PLoS ONE: Izražavanje AFP i STAT3 je uključen u arsen trioksid apoptozi i inhibiciju proliferacije AFP-proizvodi Želučani stanica raka

Sažetak pregled

Alfa-fetoprotein (AFP) -proizvodi od raka želuca (AFPGC), zastupan po proizvodnji AFP, ima više agresivno ponašanje nego oblik karcinoma želuca. Temeljni mehanizmi nisu dobro razumjeli. Arsen trioksid (As _{2O 3) rabi se klinički za liječenje akutna promijelocitna leukemija (APL), i ima djelovanje in vitro pregled nad nekoliko čvrstih tumorskih staničnih linija, s indukciju apoptoze i inhibiciju proliferacije premijera učinci. pretvornik signala i aktivator transkripcije 3 (STAT3) ima važnu ulogu u nastanku tumora različitih primarnih karcinoma i karcinoma stanica regulirajući mobilnog opstanak i snižavanje tumor supresorski proteini. Evo, našli smo smanjena ekspresija AFP i STAT3 nakon indukcije apoptoze kao 2O 3 u AFPGC FU97 stanica. Također, razina STAT3 ciljne onkogena bcl-2 je smanjena sa As 2O 3, a to je tumor supresor Bax povećana. Nadalje, STAT3 izraz i dubina invazije i limfnih čvorova metastaze su povezane. Preživljavanje bolesnika s karcinomom želuca bio manji kod AFP i STAT3 bračnim prekomjernom ekspresijom nego s prekomjernom ekspresijom ili samostalno. Regulacija AFP i STAT3 izraz ima važnu ulogu kao 2O 3-inducira apoptozu AFPGC stanica, što upućuje na novi mehanizam kao 2O 3-inducirane stanične apoptoze. Kao što je 2O 3 može biti moguće sredstvo za AFPGC tretman pregled}

Izvor:. Jia Y, Liu D, Xiao D, Ma X, Han S, Zheng Y, et al. (2013) Ekspresija i AFP STAT3 koji su uključeni u arsen trioksid apoptozi i inhibiciju proliferacije AFP-Producing Želučani stanica raka. PLoS ONE 8 (1): e54774. doi: 10,1371 /journal.pone.0054774 pregled

Urednik: Matias A. Avila, Sveučilište Navarra Medicinskog fakulteta i Centra za primijenjena medicinska istraživanja (CIMA), Španjolska pregled

Primljeno: 4. studenog 2012; Prihvaćeno: 14. prosinac 2012; Objavljeno: 30 siječanj 2013 pregled

Copyright: © 2013 Jia i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan od strane National Nature Science Foundation Grant u Kini (NSFC, broj 81000869 i 81272588). (Http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default166.htm.). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Alfa-fetoprotein (AFP) je glavni protein plazme proizvodi žumanjčana vreća i jetri tijekom fetalnog života. U kliničkoj praksi AFP često koristi kao tumorski biljeg hepatocelularnog karcinoma te žumančanom vrećicom tumora. Neke studije su pokazale da su i drugi tumori u ljudi također može proizvesti AFP i rak želuca bila je jedna od najčešćih [1] - [8]. AFP proizvodnju želučanog karcinoma (AFPGC) ima više agresivno ponašanje nego oblik karcinoma želuca, jer se bolest brzo napreduje i metastazira često u regionalnim limfnim čvorovima i jetre [7] - [10]. Nadalje, AFPGC je povezana s kraćim intervalom bez metastaze jetre nakon radikalne operacije, a stopa preživljavanja je znatno lošija s AFPGC nego bez proizvodnje AFP [1], [9], [10]. Dakle, AFP može biti pasivna tumor marker i aktivni stimulator rasta tumora. Snižavanje AFP izraz može biti djelotvoran pristup AFP proizvodnju rak pregled

