PLoS One: Érrendszeri CXCR4 Expression - a regény antiangiogén Cél gyomorrákban?

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

G-fehérje-kapcsolt receptorok (GPCR) ideálisak a regény a rák megelőzése és kezelési stratégiák. Kerestünk differenciáltan expresszálódó GPCR-ek a nyirokcsomó-pozitív gyomor carcinoma. Katalógusa

Módszertan /fő eredményei katalógusa

A differenciális expresszió GPCR-ek három csomópont pozitív illetve három csomópont negatív bélbaktériumok típusú gyomor carcinoma elemeztük gén tömb technológia. A jelölt gének CXCL12 és receptora CXCR4 hagyta jóvá valós idejű reverz transzkripciós polimeráz láncreakció független halmaza 37 gyomor karcinóma. Translation vizsgáltuk immunhisztokémiával 347 gastricus karcinómák használva szöveti microarray valamint 61 megfelelő nyirokcsomó-metasztázisok. Fehérje expresszió korrelált klinikopatológiai betegek jellemzőit és a túlélés. 52 GPCR-ek és GPCR kapcsolatos gének voltak felfelé vagy lefelé szabályozni nyirokcsomó-pozitív gyomorrák, beleértve CXCL12. Differenciális expressziója CXCL12 igazoltuk RT-PCR és korrelál a helyi tumor növekedését. CXCL12 immunpozitivitása negatívan kapcsolódó távoli áttétek és a tumor grade. Csupán 17% -a gastricus karcinómák mutatta, CXCR4 immunpozitív tumor sejtek, amelyek társult magasabb lokális tumor mértékig. 29% -a gyomor carcinoma megmutatta CXCR4 pozitív tumor erek. Érrendszeri CXCR4 kifejezés szignifikánsan összefüggött a magasabb helyi tumor mértékben, valamint a magasabb UICC-szakaszok. Amikor egyaránt expresszáló, CXCL12 a tumorsejtek és CXCR4 a tumor mikroereiben ezek a daganatok is voltak nagyon szignifikáns összefüggést a magasabb T- és UICC-szakaszok. Három nyirokcsomóáttétek vizsgálat érrendszeri CXCR4 kifejezés, míg a tumorsejtek teljesen hiányzott CXCR4 minden esetben. A kifejezés a CXCL12 és CXCR4 nem volt hatással a betegek túlélési. Katalógusa

Következtetések /Jelentés katalógusa

Eredményeink igazolják a jelentőségét GPCR-ek a biológia a gyomor carcinoma és bizonyítja, hogy a CXCL12-CXCR4 útvonal lehet, hogy egy új ígéretes antiangiogén cél kezelésére gastricus karcinómák.

bevezető hivatkozás: Ingold B, Simon E, Ungethüm U, Kuban RJ, Müller BM, Lupp a, et al. (2010) Érrendszeri CXCR4 Expression - a regény antiangiogén Cél gyomorrákban? PLoS ONE 5 (4): e10087. doi: 10,1371 /journal.pone.0010087 katalógusa

Szerkesztő: Irene Oi Lin Ng, a University of Hong Kong, Hong Kong katalógusa

Beérkezett: szeptember 22, 2009; Elfogadva: március 16, 2010; Megjelent: április 8, 2010 katalógusa

