Plos ONE: Visoka Raznolikost Vaca cagA Helicobacter pylori genotipov pri bolnikih z in brez želodca raka

Povzetek

Ozadje

Helicobacter pylori
je povezana s kronično gastritis, peptične razjede in raka želodca. Cilj te raziskave je bil oceniti topografske porazdelitev H. pylori
v želodcu, kot tudi Vaca
in cagA
genotipov pri bolnikih z ali brez raka želodca.

Metodologija /Glavne ugotovitve

Tri želodčne biopsije, od vnaprej določenih območjih, so ocenili pri 16 bolnikih z rakom želodca in 14 bolnikov z dispeptičnimi simptomi. Pri bolnikih z rakom, so bile dodatne biopsije osebki pridobljeni iz tumorskih centrov in marže; med temi vzorci, prisotnost H. pylori Vaca
in cagA
genotipi so ovrednotili. Pozitivna H. pylori
je bila 38% in 26% v biopsije, pridobljenih iz želodca raka in nerakave skupini, ki je ( p
= 0,008), in 36% v tumorskih straneh. Pri bolnikih z rakom, smo ugotovili, prednostno razporeditev H. pylori
v fundusa in korpusa, medtem ko v skupini brez raka, je porazdelitev enakomerna ( p
= 0,003). Večina biopsije so hkrati cagA
gen-pozitivnih in -negativno. Fundusa in korpus pokazali višjo stopnjo pozitivni pogled za cagA
gen v skupini premoženjskih raka ( p
= 0,036). Zmes cagA
velikosti genov je tudi bistveno bolj pogoste v tej skupini ( p
= 0,003). Dvaindevetdeset odstotkov vseh zadevah, ki so pokazali več kot eno Váca
genov genotip; s1b in m1 Váca
genotipi so pretežno nahaja v želodčni skupini raka. Najvišja Váca
-genotype signal zaporedje raznolikost je bilo v korpusu in 5 cm od tumorskih robu.

Zaključek /Pomen

najvišja H. pylori
kolonizacija raznolikost, skupaj s cagA
gena, je bilo pretežno v fundusa in korpusa bolnikov z rakom želodca. Genotip raznolikost zaznane v sistematično celih organov in tumorja vzorčenja je bil izjemen. Ugotovili smo, da ni dovolj dokazov za podporo združenje enega izolata z določeno boleznijo, zaradi multistrain narave H. pylori
okužba je prikazano v tem delu

Navedba. López-Vidal Y, Ponce-de-León S, Castillo-Rojas G, Barreto-Zúñiga R, Torre-Delgadillo A (2008) Visoka Raznolikost Vaca
in cagA Helicobacter pylori
genotipi pri bolnikih z in brez želodca raka. PLoS ONE 3 (12): e3849. doi: 10,1371 /journal.pone.0003849

Urednik: Debbie Fox, Raziskovalni inštitut za otroke v otroški bolnišnici v New Orleansu, Združene države Amerike

Prejeto: 12. maj 2008; Sprejeto: 10. november, 2008; Objavljeno: 3. december 2008

Copyright: © 2008 López-Vidal et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta raziskave je financirala nepovratna DGAPA PAPIIT-IN207302 iz Universidad Nacional Autónoma de México (unam), UC-MEXUS in CONACyT-México 47749-M. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Helicobacter pylori
je želodčni bolezni, ki okuži skoraj 50% svetovnega prebivalstva [1]. Šteje se, glavni etiološke zastopnik z aktivnim kroničnim gastritisom in je splošno sprejeta kot primarni vzrok peptičnega; je tudi znan dejavnik tveganja za raka želodca [2]. Želodca razvoj raka je bilo dokazano, da pokrivajo več desetletij, se začne zaporedno s H. pylori
okužbe in razvoj z aktivnim kroničnim gastritisom [3]. Žleznih atrofija in črevesne metaplazijo sčasoma pojavijo v podskupini bolnikov in preneha z rakom želodca [4]. H. pylori
okužba je bilo predlagano, da vodi v povečano relativno tveganje (RR) -na reda 4-9-krat, za razvoj predrakave želodčne pogoje, še posebej, če pride do okužbe v otroštvu [5]. Glede na to, da je le manjšina H. pylori
okuženimi posameznik razvije to bolezen, se smatra, da je razvoj bolezni odvisna od izražanja specifičnih bakterijskih virulentnih genov, na primer cagA
in Váca
[6] , ki sta zelo izražene glede na stanje bolezni gostitelja [7], [8]. Združenja med želodca topografiji, genotipa raznolikost H. pylori Vaca
in cagA
geni in razvoj raka želodca še vedno sporna. Namen sedanje raziskave je bil oceniti porazdelitev Vaca
in cagA
genotipov H. pylori
skupaj želodca pri bolnikih z ali brez raka želodca

