PLoS ONE: Vaskularna CXCR4 Expression - roman antiangiogensku Target u rak želuca?

Sažetak pregled

Pozadina pregled

G-protein vezanih receptora (GPCR) su kandidati za premijera nove prevencije i liječenja raka strategija. Tražili smo različito izražene GPCR u čvoru pozitivnih želučanog karcinoma. pregled

Metodologija /glavne nalaze

Diferencijalni izraz GPCR u tri čvora pozitivnim vs. tri čvora negativne crijevne Tip želučani karcinom je analiziran gena niza tehnologija. Geni koji kandidati CXCL12 i njegov receptor su CXCR4 potvrđenu realnom vremenu reverznom transkripcijom lančane reakcije polimeraze u nezavisnog seta 37 želučane karcinoma. Prevođenje proučavana je imunohistokemijski u 347 želučanog karcinoma koriste Microarrays tkiva, kao iu 61 podudaranja metastaza u limfnim čvorovima. Ekspresija proteina je povezana s kliničkopatološkim karakteristikama bolesnika i opstanak. 52 GPCR i GPCR-vezani geni bili gore ili prema dolje regulirana u čvor pozitivan karcinoma želuca, uključujući CXCL12. Diferencijalna ekspresija CXCL12 potvrđena je RT-PCR i korelira s rastom lokalnim tumora. CXCL12 immunopositivity je negativno povezan s udaljenim metastazama i tumora razreda. Samo 17% želučanih karcinoma pokazala CXCR4 imunopozitivne tumorske stanice, koja je povezana s višim lokalne mjeri tumora. 29% želučanih karcinoma pokazala CXCR4 pozitivne tumorske kapilarama. Vaskularna CXCR4 ekspresija je značajno povezan s višom lokalnim opsegu tumora, kao i većim UICC-faze. Kada se izražava oboje, CXCL12 u stanicama tumora i CXCR4 u tumorskim kapilarama, ovi tumori su također vrlo značajno povezana s višim T- i UICC-faze. Tri metastaze otkrila vaskularne CXCR4 izraz dok tumorske stanice u potpunosti nedostajalo CXCR4 u svim slučajevima. Izraz CXCL12 i CXCR4 imao utjecaja na preživljavanje pacijenta. Pregled

Zaključci /Značaj pregled

Naši rezultati potkrepljuju značaj GPCR o biologiji želučanog karcinoma i pružiti dokaze da CXCL12-CXCR4 put može biti roman obećavajući antiangiogeno meta za liječenje želučanih karcinoma pregled

Izvor. Ingold B, Simon E Ungethüm u, Kuban RJ, Müller BM, Lupp A, et al. (2010) Vascular CXCR4 Expression - roman antiangiogensku Target u rak želuca? PLoS ONE 5 (4): e10087. doi: 10,1371 /journal.pone.0010087 pregled

Urednica: Irena Oi Lin Ng, Sveučilište u Hong Kong, Hong Kong pregled

Primljeno: 22. rujna 2009; Prihvaćeno: 16 ožujka 2010; Objavljeno: 8. travnja 2010 pregled

Copyright: © 2010 Ingold i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija bio podržan od dotacija iz Berliner Krebshilfe (Berlin Canceraid). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je jedan od najčešćih oblika raka u svijetu, na četvrtom ukupne učestalosti i odgovorna za više od 650.000 smrtnih slučajeva godišnje [1]. Smrtnost od karcinoma želuca je odlično samo od raka pluća. Rani karcinom želuca često izaziva nikakve posebne simptome. Nedostatak ranih simptoma odgađa dijagnozu. Prema tome, 80-90% zapadnih pacijenata s rakom želuca sadašnjosti s naprednim tumora i kad su lokalne ili udaljene metastaze već [1] dogodila. Stanje limfnih čvorova, pogotovo omjer metastaza-pozitivnih /metastaze negativnim limfnim čvorovima, je najjači prognostički čimbenik karcinoma želuca [2]. Stopa preživljavanja od 5 godina za pacijente s 1-6 metastaze limfnih čvorova je 44%, a završava sa samo 11% u bolesnika sa više od 15 pozitivnih limfnih čvorova. Djelomična ili potpuna gastrektomije, u kombinaciji s adjuvantne radioterapije i /ili kemoterapije, kako je navedeno, obećava potpuni lijek samo u bolesnika s ranom stadiju bolesti. U metastatskom bolešću, trenutno se koristi i radioterapeutska kemoterapijske režime lošu djelotvornost i liječenju rezistentne progresije bolesti dovodi do smrti unutar nekoliko [3] mjeseca. Do danas, ne postoji određeni prediktivni biljeg kao HER2 u karcinom dojke, EGFR u ne malom stanice karcinoma pluća ili K-RAS u kolorektalnog karcinoma, što omogućava više individualizirani terapijsku strategiju. Zato, novi terapeutski pristupi molekularni ciljani potrebni.