Copyright © 2010 Ingold et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány ben támogatták a Berliner Krebshilfe (Berlin Canceraid). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák egyik leggyakoribb rák világszerte, rangsor negyedik általános gyakorisága és számviteli több mint 650.000 ember halálát okozza évente. [1] A halálozási gyomorrák csak kiemelkedett a tüdőrák. Korai gyomorrák gyakran nem okoz specifikus tünetek. A hiányzó korai tünetek késlelteti a diagnózist. Következésképpen 80-90% -a Nyugat-gyomorrákos betegeknél jelen előrehaladott daganatok helyi vagy távoli áttétek már történt [1]. A nyirokcsomó állapot, különösen az arány a metasztázis-pozitív /metastasis-negatív nyirokcsomók, a legerősebb prognosztikai faktor a gyomorrák [2]. Az 5 éves túlélési arány a betegek 1-6 nyirokcsomó-metasztázisok 44%, és befejezve a csak 11% betegeknél több mint 15 pozitív nyirokcsomók. Részleges vagy teljes eltávolítását követően, kombinálva adjuváns sugárkezelés és /vagy kemoterápia jelzett, ígéri a teljes gyógyulás csak korai stádiumú betegség. Az áttétes betegségben, a jelenleg használt sugárterápiás és kemoterápiás gyenge hatékonyság és a kezelés rezisztens betegség progressziójának halálhoz vezet néhány hónap alatt [3]. A mai napig nem létezik specifikus prediktív marker, mint a HER2 emlőkarcinóma, az EGFR a nem kissejtes tüdő-karcinóma vagy K-RAS colorectalis carcinoma, amely lehetővé teszi a több egyéni terápiás stratégia. Ezért új molekuláris célzott terápiás megközelítésekre van szükség.

G-fehérje-kapcsolt receptorok (GPCR-ek) jelentik messze a legnagyobb család sejtfelszíni molekulák, amelyek relé jeleket GTP-kötő fehérje (G-fehérje ) -initiated második messenger kaszkádokban a sejtbe [4]. GPCR-ek szabályozzák sok agonisták, de mindegyik megegyezik jellegzetes mag tagjai hét transzmembrán α-hélix, amelyek kapcsolódnak a három intra- és extracelluláris három hurok. Ezek a receptorok ellenőrzik kulcsfontosságú fiziológiai funkciókat, beleértve a neurotranszmisszió, hormon és enzim felszabadulást endokrin és exokrin mirigyek, az immunválaszt, izom-összehúzódás és a vérnyomás szabályozása, hogy csak néhányat említsünk. [4] katalógusa

A rosszindulatú sejtek gyakran eltérítik a normális fiziológiai funkciói GPCR-ek, hogy szaporodni önállóan, és elkerülni az immunrendszert. Továbbá GPCR-ek központi szerepet játszanak a tumor által indukált angiogenezis és a rák metasztázist. Sok szolid tumorok támaszkodnak GPCR-ek kiváltására angiogén válasz akár hatva endoteliális vagy stromalis komponenseket közvetlenül vagy szabályozás a kibocsátás vagy aktivitását más angiogén mediátorok, mint például a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF), vagy bázikus fibroblaszt növekedési faktor (bFGF) által kötőszöveti és immunsejtek [5]. A rákos sejtek manipulálni GPCR-ek vonzani endothel sejtek és vezeti őket, hogy támadják a tumor tömege, ezáltal új hajók, hogy a tápanyagok és az oxigén. Számos rák áttétet sajátos szerveknél, milyen gyakran okozza a aberráns expresszióját GPCR-ek a rákos sejtekben - különösen a kemokinreceptorok - egyidejű a kibocsátást a kemokinek a szekunder szervek [6].

Drug Delivery tumor képalkotó és biomarkerek előrejelzésére malignus alkalmazásai GPCR-ek, hogy kiemelje: radioaktívan jelzett peptidek, amelyek kötődnek a GPCR-k esetleg széles körű alkalmazást a rák a diagnózis és terápia [7]. Kötődő ligandok GPCR-ek is konjugálható citotoxikus szereket, hogy kifejezetten a rosszindulatú sejteket overexpresszáló ezek a receptorok, így csökkenti a mellékhatások [8]. Továbbá GPCR-ek értékes lehet biomarkerek rák diagnózisa bizonyítottnak-vizsgálatok prosztatarák [9]. Katalógusa