Hipoteza:. višja frekvenca H. pylori
je povezan z zgodnjo stopnjo raka želodca.

Metode

Pacienti iz za endoskopsko študije zaradi suma raka ali dispeptičnimi simptomi so bili povabljeni k sodelovanju v presečno prospektivne študije . so bili vključeni vsi bolniki z rakom, kot tudi tiste z ne-razjed dispepsijo in /ali gastroezofagealne refluksne. Merila za izključitev vključena nepravilnosti koagulacijo, nesteroidno protivnetno (NSAID) vnos drog v zadnjih 72 urah, portalno hipertenzijo in prisotnost limfoma v histološko študije.

Vsi bolniki so podpisali pisno obveščeni obrazec o soglasju pred sodelovanjem v raziskavi. Protokol študije je odobril revizijski odbor institucionalne na Instituto Nacional de Ciencias Médicas y NUTRICION Salvador Zubirán (INCMNSZ), registrsko številko CIBH-1081.

Zgornja gastrointestinalne endoskopije je bila izvedena v skladu s standardno tehniko. Sistematično shema biopsija vzorčenje smo uporabili kot sledi: od vsakega pacienta smo tri želodčne biopsije pridobljeni iz vsakega od štirih želodčnih mest (antruma, kotno porcij, corpus in fundus). Iz bolnikov z rakom želodca so dodatni biopsije osebki pridobljeni iz središča in robu tumorja in na razdalji vsaj 2-5 cm od robu tumorjev.

Vsi patološki vzorci iz bolnikov z rakom želodca so bili ocenjeni z enim samim izkušeni patolog in razvrščeni glede na klasifikacijo Lauren kot difuzni, črevesja ali mešanega tipa [9]. Opis napredovalega raka želodca, je temeljila na razvrstitvi BORRMANN [10]. Morfološke zgodnjega raka želodca podvrste so bile razvrščene v skladu s smernicami japonski endoskopija družbe [11], [12].

H. pylori
je kultivirani, ki blati biopsijo primerkov na površini agar plošč konjske krvi (10% konjske krvi v Casman agar bazo [BBL Microbiology sistemi, Cockeysville, MD, ZDA]) [8].

kromosomskih DNA je bila vzeta [13], in H. pylori 16S rRNA
in cagA
gen smo pomnožili s PCR, kot je prej opisano [7]. Váca
signalna sekvenca in mid-okolica so vnesli specifičnega tipa alelna PCR, kot je že opisal Morales et al.
[8].

cagA
variabilna regija pomnožitev gena. cagA
3 'ponavljajo regije H. pylori
sevi študirali v tej preiskavi so bili razvrščeni glede na njihovo dolžino (zaradi prisotnosti spremenljivega števila ponavljajočih se zaporedij v regiji 3 'gena). V pomnoževanja izdelki, pridobljeni, so razvrščene po velikosti v eno od treh skupin: kratka (906 točk); medij (1008 bp), in dolgo (1110 bp), po Karita et al
. [14]. Pomnoževanje smo izvedli ob uporabi primerjev cagRV17-F 5'-acc CTG GTC GGT AAT GGA TTA TCT-3 'in cag22-R 5'-TTA aga TTT TTG GAA acc acc ttt t-3', ki sta oblikovana na osnovi sekvence naložena od Genbank uporabo Alig (znanstvena in izobraževalna programska oprema) in ClustalW (BCM iskanje zaganjalnik, poravnava večih zaporedij).

