotin-streptavidin-peroxidase med en Vectastain ABC-kit (Vector Laboratories, CA, USA). Kort fortalt blev vævssnit (4 mm) fremstillet ud fra paraffinindlejrede vævsprøver. Snittene blev afparaffiniseret med xylen, efterfulgt af dehydrering i gradueret alkohol. Snit blev opvarmet i en mikrobølgeovn i 2 minutter ved 900 W at hente antigenet, og derefter inkuberet med 0,3% H _{2O 2-opløsning i methanol i 30 min for at blokere endogen peroxidase. Efter 3 vaske med phosphatpufret saltvand (PBS) blev objektglassene inkuberet med 10% normalt hesteserum til at blokere uspecifik baggrundsfarvning, derefter inkuberet med primære antistoffer kanin-anti-AFP (1:100 fortynding) og anti-STAT3 (1:200) i et fugtigt kammer ved 4 ° C natten over. Efter en vask med PBS blev snit inkuberet med biotinyleret-heste-anti-muse-antistoffer i 30 minutter, vasket 3 gange med PBS og inkuberet med streptavidin-konjugeret peroxidase i 30 min. Snit blev visualiseret ved inkubation med 3, 3'-diaminobenzidin-opløsning (0,3% H 2O 2 og 0,05% 3, 3'-diaminobenzidin) og modfarvet med hematoxylin. Udeladelse af det primære antistof var en negativ kontrol. Hver kørsel omfattede en positiv kontrol og en negativ kontrol. For den negative kontrol blev det primære antistof erstattet med PBS.}

Statistical Analysis

Data er udtrykt som middelværdi ± SD og blev analyseret ved anvendelse af SPSS v11.5 (SPSS Inc., Chicago , IL, USA). Foreningen af ​​clinicopathologic variabler og AFP og STAT3-ekspression blev bestemt ved chi-square test, og Yate korrektion blev anvendt i et lille antal prøver. Chi-square test eller to-tailed Students t
test blev anvendt til at vurdere forskelle mellem grupperne. Analyse af overlevelse involverede log-rank test, med Kaplan-Meier-kurver. P < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

Vækst hæmning og apoptose induktion i FU97 Celler af Som _{2O 3}

FU97 celler blev behandlet med. forskellige koncentrationer af As _{2O 3 (1, 5 og 10 pmol /l) ved 24, 48 og 72 timer. Som 2O 3 hæmmede spredning af FU97 celler koncentration og tid hængigt (Fig. 1A). I celler behandlet med 5 mmol /l og 10 pmol /L Da 2O 3 for 72 timer, vækst hæmning var 56,27 ± 3,91% og 73,46 ± 4,64%, hhv. DNA-fragmentering er karakteristisk for den apoptotiske proces. Typiske DNA fragmentering stiger blev påvist i FU97 celler behandlet med 5 mmol /l og 10 pmol /L Da 2O 3 (fig. 1B). Her har vi yderligere at undersøge morfologisk ændring af apoptotisk celle. FU97 celler behandlet med 5 mmol /l og 10 pmol /L Da 2O 3 for 72 timer blev farvet ved hjælp af Hoechst 33258, og observeret under fluorescerende microscope.The Resultaterne viste, at Som 2O 3 induceret FU97 celler apoptose i en koncentrationsafhængig måde, som vist ved fragmenterede og kondenserede kerner (fig. 1C). For at belyse den yderligere indflydelse Som 2O 3 på celle apoptose, blev caspase3 målt af vestlige blot.The resultater fra fig. 1D viste klart, at caspase 3 proteinekspression steget betydeligt i FU97 cells.Therefore, Som 2O 3 kunne hæmme cellevækst og inducere apoptose af AFPGC FU97 celler.}

hæmmende effekt af Som 2O 3 på ekspression af AFP og STAT3 i FU97 Celler

for at belyse den rolle AFP og STAT3 i Som _{2O 3-induceret hæmning af proliferation og apoptose, effekten af ​​som 2O 3 på AFP og STAT3 ekspression blev undersøgt under anvendelse af kvantitativ realtids-PCR og western blot. Celler blev behandlet med 1, 5 og 10 pmol /L Da 2O 3 i 72 h.The mRNA og protein ekspression af AFP og STAT3 og phosphorylering af STAT3 var signifikant nedreguleret med AS 2O 3 behandling i en koncentrationsafhængig måde (fig. 2, fig. 7).}