Ezért célul tűztük ki (i) értékeli differenciáltan expresszálódó GPCR-ek a csomóponti negatív versus csomóponti pozitív intesztinális típusú gyomor karcinóma GeneChip array technikával. (Ii) a transzkripcióját jelölt gének validáltuk valós idejű reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (real-time RT-PCR). Értékeltük a fordítás és histoanatomical eloszlása ​​a kemokin CXCL12 és az annak megfelelő kemokinreceptor CXCR4 egy nagy sorozat 347 gyomor karcinóma minták immunhisztokémiai segítségével a szövet microarray-technológia, valamint a 61 megfelelő nyirokcsomó metasztázisok hagyományos dia (III). Mi korrelált a transzlációs expressziós mintázat egy bőséges készlet klinikopatológiai beteg jellemzők, beleértve a túlélés (iv). Katalógusa

Eredmények katalógusa

Differential génexpresszió nyirokcsomó-negatív és nyirokcsomó-pozitív gyomorrák szövetek katalógusa

Először vizsgáltuk a differenciális expresszióját mRNS egy sor 6 intesztinális típusú gyomorrák beteg (3 és 3 nélkül nyirokcsomó metasztázisok) felhasználásával GeneChip® Human Genome U133 Plus 2.0 tömbjével Affymetrix amely érzékeli 47.000 átiratok és variánsai valamint 38,500 jól jellemzett humán géneket. mRNS-t extraháltunk, és átírt csak szövetminta nyert primer tumorokban. Összesen 115 transzkriptumok találták fel és 219, hogy le-szabályozott csomópont pozitív gyomorrák összehasonlítva csomópont negatív gyomor rák (táblázat S1). Következő kerestünk differenciáltan expresszálódó GPCR-ek. Azonosítottunk 52 GPCR-ek és GPCR kapcsolatos gének, amelyek felfelé vagy lefelé szabályozni a fold változás tényezője > 1,5 (asztal S2). Katalógusa

In silico katalógusa elemzés katalógusa

ezután átkutatták a ENTREZ katalógusa adatbázis a " National Center for Biotechnology Information (NCBI) hotelben" bejegyzéseket a GPCR-ek és GPCR-ligandumok és azok feltételezett szerepe a daganat biológiai . A jelentősége az angiotenzin II 1-es típusú receptor gyomorrákban korábban igazolta a saját csoport [10]. Számos tanulmány kimutatta, hogy a kifejezés a Duffy vércsoport kemokinreceptor (DARC) korrelál fordítottan prevalenciája és prognózisa prosztatarák [11] - [13]. Az állati modellben az emlőrák expressziójának EDG2 korrelált a incidenciája tüdő metasztázisok [14]. FPRs közvetítik a hatás Annexin 1 sejt mozgékonyságra és invázió, amelyek fontosak a metasztatikus potenciálját tumorsejtek [15]. LGR5 nemrég kimutatták, hogy egy őssejt markere sejtek a vékonybél és a vastagbél és a szár-sejt-specifikus veszteséget Apc eredmények fokozatosan növekvő neopláziák [16]. Együttesen ezek az adatok azt igazolják, hogy ez a megközelítés azonosított GPCR-ek és GPCR-ligandumok, amelyek részt vesznek a gyomorrák biológia. Ami kemokinreceptorok és kemokinek expresszióját a kemokinek CCL2 és CXCL12 is megemelkedett a csomóponti pozitív gyomorrák képest csomóponti negatív eset (kiegészítő táblázat S2). Mivel a CXCL12-CXCR4 tengely kiemelkedő szerepet tumorgenesisben, angiogenezis elősegítésében és tumorsejtek migrációját a metasztázisok [17] - [19], akkor a kiválasztott CXCL12 és receptora CXCR4 további elemzésekhez. Katalógusa

átírása CXCL12 és CXCR4 gyomorrákban katalógusa

A differenciális expressziója CXCL12- és CXCR4-mRNS által hitelesített real-time RT-PCR független halmaza 37 intestinalis típusú gyomorrák mintákat. Összehasonlítottuk nem neoplasztikus nyálkahártya a primer tumor, valamint a primer tumorok csomópont negatív primer tumorok csomópont pozitív daganatok.