Arsen trioksid (Kao što je _{2O 3) se uspješno koristi u liječenju leukemije [11]. - Aktivna je [13] i u nekoliko solidnih tumora, uključujući rak želuca [14]. Mehanizam djelovanja kao 2O 3 sadrži utječu aktivnosti Akt, JNK kinaza, NF-kB, glutation, kalcij signalizaciju, reaktivnih vrsta kisika (ROS) i kaspaze, kao i pro- i anti -apoptotic proteini [15] - [18]. Ne standardna kemoterapija je dostupna za AFPGC, iako su neki režimi pokazali učinkovitost u malom broju slučajeva [19] - [21]. Također, učinci i mehanizam AS 2O 3 protiv AFPGC ostaju nejasni. Pregled}

pretvornik signala i aktivator transkripcije 3 (STAT3) je uključen u oba prijenosa signala i aktivacije transkripcije i ima važnu ulogu u raznim biološkim procesima kao što su metabolizam i tumorigenezi [22], [23]. STAT3 konstitutivno aktiviran u raznim vrstama raka [24], [25]. Ciljanje STAT3 može biti djelotvoran pristup rješavanju progresije tumora. Taj STAT3 djelovanje posredovano kroz regulaciju različitih STAT3 ciljnih gena, uključujući inhibitore apoptoze i regulatora staničnog ciklusa, poput Bcl-2, MCL-1 survivina, p53, c-myc, ciklin D1 [26] - [31], i faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF) [32]. Međutim, uloga STAT3 u AFPGC slabo razumije. Pregled

Evo, ispitan je učinak kao _{2O 3 na proliferaciju i AFP i STAT3 izražavanja u AFPGC FU97 stanicama. Procijenili smo downstream događaje STAT3 signalizaciju, Bcl-2 i Bax izražavanja, istražiti moguće mehanizme kojima se temelji ovaj fenomen. Osim toga, procijenili smo ekspresiju AFP i STAT3 imunohistokemijski u ljudskim uzorcima s rakom želuca. Regulacija AFP i STAT3 izraz pridonio kao 2O 3-inducirana apoptoza i inhibiciju proliferacije AFPGC. Pregled}

materijali i postupci

Izjava Etika pregled

studija protokol je odobren od strane medicinske etike andHuman kliničkom ispitivanju odbora Centralne bolnice Jinan. Pismeni informirani pristanak koji je dobiven od svih bolesnika. Pregled

Kultura stanica i liječenje lijekovima pregled

Ljudski AFPGC stanična linija FU97 dobiven iz japanske zbirke Research Bioresources (Japan), a koji se održava u DMEM ( Invitrogen) nadopunjenom s 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS;, Invitrogen), 1% antibiotika na 37 ° C u 5% CO _{2 vlažnom zraku pregled}

_{2O 3 ( sigma) otopi se u fosfatnom puferu (PBS) na 1 mol /L u obliku otopine i pohranjena na 4 ° C. in vitro pregled uporabe, otopina razrijedi se do odgovarajuće koncentracije u mediju za rast bez FBS. Eksponencijalno rastuće stanice su tretirane s As 2O 3 kod konačne koncentracije od 1, 5 ili 10 umol /L. Kontrolne kulture su tretirane s destiliranom PBS u konačnoj koncentraciji od 0,1% u mediju za kulturu. Svi pokusi su provedeni u triplikatu. Pregled}

MTT citotoksičnosti pregled

Učinak As _{2O 3 na inhibiciju u pregled određena je rast stanica FU97 vitro mjerenjem MTT (3- [4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-difeniltetrazolij-bromid) bojiti apsorbancije živih stanica. FU97 stanice su nasađene na ploče s 96 jažica u 1,6 × 10 ^{3 stanica po jamici u 100 ul DMEM koji sadrži 10% FBS preko noći. Nakon izlaganja raznim koncentracijama As 2O 3 24, 48 i 72 sata, 20 ul (5 g /l) MTT (Sigma, St. Louis, MO) je dodana u svaku jažicu i ploče se inkubirane tijekom dodatna 4 h na 37 ° C. Formazine otopi se u 150 ul /jažici dimetil sulfoksidu (DMSO), a apsorbancija je otkriven na 490 nm. Inhibitorni postotak (%) = (1-A vrijednost u pokusnoj skupini /A vrijednosti kontrolne skupine) x 100%. 0. umol /L skupina je služila kao negativna kontrola. Pregled}}