AFP koncentration associeret med væksthæmning og apoptose i FU97 cellekultursupernatanten

for yderligere at bekræfte den inhiberende virkning af Som _{2O 3 på AFP, vi målte AFP proteinniveauet i supernatanten af ​​FU97 celler. Som 2O 3 kunne sænke AFP proteinniveauet koncentration hængigt (fig. 3, fig. 7). Dette resultat er aftalt med den cellulære vækstinhibering ratio (fig. 1A), apoptose af FU97 celler (Fig. 1B, C, D), og reduceret mRNA-ekspression af AFP og STAT3 (fig. 2A) og protein ekspression af AFP, STAT3 og pSTAT3 (fig. 2B).}

reducerede niveauer af STAT3 Targeting Gener, Bcl-2 og Bax, med Som _{2O 3 behandling i FU97 Celler}

at udforske udtrykket af STAT3 målretning gener undersøgte vi ekspressionen af ​​anti-apoptotiske Bcl-2 og pro-apoptotiske Bax i FU97 celler behandlet med Som _{2O 3. MRNA og protein ekspression af Bcl-2 blev nedreguleret i As 2O 3-behandlede celler (fig. 4), men den af ​​Bax blev opreguleret, hvilket antyder, at virkningen af ​​As 2O 3 i celle apoptose blev medieret af hæmning af konstitutivt aktiveret STAT3 (fig. 7).}

Kliniske Karakteristik af den udvalgte population

Der var 34 mænd (70,8%) og 14 kvinder (29,2%) patienter, med en gennemsnitsalder på 66 år (interval, 45-83 år). De klinisk-patologiske karakteristika for de patienter blev opsummeret i tabel 2. Der var 48 patienter havde fuldstændig opfølgende data, og opfølgningen periode var fra 3 måneder til 60 måneder, med en gennemsnitlig periode på 33,7 måneder. Den samlede overlevelsestid blev defineret som de måneder fra datoen for kirurgi til datoen for død eller tab opfølgning.

immunhistokemisk ekspression af STAT3

Fordi vi mangler oplysninger om udtryk for STAT3 i AFPGC, vi fastlagt sin udtryk ved immunhistokemisk farvning af AFPGC patientens væv. I de 24 AFPGC primære tumorer, 11 var positive (46%), og 13 var negative (54%) for STAT3 udtryk. I de 24 AFP-negative mavekræft prøver, 8 (33%) primære tumorer var positive og 16 (67%) var negative for STAT3 udtryk. På trods af de forholdsvis lave antal patienter med fuldstændige data, STAT3 overekspression var signifikant associeret med dybden af ​​invasion og lymfeknudemetastase (p < 0,05). I AFP-positive og -negative grupper (Fig 5, tabel 2, fig . 7).

Angivelse af AFP og STAT3 associeret med dårlig prognose for Gastric Cancer

Den mediane overlevelse af AFP-positive patienter var 23 måneder (95% konfidensinterval, 16-30 måneder ). hvilket var betydeligt kortere end i AFP-negative patienter, 53 måneder (95% konfidensinterval, 47-59 måneder) (P < 0,05) .Den median overlevelsestid i STAT3-positive gruppe var 38 måneder (95% konfidensinterval , 29-47 måneder), hvilket var betydeligt kortere end i STAT3-negative gruppe, 54 måneder (95% konfidensinterval, 47-61 måneder) (P <. 0,05, figur 6A og B, figur 7) .Furthermore. , overlevelse var lavere for AFP og STAT3 dobbelt-positive patienter end med udtryk for AFP eller STAT3 alene (P < 0,05, figur 6C og D, figur 7..). Hos patienter med AFP og STAT3 dobbelt positivt udtryk median overlevelse var 22 måneder (95% konfidensinterval 11-33 måneder). Til sammenligning, hos patienter med enkelt udtryk af AFP eller STAT3, den mediane overlevelse var 54 måneder (95% konfidensinterval 44-64 måneder) og 59 måneder (95% konfidensinterval 47-71 måneder).