Podatki so bili analizirani za opisne namene uporabo relativnih frekvenc in računskih sredstev (standardni odklon [SD]), kakor se zdi primerno. Primerjave med skupinami so bile izvedene s χ ^{2 analiza, kot tudi z Fisher-Freeman-Halton točno test za nepredvidljivih tabel. Želodca skupina raka je bila v primerjavi z bolniki, ki nimajo ulkusa dispepsijo in /ali gastroezofagealnega refluksa. Bolniki z rakom bili razdeljeni že v TNM stopnji 0, I ali II in napredne za III ali IV. Vsebnost alfa je bil določen na 0,05. Glede na to, da so bili opravljeni več sočasnih primerjav, je bila uvedena nominalno popravek alfa-vrednost v skladu s postopkom Bonferroni. Zato smo šteti združenja s P
vrednostmi med 0,05 in 0,01 kot osumljenca. Nasprotno, rezultati na p
so v obravnavanem ≤0.0063 raven razmeroma velik. Vrednosti med 0,01 in 0.0063 so bili šteti kot zanemarljiv. Vse analize so bile opravljene z uporabo stata statistične programske opreme (intercoolerja stata 7.0 za Windows 98/95 /NT paketa, 2002) in Stat-xact (v. 4.0.1., Cytel Software Corp., 1999).}

Rezultati

dvaintrideset bolniki so bili vključeni v to študijo. Na podlagi endoskopski diagnostiki, 18 so razvrščeni v želodcu skupino raka in 14 v skupini brez raka. Zaradi histološki dokaz želodca limfoma pa dva bolnika v želodcu skupini raka je treba izključiti, tako da 16 ljudi v tej skupini. Povprečna starost bolnikov v rakom želodca in dispeptičnimi skupinah je bila 57,6 ± 16,7 let (56% moških) in 47,2 ± 13,3 let (14% moški) oz. Deset bolnikov (63%) prikaže razpršeno tumor v skladu s klasifikacijo Lauren. Pet bolnikov je imelo zgodnje želodčni rak (tipa I, tri, II, on; IIB, enega) in 11 imela napredno želodčnega raka (tip IIIA, štiri, IIIB, tri; IV, štiri), v skladu z japonsko Research Society for želodca raka smernice in klasifikacija BORRMANN.

V naših 411 biopsijo vzorcev, H. pylori
ga je opredelila niti kulture ali PCR v 38% (78/203) vzorcev biopsijo iz želodca skupine raka, 26% (54/208) iz skupine premoženjskih raka ( p
= 0,008) in 36% (40/110) od tumorskih območij (glej tabeli 1 in 2). H. pylori
pokazali diferenčni topografsko porazdelitev pri bolnikih z rakom želodca, z višjo stopnjo pozitivnosti v fundusa in korpusa ( p
= 0,003), tabela 1. skupina ni rak ni pokazala diferencialni topografskih porazdelitev . Nekoliko višje pozitivnost na H. pylori
je bilo ugotovljeno v tumorskih mestih po kulturi ali na robu tumorskih s PCR; Vendar se ti povečani pozitivnosti niso bile statistično značilne (tabela 2). Ni bilo pomembno povezanost med H. pylori
stopnja pozitivnosti in TNM stopnja raka (zgodaj v primerjavi z zamudo).

Ugotovili smo, H. pylori-cagA
pozitivnost v 72% želodčnih vzorcev iz želodca skupine raka, 73% skupini premoženjskih raka ( p
= NS) (tabela 3), in 83% tumorja strani ( p
= ni pomemben [NS]). H. pylori-cagA
topografske porazdelitev ni bila statistično signifikantna v želodčni rak skupino, medtem ko je skupina, ki niso rak pokazali višjo stopnjo pozitivnosti v fundusa in korpusa; Vendar pa je pomen te ugotovitve ni vprašljiva ( p
= 0,036) (tabela 3). Še enkrat, v tumorskih strani smo ugotovili, ni pomembno distribucijsko vzorec za cagA
pozitivnosti frakcije, niti ni bilo razlike med bolniki z zgodnjim in napredovalega raka želodca.