G-protein-vezani receptori (GPCRs), predstavlja čini najveći obitelji na površini stanice molekula, koje prosljeđuju signal putem GTP proteina (G-protein ) -initiated drugi kaskade glasnik u stanicu. [4] GPCR regulirani su mnogi agonista, ali svi dijele karakterističan jezgru sastavljenu od sedam transmembranski a-uzvojnice, koji su povezani kroz tri intra- i tri izvanstanične petlje. Ti receptori kontroliraju ključne fiziološke funkcije, uključujući i neurotransmisiju, hormona i enzima puštanje iz endokrinih i egzokrine žlijezde, imunoloških odgovora, kontrakciju mišića i regulaciju krvnog tlaka u ime nekoliko. [4] pregled

malignih stanica često oteti normalnim fiziološkim funkcije GPCR preživjeti, razmnožavati autonomno i izbjeći imunološki sustav. Nadalje GPCR imaju središnju ulogu u tumorskoj angiogenezi induciranoj te tumorske metastaze. Mnogim solidnim tumorima, oslanjaju na GPCR da izazove angiogeni odgovor ili djeluje na endotelne i strome komponente izravno ili kroz regulaciju otpuštanja ili djelovanja drugih angiogenih posrednika, kao što su vaskularni endotelni faktora rasta (VEGF) ili bazični faktor rasta fibroblasta (bFGF) po strome i imunološke stanice [5]. Stanice raka manipulirati GPCR za privlačenje endotelne stanice i dovode ih da napadnu tumorske mase, čime se formira nova plovila za pružanje hranjivih tvari i kisika. Mnogi karcinomi metastaziraju na određene organe, što je često uzrokovane ekspresiji od GPCR u stanicama raka - posebno kemokinskih receptora - istodobno s izdavanjem kemokina iz sekundarnih organa [6] pregled

za primjenu lijeka, tumor slike. i biomarkeri predviđanje malignosti su aplikacije GPCR za isticanje: Radio-obilježene peptida koji se vežu na GPCR mogli imati široke aplikacije za dijagnozu raka i terapije [7]. Ligandi koji se vežu GPCR su također konjugiran na citotoksičnim sredstvima ciljati malignih stanica koje prekomjerno eksprimiraju ove receptore, dakle, smanjenje nuspojava. [8] Nadalje, GPCR može biti vrijedna biomarkeri za dijagnozu raka, kako se dokazuje studija raka prostate [9]. Pregled

Stoga, cilj (i) procjenu različito izražene GPCR u čvora negativna u odnosu čvora pozitivne crijevne tipa želučanog karcinoma strane GeneChip niz tehnika. (Ii) transkripciju gena kandidata je ovjeren od strane realnom vremenu reverznom transkripcijom lančanom reakcijom polimeraze (real-time RT-PCR). Istraživali smo prijevod i histoanatomical distribuciju kemokina CXCL12 i pripadne kemokinskih receptora CXCR4 u velikom nizu 347 uzoraka karcinoma želuca imunohistokemijski pomoću tkiva microarray-tehnologije, kao i na 61 podudaranja metastaza u limfnim čvorovima na konvencionalnim slajdova (III). korelaciji smo translacijske izraz uzoraka s obilnim skupa kliničkopatološkim karakteristika pacijenta, uključujući i preživljavanje pacijenta (iv). pregled

Rezultati

diferencijalne ekspresije gena u čvoru negativna i čvora pozitivni rak želuca tkiva

Prvo, proučili smo na diferencijalnu ekspresiju mRNA u nizu tipa 6 crijevna pacijenata oboljelih od raka želuca (3 sa 3 i bez metastaza u limfnim čvorovima) pomoću GeneChip® ljudskog genoma U133 Plus 2.0 Array iz Affymetrix koji detektira 47.000 transkripti i varijante kao i 38.500 karakteristično ljudske gene. mRNA ekstrahirana i transkribira samo iz uzoraka tkiva dobivenih od primarnih tumora. pronađen je ukupno 115 transkripata se nad- i 219 biti dolje regulirano u čvor pozitivan karcinoma želuca u usporedbi s čvora negativne želučanog karcinoma (Tablica S1). Dalje smo tražili različito izraženi GPCR. Identificirali smo 52 GPCR i GPCR-vezanih gena, koji su bili gore ili prema dolje regulira s puta faktor promjena u >. 1.5 (Tablica S2) pregled