analiza fragmentacije DNA elektroforezom Netlogu

Ukupno 10 ^{6 stanice lagano struganje od jela, dva puta isprane u hladnom PBS, i centrifugirana na 15000 rpm tijekom 10 minuta, a zatim liziraju u 200 ul lizirajućeg pufera (1 ml 1 M Tris-HCl puferu, pH 7.4, 0.2 mL 0.5 M etilendiamintetraoctene kiseline [EDTA], 0,5 mL 10% Triton X-100 ). Lizirane stanice se drži na 4 ° C tijekom 10 minuta, a supernatanti se inkubiraju s 2 uL RNA-ze A (10 mg /ml u Tris-EDTA puferu) na 50 ° C tijekom 30 min, a zatim s 2 ul proteinazom K (10 mg /mL u destiliranoj vodi) kroz 45 min na 50 ° C. Otopina se pomiješa s 5 M NaCl (20 ul) i 2-propanol (120 ul) i inkubira na 20 ° C tijekom 24 sati, zatim se centrifugira pri 15000 okretaja u minuti tijekom 20 minuta. Istaloženi DNA je otopljen u Tris-EDTA (5 ul) pufer i podvrgnu se elektroforezi s 2% -tnom agaroznom gelu i Tris-acetat-EDTA puferu na 50 V. DNA fragmentacije vizualizira s korištenjem UV transilluminator. Pregled}

Hoechst 33258 Bojanje Analiza staničnoj apoptozi pregled

stanice narasle na staklo te prekrivene,-listića su fiksirane s 4% paraformaldehidom /PBS-u tijekom 30 minuta, ispere se 15 min u 0,1% Triton X-100 /PBS i inkubirani u mraku s Hoechst 33258 (10 ug /ml) kroz 15 min. Nakon prikrivanje gaćice su isprane u PBS, pozitivne jezgre su izbrojene. Normalno jezgre i apoptoza jezgre (kondenzirana ili fragmentirani kromatina) su lako uočiti. Pregled

Kvantitativna Real-time PCR pregled

Stanice su uzgajane uz što _{2O 3 (5 umol /L ) tijekom 72 sata. Ukupna RNA je ekstrahirana korištenjem Trizol reagensa (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) i kvantificiran spektrofotometrijski. Prvog lanca cDNA pripraviti uporabom prajmera sljedećih kompletu uputa (Takara, Japan). U stvarnom vremenu kvantitativni PCR AFP, STAT3 i njegovih nizvodno gena koji su uključeni u 7300 Real-time PCR System (ABI, USA) sa Takara SYBR premiksa Ex Taq reagensa (Takara, Japan). Klice su konstruirane i ovjeren od strane Invitrogcna. Fitilj informacije u tablici 1. PCR reakcije su izvršene u triplikatu, u volumenu od 20 ul 2 min na 94 ° C za denaturiranje početno, nakon čega slijedi 30 ciklusa na 94 ° C tijekom 30 s i na 60 ° C tijekom 45 s. Gen GAPDH kontrolna vođenje korištena je kao interna kontrola. Svaki primer set bila je prvo isprobana na određivanje optimalne koncentracije, a produkti su razdvojeni na 1% -tnom agaroznom gelu da se potvrdi odgovarajuće veličine. Nakon toga, ABI krivulja disocijacije software je korišten za kontrolu za više vrsta u svakoj PCR amplifikacije. cDNA iz FU97 stanica bez As 2O 3 tretman je korišten za konstrukciju standardne krivulje za svaki gen. pregled}

