PLoS ONE: išraiška AFP ir STAT3 dalyvauja Arseno trioksidas sukeltos Apoptozė ir slopinimas platinimu AFP gaminančios skrandžio vėžio ląsteles

Anotacija

Alfa-fetoproteino (AFP) -producing skrandžio vėžys (AFPGC), atstovaujamu AFP gamybą, turi daugiau agresyvų elgesį nei bendros skrandžio vėžio. Pagrindiniai mechanizmai nėra gerai suprantama. Arseno trioksidas (kaip _{2O 3) naudojamas kliniškai gydyti ūmų promielocitine leukemija (APL) ir turi veiklą in vitro
prieš keletą solidinių navikų ląstelių linijų, su sukeliama apoptozė ir slopinimo platinimu Pirmininkai poveikis. Signalo keitiklis ir aktyvatorius transkripcijos 3 (STAT3) vaidina svarbų vaidmenį Tumorigenesis įvairių pirminių vėžio ir vėžio ląstelės upregulating ląstelių išlikimo ir downregulating auglio slopinamojo baltymus. Čia, mes nustatėme, sumažėjo išraiška AFP ir STAT3 po sukeliama apoptozė AS 2O 3 į AFPGC FU97 ląsteles. Be to, iš STAT3 tikslinės onkogeno lygis BCL-2 buvo sumažintas su AS 2O 3, ir kad iš vėžinių slopintuvas Bax buvo padidintas. Be to, STAT3 išraiška ir gylis invazijos ir limfmazgių metastazių buvo susiję. Išgyvenimo pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, buvo mažesnė, AFP ir stat3 dvigubo raiškos nei Padidėjusi atskirai. Downregulation AFP ir STAT3 išraiška vaidina svarbų vaidmenį kaip 2O 3 sukeltos apoptozę AFPGC ląstelių, kurios siūlo naują mechanizmą kaip 2O 3 sukelta ląstelių apoptozė. Kaip 2O 3 gali būti įmanoma agentas AFPGC gydymo}

nurodomoji dalis:. Jia Y Liu D Xiao D Ma X Han S Zheng Y et al., (2013) išraiška AFP ir STAT3 dalyvauja Arseno trioksidas sukeltos Apoptozė ir slopinimas platinimu AFP gaminančios skrandžio vėžio ląsteles. PLoS ONE 8 (1): e54774. Doi: 10,1371 /journal.pone.0054774

redaktorius: Matias A. Avila Navaros universitetas medicinos mokyklos ir centro taikomosios medicinos tyrimų (CIMA), Ispanija

Įstojo: lapkričio 4, 2012; Priėmė: Gruodžio 14, 2012 m Paskelbta: Sausis 30, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Jia et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas remia nacionalinio pobūdžio mokslo fondas Grant Kinijos (NSFC, Nr 81000869 ir 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Alfa-fetoproteino (AFP) yra pagrindinis plazmos baltymas, gaminamas trynio maišeliu ir kepenų metu vaisiaus gyvybei. Klinikinėje praktikoje, AFP yra dažnai naudojamas kaip naviko žymens kepenų ląstelių karcinoma ir trynio navikai. Kai kurie tyrimai parodė, kad kiti navikai žmogaus taip pat galėtų gaminti AFP ir skrandžio vėžys buvo vienas iš dažniausiai [1] - [8]. AFP-gaminti skrandžio vėžiu (AFPGC) turi daugiau agresyvų elgesį nei bendros skrandžio vėžiu, nes liga greitai progresuoja ir metastazuoja dažnai sritiniuose limfmazgiuose ir kepenų [7] - [10]. Be to, AFPGC yra susijęs su trumpesnį intervalo be metastazių kepenyse po radikaliai operacijos, ir išlikimo norma yra žymiai prasčiau su AFPGC nei be AFP gamybos [1], [9], [10]. Tokiu būdu, AFP gali būti pasyvus vėžio žymenį ir aktyvus naviko augimas stimuliatorius. Downregulating AFP išraiška gali būti veiksmingas būdas AFP gaminančių vėžį