U silico
analiza Netlogu

Nakon toga smo tražili Entrez pregled bazu u " Nacionalni centar za biotehnološke informacije (NCBI)
" za unose GPCR i GPCR-liganada i njihova pretpostavljena uloga u tumorske biologije , Značaj angiotenzin II tip 1-receptora u karcinomu želuca je prethodno potvrđena od strane naše vlastite grupe [10]. Nekoliko istraživanja je pokazalo da je izraz kemokina receptora Duffy krvnom grupom (DARC) bile obrnuto proporcionalne s učestalosti i prognozi raka prostate [11] - [13]. U životinjskom modelu karcinoma dojke ekspresija EDG2 povezana je s učestalošću plućnih metastaza [14]. FPRs posreduje učinak aneksin 1 na staničnoj pokretljivosti i invazije, koji su važni za metastatski potencijal tumorskih stanica [15]. LGR5 nedavno se pokazalo da je matična stanica marker stanica tankog crijeva i kolona i matičnih stanica određeni gubitak rezultata APC u postupno rastućim neoplazija [16]. Zajedno, ovi podaci pokazuju da je naš pristup prepoznaje GPCR i GPCR-liganada koji mogu biti uključeni u želučanom biologije raka. Što se tiče citokinskih receptora i kemokina, ekspresija kemokina CCL2 i CXCL12 su povećani u čvora pozitivnim karcinomom želuca u odnosu na nodal negativnih slučajeva (dopunska tablica S2). Budući da je CXCL12-CXCR4 os igra istaknutu ulogu u tumourigenesis, poticanje angiogeneze i migraciju tumorskih stanica na metastatskih stranicama [17] - [19], odabrali smo CXCL12 i njegov receptor CXCR4 za daljnju analizu pregled

Transkripcija. CXCL12 i CXCR4 kod raka želuca pregled

diferencijal izraz CXCL12- i CXCR4-mRNA je ovjeren od strane realnom vremenu RT-PCR u nezavisnoj set uzoraka karcinoma želuca 37 crijevna tipa. Usporedili smo ne-neoplastične sluznice s primarnog tumora, kao i primarne tumore čvor negativnog s primarnim tumorima čvora pozitivnih karcinoma. pregled

CXCL12 izražavanje bilo značajno povećao u želučanom karcinomu u usporedbi s ne-neoplastičnim sluznici (p = 0.033 ). Potvrđivanje podataka polja, CXCL12 izraz je također viša u čvora pozitivnim želučanog karcinoma u usporedbi s čvora negativne slučajeve. Međutim, ta razlika nije bila statistički značajna (p = 0,132; slika 1a). Što se tiče lokalnog rasta tumora, nije bilo značajne razlike u ekspresiji CXCL12 u pT1 /T2 stadijem tumora u odnosu na pT3 /T4 tumora. No, zanimljivo, CXCL12 izraz pokazala značajnu povezanost u pT1 /pT2a odnosu pT2b /T3 /T4 (p = 0,049; slika 1b) pregled

Bilo je ni razlika od CXCR4 izražavanja u želučanom karcinomu u odnosu na ne-neoplastičnim tkivom. (p = 0,229), kao ni u čvora negativna u odnosu čvora pozitivnim želučanog karcinoma (p = 0,22; slika 1c). Uspoređujući CXCR4 izraz s lokalnom mjeri tumora, razine CXCR4-mRNA raste s rastom lokalnih tumora. (P = 0,079; Slika 1D) pregled

Prijevod CXCL12 u želučanom karcinomu, korelacija s kliničkopatološkim parametara i opstanak analizira

prijevod i histoanatomical distribucija CXCL12 je kasnije studirao imunohistokemijski na 347 uzoraka karcinoma želuca. U 291 slučajeva, CXCL12 imunoreaktivnost je oporeziv. Tumorske stanice izraženi CXCL12 u 244 od 291 (84%) uzoraka. Snažan je citoplazmatska, a membranski immunoreaction opažena u 143 (49%) slučajeva, a slabe bojenjem na 101 (35%). 47 tumora (16%) je nedostajalo CXCL12-imunoreaktivnost. Svi uzorci tumora su pokazali izrazit CXCL12 pozitivnost za vaskularne endotelne stanice, koji je služio kao interni pozitivna kontrola (slika 2a-c). Statističke analize pokazale su značajnu korelaciju između ekspresije CXCL12 u stanicama tumora i udaljenih metastaza (p = 0,043), kao i tumora razred (p = 0,0064). Svi ostali kliničkopatološkim parametri nisu pokazali povezanost s izrazom CXCL12 u tumorskim stanicama (Tablica 1). Kad dijeljenjem skupinu u dvije skupine, tj crijevna tipa i difuzni tip karcinoma želuca, nema korelacije između izražavanja CXCL12 i bilo kliničkopatološkim parametar obje skupine (podaci nisu prikazani). Izraz CXCL12 tumorskih stanica nije imala utjecaja na preživljavanje pacijenta (cijela grupa: p = 0,830; crijevna vrsta karcinoma: p = 0,766; difuzni tip karcinoma: p = 0.817). Pregled