CXCL12 expresszió szignifikánsan emelkedett gyomor karcinóma, mint a nem-daganatos nyálkahártya (p = 0,033 ). Megerősítve a tömb adatok CXCL12 kifejezés is fel-szabályozott nyirokcsomó pozitív gyomorrák képest nyirokcsomó negatív eseteket. Azonban ez a különbség nem érte el a statisztikai szignifikancia (p = 0,132; 1A ábra). Ami a helyi daganat növekedés, nem volt szignifikáns különbség a CXCL12 expresszió pT1 /T2 stádiumban lévő daganat versus pT3 /T4 daganatok. De érdekes, CXCL12 kifejezés mutatott szignifikáns összefüggést a pT1 /pT2a versus pT2b /T3 /T4 (p = 0,049; 1b ábra). Katalógusa

nem volt sem a különbség CXCR4 kifejezés a gyomor carcinoma, illetve nem daganatos szövetek (p = 0,229), sem a nyirokcsomó negatív versus csomóponti pozitív gyomorrák (p = 0,22; 1c ábra). Összehasonlítva CXCR4 kifejezés a helyi tumor mértékben CXCR4-mRNS szintje nőtt a lokális tumor növekedése (p = 0,079; 1D ábra). Katalógusa

fordítása CXCL12 a gyomorrák, korreláció a klinikopatológiai paraméterek és túlélési elemzések

A fordítás és histoanatomical forgalmazása CXCL12 később vizsgáltuk immunhisztokémiai 347 gyomorrák mintákat. 291 esetben CXCL12 immunreaktivitás értékelhető. Tumor sejtek expresszálták CXCL12 244 291 (84%) mintákban. Egy erős citoplazmatikus és hártyás immunreakció volt megfigyelhető 143 (49%) esetben, és egy gyenge festődést 101 (35%). 47 tumorok (16%) nem rendelkezett CXCL12-immunreaktivitást. Minden tumorminták mutatott megkülönböztethető CXCL12 pozitivitás a vaszkuláris endoteliális sejtek, amely szolgált mint belső pozitív kontroll (ábra a 2A-C). A statisztikai elemzések szignifikáns korrelációt a kifejezés a CXCL12 tumorsejtekben és a távoli metasztázisok (p = 0,043), valamint a tumor grade (p = 0,0064). Minden más klinikopatológiai paraméterek nem mutatott összefüggést a CXCL12 expresszió a tumor sejtekben (1. táblázat). Amikor elosztjuk a kohorsz két csoportra, azaz intesztinális típusa és a diffúz típusú gyomorkarcinóma, nem találtunk korrelációt CXCL12 expresszió és bármely klinikopatológiai paramétere egyik csoportban sem (az adatokat nem mutatjuk). A CXCL12 kifejezést daganatsejtek nem volt hatással a túlélés (teljes csoport: p = 0,830; intesztinális típusú carcinoma: p = 0,766; diffúz típusú carcinoma: p = 0,817). Katalógusa

Fordítás CXCR4 a gyomorrák, korreláció a klinikopatológiai paraméterek és túlélési elemzések katalógusa

Fordítás CXCR4 is vizsgáltuk immunhisztokémiai. Immunreaktivitás tumorsejtek értékelhető 293 tumor minták, amelyek közül csak 6 (2%) mutatott egyértelmű membrán festés (kategória 2+; 2D, ábra). A legtöbb CXCR4 pozitív daganatminták csak kiderült halvány citoplazma CXCR4 immunreakció (kategória 1+ 44 esetben, 15%; alak 2e). Nukleáris CXCR4 immunreaktivitást nem volt megfigyelhető minden esetben, és bármely sejttípusban. Egy általános 83% -os (243 293), a gyomor-karcinómák voltak immunnegatív a CXCR4, legtöbbjük mutató egyidejű CXCR4 pozitív leukociták, mint belső pozitív kontroll (2f ábráját). Érdekes módon, a korábban megfigyelt kolorektális karcinómák, 86 293 gastricus karcinómák (29%) mutatott a CXCR4 pozitív mikroerek a tumor sztróma egy erős CXCR4 immunreaktivitását endoteliális sejteket (3A ábra). A vaszkuláris természet e finom szerkezetek megerősítette egy CD34 immunhisztokémiai (3b ábra). Katalógusa