Arseno trioksidas (kaip _{2O 3) buvo sėkmingai gydoma leukemija [11] - [13]. Ir yra aktyvus keliose solidinių navikų, įskaitant skrandžio vėžio [14]. Veikimo AS mechanizmas 2O 3 apima įtakos AKT, JNK kinazės, NF-κB, glutationo, kalcio signalizacijos, reaktyvių deguonies formų (ROS) ir kaspazių veiklą, taip pat pa- ir anti -apoptotic baltymai [15] - [18]. Nėra su standartine chemoterapija galima AFPGC, nors kai kurie režimai įrodė veiksmingumą nedaugeliui atvejų [19] - [21]. Be to, poveikis ir mechanizmas kaip 2O 3 prieš AFPGC lieka neaiški.}

Signalo keitiklis ir aktyvatorius transkripcijos 3 (STAT3) dalyvauja tiek signalo perdavime ir transkripcijos aktyvavimo ir turi svarbų vaidmenį įvairių biologinių procesų, pavyzdžiui, medžiagų apykaitos ir tumorigenezei [22], [23]. STAT3 yra constitutively aktyvuota įvairių rūšių vėžio [24], [25]. Nukreipimas stat3 gali būti veiksmingas būdas spręsti naviko progresavimą. Tai STAT3 poveikis yra sąlygotas per reguliavimo įvairių stat3 tikslinių genų, įskaitant apoptozę inhibitorių ir ląstelinio ciklo reguliavimo, pavyzdžiui, BCL-2, MCL-1, survivin, p53, c-Myc, cikloniniai D1 [26] - [31], ir kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) [32]. Tačiau STAT3 vaidmuo AFPGC menkai supranta.

Čia mes išnagrinėjo AS poveikį _{2O 3 dėl neplatinimo ir AFP ir stat3 raiškos AFPGC FU97 ląsteles. Mes įvertinome pasroviui įvykius stat3 signalizacijos, BCL-2 ir Bax išraiškos, ištirti galimus mechanizmus, sukeliančius šį reiškinį. Be to, mes įvertino AFP ir STAT3 išraišką imunohistocheminiu žmogaus skrandžio vėžio pavyzdžius. Downregulation AFP ir STAT3 išraiška prisidėjo prie AS 2O 3 sukeltos apoptozės ir slopina proliferaciją ir AFPGC.}

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

tyrimo protokolas buvo patvirtintas medicinos etikos andHuman klinikinio tyrimo komiteto Jinan centrinėje ligoninėje. Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš visų pacientų.

Mobilusis Kultūra ir narkotikų gydymo

žmogaus AFPGC ląstelių linija FU97 buvo gauta iš Japonijos rinkimas tyrimų Bioresources (Japonija) ir išliko DMEM ( Invitrogen), papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS;. Invitrogen), su 1% antibiotikų 37 ° C temperatūroje 5% CO _{2 drėkinama oro}

Kaip _{2O 3 ( sigma) buvo ištirpinta fosfatinio buferio druskų tirpalu (PBS) ne 1 mol /l, nes ji pradinio tirpalo ir saugomi 4 ° C temperatūroje. Dėl in vitro
naudojimą, pradinis tirpalas buvo skiedžiamas iki reikiamos koncentracijos terpėje be FBS. Eksponentiškai augančių ląstelių buvo gydomi kaip 2O 3 galutinė koncentracija yra 1, 5 arba 10 mikromoliai /L. Kontrolinės kultūros buvo gydomi distiliuoto PBS esant kad galutinė koncentracija būtų 0,1% kultūrinėje terpėje. Visi eksperimentai buvo atliekami tris kartus.}

MTT citotoksiškumo Analizės

AS poveikis _{2O 3 dėl slopina in vitro
lėmė augimas FU97 ląstelių matuojant MTT (3- [4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-diphenyltetrazolium bromido) dažų absorbcija gyvų ląstelių. FU97 ląstelės buvo pasėjamos 96 duobučių lėkštelėse 1,6 × 10 ^{3 ląstelės per gerai 100 iL DMEM, kurių sudėtyje yra 10% FBS naktį. Po kontakto su įvairios koncentracijos kaip 2O 3 už 24, 48 ir 72 h, 20 pL (5 g /l) MTT (Sigma, St. Louis, MO) tirpalas buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir plokštelės buvo inkubuojami už papildomą 4 h 37 ° C temperatūroje. Formazine buvo ištirpinta 150 pL /duobutėje dimetilsulfoksido (DMSO) ir absorbcija buvo aptikta esant 490 nm bangos ilgiui. Slopinantis tarifas (%) = (1-a vertė eksperimentinės grupės /A vertė kontrolinės grupės) × 100%. 0 mkmol /L grupė buvo naudojamas kaip kontrolinis.}}