Prijevod CXCR4 u želučanom karcinomu, korelacija s kliničkopatološkim parametara i opstanak analizira pregled

prijevod CXCR4 također je ispitivana i imunohistokemijski. Imunoreaktivnost u stanicama tumora bio oporeziv u 293 uzoraka tumora, od kojih je samo 6 (2%) pokazala nedvosmislenu Membranozni bojenje (kategorija 2+ Slika 2D). Većina CXCR4 pozitivnih tumorskih uzoraka samo otkrila blijedu citoplazmatski CXCR4 imunoreaktivnost (kategorija 1+, 44 predmeta, 15%; brojka 2e). Nuklearne CXCR4 imunoreaktivnost nije opažena u svakom slučaju i bilo koje vrste stanica. Ukupna od 83% (243 od 293) od želučanog karcinoma su immunonegative za CXCR4, većina ih pokazuje popratnim CXCR4 pozitivne leukocite kao interna pozitivne kontrole (slika 2f). Zanimljivo, kao što je prethodno opaženo u kolorektalnih karcinoma, 86 293 želučanih karcinoma (29%) pokazalo je CXCR4 pozitivne kapilarama u stromi tumora s jakom CXCR4 imunoreaktivnost endotelnih stanica (Slika 3A). Vaskularni priroda tih osjetljivih struktura je potvrđena CD34 imunološkim (slika 3b). Pregled

Uspoređujući CXCR4 izraz u stanicama tumora s različitim kliničkopatološkim parametrima, CXCR4 izraz značajno je povezana s višim lokalne mjeri tumora (T-status p = 0,030). Međutim, daljnje udruge tumorskih CXCR4 izražavanja i drugih kliničkopatološkim varijabli utvrđeno je (Tablica 2). Pri analizi podskupina crijevnih tipa želučanog karcinoma, nema udruge su pronađeni s bilo kliničkopatološkim parametra (podaci nisu prikazani). Pregled

Nakon toga studirao je povezanost ekspresije CXCR4 u endotelnim stanicama (vaskularne CXCR4 izražavanja, vCXCR4) tumora Mikro vaskularne žile i razne kliničkopatološkim parametri. Zanimljivo je da je izraz CXCR4 u kapilarama korelaciji vrlo značajno s lokalnog rasta tumora (T-kategorije; p = 0,0001), kao i sa pozornice UICC-tumora (p = 0.0059). Čak iu podskupinama crijevne vrsti i difuznog tipa želučanog karcinoma, vCXCR4 ekspresija bila je značajno povezana s lokalnom mjeri tumora (crijevna tip: p = 0,004; difuzni tip: p = 0.030) i fazi UICC-tumora (vrsta crijevne: p = 0,020) , Nadalje vCXCR4 izražavanje bilo značajno povezano s dobi bolesnika (p = 0,0148) u cijeloj skupini (tablica 3). Pregled

Opstanak Analiza je pokazala da CXCR4 izraz u stanicama tumora želuca karcinoma, kao i kod tumorskih kapilarama imao utjecaja . na preživljavanje

Istodobna CXCL12 /vCXCR4 izražavanja u karcinom Netlogu želučane

od osi CXCL12-CXCR4 je pokazala da se uključe u progresiji tumora [17] - [19], istražili smo povezanost od istovremene ekspresije CXCL12 i vCXCR4 s kliničkopatološkim parametrima. Doista, CXCL12-vCXCR4 pozitivni tumori su bili povezani s većim lokalnim mjeri tumora (p = 0,0014) i višim stupnjevima UICC (p = 0,017). Međutim, to nije imalo utjecaja na preživljavanje pacijenta, čak iu podskupinama crijevnih i difuznog tipa želučanog karcinoma. Pregled