Amikor korreláló CXCR4 kifejezés a daganatos sejtek különböző klinikopatológiai paraméterek CXCR4 kifejezés szignifikánsan összefüggött a magasabb helyi tumor mértékben (T-állapot; p = 0,030). Azonban további társulásai daganatos CXCR4 kifejezés és más klinikopatológiai paramétereivel találtunk (2. táblázat). Elemzése során alcsoportja intesztinális típusú gastricus karcinómák, nincs összefüggést találtunk semmilyen klinikopatológiai paramétert (az adatokat nem mutatjuk).

Ezután tanulmányoztuk a korreláció CXCR4 expresszióját az endoteliális sejtekben (vaszkuláris CXCR4 kifejezés, vCXCR4) a tumor erek és különféle klinikopatológiai paraméterek. Érdekes, hogy a kifejezés a CXCR4 a mikroerek korrelált nagyon jelentősen a helyi tumornövekedést (T-kategória; p = 0,0001), valamint az UICC-tumor stádiuma (p = 0,0059). Még a alcsoportokban bél típusa és a diffúz típusú gyomorrák, vCXCR4 expresszió szignifikáns összefüggést a lokális tumor mértékben (bél típusa: p = 0,004; diffúz jellege: p = 0,030) és az UICC-tumorstádium (bél típusa: p = 0,020) . Továbbá vCXCR4 expressziója szignifikánsan összefüggött a betegek kora (p = 0,0148), a teljes csoport (3. táblázat).

Túlélési analízis azt mutatta, hogy a CXCR4 expresszióját a tumorsejtekben a gyomorrák, valamint a tumor mikroerek nem volt hatással a túlélésre. katalógusa

egyidejű CXCL12 /vCXCR4 kifejezést gyomorrák katalógusa

Mivel a CXCL12-CXCR4 tengely kimutatták, hogy részt vesz a tumor progresszióját [17] - [19], megvizsgáltuk a korrelációs az együttes kifejeződése CXCL12 és vCXCR4 klinikopatológiai paraméterek. Sőt, CXCL12-vCXCR4 pozitív tumorok társult magasabb lokális tumor mértékben (p = 0,0014) és a magasabb UICC szakaszában (p = 0,017). Azonban nem volt hatással a betegek túlélési, még a alcsoportok a bél és a diffúz típusú gyomorrák. Katalógusa

Expression mintázata CXCL12 és CXCR4 illő nyirokcsomó áttétek katalógusa

A CXCL12-CXCR4 tengely beszámoltak arról, hogy részt vesz a metasztatikus folyamatokban különféle daganatos szervezetek. Ezért megvizsgáltuk CXCL12 és CXCR4 immunreaktivitás részhalmaza 61 megfelelő nyirokcsomó áttétek. A CXCL12 expressziós mintázat volt elérhető 46 áttétek. Összességében 4 nyirokcsomó áttétek voltak CXCL12 negatív, mint a megfelelő primer tumor. 40 nyirokcsomó-metasztázisok mutatott egyértelmű CXCL12 pozitivitás szerint a primer tumor. A festés intenzitása nagyon heterogén volt, mutatja erősen pozitív tumorsejtek szomszédos halványan festődő tumorsejtek klaszterek. Azonban két áttétek kiderült CXCL12 immunreakciót habár nincs CXCL12 expresszióját kimutatták a primer tumor. Katalógusa