DNR fragmentaciją analizė elektroforezės

10 viso ^{6 ląstelės švelniai pavogta iš patiekalų, išplauti du kartus šaltu PBS, ir centrifuguojamas 15000 apsisukimų per minutę 10 min, po to lizuojamos 200 pL lizės buferiniame tirpale (1 ml 1 M Tris-HCl buferiniame tirpale, pH 7,4, 0,2 ml 0,5 M etilendiamintetraacto rūgšties [EDTA], 0,5 ml 10% Triton X-100 ). Lizinamų ląstelės vyko, esant 4 ° C temperatūroje 10 min, ir supernatantų, buvo inkubuojamos su 2 mikrol RNaze A (10 mg /ml, o Tris-EDTA buferinio) esant 50 ° C temperatūroje 30 min, po to 2 mikrol, proteinazės K (10 mg /ml, distiliuotame vandenyje) 45 min esant 50 ° C temperatūroje. Tirpalas buvo maišomas su 5 M NaCl (20 pl) ir 2-propanolio (120 pl), inkubuojami 20 ° C temperatūroje 24 valandų, po to centrifuguojamos 15000 apsisukimų per minutę 20 min. Nusodintas DNR buvo ištirpinta Tris-EDTA (5 pl) buferio ir buvo atlikta elektroforezės 2% agarozės gelyje ir tri-acetatas-EDTA buferinio tirpalo, esant 50 V DNR suskaidymas modelis buvo vizualizuojami su naudojimo UV transiliuminatorių.}

Hoechst 33.258 Dažymo analizė ląstelių apoptozę

Cells auginami ant stiklo fiktyviais lapeliai buvo nustatytos su 4% paraformaldehido /PBS 30 min, plauti 15 min 0,1% Triton X-100 /PBS ir inkubuojami tamsiai su Hoechst 33258 (10 mikrogramų /ml) 15 min. Po COVER-lapeliai buvo plaunami PBS, teigiami branduoliai buvo skaičiuojami. Normalus branduoliai ir Apoptozinės branduoliai (sutankintos ar susiskaldžiusi chromatino) buvo lengvai atskirti.

Kiekybiniai Realaus laiko PGR

Ląstelės buvo auginamos su AS _{2O 3 (5 mkmol /l ) 72 h. Bendras RNR buvo išskirta su naudojimo Trizol reagento (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ir kiekybiškai spektrofotometriškai. Pirmosios krypties kDNR buvo parengtas naudoti atsitiktinių pradmenų šių rinkinys instrukcijas (TAKARA, Japonija). Realaus laiko kiekybine PGR AFP, STAT3 ir jos paskesnių genų apėmė 7300 Realaus laiko PGR sistema (ABI, JAV) su Takara SYBR Pašaro ex Taq reagentų (TAKARA, Japonija). Gruntai buvo suprojektuoti ir patvirtinti Invitrogen. Gruntas informacija yra 1 lentelėje PGR reakcijos buvo atlikti tris kartus per 20-ties mikrol tūrio 2 min 94 ° C temperatūroje pradinio denatūravimo, o po to 30 ciklų 94 ° C temperatūroje 30 s ir esant 60 ° C temperatūroje 45 Š. Numerių tvarkymo kontrolė genas GAPDH buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės. Kiekvienas pradmenų rinkinio pirmą kartą buvo išbandytas optimalius koncentraciją, ir produktai buvo paleisti 1% agarozės gelyje patvirtinti, tinkamo dydžio. Vėliau, ABI disociacijos kreivė programinė įranga buvo naudojami siekiant kontroliuoti kelis rūšių kiekvienoje PGR. kDNR iš FU97 ląstelių be AS 2O 3 gydymo buvo naudojamas statyti standartinę kreivę kiekvieno geno.}