Western blot analiza pregled

Stanični peleti su homogenizirani u puferu za ekstrakciju (50 mmol /L Tris-HCl, pH 6,8, 0,1% SDS, 150 umol /L NaCl, 100 mg /L fenilmetilsulfonil fluorida, 1 mg /L aprotinin, 1% NP-40 i 0.5% natrij-ortovanadat), inkubirano na 4 ° C 30 min i centrifugiran 20 min na 12 000 g /min. Ukupni protein u staničnom lizatu je mjerena uporabom Bio-Rad kolorimetrijskom priborom (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Za Western blot test, ukupni protein se odvoji na 10% SDS-PAGE i prenesen na nitroceluloznu membranu (0.45 um, Millipore, Billerica, MA, USA), koji se inkubiraju 24 h na 4 ° C s antitijelima za AFP (1 :500, R &D), Stat3 (1:1000), caspase 3 (1:500), bcl-2 (1:500) BAX (1:500) i GAPDH (1:1000, sve Cell Signalling Technology) onda peroksidaza-konjugiranog anti-miš /zečja IgG antitijela (Santa Cruz Biotechnology), nakon konačnog ispiranja. Reakcije su razvijene uz upotrebu 4-klor-1-naftol (Sigma) i H _{<2O sub> 2. Signali su detektirane uporabu hemiluminiscencija kitom (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, UK). Razina GAPDH je interni standard. pregled}

imunoanalize AFP koncentracije u supernatant Netlogu

supernatant od FU97 stanice su prikupljeni nakon tretmana sa što _{2O 3 ili negativna kontrola za 24, 48 i 72 koncentracija h.AFP u supernatantu određena je na dva mjesta immunoenzymometric testu u sustavu TOSOH AIA (Japan). Odrezani vrijednost za AFP je 10 ng /ml. Pregled}

Pacijenti

Ispitali smo podatke iz kirurških i patoloških zapisa za 24 bolesnika s AFPGC i 24 nasumično odabranih bolesnika s normalnim razinama serumskog AFP i odgovara AFPGC pacijentima želučane stadiju raka. Pacijenti su podvrgnuti operativnom resekcija Kliničke bolnice Shandong University, Kina, od siječnja 1996. do prosinca 2011. godine AFPGC pacijenata pokazalo je AFP razine povišene u serumu, ali bez popratne bolesti jetre. Histopatološka prisutnost AFP pozitivnosti potvrđena je imunohistokemijski. Kontaktirali smo svakog pacijenta za potvrdu opstanka ili datum smrti. pregled

Imunohistokem pregled

Imunohistokem uključeni korištenje biotin-streptavidin-peroksidaze s Vectastain ABC opreme (Vector Laboratories, CA, USA). Ukratko, sekcije tkiva (4 mm) dobije se iz u parafin uklopljenih uzorcima tkiva. Sekcije su deparafmizirani ksilenom praćeno dehidracijom u ocjenjuju alkoholu. Sekcije su se grije u mikrovalnom 2 min na 900 W dohvatiti antigen, a zatim su inkubirane s 0,3% 'H-sub> 2O _{2 otopina u metanolu tijekom 30 min da bi blokirale endogenu peroksidazu. Nakon 3 ispiranja s fosfatnim puferom (PBS), stakalca su inkubirana 10% normalnog konjskog seruma za blokiranje nespecifične pozadinske bojenje, zatim su inkubirane s primarnim antitijelima zeca za antigene AFP (1:100 razrjeđivanje) i anti-stat3 (1:200) u vlažnoj komori na 4 ° C preko noći. Nakon ispiranja s PBS, sekcije su inkubirane s biotiniliranim-konjskim protumišjim antitijela tijekom 30 minuta, isprane 3 puta s PBS-om i inkubirane sa streptavidin-konjugiranom peroksidazom tijekom 30 min. Sekcije su vizualizirani inkubacija s 3, otopina 3'-diaminobenzidinu (0,3% 'H-sub> 2O 2 i 0.05% 3, 3'-diaminobenzidin), uz kontrastnu boju hematoksilin. Izostavljanje primarnog antitijela bila negativna kontrola. Svaka vožnja uključuje pozitivnu kontrolu i negativnu kontrolu. Za negativnu kontrolu, primarna antitijela zamijenjen s PBS-om. Pregled}

Statistička analiza pregled

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD i analizirani korištenjem SPSS v11.5 (SPSS Inc., Chicago IL, USA). Udruga kliničko varijabli i AFP-a STAT3 izražavanja utvrđena je hi-kvadrat test, a Yate-a korekcija se primjenjuje u malom broju uzoraka. Hi-kvadrat test ili dva repa Student t pregled test korišten je za procjenu razlika između grupa. Analiza preživljavanja koji su uključeni u log-rank testa, sa Kaplan-Meier krivulje. P < 0,05 smatrana je statistički značajna pregled