CXCR4 immunreakciót értékelték 54 nyirokcsomó áttétek. Érdekes, hogy egyikük sem mutatott CXCR4 kifejezés. Még azok daganatok (n = 6), mutatja egy halvány CXCR4 pozitivitás a primer tumor, hiányzott CXCR4 kifejezés a megfelelő nyirokcsomó-metasztázisok. Azonban minden nyirokcsomóáttétek egyértelműen kimutatták CXCR4 pozitív limfociták, melyek egyben a belső pozitív kontrollként. Érdekes, hogy három esetben intratumoural CXCR4 pozitív mikroerek volt detektálható.

Discussion

G-fehérje-kapcsolt receptorok képviselik a legnagyobb család transzmembrán receptorokhoz. Öt százaléka az összes emberi gén kód több mint 800 különböző GPCR-ek, és körülbelül 80 különböző ligandumokat azonosítottak mostanáig [20]. GPCR-ek a legelterjedtebb farmakológiai célpontok az orvostudományban, azaz majdnem 30% -a az összes kábítószer ellen irányulnak GPCR-ek. Bizonyíték növekszik, hogy a GPCR-ek is ígéretes célpontjai rákterápiában. Ebben a tanulmányban célul tűztük találni GPCR-ek, amelyek eltérő módon fejeződnek ki a nyirokcsomó-pozitív gyomorrák és ezért lehet tekinteni a jövőbeni célok gyomorrák kezelésére. Találtunk 52 GPCR-ek és GPCR kapcsolatos géneket, amelyek felfelé vagy lefelé szabályozni nyirokcsomó-pozitív primer gyomor rákos szövetet képest nyirokcsomó-negatív rák. Több, a GPCR-ek voltak korábban kimutatták, hogy részt vesz a daganat biológiai, például AT1R, EDG2, DARC és FPR1 [10], [11], [14], [15]. Még érdekesebb, hogy a mi lista is tartalmaz LGR5 [16], amely a közelmúltban kimutatták, hogy egy őssejt marker a vékonybélben és a vastagbélben. Továbbá különös elvesztése Apc a LGR5-pozitív sejteket eredményez fokozatosan növekvő neopláziákban. Így in silico
validálása adataink támogatta a hipotézist, hogy a GPCR-ek részt vesznek a tumor biológia gyomorrák.

későbbi érvényesítési vizsgálatok segítségével egy csoport független a betegek azt mutatta, hogy a GPCR- ligandum CXCL12 expresszálódik a tumorsejtekben a legtöbb gastricus karcinómák. Továbbá CXCL12 kifejezés negatívan kapcsolódó távoli áttétek és a tumor grade. Ellenkezőleg, csak 17% -a gastricus karcinómák mutatta, CXCR4 immunpozitív tumor sejtek, amelyek társult magasabb lokális tumor mértékig. Érdekes, körülbelül egyharmada a gastricus karcinómák mutatta, CXCR4 pozitív tumor mikroerek. Érrendszeri CXCR4 kifejezés szignifikánsan összefüggött a magasabb helyi tumor mértékben, valamint a magasabb UICC-szakaszok. Amikor egyaránt expresszáló, CXCL12 a tumorsejtek és CXCR4 a tumor mikroereiben ezek a daganatok is szignifikáns összefüggést mutatott magasabb T- és UICC túrák, támogató szerepe a CXCL12-CXCR4 tengely neoangiogenezis gyomorrák. Katalógusa