Eighty-one H. pylori
sevi so raziskovali (80 cagA
+), vključno z 46 sevov iz bolnikov z rakom želodca in 35 pri bolnikih brez raka. dva cagA
genov velikosti smo dobili le od 80 H. Študiral pylori
linije; nobeden od več cagA
sekvence so bile ugotovljene. V obeh skupinah je krajši cagA
je najpogosteje zazna. Rezultati so povzeti v tabeli 4. Zanimivo je, da sta cagA
velikosti smo pomnožili od 12 (15%) sevov, kar kaže, da so bili ti bolniki sočasno okuženi z več H. pylori
sevi. Ta ugotovitev je bila pridobljena pogosteje v skupini brez raka bolnikov (28,6%), kot v želodčni skupini raka (4,4%) ( p
= 0,003).

Prevladujoča signalna sekvenca genotip pri bolnikih z rakom želodca, ki so prisotne v 39% v skupini, je s1b. Kombinacija s1b /s2 je bila prisotna v 20% skupine in s2 je bil prisoten v 12%. Šestnajst odstotkov bolnikov z rakom želodca imel nedoločljiva signalno sekvenco (S0). Ni bilo statistično značilno distribucijo Váca
genotipov po trebuhu ( p
= NS) (glej sliko 1). Najpogostejši Vaca
genotipom v skupini brez raka je s1b, ki je bila prisotna v 59% v skupini, ki ji sledi kombinacijo s1a /s1b v 11%, s1a /s1b /s2 pri 7%, in nedoločljiva zaporedje signalov v 9% ( p
= 0,06), slika 1. Analiza topografske distribucije genotipom je pokazala, da je genotip s1b za je Vaca
prevladujejo na vseh območjih (Fundus, korpusa , kotno odsek, in antruma) želodca v obeh skupinah raziskovali (slika S1). Našli smo drugačen in malo pomembne razlike v vzorcih razširjenosti teh genotipov med skupinami z rakom in nerakave ( p
= 0,01). Tako korpus in fundus na želodčni skupine raka pokazal večjo raznolikost signala zaporedji genotipov, kot je to storilo korpus v skupini brez raka (Slika S1).

Najpogostejša Vaca
genotipov za vsako od tumorskih mest (center in stopnja tumorja, in vsaj 2-5 cm od robu tumorskih) sta s1b in s2, ki je bila prisotna v 19%; s1a /s1b in s1b /s2 bila vsaka prisotna v 17%, in s1a /s1b /2, s1a /s2, in s0 bili prisotni na 8%. Ni bilo signifikantne povezave med bližino na genotip in tumor mestu (slika 2). Porazdelitev te genotipa v tumorskih in anatomskih mestih pri bolnikih z rakom ni bila statistično značilna ( p
= 0,06) (sliki 1 in 2). Pomemben združenje ( p
= 0,02) je bila ugotovljena med genotipom in tumorja fazi: s1a /s1b, s1a /s1b /s2, in s1b /s2 genotipi so prevladovale na začetku želodca skupine raka, medtem ko s1b, s2 in s1a /s2 genotipi so bile razmeroma bogat v naprednih želodca skupine raka (slika 3).

najbolj pogosta sredi regija genotip pri bolnikih z rakom želodca je m1, ki je bil prisoten pri 44% bolnikov , sledijo m0 (untypeable genotip) v 26%, m2 v 21%, in kombinacijo m1 /m2 v 10% (slika 1). V skupini premoženjskih raka, najpogostejši Váca
genotip je bil M1, ki je bila prisotna v 52% bolnikov, ki ji sledi m0 v 32%, skupaj z m1 /m2 v 11%, in m2 v 5%; je bil ločen vzorec porazdelitve teh genotipov z vprašljivo raven pomembnosti ( p
= 0,03) (slika 1). Analiza topografske porazdelitvijo po anatomskih con sredi regije genotipa pokazala, da je m1 genotip pretežno (50%) v kotne odseka, pri čemer ostane v fundusa (48%) in korpusa (42%). M0 genotip je pretežno v antruma (39%) v želodčni skupini raka (slika S1). V skupini brez raka, je m1 genotip najpogostejši v fundusa (77%); 56% je bilo v korpusu, in 43% je bilo v antruma. M0 genotip je bila odkrita v kotni del (62%), brez statistično pomembne razlike med študijskih skupinah (Slika S1). Skoraj enakomerna porazdelitev različnih genotipov je bilo v tumorskih straneh (slika 2). Ni bilo nobene razlike med anatomskih območja in tumorskih mestih pri bolnikih z rakom želodca (slika 1 in 2) ali med začetnih in naprednih tumorjev (slika 3).