ekspresije CXCL12 i CXCR4 u odgovarajući metastaze u limfne čvorove

CXCL12-CXCR4 osi Objavljeno je da se uključe u metastatskog procesa u različitim tumorskim entiteta. Stoga smo ispitali CXCL12 i CXCR4 imunoreaktivnost u podskup od 61 podudaranja metastaza u limfnim čvorovima. CXCL12 ekspresije bio dostupan za 46 metastaza. Sve u svemu, 4 su metastaze limfnih čvorova CXCL12 negativna kao i njihov odgovarajući primarni tumor. 40 metastaze limfnih čvorova pokazao jasnu CXCL12 pozitivnost prema primarnom tumoru. Intenzitet bojenja je vrlo heterogena pokazuje jako pozitivne tumorske stanice u susjedstvu lagano obojenog tumorske stanice klastera. Međutim, dvije metastaze otkrila CXCL12 imunoreaktivnost iako bez izraza CXCL12 je otkrivena u primarnom tumoru. Pregled

CXCR4 imunoreaktivnost je procijenjena na 54 metastaza u limfnim čvorovima. Zanimljivo je da nitko od njih nije pokazao nikakvu CXCR4 izraz. Čak i oni tumori (n = 6), što pokazuje slab CXCR4 pozitivnosti u primarnom tumoru, nedostajalo izraz CXCR4 u odgovarajućim metastaza u limfnim čvorovima. Međutim, sve metastaze u limfne čvorove jasno otkriva CXCR4 pozitivne limfocite, koji su služili kao interni pozitivnu kontrolu. Zanimljivo, u tri slučaja intratumoural CXCR4 pozitivne Mikro vaskularne žile detektirati. Pregled

Rasprava pregled

G-protein-vezanih receptora predstavljaju najveći porodicu transmembranskih receptora. Pet posto svih ljudskih gena kod za više od 800 različitih GPCR i oko 80 različitih liganada identificirani su do sada [20]. GPCR su najčešći farmakološke mete u medicini, tj skoro 30% svih lijekova su usmjereni protiv GPCR. Dokaz je u porastu da GPCR također može biti obećavajući mete za terapije protiv raka. U ovom radu cilj pronaći GPCR koji su različito izraženi u čvora pozitivnim želučanog karcinoma i stoga se mogu smatrati budućim ciljevima za želučane liječenja raka. Pronašli smo 52 GPCR i GPCR-vezanih gena koji su gore ili prema dolje regulirana u čvor pozitivan primarnoj želučanog tkiva raka u usporedbi s čvora negativnog raka. Nekoliko GPCR-ova je ranije pokazano da se uključe biologije tumora, kao što su, AT1R EDG2, DARC i FPR1 [10], [11], [14], [15]. Najzanimljivije je da je naša lista je također uključena LGR5 [16], koja je nedavno pokazala da se matične stanice marker u tankom crijevu i debelog crijeva. Nadalje, specifičan gubitak APC u LGR5-pozitivnih stanica rezultira progresivno raste neoplazija. Dakle, u silico
validaciju našim podacima podržava hipotezu da su GPCR uključeni u biologiji tumora raka želuca. Pregled

Naša naknadne studije validacije koriste skupinu neovisnih bolesnika pokazala je da je GPCR- ligand CXCL12 je izražen u stanicama tumora većine želučanih karcinoma. Nadalje, izraz CXCL12 negativno je povezana s udaljenim metastazama i tumora razreda. Naprotiv, samo 17% želučanih karcinoma pokazala CXCR4 imunopozitivne tumorske stanice, koja je povezana s višim lokalne mjeri tumora. Zanimljivo je da oko trećine od želučanog karcinoma pokazala CXCR4 pozitivne tumorske kapilarama. Vaskularna CXCR4 ekspresija je značajno povezan s višom lokalnim opsegu tumora, kao i većim UICC-faze. Kada se izražava oboje, CXCL12 u stanicama tumora i CXCR4 u tumorskim kapilarama, ovi tumori su također značajno povezan s višom T- i UICC-faze, s podrškom za ulogu osi CXCL12-CXCR4 u neoangiogenezom raka želuca. Pregled

među GPCR je kemokin sustava značajno pridonosi napredovanja tumora putem modulacije lokalna upalna reakcija, proliferacije tumorskih stanica, migraciju i preživljenje te neoangiogeneze [4]. CXCR4 receptora kemokina u početku je utvrđeno da regulira navođenje limfocita u upali i predstavlja ko-receptor za virus humane imunodeficijencije (HIV) [21]. Fiziološki je CXCL12-CXCR4 osi sudjeluje u migraciji embrionalnih stanica središnjeg živčanog sustava, koštane srži i srce [22], [23]. On igra ključnu ulogu u metastatskih procesima kao što je prikazano na prsa [24], [25], jajnika [26] i rak prostate [27] i CXCL12 je visoko izražen u organima koji su česti mjesta udaljenih metastaza kao što su pluća, jetra i limfe čvorovi [28]. U želučani karcinom, podaci koji se odnose na CXCL12-CXCR4 put su rijetke [29]. Postoje neki dokazi da CXCR4 izražavanje želučane karcinome češće razviju peritonealnoj širenje tumora i zloćudni ascites sadrži visoke koncentracije CXCL12 [30]. Pregled