között a GPCR-ek, a kemokin rendszer jelentős mértékben hozzájárul a tumor progresszióját modulálásán keresztül a helyi gyulladásos reakció, a tumorsejt-proliferációt, migrációt és túlélés, valamint a neoangiogenezis [4]. A kemokinreceptor-CXCR4 kezdetben találták, hogy szabályozzák a homing a limfociták a gyulladásos és a jelentése koreceptor a humán immundeficiencia vírus (HIV) [21]. Fiziológiailag a CXCL12-CXCR4 tengely részt vesz migrációját embrionális sejtek a központi idegrendszer, a csontvelő és a szív [22], [23]. Ez kritikus szerepet játszik a metasztatikus folyamatokban, amint az emlő [24], [25], petefészekrák [26] és prosztatarák [27] és a CXCL12 erősen expresszálódik a szervekben, amelyek gyakori helyei távoli metasztázisok, mint a tüdő, a máj és a nyirok csomópontok [28]. A gyomor karcinóma, vonatkozó adatokat a CXCL12-CXCR4 útvonal ritkák [29]. Van néhány bizonyíték, hogy a CXCR4 kifejező gastricus karcinómák nagyobb valószínűséggel dolgozzon ki egy peritoneális terjedését a tumor, és a malignus ascites tartalmaz nagy koncentrációban CXCL12 [30].

Összehasonlítva a gén tömb adatokat azokkal, amelyeket RT-PCR és immunhisztokémia volt érdekes, hogy a differenciális expressziója CXCL12 a nyirokcsomó-pozitív gyomorrák megerősítette a transzkripciós de nem a transzlációs szinten. Itt a immunhisztokémiai kimutatása CXCL12 a tumorsejtek korrelált csak távoli áttétek és a tumor grade de nem csomóponti terjedését. Azonban CXCL12 kiderült, hogy nem csak a tumorsejtekben, hanem az endothel és stromális sejtek [31], és az általános kifejezés az egész szövetet rekesz nehezebb megítélni immunhisztokémiával. Éppen ellenkezőleg, a mi transzkripciós felhasznált tanulmányok szövet homogenizátumokat amely integrálja az összes CXCL12 expresszáló sejtek a tumorszövetben. Mindazonáltal meg kell szem előtt tartani, hogy a gén transzkripcióját nem mindig korrelál a mRNS transzlációs, és hogy a tumor biológiai hatását CXCL12 is függ a jelenléte és histoanatomical eloszlása ​​CXCR4. Ennek alátámasztására állításával tudtuk mutatni, hogy együttes kifejeződése CXCL12 a tumorsejtek és CXCR4 a tumor mikroereiben korrelált helyi daganat növekedését és UICC-tumorstádium. Katalógusa

Azt jelentették, hogy daganatellenes CXCR4 pozitivitás korrelál a fejlődés a peritoneális carcinomatosis [30]. Továbbá erős CXCR4 kifejezés szignifikánsan összefüggött a nyirokcsomó-metasztázisok magasabb UICC szakaszok és csökkentett 5 éves túlélési aránya [32]. Eredményeink látszólag különböznek ezek a korábbi tanulmányok. Értékelésekor CXCR4 immunreaktivitás tumorsejtekben, egy alacsony expressziós ráta volt megfigyelhető. Csupán 17% a tumor minták mutattak többnyire halvány CXCR4 immunreakció. Továbbá minden 61 megfelelő nyirokcsomóáttétek hiányzott CXCR4 kifejezést. Ez a festési mintázat lehet a magyarázat, hogy miért például intesztinális típusú gastricus karcinómák, CXCR4 kifejezés csak szignifikánsan összefüggött a helyi tumornövekedést (T-kategória), de nem más klinikopatológiai faktorok, mint korábban leírtuk. Mi egy alaposan jellemzett CXCR4 antitest nagyobb specificitását, mint a kereskedelmi forgalomban kapható antitestekkel mutatja Fisher és munkatársai [33]. Ez a különbség a specificitása is szolgálhat a különböző festési mintát. Például egy nukleáris CXCR4 kifejezés, amely a jelentések szerint társítható nyirokcsomó metasztázisok colorectalis rák, nem volt látható a mi sorozat [34]. Továbbá, mi soha nem észlelt CXCR4 pozitivitás kötőszöveti sejtek ismertetett tanulmányt Saigusa és munkatársai [35]. Tisztázza, ha a CXCR4-CXCL12 útvonal végül hozzájárul generációs metasztázisok gyomorrák, különösen a nyirokcsomó metasztázisok, további vizsgálatokra van szükség. Katalógusa