diskussion

AFPGC har været vanskeligt at behandle hovedsagelig på grund af tilbøjeligheden til metastase og modstand på konventionel behandling. Der er et presserende behov for alternative behandlingsformer specifikt vedrører disse spørgsmål. Som _{2O 3 er blevet anvendt i kliniske forsøg med APL i årevis, og 10 mg /dag som 2O blev fundet effektive til at inducere komplet remission hos patienter 3 med nyligt diagnosticeret og recidiverende APL [ ,,,0],33]. Som 2O 3 hæmmede celledeling og induceret apoptose af den menneskelige hepatocellulært carcinom HepG2 [34], som blev yderligere understøttet af et klinisk forsøg viser Som 2O 3 for at være effektiv og sikker for patienter med fremskreden primær carcinoma i leveren [35], toksiciteten var milde og serum AFP-niveau blev reduceret. Derfor har vi undersøgt, om Som 2O 3 inducerede også cellevækst hæmning og apoptose af hepatoid adenocarcinom i maven AFPGC FU97 celler og fundet de antitumor egenskaber Som 2O 3 i AFPGC celler.}

Vi leverer bevis for, at som _{2O 3 har en stærk anti-proliferativ effekt på FU97 celler i en koncentration og tid afhængig måde. Plasmaniveauet af arsen i den kliniske behandling af akut promyelocytisk leukæmi kan nå 5,5-7,3 mM [36]. I vores undersøgelse viste alle resultater, 5 pmol /L Da 2O 3 effektivt inhiberede proliferationen og induceret celle apoptose ved 72 timer. Denne dosis er klinisk relevant, hvilket tyder på, at AFPGC celler er følsomme over for Som 2O 3.}

AFPGC, som repræsenteret ved produktionen af ​​AFP, udviser højere proliferativ aktivitet, svagere apoptose, og rigere neovaskularisering end AFP-negative gastriske cancere. På den anden side er høje niveauer af AFP i fuldt udviklede leverkarcinom eller i serum fra værten forbundet med en mere aggressiv adfærd, og øget anaplasia [37], [38]. Studier af AFP knockdown af siRNA fundet hæmmede proliferation i hepatomer [39]. Derfor kan AFP fungere i et afgørende skridt i udviklingen af ​​AFP-positiv cancer. Nedregulering af AFP-ekspression kan udgøre en væsentlig terapeutisk strategi. Vi fandt, at Som _{2O 3 kunne nedregulere AFP mRNA og protein-ekspression. Også, nedregulering af AFP fra Som 2O 3 kunne hæmme celledeling og fremkalde celle apoptose i AFPGC FU97 celler. Desuden AFP sekretion i Som 2O 3-behandlede celler var dosis- og tidsafhængigt faldt i supernatanten. Nedregulering af AFP-ekspression kan bidrage til As 2O 3-induceret hæmning af cellevækst og apoptose. Således disse data viste, at AFP-ekspression nedreguleres som reaktion på Som 2O 3 behandling. AFP kan spille en vigtig rolle i udbredelsen og apoptose af AFPGC.}

Ud over at være et punkt for konvergens for mange onkogene signalveje, STAT3 deltager også i cellevækst og overlevelse. I leukæmiceller, As _{2O 3 aktiverer talrige intracellulære signaltransduktionsveje, hvilket således resulterer i induktion af apoptose [40]. Som 2O 3 hæmning af STAT3, før hæmning af celleproliferation, er blevet beskrevet i myelomatose celler [41]. Også, som 2O 3 hæmmer proteintyrosinkinase, derved indirekte faldende aktivering af STAT-proteiner [42] .Derfor, nedregulering af STAT3 er blevet betragtet som en af ​​de virkningsmekanismer af As 2O 3 i akut promyelocyt leukæmi (APL) .Vi fandt STAT3 aktiveres i AFPGC celler, og som 2O 3 kunne nedregulere STAT3 mRNA-ekspression og STAT3 og pSTAT3 proteinekspression. Især nedreguleret udtryk for STAT3 og pSTAT3 var i overensstemmelse med nedreguleret udtryk for AFP ved Som 2O 3. STAT3 kan hæmmes af nogle faktor under dens aktivering som reaktion på Som 2O 3. i AFPGC. Uanset de mulige mekanismer involveret i reguleringen af ​​STAT3, kan den høje AFP udtryk i AFPGC have stor betydning. Tidligere undersøgelser har også vist, at AFP kan dimerisere med andre proteiner, såsom nukleære receptorer (dvs. retinoinsyre receptor), transkriptionsfaktorer og caspaser, som alle kan fremme væksten af ​​tumorceller [43], [44]. Dette vil igen, har ført til spekulationer om, at AFP kunne dimerisere med transskription faktorer STAT3 at fremme AFPGC vækst. er behov for yderligere undersøgelser af reguleringen af ​​STAT3 Udtryk med relation til AFP.}