Uspoređujući naše podatke ekspresijom gena s onima dobivenim pomoću RT-PCR i imunohistokemijski, bilo je zanimljivo napomenuti da je diferencijalni izraz CXCL12 u čvor pozitivan želučanog karcinoma potvrdio transkripcije, ali ne i na prijevodni razini. Ovdje imunohistokemijsku detekciju CXCL12 u stanicama tumora povezana samo s udaljenim metastazama i tumora stupnja, ali ne i u limfnim širenja. Međutim, CXCL12 se naći ne samo u stanicama tumora, ali i endotela i stanica strome [31], a ukupni izražavanja u prostoru cijele tkiva je teže procijeniti imunohistokemijski. Naprotiv, naši transkripcijski studije koriste tkiva homogene koji integriraju sve CXCL12 izražava stanice tumorskog tkiva. Ipak, mora se imati na umu da transkripciju gena nije uvijek u korelaciji s mRNA prijevod i da je tumor biološki učinak CXCL12 također može ovisiti o prisutnosti i histoanatomical distribuciju CXCR4. U prilog ovoj tvrdnji, uspjeli smo pokazati da su istovremeno izraz CXCL12 u tumorskim stanicama i CXCR4 u tumorskim kapilarama u korelaciji s rastom lokalnih tumora i UICC-tumora fazi. Pregled

To je izvijestio da je tumoural CXCR4 pozitivnost značajno korelira s razvojem peritonejsku karcinomatoza [30]. Nadalje, snažan CXCR4 izraz je značajno povezana s metastaza u limfnim čvorovima, višim stupnjevima UICC i sniženoj stopi od 5 godina preživljavanja [32]. Naši rezultati pojavljuju se razlikuju od ovih prethodnih studija. Pri vrednovanju CXCR4 imunoreaktivnost u stanicama tumora, niska stopa izraz je promatrao. Samo 17% uzoraka tumora pokazalo je uglavnom slab CXCR4 imunoreaktivnost. Osim toga, svi 61 podudaranja metastaze u limfne čvorove nedostajalo izraz CXCR4. To bojenje uzorak može objasniti zašto primjerice u crijevnu tipa želučanih karcinoma, CXCR4 ekspresija samo značajno povezan s rastom lokalnim tumora (T-skupinu), ali ne s ostalim klinikopatološkim faktorima kao što je prethodno opisano. Koristili smo temeljito karakterizira CXCR4 antitijela s višim specifičnošću od komercijalno dostupnih antitijela kao što je prikazano od strane Fisher i kolege [33]. Ova razlika s obzirom na specifičnost može poslužiti za različite bojenje uzoraka. Na primjer, nuklearna izraz CXCR4, koji je izvijestio da je povezan s metastaza u limfnim čvorovima u rak debelog crijeva, nije bio viđen u seriji [34]. Osim toga, mi nikada ne otkriti CXCR4 pozitivnosti u stanice strome, kao što je opisano u studiji Saigusa i kolege [35]. Naime, ako je CXCR4-CXCL12 put u konačnici doprinosi generacije metastaza u želučanog karcinoma, osobito metastaze u limfne čvorove, daljnje studije su potrebne. Pregled