Vakarų dėmė analizė

Mobilaus ryšio granulės homogenizuoti gavybos buferio (50 mmol /l Tris-HCl, pH = 6,8, 0,1% SDS, 150 mkmol /l NaCl, 100 mg /l fenilmetilsulfonilfluoridą fluorido, 1 mg /l aprotinino, 1% NP-40 ir 0,5% natrio orthovanadate), inkubuojamos 4 ° C temperatūroje 30 min, ir centrifuguojamas 20 min 12 000 g /min. Bendras baltymas yra į ląstelių lizato buvo matuojamas su naudojimo Bio-Rad kolorimetrinės rinkinio (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Vakarų blot analizė, kad bendras baltymas buvo atskirtos 10% SDS-PAGE ir perkeliamas ant nitroceliuliozės membranos (0,45 mkm, Millipore ", Billerica, MA, JAV), kuris buvo inkubuojami už 24 h, esant 4 ° C temperatūroje su už AFP antikūnų (1 :500 R & D) STAT3 (1:1000), kaspazės 3 (1:500), BCL-2 (1:500), BAX (1:500) ir GAPDH (1:1000, visi Mobilusis signalizacijos technologija) , tada krienų peroksidazės-konjuguoto anti-pelės /triušis IgG (Santa Krusas biotechnologijos) po galutinio skalbimui. Reakcijos buvo sukurti kartu su naudoti pagal 4-chlor-1-naftolio (Sigma), ir H _{2O 2. Signalai buvo aptikta su naudojimo sustiprinto cheminės liuminescencijos komplektas (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, Jungtinė Karalystė). GAPDH lygis buvo vidinis standartas.}

Immunoassay AFP koncentracija skystyje virš nuosėdų

iš FU97 ląstelių paviršinis buvo renkami po gydymo kaip _{2O 3 arba neigiamos kontrolės 24, 48 ir 72 h.AFP koncentracija virš nuosėdų nulėmė dviejų svetainę immunoenzymometric testo į Tosoh AIA sistemos (Japonija). Reikšmė, AFP atjungimo buvo 10 ng /ml.}

Pacientai

išnagrinėjo duomenis iš chirurginių ir patologinių įrašų 24 pacientams, sergantiems AFPGC ir 24 atsitiktinai atrinktų pacientų, sergančių normalų lygį kraujo serume, AFP ir suderinta AFPGC pacientams skrandžio vėžio stadijoje. Pacientai buvo atliktos chirurginės rezekcija tuo klinikinės ligoninės Shandong University, Kinija, nuo 1996 sausio iki 2011 m gruodis AFPGC pacientų parodė, padidėjęs serumo AFP lygį, bet ne kartu vartojantiems kepenų ligomis. Histopatologinė buvimas AFP pozityvumo buvo patvirtinta imunohistocheminiu. Mes susisiekė kiekvienam pacientui patvirtinti išlikimas arba mirties data.

imunohistocheminis

imunohistocheminis dalyvauti naudojimas biotino-avidino-peroksidazės su Vectastain ABC komplektas (Vector Laboratories, CA, JAV). Trumpai tariant, audinio skyriai (4 mm) buvo ruošiamas iš parafino įterptųjų audinių pavyzdžius. Skyriai buvo deparaffinized su ksileno po dehidratacijos į rūšiavo alkoholio. Dalys buvo kaitinamas mikrobangų 2 min 900 W, kad galėtų priimti antigeną, ir tada inkubuojami su 0,3% H _{2O 2 tirpalo metanolyje 30 min iki blokuoti endogeninio peroksidaze. Po 3 plovimų su phosphatebuffered druskų tirpalo (PBS), skaidres buvo inkubuojami su 10% normalaus arklio serumu blokuoti nespecifinį fono dėmių, tada inkubuojami su pirminės antikūnai triušio prieš jūros AFP (1:100 praskiedimas) ir anti-STAT3 (1:200) į drėgnoje kameroje 4 ° C temperatūroje per naktį. Po plovimo su PBS, dalys buvo inkubuotos su biotinilinta-arklių antikūnai prieš pelės antikūnus 30 min, plauti 3 kartus su PBS, ir inkubuojami su streptavidino-konjuguoto peroksidazės 30 min. Skyriai buvo regimos inkubacijos su 3, 3'-diaminobenzidinas tirpalo (0.3% O 2O 2 ir 0,05% 3, 3'-diaminobenzidinas) ir counterstained hematoksilinu. Neveikimas pirminės antikūnų buvo neigiamas kontrolė. Kiekvienas paleisti įtraukti teigiamą kontrolę ir neigiama kontrolė. Dėl neigiamos kontrolės, pirminis antikūnas buvo pakeistas su PBS.}