Tabela 5 prikazuje analizo ločenega vaca
genotipi nahaja znotraj vsakega posameznika, za katerega smo proučevali več kot eno biopsijo. Dvaindevetdeset odstotkov (12/13) bolnikov z rakom je imelo več kot en genotip sedanje. Podobna ugotovitev so opazili pri skupini brez raka. Trije predmeti v skupini premoženjskih raka so bile ves čas pozitivno vpliva na cagA
gena, in še trije hkrati imel obe vrsti (pozitivne in negativne). V skupini raka, je bilo šest posameznikov pozitiven cagA
in sedem za obe vrsti. Ni predmeti so bili vedno negativni tega gena. Slika 4 prikazuje število biopsij na posameznika in število ločenih Váca
gen signala segment (SS) genotipov. Najmanjše število genotipov pri bolnikih z 10 ali več biopsije bila dva, najvišja je bila pet

Pogovor

Ta študija je v štirih glavnih ugotovitev:. Prvi, H. pylori
je enakomerno porazdeljena po želodca pri bolnikih, ki imajo le dispepsije simptome; drugič, H. pylori
ima prednost fundusa in korpusa pri bolnikih z rakom želodca; tretjič, pri bolnikih z dispeptičnimi simptomi, H. pylori-cagA
ima prednostno razporejanje v fundusa in korpusa in je visoka frekvenca mešani cagA
velikosti; Četrti je bil s1b genotip prevladujejo v obeh skupinah, in s1a genotip je bil prisoten le v dispepsije skupini.

Visoka H. pylori
pozitivnosti v fundusa bolnikov z rakom želodca je bila morda zaradi svoje bližine korpusa, na območju, ki je kolonizirali v H. pylori
inducirano gastritis. Corpus-prevladuje atrofija, ali izgubo specializiranih žleznega tipov celic, kot parietalnih in glavnih celic, se zdi, da je ključnega pomena za napredovanje raka [15], in je verjetno, da je fundus vključena bodisi pred ali po korpus se že ukvarja z rak.

A relativno visoka pozitivnost za H. pylori
je bilo na tumorja mestu kljub prejšnjih izjav, ki H. pylori
ne more razviti v atrophied sluznici in da je črevesna metaplazijo neugodno milje [16]. Tang et al.
, Pa je predlagal, da H. pylori lahko
preživi v želodčni epitela v prisotnosti rakotvoren lezij [17]. Ugotovljeno je bilo tudi, razmišljal, da lahko nekateri virulence dejavniki igrajo pomembno vlogo pri vztrajanju H. pylori
v želodčni sluznici [18].

V tej raziskavi smo ugotovili, da je H. pylori
kaže podobno kolonizacijo anatomskih regij v želodcu in tumorja mestu. H. pylori
pozitivnosti v zgodnjih in naprednih želodčne skupin raka je bilo ugotovljeno tudi, da je zelo podobna; Tang et al.
Pa upoštevati rezultate inverznih [17]. Prepričani smo, da je razlika med tema dvema študij zaradi številnih biopsije proučevanih pri vsakem bolniku; smo pokazali, da sistematično vzorčenje spreminja združenje H. pylori
z boleznijo.

Višja razširjenost H. pylori cagA
gen-pozitivnost je bilo v korpusu in fundusa bolnikov z dispepsijo. Prej, Semino-Mora et al
. so pokazali, da je ta vzorec ni prisotna pri bolnikih z rakom želodca [19], čeprav smo uporabili drugačno cagA
ojačevanja fragmenta v tem delu. Želodca neoplastične transformacije je povzročil in trajna, vsaj delno, s in vivo
znotrajcelični cagA
izraz; Ta učinek bi lahko imela pomembno vlogo ne samo v zgodnjem želodca rakotvornosti, ampak na podlagi naših podatkov, lahko pride tudi kasneje v tem procesu [19]. Opazili smo, da 15% sevov imela mešanico cagA
3 "ponovi velikosti regijo, kar kaže na prisotnost sočasno okužbo z multiplo H. pylori
sevov, predvsem v skupini premoženjskih raka. Kidd et al
dobimo različne rezultate.; medtem ko ti avtorji raziskali večje število bolnikov [20], smo raziskali večje število želodčnih biopsije katerega vključenih več posebnih lokacije v želodcu.