Oko trećine ispitanih želučanog karcinoma pokazala CXCR4 pozitivan tumour- okolno kapilarama , Tumorske stanice zahtijevaju adekvatnu opskrbu kisikom i hranjivim tvarima za održavanje opstanak. Čak i genetskih abnormalnosti koje dysregulate rast i preživljenje pojedinih stanica, tumori ne može povećati preko 1-2 mm ^{3 bez vaskularizacije i hipoksije inducirana smrt stanica pojavljuje. Pokazano je da se CXCR4 izražava pomoću endotelnih stanica i stimulaciju CXCR4 od CXCL12 ima proangiogenic učinak [36]. Nadalje, CXCR4 je hipoksija može inducirati gen, uređeno je hipoksijom induciranog faktora 1 a (HIF1α). Kad je kisik rijetki kao u brzorastućim tumorima, HIF1α pojačava izraz CXCR4 [37]. Povećana ekspresija CXCR4 u endotelnim stanicama promatrane u našoj tumora kolektivu može biti dio integriranog hipoksičnog odgovor na rastući tumor koji omogućava stvaranje novih krvnih žila. U našoj studijskoj grupi, vaskularne CXCR4 izraz značajno koreliraju sa stupnjem rasta lokalnog tumora. U 8% T1 /pT2a tumora (4 od 52), te u 34% T2B /T3 /pT4 tumora (81 od 239) CXCR4 pozitivne Mikro vaskularne žile bile otkriti. T2B /T3 /T4-stage želučani karcinom češće njeguju hipoksično mikroklima od T1 /T2a stadiju tumora i time bi mogli izazvati izraz CXCR4 gena i angiogenezu. Otkrivanje CXCR4 pozitivnih kapilarama u velikim metastaza u limfnim čvorovima (> 9 mm u promjeru) potvrdila ta promatranja. Nadalje, koji smo prethodno pokazali usporedive rezultate u karcinomu debelog crijeva [38]. Osim toga, kao što je prikazano na glioblastoma multiforme [39], uzorci tumora koji otkrivaju oboje, CXCL12 pozitivne tumorske stanice i CXCR4 pozitivne kapilarama su vrlo značajno povezana s visokim lokalnim mjeri tumora i visokim UICC fazama, dodatno podupire značaj funkcionalnog CXCL12-CXCR4 osi u želuca biologije raka pregled}

Ukratko, pokazali smo da GPCR različito eksprimiraju u želučanom tkivu karcinoma i mogu pridonijeti biologiji tumora. tumori eksprimiraju, CXCL12 u tumorskim stanicama i CXCR4 tumorom okružuje mikroprostora, pokazuju vrlo značajna povezanost s rastom lokalnih tumora i UICC faze. Ovi rezultati, zajedno s našim prethodnim podacima o kolorektalnog karcinoma, potkrijepiti ulogu CXCL12-CXCR4 osi u tumor-neoangiogenezom u gastrointestinalnih tumora. CXCL12-CXCR4 put može biti novi obećavajući antiangiogeno meta za liječenje želučanih karcinoma. Pregled

Materijali i metode pregled

Tumorski uzorci

Uzorci tkiva raka želuca dobiveno kirurški na sveučilišne bolnice Charite u Berlinu (1995-2008). Svježe zamrznuta tkiva od 6 slučajeva crijevna tipa želučanog karcinoma je bio korišten za GeneChip analize (čvora negativan: 3 bolesnika; čvora pozitivna: 3 bolesnika, žensko-muško-omjer: 01:02). Nezavisni serija u paru kancerogenih i tumora susjedna normalna tkiva iz 37 crijevna tipa želučanog karcinoma ispitana su real-time RT-PCR (čvora negativan: 12 pacijenata; čvora pozitivan: 25 pacijenata; žensko-muško omjer: ~1:1 za detaljne karakteristike pacijenta vidi tablicu S3). Za imunohistokemijska analiza, pacijent kohorta 347 uzastopnih bolesnika s karcinomom želuca je ispitan, koji obuhvaća 194 crijevnu tip i 122 difuznog tipa karcinoma prema klasifikaciji Lauren. 31 uzoraka pokazali su ostale histološkoj (tj mucinozni, cjevaste, nediferencirani). Ukratko, kohorta se sastojala od 220 muškaraca i 127 žena. Srednja dob bolesnika u vrijeme postavljanja dijagnoze bila je 64 godina. Preživljavanje su podaci bili dostupni od 196 tih pacijenata. Follow-up podataka za ostale pacijente nedostaje jer ti pacijenti nisu bili stanovnik u blizini bolnice i izgubili se na praćenje. Od 196 pacijenata, 124 je umrlo tijekom praćenja. Prosječno praćenje za one pacijente još živ na krajnje točke analize bio je 33 mjeseci. Od 61 pacijenata, tkiva istih metastaze limfnih čvorova bio je dostupan (27 crijevna tip, 26 difuzni tip, 8 drugih histološkoj). Samo bolesnici s histološki potvrđenim rak želuca i odgovarajuća tkiva dostupne su uključeni. Pacijenti s neoadjuvantly tretirane želučanog karcinoma ili drugih poznatih malignoma bili su isključeni iz istraživanja. Ovaj projekt je odobren od strane lokalnog etičkog povjerenstva (ref. Broj EA1 /06/2004). Pregled