Statistinė analizė

Duomenys pateikti kaip vidurkis ± SD ir buvo analizuojami naudojant SPSS v11.5 (SPSS Inc., Čikaga , IL, JAV). Iš clinicopathologic kintamųjų ir AFP ir stat3 raiškos asociacija nulėmė chi-square testą ir Yate pataisa buvo taikoma mažo mėginių skaičius. Chi-kvadrato testas ar du-tailed Studento , T
testas buvo naudojamas vertinant skirtumus tarp grupių. Analizė išlikimo apėmė log-rank testas, su Kaplan-Meier kreivėmis. "P < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

augimo slopinimo ir apoptozės indukcija FU97 ląsteles kaip _{2O 3}

FU97 ląstelės buvo gydomi. skirtingų koncentracijų kaip _{2O 3 (1, 5 ir 10 mkmol /L), 24, 48 ir 72 val. Kaip 2O 3 slopino FU97 ląstelių koncentracijos ir laiko priklausomai nuo (pav. 1a) proliferaciją. Ląstelėse gydytų 5 mkmol /l, o 10 mikromoliai /l 2O 3 72 h, augimo slopinimo buvo 56,27 ± 3,91% ir 73,46 ± 4,64%, atitinkamai. DNR fragmentacija yra būdinga apoptozės procesą. Tipinis DNR fragmentaciją kopėčios buvo aptikta FU97 ląstelių gydytų 5 mkmol /l, o 10 mikromoliai /l 2O 3 (pav. 1B). Čia mes toliau studijuoti morfologinę apie apoptozės ląstelių kaitą. FU97 ląstelės gydomi 5 mkmol /l, o 10 mikromoliai /l 2O 3 72 val buvo dažomi "Hoechst 33.258 ir stebima fluorescencinės microscope.The rezultatai parodė, kad 2O 3 sukeltas FU97 ląstelių apoptozę nuo koncentracijos priklausomu būdu, kaip nurodyta susiskaldžiusios ir kondensuotas branduolių (pav. 1c). Norėdami išsiaiškinti tolesnę įtaką kaip 2O 3 d ląstelių apoptozę, caspase3 buvo matuojamas Vakarų blot.The rezultatus pav. 1D aiškiai parodė, kad kaspazės 3 baltymo raiška gerokai padidėjo FU97 cells.Therefore, kaip 2O 3 gali slopinti ląstelių augimą ir sukelti apoptozę AFPGC FU97 ląsteles.}

slopinantis poveikis kaip 2O 3 dėl raiškos AFP ir STAT3 į FU97 Cells

aiškinsis AFP ir STAT3 vaidmenį kaip _{2O 3 sukeltas slopinimo platinimu ir apoptozės, AS poveikio 2O 3 dėl AFP ir STAT3 išraiška buvo tiriama naudojant kiekybinius realaus laiko PGR ir Vakarų dėmė. Ląstelės buvo gydomi 1, 5 ir 10 mikromoliai /l 2O 3 už 72 h.The iRNR ir baltymų ekspresija AFP ir STAT3 ir fosforilinimo STAT3 buvo žymiai downregulated su AS 2O 3 gydymo nuo koncentracijos priklausomu būdu (2 7 pav., pav.).}

AFP koncentracija, susijusi su augimo slopinimo ir apoptozės į FU97 ląstelių kultūrų

Jei dar patvirtinti slopinantį poveikį kaip _{2O 3 dėl AFP, mes matuojamas AFP baltymų lygį virš nuosėdų iš FU97 ląsteles. Kaip 2O 3 gali sumažinti AFP baltymų lygio koncentracijos priklausomai nuo (3 pav., 7 pav.). Šis rezultatas, suderintą su korinio augimo slopinimo santykis (1A pav.), Apoptozės FU97 ląstelių (pav. 1B, C, D), taip pat mažesnis mRNR ekspresijos AFP ir STAT3 (2A pav.) Ir baltymų ekspresijos AFP, STAT3 ir pSTAT3 (2B pav.).}

mažesnio stat3 taikymas pagal genų, BCL-2 ir Bax, su AS _{2O 3 gydytis FU97 Cells}

