PLoS One: Expression az AFP és STAT3 részt vesz az arzén-trioxid-indukált apoptózis gátlása és a proliferációs AFP-termelő gyomorkarcinóma Cells

absztrakt katalógusa

Alpha-fetoprotein (AFP) -termelő gyomorrák (AFPGC), képviseli a termelés AFP, egy több agresszív viselkedés, mint a közönséges gyomorrák. A kiváltó mechanizmusok még nem teljesen ismertek. Az arzén-trioxid (A _{2 O 3) használják klinikailag kezelésére akut promyelocytás leukémia (APL), és aktivitása in vitro
ellen számos szolid tumor sejtvonal, azzal apoptózis indukálása és a proliferáció gátlása az elsődleges hatásokat. Jelátvivő és transzkripciós aktivátor 3 (STAT3) fontos szerepe van a tumorigenezisben különböző primer rák és rákos sejt által upregulating sejt-túlélés és mTOR gátlása miatt csökken a tumor szupresszor fehérjéket. Itt azt találtuk, csökkent expressziója AFP és STAT3 után az apoptotikus Ahogy 2 O 3 a AFPGC FU97 sejteket. Továbbá, a szint a STAT3 megcélzott onkogén Bcl-2-t csökkent Amint 2 O 3, és hogy a tumor szuppresszor Bax nőtt. Továbbá STAT3 expressziójának és mélysége invázió és a nyirokcsomó-áttétek is társult. Túlélési betegek gyomorrák alacsonyabb volt, az AFP és a STAT3 kettős overexpressziója mint overexpressziója akár egyedül. Downregulációját AFP és STAT3 expressziója fontos szerepet játszik a Mint 2 O 3-indukált apoptózisát AFPGC sejtek, ami azt sugallja, egy új mechanizmus Amint 2 O 3-indukált sejtek apoptózisát. Ahogy 2 O 3 lehet egy lehetséges szer AFPGC kezelésére. Katalógusa}

Citation: Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) kifejezése AFP és STAT3 részt vesz az arzén-trioxid-indukált apoptózis gátlása és a proliferációs AFP-termelő Gyomor rákos sejteket. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774 katalógusa

Szerkesztő: Matias A. Avila, a Navarrai Egyetem Orvostudományi Központjának Alkalmazott Medical Research (CIMA), Spanyolország katalógusa

Beérkezett: November 4, 2012-ben; Elfogadva: december 14, 2012; Megjelent: január 30, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Jia et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány által támogatott Nemzeti Természettudományi Alapítvány Grant of China (NSFC, No. 81000869 és 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Alpha-fetoprotein (AFP) egy nagy plazma által termelt fehérje a szikzacskós és a májban a magzati életben. A klinikai gyakorlatban, az AFP gyakran használják, mint egy tumormarker a hepatocelluláris karcinóma és szikzacskó daganatok. Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a más tumorok humán is előállítani az AFP és a gyomorrák volt az egyik leggyakoribb [1] - [8]. AFP-termelő gyomorrák (AFPGC) van egy több agresszív viselkedés, mint a közönséges gyomorrák, mert a betegség előrehaladtával gyorsan és áttétet gyakran a regionális nyirokcsomók és a májban [7] - [10]. Továbbá AFPGC társul rövidebb intervallum-mentes máj metasztázis után radikális műtét, és a túlélési arány szignifikánsan rosszabb a AFPGC mint anélkül AFP termelés [1], [9], [10]. Így, az AFP lehet egy passzív tumormarker és egy aktív tumornövekedés stimulátor. MTOR gátlása miatt csökken AFP kifejezés lehet hatékony megközelítés AFP-termelő rák. Katalógusa

Az arzén-trioxid (A _{2 O 3) sikeresen kezelésére használják leukémia [11] - [13], és aktív több szilárd tumorok, beleértve a gyomorrák [14]. A hatásmechanizmus az As 2 O 3 tartalmazza tevékenységét érintő Akt, a JNK kinázok, NF-kB, glutation, kalcium jelátvitel, reaktív oxigénfajták (ROS), és kaszpázok, valamint a pro- és anti -apoptotic fehérjék [15] - [18]. Nem szokványos kemoterápiás elérhető AFPGC, bár egyes rendek hatékonynak bizonyult a kis számú esetben [19] - [21]. Továbbá, a hatások és mechanizmusa Mivel 2 O 3 ellen AFPGC homályos marad. Katalógusa}

jelátviteli és transzkripciós aktivátor 3 (STAT3) részt vesz mind a jelátviteli és transzkripciós aktiváló, és fontos szerepet a különböző biológiai folyamatok, mint anyagcsere és a tumorgenezis [22], [23]. STAT3 konstitutíven aktiválódik sokféle rák típusok [24], [25]. Célzás STAT3 lehet hatékony módon közelíti meg a betegség progresszióját. Ez a STAT3 hatás közvetíti szabályozása különböző STAT3 célgének, beleértve az apoptózist inhibitorok és sejtciklus szabályozók, mint például a Bcl-2, Mcl-1, survivin, p53, c-myc, a ciklin D1 [26] - [31], és a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) [32]. Azonban a szerepe a STAT3 a AFPGC nehezen érthető. Katalógusa