Rezultati

Sprečavanje rasta i indukcija apoptoze u FU97 Stanice kao _{2O 3 pregled}

FU97 stanice su tretirane. različite koncentracije As _{2O 3 (1, 5 i 10 umol /L) na 24, 48 i 72 sata. Kao što je 2O 3 inhibiraju proliferaciju FU97 koncentracije i vremena stanice ovisno o (sl. 1). U stanicama koje su tretirane s 5 umol /L i 10 umol /L Kao 2O 3 72 sata, inhibicija rasta je bila 56.27 ± 3.91% i 73,46 ± 4,64%, respektivno. DNA fragmentacija je karakteristična značajka apoptoze procesa. Tipični DNA fragmentacije ljestve otkrivene su u FU97 stanica tretiranih s 5 umol /L i 10 umol /l kao 2O 3 (Sl. 1b). Ovdje ćemo dodatno proučiti morfološke promjene apoptoze stanice. FU97 stanice tretirane s 5 umol /L i 10 umol /l kao 2O 3 za 72 h su obojeni pomoću Hoechst 33258 i promatrati pod fluorescentnim rezultata microscope.The pokazalo je da 2O 3 inducirana FU97 stanica apoptozu na način koji ovisi o koncentraciji, kao što je naznačeno fragmentiranih i kondenzirani jezgre (Sl. 1C). Da se razjasni daljnji utjecaj kao 2O 3 na staničnoj apoptozi, caspase3 mjerena je zapadni blot.The rezultatima iz Sl. 1D jasno su pokazali da kaspaza 3 ekspresije proteina značajno povećan u FU97 cells.Therefore, As 2O 3 može inhibirati rast stanica i inducira apoptozu AFPGC FU97 stanica. Pregled}

Inhibitorski efekt kao _{2O 3 na iskazivanje AFP i STAT3 u FU97 stanicama pregled}

Kako bi se razjasnila uloga AFP i STAT3 u As _{2O 3 inducirana inhibicija proliferacije i apoptoze, učinak As 2O 3 na AFP i STAT3 izraz ispitana je pomoću kvantitativne real-time PCR i western blot. Stanice su tretirane s 1, 5 i 10 umol /L kao 2O 3 za 72 h.The mRNA i proteina AFP i STAT3 i fosforilacije STAT3 značajno podreguliran za As 2O 3. tretman na način ovisan o koncentraciji (sl. 2, sl. 7). pregled}

AFP Koncentracija povezana s rastom inhibicije apoptoze i u FU97 stanične kulture pregled

dodatno potvrđuju inhibitorni efekt Kao što je _{2O 3 na AFP, mjerili smo razinu AFP proteina u supernatant FU97 stanica. Kao što je 2O 3 mogao smanjiti AFP razine koncentracija proteina u ovisnosti o (sl. 3, sl. 7). Ovaj rezultat u dogovoru s omjerom stanični rast inhibicije (sl. 1), apoptoze FU97 stanicama (Sl. 1B, C, D), i smanjenje ekspresije mRNA AFP i STAT3 (Sl. 2A) i ekspresiju proteina AFP, STAT3 i pSTAT3 (sl. 2b). pregled}

Smanjena razina STAT3 ciljanja gena, Bcl-2 i Bax, a kao _{2O 3 tretmana u FU97 stanica pregled}

Kako bi istražili izraz STAT3 gene ciljanje, ispitali smo ekspresiju anti-apoptoze Bcl-2 i pro-apoptoze Bax u FU97 stanice tretirane kao _{2O 3. MRNA i proteina izraz Bcl-2 je regulirani kao 2O 3 tretirane stanice (Sl. 4), ali da je Bax bio regulira prema gore, što sugerira da je učinak kao 2O 3 u staničnoj apoptozi je posredovana inhibicija konstitutivno aktivirani STAT3 (Sl. 7). pregled}