STAT3 kan inducere celle apoptose ved transkriptionelt nedregulere Bcl-2 udtryk [45]. Bcl-2 er en opstrøms effektormolekyle i apoptotiske vej og en potent suppressor af apoptose. Det kan oligomerisere Bax, som efterfølgende depolariserer mitokondrielle membranpotentiale at frigive cytochrom c og inducere apoptose [46]. Forholdet mellem Bcl-2 til Bax er vigtig for, om cellerne vil undergå apoptose eller overlevelse. Vi fandt reduceret ekspression af Bcl-2 sammen med inhiberet STAT3 udtryk med Som _{2O 3 behandling i AFPGC celler. I modsætning hertil blev ekspressionen af ​​Bax steget. Sammen med fund i andre celle systemer, hvor hæmmet STAT3 niveau blev fundet at falde Bcl-2 ekspression og inducere apoptose [45], den som 2O 3-inducerede effekter fandt vi kan medieres af hæmning af konstitutivt aktiveret STAT3.}

for yderligere at vise, om STAT3 spiller en central rolle i AFPGC undersøgte vi AFPGC patienter i form af STAT3 udtryk. STAT3 positivitet i AFP-positive tumorer var 46% og i AFP-negative tumorer 33%. Patienter med AFPGC havde en højere STAT3 udtryk, men ikke signifikant måske på grund af et lille antal patienter. Imidlertid blev STAT3-positivt udtryk forbundet med kræft væv, dybde invasion og lymfeknude metastaser i AFPGC. Klinisk patienter med AFPGC har dårlig prognose [1], [9], [10]. Vi bekræftede, at prognosen var værre for patienter med end uden AFP, der blev matchet af kræft fase. Desuden overlevelsen af ​​patienter med både AFP og STAT3 positivitet var betydeligt dårligere end dem med AFP eller STAT3 positivitet alene. Således i denne særlige type mavekræft, synes STAT3 at have en vigtig rolle i celle overlevelse og proliferation. STAT3 udtryk i AFPGC kan forklare den klinisk aggressiv adfærd AFPGC, og STAT3 udtryk kan være et nyttigt progression indikator, hvis de er valideret af omfattende prospektive studier i større kohorter. Nedregulering af AFP og STAT3 udtryk kan udgøre en relevant terapeutisk strategi i AFPGC. Om forholdet mellem AFP produktion og STAT3 ekspression, er der ingen tilgængelige rapport, der beskriver de underliggende mekanismer til date.It er blevet rapporteret, at AFP-ekspression i gastrisk cancer skyldes manglen på transkriptionsfaktoren ATBF1 [47]. Desuden ATBF1, som et tumorsuppressorgen, enhancesthe undertrykkelse af STAT3 signalering ved interaktion med PIAS3 [48] .Derfor, er det rimeligt at antage, at inaktivering af ATBF1 genet i AFPGC gennem mutation eller reduceret ekspression, kan tillade AFPGC celler til at producere AFP-protein og overexpres STAT3. For at tydeliggøre, hvilke faktorer er involveret i AFP produktion og STAT3 udtryk, er der behov for yderligere undersøgelse.

Som konklusion, som _{2O 3 kan hæmme AFPGC cellelinje FU97 vækst og inducere apoptose. De mulige mekanismer blev relateret til nedregulering af AFP og STAT3 og STAT3 målretning anti-apoptotiske gen Bcl-2 og opregulere tumorsuppressorgen Bax (fig. 7). Ekspressionen af ​​STAT3 i AFPGC spiller en vigtig rolle i tumorinvasion og prognose. Som 2O 3 kan være en mulig ny adjuverende lægemiddel i behandlingen af ​​AFPGC. Den foreliggende undersøgelse giver nogle teoretiske grundlag for dets kliniske anvendelse værdig yderligere undersøgelse.}

• PLoS ONE: microRNA-9 Undertrykker spredning, invasion og metastase af Gastric Cancer Cells gennem Målretning cyclin D1 og Ets1
• PLoS ONE: A Novel Proteomics-Based Clinical Diagnostics Teknologi Identificerer heterogenitet Aktiveret signalveje i Gastric Kræft