Itt megvizsgáltuk a hatását Ahogy _{2 O 3 szaporodási és az AFP és STAT3 expressziójának AFPGC FU97 sejtekben. Értékeltük downstream eseményeit STAT3 jelátvitel, a Bcl-2 és Bax expresszió, hogy vizsgálja meg a lehetséges mechanizmusok mögöttes ezt a jelenséget. Továbbá értékeltük a kifejezés az AFP és STAT3 immunhisztokémiai humán gyomorrák mintákat. Downregulációját AFP és STAT3 kifejezés hozzájárult Ahogy 2 O 3-indukált apoptózis gátlása és a proliferáció AFPGC. Katalógusa}

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A vizsgálati protokollt jóváhagyta az orvosi etikai andHuman Clinical Trial Bizottságának Jinan Központi Kórház. Tájékoztatás után írásos beleegyezésüket adták az összes betegnél.

Sejttenyészet és a gyógyszeres kezelés

Az emberi AFPGC sejtvonalat FU97 kapunk a japán Collection of Research Bioresources (Japán) és tartottunk fenn DMEM ( Invitrogen), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS; Invitrogen), és 1% antibiotikummal, 37 ° C-on, 5% CO _{2 nedvesített levegőt.}

_{2 o 3 ( Sigma) feloldottuk foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS), 1 mol /l törzsoldatként és 4 ° C-on. A in vitro
használat, a törzsoldatot hígítjuk a megfelelő koncentráció növekedés közepes FBS nélküli. Az exponenciálisan növekedő sejteket kezeltünk Amint 2 O 3 végső koncentrációkban 1, 5, vagy 10 nmol /l. A kontroll tenyészetek kezeltük desztillált PBS-sel végső koncentrációja 0,1% tápközegben. Minden kísérletet három példányban. Katalógusa}

MTT citotoxicitási vizsgálat katalógusa

A hatás Mivel _{2 O 3 a gátló in vitro katalógusa növekedését FU97 sejtek határoztuk mérésével MTT-t (3- [4,5-dimetil-tiazol-2-il] -2,5-difenil-bromid) festékabszorbanciát az élő sejtek. FU97 sejteket szélesztettünk 96 mérőhelyes lemezeken 1,6 × 10 ^{3 sejt per lyuk 100 ul DMEM-ben, amely 10% FBS-t egy éjszakán át. Expozíció után a különböző koncentrációjú Amint 2 O 3-on 24, 48 és 72 óra, 20 jil (5 g /l) MTT-t (Sigma, St. Louis, MO) oldatot adtunk minden egyes üreghez, és a lemezeket inkubáljuk további 4 órán át 37 ° C-on. Formazinnal feloldunk 150 ni /lyuk dimetil-szulfoxid (DMSO), és az abszorbanciát detektáltuk 490 nm-en. Gátlási arányt (%) = (1-A érték a kísérleti csoportban /egy értéket a kontroll csoport) × 100%. A 0 nmol /liter csoport alkalmaztunk vak kontrollt.}}

DNS-fragmentációt Elemzés elektroforézissel

Összesen 10 ^{6 sejt óvatosan lekaparjuk ételek, kétszer mostuk hideg PBS-ben, és centrifugáltuk 15000 rpm-en 10 percen keresztül, majd lizáltuk 200 ul lízispufferben (1 ml 1 M Tris-HCl-pufferben, pH = 7,4, 0,2 ml 0,5 mólos etilén-diamin-[EDTA], 0,5 ml 10% -os Triton X-100 ). Lizált sejteket tartjuk 4 ° C-on 10 percig, és a felülúszókat inkubáljuk 2 ul RN-áz A (10 mg /ml Tris-EDTA-puffer) 50 ° C-on 30 percig keverjük, majd 2 ul proteináz K (10 mg /ml desztillált vízben) 45 percig 50 ° C-on. Az oldatot összekeverjük 5 M NaCl (20 jil) és 2-propanolt (120 ul), inkubáljuk 20 ° C-on 24 órán át, majd centrifugáltuk 15000 rpm-en 20 percig. A kicsapott DNS-t feloldjuk Tris-EDTA-t (5}

• PLoS One: a mikro-RNS-9 meggátolja a proliferáció, invázió és metasztázis gyomorrák sejtek révén célzás ciklin D1 és Ets1
• PLoS One: A Novel proteomikai alapuló klinikai diagnosztika technológiája azonosítja heterogenitás aktivált jelátviteli Gyomor Cancers