Klinička obilježja od odabranih stanovnika pregled

bilo je 34 muškarac (70,8%) i 14 ženskog spola (29,2%) bolesnika, prosječne dobi od 66 godina (raspon 45-83 godina). U kliničkopatološkim karakteristike bolesnika prikazani su u tablici 2. Bilo je 48 bolesnika imalo potpune podatke praćenja i follow-up razdoblje je od 3 mjeseca do 60 mjeseci, s prosječnom periodu od 33,7 mjeseci. Ukupno vrijeme preživljenja bio je definiran kao mjeseci od datuma operacije do datuma smrti ili praćenja. Pregled

Imunohistokemijska Izražavanje STAT3 Netlogu

Budući da nemaju informacija o izrazu STAT3 u AFPGC, utvrdili smo svoj izraz imunohistokemijskom bojanjem AFPGC pacijenta tkiva. U 24 AFPGC primarne tumore, 11 je bilo pozitivno (46%) i 13 su bili negativni (54%) za STAT3 izražavanja. U 24 AFP-negativnih uzoraka želučanog raka, 8 (33%) primarni tumori bili pozitivni i 16 (67%) bili su negativni na STAT3 ekspresiju. Štoviše, unatoč relativno malog broja pacijenata s potpunim podacima, STAT3 prekomjerna ekspresija značajno je povezan s dubinom invazije i limfnih čvorova metastaze (p < 0,05). U AFP-pozitivnih i -negativno skupine (Slika 5, Tablica 2, sl . 7).

Izražavanje AFP i STAT3 povezana s lošom prognozom za rak želuca Netlogu

Prosječno vrijeme preživljavanja AFP-pozitivnih bolesnika bila je 23 mjeseci (95% interval pouzdanosti, 16-30 mjeseci ). što je znatno kraće nego u AFP-negativnih bolesnika, 53 mjeseci (95% interval pouzdanosti, 47-59 mjeseci) (P < 0,05) .The medijan vremena preživljavanja u STAT3-pozitivnih grupi je 38 mjeseci (95% interval pouzdanosti , 29-47 mjeseci), što je znatno kraće nego u STAT3-negativne grupe, 54 mjeseci (95% interval pouzdanosti, 47-61 mjeseci) (P '. 0.05, slika 6A i B, Slika 7) .Furthermore. , preživljavanje bio je manji za AFP i STAT3 dvostruko pozitivnih bolesnika nego s izrazom AFP ili STAT3 samog (p < 0.05, Slika 6C i D, Slika 7.).. U bolesnika s AFP-a STAT3 dvostrukim pozitivnim izrazu srednja vrijednost vremena preživljenja bio je 22 mjeseci (95% interval pouzdanosti 11-33 mjeseci). Za usporedbu, u bolesnika s jednim izrazom AFP ili STAT3, srednja vrijednost vremena preživljenja bio je 54 mjeseci (95% interval pouzdanosti 44-64 mjeseci) i 59 mjeseci (95% interval pouzdanosti 47-71 mjeseci). Pregled

Rasprava pregled

AFPGC je teško liječiti, uglavnom zbog sklonosti za metastaze i otpornost na konvencionalne terapije. Alternativne terapije koja se konkretno bavi ovim pitanjima hitno su potrebni. Kao što je _{2O 3 se koristi u kliničkim ispitivanjima APL godinama, i 10 mg /dan kao 2O pronađen je učinkovit u poticanju potpune remisije u bolesnika 3 s nedavno dijagnosticiran i relaps APL [ ,,,0],33]. Kao što je 2O 3 proliferacija inhibiran stanica i inducira apoptozu u hepatocelularni karcinom linije ljudskog HepG2 [34], što je dodatno podržan od strane kliničkih ispitivanja pokazuje kao 2O 3 biti učinkovit i siguran za bolesnika s uznapredovalim karcinomom primarnim jetre [35], toksičnost je bila blaga i serum AFP razina smanjuje. Stoga smo istraživali bilo kao 2O 3 i inducirane inhibicije rasta stanica i apoptozu hepatoid adenokarcinoma želuca AFPGC FU97 stanica i utvrđeno je antitumorska svojstva kao 2O 3 u AFPGC stanica.}