Jei tyrinėti išraiška iš STAT3 orientacija genus, mes išnagrinėjo anti-apoptozės BCL-2 ir proapoptozinis Bax išraišką FU97 ląstelių gydytų kaip _{2O 3. MRNR ir baltymų ekspresija BCL-2 buvo downregulated As 2O 3 paveiktų ląstelių (4 pav.), Tačiau, kad Bax buvo aktyvinama, kuri rodo, kad AS poveikis 2O 3 ląstelių apoptozės buvo tarpininkaujant slopindamas constitutively aktyvuota STAT3 (7 pav.).}

klinikines charakteristikas pasirinktos Gyventojų

buvo 34 vyrų (70,8%) ir 14 moterų (29,2%) pacientų, kurių vidutinis amžius buvo 66 metai (diapazonas, 45-83 metų). Į klinikos charakteristikos pacientų buvo apibendrintos 2 lentelėje buvo 48 pacientai turėjo visą stebėjimo duomenys ir stebėjimo laikotarpį buvo nuo 3 mėnesių iki 60 mėnesių, vidutinis laikotarpį 33,7 mėnesių. Bendras išgyvenamumas laikas buvo apibrėžtas kaip mėnesius nuo operacijos dienos iki mirties arba nuostolių tolesnių dienos.

Imunohistocheminis išraiška stat3

Kadangi mums trūksta informacijos apie STAT3 išraiškos į AFPGC, nustatėme savo ekspresiją imunohistocheminio dažymo AFPGC paciento audinio. Per 24 AFPGC pirminius navikus, 11 buvo teigiamas (46%) ir 13 buvo neigiami (54%) už stat3 išraiška. Per 24 AFP neigiami skrandžio vėžio mėginiai, 8 (33%) pirminiai navikai buvo teigiami ir 16 (67%) buvo neigiami stat3 išraiška. Be to, nepaisant santykinai mažo skaičiaus pacientų, sergančių visiškai duomenimis, STAT3 raiška buvo reikšmingai susijęs su invaziją ir limfmazgių metastazių (p < 0,05) gylio. Į AFP-teigiamų ir neigiamojo grupes (Pav 5, 2 lentelė, pav . 7).

išraiška AFP ir stat3 susijęs su blogos prognozės skrandžio vėžio

išgyvenamumo mediana laiko AFP-teigiamiems pacientams buvo 23 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas, 16-30 mėnesių ). kuris buvo gerokai trumpesnė negu AFP-neigiamų pacientų, 53 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas, 47-59 mėnesių) (p < 0,05) .Sriegines išgyvenamumo mediana laiką stat3 teigiamas grupėje buvo 38 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas , 29-47 mėnesių), kuris buvo gerokai trumpesnė nei kad stat3 neigiamas grupės, 54 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas, 47-61 mėnesių) (p. < 0,05, pav 6A ir B pav 7) .Furthermore. , išgyvenamumas buvo mažesnis AFP ir stat3 dukart teigiamiems pacientams nei išraiškos AFP arba STAT3 vien (P < 0,05, pav 6C ir d, 7 pav.).. Pacientams, sergantiems AFP ir stat3 dukart teigiamos išraiškos vidutinis išgyvenamumo laikas buvo 22 mėnesiai (95% pasikliautinasis intervalas 11-33 mėnesių). Palyginimui, pacientams, sergantiems viena išraiška AFP arba STAT3, vidutinis išgyvenamumo laikas buvo 54 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas 44-64 mėnesių) ir 59 mėnesių (95% pasikliautinasis intervalas 47-71 mėnesių).

Diskusijos

AFPGC buvo sunku gydyti daugiausia dėl to, kad už metastazių ir atsparumą įprastinių gydymo polinkis. Alternatyvūs gydymo konkrečiai kalbama apie šias problemas skubiai reikia. Kaip _{2O 3 buvo naudojamas klinikiniuose tyrimuose APL metų, ir 10 mg /dieną, 2O 3 buvo nustatyta efektyvi skatinančius pilną remisiją pacientams, sergantiems naujai diagnozuota ir pasikartojo APL [ ,,,0],33]. Kaip 2O 3 slopino ląstelių proliferacija ir sukeliama apoptozė žmogaus kepenų ląstelių karcinoma ląstelių linijos HepG2 [34], kurioje buvo toliau remia klinikinio tyrimo, kuriame kaip 2O 3 būtų veiksmingas ir saugus pacientams, sergantiems pažengusia pirminės vėžio, kepenų [35], toksiškumas buvo lengvas ir serumo AFP lygis sumažėjo. Taigi, mes ištirti, ar kaip 2O 3 taip pat sukeltų ląstelių augimo slopinimą ir apoptozę hepatoid adenokarcinoma skrandžio AFPGC FU97 ląsteles ir rasti priešvėžiniai savybės kaip 2O 3 AFPGC ląsteles.}