Smo že ugotovili prisotnost genotipov raznolikosti v peptične razjede korpusa [8]. Ta raznolikost je predlagala, da se odražajo sinergijskih ukrepov, ki so povezane s tem postopkom [21]. Prevladujoča Váca
genotip signalna sekvenca odkrili v obeh skupinah je bilo s1b, v dogovoru z našim predhodnim poročilom [22].

pomembne ugotovitve naše raziskave kažejo, da je topografski distribucija Váca
signal sekvenca je s1b genotip je pogosto povezano s skupino brez raka in s1b /s2 kombinacijo oziroma s2 genotipov najdemo zgolj v želodčni skupini raka. Ni prejšnje študije o osebah z rakom želodca, ki so obravnavala štiri tumorske območij z ocenjenimi v tem delu. S1c genotip je bilo ugotovljeno, da je najbolj razširjena genotip v Aziji; Vendar pa njegova povezava z rakom želodca se zmanjšuje [22], [23]. Raznolikost Váca
genotipa H. pylori
je mogoče pojasniti z modelom koevolucija [21].

Glede Váca
mid-regija alelov smo ugotovili, da sta m1 in m2 genotipov v obeh proučevanih skupin, z m1 genotip, da je najbolj pogost v vnaprej določenih območjih ocenjevanega želodcu [8].

v obeh proučevanih skupin, smo ugotovili, H. pylori
sevi, ki so bili untypeable za signal zaporedju in srednje regije alelov zaradi znatne razlike v Váca
gena [8], [24]. Dosledno je pokazala, da je cagA
- in je Váca
-allele raznolikost večja v tumorju, kar kaže, da je H. pylori
lahko ostanejo v tumorju brez obremenitve okolja.

genotipa raznovrstnost opaziti po sistematičnih celih organov in tumorjev v tem delu je bil izjemen. Glavni praktične posledice te ugotovitve je treba iskati podobno izčrpen sistem vzorčenja, da bi se povezali dejavnik patogenosti z boleznijo. Ugotovili smo, da je zveza enotnega izolata, pridobljen iz enega samega biopsijo, z boleznijo, ne zadostuje zaradi multistrain narave H. pylori
okužba dokazana v tem delu.

Omejitve te študije se nanašajo na njeno opazovalne narave in njegovem oblikovanju prečnega prereza. Ne moremo izključiti možnosti, da gre za zavajajoče spremenljivka povezana tako s prisotnostjo Helicobacter pylori
okužbe in raka ali dispepsije statusa. Poleg tega pomanjkanje vzdolžno spremljanju nam preprečuje, da potrjuje zaporedno videz dogodkov, kot so razvoj raka in začetno okužbo z seva (-ov) za Helicobacter pylori
, ki so bili na koncu zazna.

Konflikt izjavo interes

avtorji izjavi, ni navzkrižja interesov.

Podpora Informacije
sliki S1. .
Topografski signalna sekvenca in srednja regija distribucija alel gena Vaca pri bolnikih z ali brez raka želodca
doi: 10,1371 /journal.pone.0003849.s001
(3,81 MB TIF)

Priznanja

zahvaljujemo Rosa Isabel Amieva-Fernández, Ana Karina Martínez-Díaz, Leonor Jacobo-Albavera in Fernando Vargas-Romero za odlično tehnično pomoč pri pomnoževanju DNA.

• Plos ONE: inducirajo s hipoksijo Factor 1α Določa Rak želodca Chemosensitivity z modulacijo p53 in NF-κB
• Plos ONE: znotraj tumorskih Heterogenost HER2, FGFR2, cMet in ATM želodčnega raka: Optimizacija osebno zdravstveno nego z inovativno patološko in statistični Analysis