Mi pružamo dokaze da je kao _{2O 3 ima snažnu anti-proliferativni učinak na FU97 stanica u koncentraciji i vremenu ovisno. Nivo u plazmi arsena u kliničkom liječenju akutnog promijclocitnu leukemiju može doći do 5.5-7.3 mm [36]. U našoj studiji, svi rezultati su pokazali da je 5 umol /L Kao 2O 3 učinkovito inhibira proliferaciju i induciraju staničnu apoptozu u 72 sati. Ova doza je klinički relevantan, što sugerira da AFPGC stanice su osjetljive na što je 2O 3. Pregled}

AFPGC, kao što je prikazano u proizvodnji AFP, pokazuju veću proliferativne aktivnosti, slabije apoptozu i bogatiji neovaskularizacije nego AFP-negativnih želučanog karcinoma. S druge strane, visoke razine AFP u potpuno razvijene hepatocarcinoma ili u serumu domaćina udruženo s agresivnim ponašanjem, a povećana anaplazija [37], [38]. Studije AFP obaranje po siRNA pronađeno inhibira proliferaciju stanica u hepatoma [39]. Dakle, AFP može funkcionirati u temeljni korak u napredovanju AFP-pozitivnog raka. Silazni AFP izražavanja može predstavljati relevantnu terapijsku strategiju. Otkrili smo da je kao _{2O 3 može smanjiti regulaciju AFP mRNA i proteina. Također, regulacija AFP AS 2O 3 može inhibirati proliferaciju stanica i inducirati staničnu apoptozu u AFPGC FU97 stanica. Štoviše, AFP sekrecije kao 3 tretirane-2O stanice je dozi i vremenu u ovisnosti o smanjila u ostatku. Silazni AFP izražavanja može pridonijeti kao 2O 3-inducirana inhibicija rasta stanica i apoptoze. Dakle, ti podaci ukazuju da AFP izraz regulirani u odgovoru na As 2O 3 liječenja. AFP može igrati važnu ulogu u proliferaciji i apoptoze AFPGC. Pregled}

Osim što je točka u kojoj se za brojne onkogena signalnih putova, STAT3 također sudjeluje u rastu stanica i opstanak. U leukemije, As _{2O 3 aktivira brojne unutarstanične puteva prijenosa signala, što je rezultiralo u indukciju apoptoze [40]. Kao 2O 3 inhibicije STAT3, prije inhibiciju stanične proliferacije, opisana je u različitim stanicama mijeloma [41]. Također, kao i 2O 3 inhibira protein tirozin kinaze, a time posredno smanjuje aktivaciju STAT proteina [42] .Stoga, regulacija od STAT3 je smatra jednom od mehanizama djelovanja kao 2O 3 u akutnoj promijclocitnu leukemiju (APL) Mi naći STAT3 aktivirati u AFPGC stanicama, kao i 2O 3 može smanjiti regulaciju ekspresije STAT3 mRNA i STAT3 i pSTAT3 ekspresije proteina. Posebno, regulirani izraz STAT3 i pSTAT3 je u skladu s regulirani izrazom AFP AS 2O 3. STAT3 može biti inhibirana nekim faktorom tijekom aktivacije u odgovoru na što je 2O 3. u AFPGC. Bez obzira od mogućih mehanizama uključenih u regulaciju STAT3, visoka AFP izraz u AFPGC moglo imati važne implikacije. Prethodna istraživanja su također pokazala da je AFP može dimerizacije s drugim proteinima, kao što su stanične receptore (na primjer, retinoična receptora), faktora transkripcije i kaspaze, od kojih svi mogu potiču rast tumorskih stanica [43], [44]. To je, pak, dovelo je do nagađanja da bi mogao AFP dimerizacije s faktora transkripcije STAT3 za stimulaciju rasta AFPGC. Potrebni su dodatni istraživanja regulacije STAT3 izraza vezanih uz AFP. pregled}