Mes pateikti įrodymus, kad _{2O 3 turi stiprią antiproliferacinis poveikį FU97 ląstelėmis koncentracijos ir laiko priklausomu būdu. Plazmos lygis arseno klinikinėje valdymo ūmaus promielocitine leukemija gali pasiekti 5.5-7.3 mM [36]. Mūsų tyrimo duomenimis, visi rezultatai parodė, kad 5 mkmol /l 2O 3 efektyviai slopina proliferaciją ir sukeliama ląstelių apoptozę 72 h. Ši dozė yra kliniškai reikšmingas, kuri rodo, kad AFPGC ląstelės yra jautrios AS 2O 3.}

AFPGC, kaip atstovaujama AFP gamybą, pasižymi aukštąjį dauginimosi veiklą, silpnesnę apoptozę ir turtingesnis neovaskuliarizacijos nei AFP neigiami skrandžio vėžio. Kita vertus, aukšto lygio AFP išvystyta kepenų vėžį arba serume priimančiosios yra susijęs su daugiau agresyvaus elgesio, ir padidėjo anaplasia [37], [38]. Tyrimai AFP triuškinantis iki siRNA rasti slopinamas ląstelių proliferaciją in hepatoma [39]. Todėl, AFP gali funkcionuoti pagrindinės žingsnis AFP-teigiamas vėžio progresavimą. Downregulation AFP išraiška gali kelti atitinkamą gydymo strategiją. Mes nustatėme, kad _{2O 3 gali downregulate AFP mRNR ir baltymų ekspresiją. Be to, downregulation AFP AS 2O 3 gali slopinti ląstelių proliferaciją ir indukuoja ląstelių apoptozę AFPGC FU97 ląsteles. Be to, AFP sekreciją kaip 2O 3-paveiktų ląstelių buvo nuo dozės ir skirtingu laiku darytą sumažėjo virš nuosėdų. Downregulation AFP išraiškos gali prisidėti prie AS 2O 3 sukeltas slopinimo ląstelių augimą ir apoptozės. Taigi, šie duomenys rodo, kad AFP išraiška downregulated reaguojant į AS 2O 3 gydymo. AFP gali vaidinti svarbų vaidmenį platinimo ir apoptozės AFPGC.}

Be to, yra konvergencijos taškas daugelio onkogeniniam signaliniu keliu, STAT3 taip pat dalyvauja ląstelių augimui ir išlikimui. Be leukemijos ląstelių, kaip _{2O 3 aktyvuoja daugelį ląstelėje impulsų perdavimą, todėl todėl sukeliama apoptozė [40]. Kaip 2O 3 slopinimas STAT3 prieš slopinimą ląstelių proliferacijos, buvo aprašyta daugine mieloma ląstelių [41]. Be to, kaip 2O 3 slopina baltymų tirozinkinazę, tokiu būdu netiesiogiai mažėja aktyvavimo STAT baltymų [42] .Todėl, buvo laikomas downregulation iš STAT3 vienas iš veiksmų As mechanizmų 2O 3 ūmaus promielocitine leukemija (APL) Mes rasti stat3 įjungiami AFPGC ląstelių, ir kaip 2O 3 gali downregulate STAT3 iRNR raiška ir stat3 ir pSTAT3 baltymo ekspresiją. Ypač, downregulated išraiška STAT3 ir pSTAT3 atitiko downregulated išraiška AFP AS 2O 3. STAT3 gali būti slopinamas tam tikru veiksniu per savo aktyvacijos atsakymo kaip 2O 3. į AFPGC. Nepriklausomai nuo galimų mechanizmų, dalyvaujančių STAT3 reglamentavimą, aukštos AFP išraiška AFPGC gali turėti svarbių padarinių. Ankstesni tyrimai taip pat parodė, kad AFP galėtų dimerize su kitų baltymų, pavyzdžiui, branduolio receptorius (t.y., retino receptorių), transkripcijos faktorius ir kaspazių, kurie visi gali skatinti navikų ląstelių augimui [43], [44]. Tai, savo ruožtu, lėmė spekuliacijos, kad AFP gali dimerize su transkripcijos veiksniai stat3 skatinti AFPGC augimą. Tolesnius tyrimus dėl stat3 išraiška, susijusi su AFP reglamentą reikia.}