GeneChip analiza pregled

Ukupna RNA izolirana s fenol-kloroform pomoću mirVana ™ Mirna izolacije Kit ( Ambion, Austin, SAD). Kontaminirajućih DNA je uklonjen DNase obradom (Turbo DNAfree kit; Ambion, Austin, SAD) na 37 ° C tijekom 30 minuta. Mi smo koristili GeneChip® ljudskog genoma U133 Plus 2.0 polja (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) u skladu s uputama proizvođača protokol analize razine ekspresije mRNA. Affymetrix GeneChip® Operativni Software (GCOS 1.4) automatizira upravljanje GeneChip® protokom stanice i GeneChip® Scanner 3000. Netlogu

Bioinformatika

Sirovi podaci su analizirani s Affymetrix GeneChip operativni sustav (GCOS 1.4) , Detekcija p-vrijednost transkriptu određuje otkrivanje poziv, što ukazuje da li je transkript pouzdano otkrije (p < 0,05; sadašnju) ili nije otkrivena (odsutan). Da biste omogućili usporedbu između čipova podaci su preračunate na globalnu intenziteta 500. data mining alata 3.0 (Affymetrix) i GeneSpring programskog paketa 7,2 (Silicon genetiku, Redwood City, CA) korišteni su za prosječne rezultate iz različitih uzoraka i obavljanje statistička analiza za usporedbu između raka želuca s (N1) i bez (N0) metastaze u limfne čvorove. Podaci o šest polja su normalizirani na račun za varijabilnosti u Hibridizacija probe parova i drugih hibridizacije artefaktima. Normalizacija se sastoji od sljedećih tri koraka: prvo, transformacije podataka (set mjerenja manje od 300,0 do 300,0); Drugo, po čipu (normalizirati svaki čip na 50. percentil mjerenja uzetih iz tog čipa); i treće, po gena (normalizirati svaki gen medijana mjerenja za taj gen). Mnogostrukost promjene izračunat je za svaku gen kao aritmetička sredina od normalizacije izraz vrijednosti N1 podijeljen aritmetička sredina od normalizacije izraz vrijednosti N0. Neobrađeni podaci iz microarray eksperimenata su stavili na Gene Expression Omnibus baze podataka (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?token=pzmjlcoscakugfc&acc=GSE17187).

Real-time obrnuti lančana reakcija polimeraze transkriptaze

Za sintezu cDNA, 2 ug ukupne RNA podvrgnuta je obratnoj transkripciji pomoću Omniscript RT Kit (Qiagen). Primeri gena specifičnih su dizajnirani od strane BioTeZ Berlin-Buch GmbH (Berlin, Njemačka). Nizovi primera su kao što slijedi: CXCR4 5 'CAG CAG AAG GTA GCA CG TGA, 3' CAG GGT TCC TTC ATG GAG TC; CXCL12 5 'CGA TTC TTC GAA AGC MAČKA GT, 3'CAC TTG TCT GTT GTT GTT CTT CAG; Beta2-mikroglobulinje 5 'ACC CCC ACT GAA AAA GAT GA, 3' ATC TTC AAA CCT CCA TGA TG. Real-time reverse-transkriptaze lančana reakcija polimeraze (Real-time RT-PCR) se izvodi pomoću QuantiTect ™ SYBR® Green PCR Kit (Qiagen) i LightCycler System (Roche Diagnostics, Mannheim, Njemačka). Usporedni C _{t vrijednosti normalizirane su na onom domaći gen beta2-mikroglobulina. Nema predloška kontrole (bez cDNA u PCR) se kandidira za svaki gen za otkrivanje nespecifičnih ili genomske pojačanje i primera dimerizacije. Pregled}

Histologija pregled

Za histoloških analiza, uzorci tkiva su fiksirani u 10% formalinu neutraliziran i uklopljene u parafin. Deparafmizirani Sekcije su označene korištenjem hematoksilinom i eozinom. Želučani karcinom je klasificiran prema klasifikaciji SZO [1]. PTNM faza određena je u skladu sa smjernicama UICC. Pregled

Tissue mikropostrojima gradnja pregled

formalinom fiksne i uzorci tkiva u parafin ugrađen je korišten za dobivanje Microarrays tkiva kao što je prethodno opisano [40], [41 ]. Ukratko, odabrana su tri do šest morfološki reprezentativne regije blokova parafina 'donatora'.

• PLoS ONE: genske ekspresije Potpisi mogu razlikovati rak želuca razreda i Stages
• PloS Genetics: Mir-218 Sprječava invazije i metastaziranja raka želuca ciljanjem Robo1 Receptor