STAT3 mogu potaknuti staničnu apoptozu transcriptionally snižavanje Bcl-2 izraza [45]. Bcl-2 je uzvodno efektorska molekula u putu apoptoze, a potentni supresor apoptoze. To može oligomerize Bax, koji je potom depolarizira mitohondrijsku membranski potencijal za oslobađanje citokrom c i inducira apoptozu [46]. Omjer Bcl-2 u Bax važno je za određivanje hoće li stanice apoptozu ili preživljavanje. Našli smo je smanjena ekspresija bcl-2 zajedno s blokiranog STAT3 izraza sa što _{2O 3 tretmana u AFPGC stanicama. Nasuprot tome, ekspresija Bax povećana. Zajedno s nalazima u drugim staničnim sustavima, gdje je nađeno inhibirani nivo STAT3 smanjiti Bcl-2 ekspresiju i indukciju apoptoze [45] je kao 2O 3-inducirani efekti našli smo mogli biti posredovani inhibicijom konstitutivno aktiviran STAT3. pregled}

Kako bi dodatno pokazali da li STAT3 igra ključnu ulogu u AFPGC, ispitali smo AFPGC pacijenata u smislu STAT3 izražavanja. STAT3 pozitivnost u AFP-pozitivnih tumora bio je 46%, au AFP-negativnih tumora za 33%. Bolesnici s AFPGC imali višu stopu STAT3 izražavanja, iako ne možda značajna zbog malog broja pacijenata. Međutim, STAT3 pozitivna ekspresija bila povezana s tumorskom tkivu, dubini invazije i limfnih čvorova metastaza u AFPGC. Klinički, bolesnici s AFPGC imaju lošu prognozu [1], [9], [10]. Potvrdili smo da je prognoza bila lošija za pacijente sa nego bez AFP koje su odgovarale stadiju raka. Nadalje, opstanak bolesnika s obje AFP i STAT3 pozitivnosti bila je značajno lošija od one sa samim AFP ili STAT3 pozitivnosti. Dakle, u ovom specifičnom tipu karcinoma želuca, STAT3 čini se da ima važnu ulogu u preživljavanju stanica i proliferacije. STAT3 izraz u AFPGC može objasniti klinički agresivnog ponašanja AFPGC i STAT3 ekspresija može biti koristan pokazatelj napredovanja, ako je ovjeren od strane opsežnih studija dokazano u većim skupinama. Silazni AFP i STAT3 izražavanja mogu predstavljati relevantnu terapijsku strategiju u AFPGC. Što se tiče odnosa između AFP proizvodnje i STAT3 izražavanja, ne postoji dostupna izvješće opisuje temeljne mehanizme za date.It je izvijestio da je AFP izraz u raka želuca je zbog nedostatka faktora transkripcije ATBF1 [47]. Osim toga, ATBF1, kao supresor gena tumora, enhancesthe suzbijanje STAT3 signalizacije po interakciji s PIAS3 [48] .Stoga, razumno je uzeti u obzir da je inaktivaciju gena ATBF1 u AFPGC putem mutacije ili smanjene ekspresije, može se dopustiti AFPGC stanice za proizvodnju AFP proteina i overexpres STAT3. Da pojasnimo čimbenika koji su uključeni u AFP proizvodnje i STAT3 izražavanja, daljnje istraživanje je potrebno. Pregled

Na kraju, Kao _{2O 3 može spriječiti AFPGC stanične linije FU97 rasta i inducira apoptozu. Mogući mehanizmi odnosi na silazni AFP i STAT3 i STAT3 ciljanje anti-apoptotički bcl-2 genu, a regulirajući gen supresor tumora Bax (Sl. 7). Ekspresija STAT3 u AFPGC igra važnu ulogu u tumorskoj invaziji i prognoze. Kao što je 2O 3 može biti mogući novi pomoćno sredstvo lijek u liječenju AFPGC. Ova studija pruža neke teorijske osnove za kliničku uporabu dostojan daljnje proučavanje. Pregled}

• PLoS ONE: mikrornk-9 Smanjuje proliferaciju, invaziju i metastaziranje želučane stanica raka kroz ciljanje Ciklin D1 i Ets1
• PLoS ONE: roman Proteomika-Based Klinička dijagnostika Tehnologija Identificira Heterogenost u aktiviranim signalnih putova u želučanom Cancers