STAT3 gali sukelti ląstelių apoptozę iki transkripciškai downregulating BCL-2 išraišką [45]. BCL-2 yra prieš srovę efektoriaus molekulė apoptozės būdo ir stiprus slopintuvas apoptozės. Jis gali oligomerize Bax, kuris vėliau depolarizes mitochondrijų membranos potencialą išleisti citochromo c ir sukelti apoptozę [46]. Iš Bcl-2 santykis su Bax yra svarbus nustatant, ar ląstelės bus atlikta apoptozę arba išgyvenimą. Mes nustatėme, sumažinto išraišką BCL-2 kartu su inhibuoja stat3 išraiškos su AS _{2O 3 gydymo AFPGC ląsteles. Priešingai, buvo padidintas Bax išraiška. Kartu su išvadomis kitų ląstelių sistemose, kur buvo nustatyta, slopino STAT3 lygis sumažės BCL-2 išraišką ir sukelti apoptozę [45], AS 2O 3 sukeltos pasekmės mes nustatėme, gali būti susijęs su slopinimu constitutively aktyvuota STAT3.}

Jei dar įrodyti, ar STAT3 vaidina svarbų vaidmenį AFPGC, mes išnagrinėjo AFPGC pacientų požiūriu stat3 išraiška. STAT3 pozityvumo AFP-teigiamų navikų buvo 46%, o AFP-neigiamas navikai 33%. Pacientai, sergantys AFPGC turėjo didesnį greitį stat3 išraiška, nors nėra didelis, galbūt dėl ​​to, kad nedidelis skaičius pacientų. Tačiau STAT3 teigiamas išraiška buvo susijęs su vėžio audinyje, gylis invazijos ir limfmazgių metastazių į AFPGC. Kliniškai, pacientai, sergantys AFPGC prastos prognozės [1], [9], [10]. Mes patvirtino, kad prognozės buvo blogiau pacientams, sergantiems nei be AFP, kurie suderintų vėžio stadijoje. Be to, pacientams, sergantiems tiek AFP ir stat3 pozityvumo išgyvenamumas buvo žymiai prastesni nei vien AFP arba stat3 pozityvumo. Taigi, šio specialaus tipo skrandžio vėžio, STAT3, atrodo, turi svarbų vaidmenį ląstelių išgyvenimo ir proliferacijos. STAT3 išraiška AFPGC gali paaiškinti kliniškai agresyvų elgesį AFPGC ir STAT3 išraiška gali būti naudinga progresavimo rodiklį, jei patvirtintas išsamiais perspektyvinius tyrimus didesnėse kohortos. Downregulation AFP ir stat3 išraiška gali kelti atitinkamą gydomąjį strategiją AFPGC. Dėl tarp AFP gamybos ir stat3 išraiškos santykį, nėra prieinama ataskaitą, kurioje išdėsto pagrindinius mechanizmus date.It buvo pranešta, kad AFP išraiška skrandžio vėžiu yra dėl to, kad transkripcijos faktorius ATBF1 [47] trūkumo. Be to, ATBF1, kaip naviko slopinamojo geno, enhancesthe iš stat3 signalizacijos slopinimo sąveika su PIAS3 [48] .Todėl galima pagrįstai manyti, kad iš ATBF1 geno AFPGC nukenksminimą, per mutacijos ar riboto išraiška, gali būti leidžiama AFPGC ląstelių gaminti AFP baltymų ir overexpres stat3. Norėdami išsiaiškinti, kokie veiksniai dalyvauja AFP gamybos ir stat3 išraiškos, reikia atlikti daugiau tyrimų.

Taigi, kaip _{2O 3 gali slopinti AFPGC ląstelių linija FU97 augimą ir sukelti apoptozę. Galimos mechanizmai buvo susiję su downregulation AFP ir STAT3 ir STAT3 nukreipti prieš Apoptozė geną BCL-2 ir upregulating navikas slopinamojo geno Bax (7 pav.). Iš STAT3 išraiška AFPGC vaidina svarbų vaidmenį navikų invazijos ir prognozės. Kaip 2O 3 gali būti įmanoma naują adjuvantinis narkotikų gydymo AFPGC. Šis tyrimas suteikia teorinių pagrindą jos klinikiniam naudojimui vertą tolesnio tyrimo.}

• PLoS ONE: MicroRNA-9 slopina proliferaciją, invazija ir metastazių skrandžio vėžio ląsteles per Nukreipimas cikloniniai D1 ir Ets1
• PLoS ONE: romano Proteomika-Based Klinikiniai diagnostika technologijų Identifikuoja heterogeniškumas aktyviajame signalo perdavimo kelių skrandžio vėžio