egyharmada a vizsgált gyomor carcinoma megmutatta CXCR4 pozitív tumour- környező erek . A tumorsejtek szükség megfelelő mennyiségű oxigén és a tápanyagok fenntartása túlélést. Még genetikai rendellenességek dysregulate növekedését és túlélését az egyes sejtek, a daganatok nem lehet nagyítani túl 1-2 mm ^{3 nélkül erezettségét és hipoxia által indukált sejthalál következik be. Kimutatták, hogy a CXCR4 expresszálódik az endoteliális sejtek és stimulálása CXCR4 által CXCL12 van proangiogenic hatás [36]. Továbbá, CXCR4 egy hipoxia indukálható gén szabályozza a hipoxia-indukált faktor 1α (HIF1a). Mikor kevés az oxigén, mint a gyorsan növekvő tumorok, HIF1a fokozza a kifejezés CXCR4 [37]. A fokozott expressziója CXCR4 endotélsejtekben megfigyelt mi tumor kollektív része lehet egy integrált hipoxiás válasz a növekvő tumor, amely lehetővé teszi a generációs új erek. A mi vizsgálati csoport érrendszeri CXCR4 kifejezés szignifikánsan korrelált a mértéke helyi daganat növekedését. 8% a T1 /pT2a daganatok (4 52), és 34% -a T2b /T3 /pT4 daganatok (81 239) CXCR4 pozitív mikroerek voltak kimutathatók. T2b /T3 /T4 stádiumú gyomor carcinoma nagyobb valószínűséggel hordozzák hypoxiás mikrokörnyezet, mint a T1 /T2a stádiumú tumorok és ezáltal okozhat, CXCR4 génexpresszió és angiogenezis. Kimutatása CXCR4 pozitív erek nagy nyirokcsomó áttétek (> 9 mm átmérőjű) alátámasztja ezeket az észrevételeket. Ezenkívül már korábban kimutatták, összehasonlítható eredmények colorectalis carcinoma [38]. Továbbá, amint az a glioblastoma multiforme [39], a tumor minták felfedve mindkét, CXCL12 pozitív tumorsejtek és CXCR4 pozitív mikroerek voltak magasan szignifikáns összefüggést magas lokális tumor kiterjedését és magas UICC szakaszban, további támogató a jelentősége egy funkcionális CXCL12-CXCR4 tengely gyomorrák biológia.}

Összefoglalóan azt mutatják, hogy a GPCR-ek vannak eltérően expresszált gyomorkarcinómában szövetben, és hozzájárulhat a tumor biológia: expresszáló tumorok mindkét, CXCL12 a tumorsejtek és CXCR4 a tumor környező mikroerek mutatnak egy igen szignifikáns összefüggést lokális tumor növekedését és UICC szakaszaiban. Ezek az eredmények, együtt a korábbi adatok kolorektális karcinóma támasztja a szerepe a CXCL12-CXCR4 tengely tumor-neoangiogenezis gasztrointesztinális daganatok. A CXCL12-CXCR4 útvonal lehet újszerű ígéretes antiangiogén cél kezelésére gastricus karcinómák.

Anyagok és módszerek

A tumorminták

A szövetmintákat a gyomorrák kapunk sebészeti úton a Charité Egyetemi Kórház Berlin (1995-2008). Friss fagyasztott szövete 6 esetben a bél típusú gyomorrák használták GeneChip elemzés (csomóponti negatív: 3 beteg; csomóponti pozitív: 3 beteg, a női-férfi arány: 1:02). Egy független sor páros rákos és tumor szomszédos normál szövetben 37 intesztinális típusú gyomor carcinoma vizsgáltuk real-time RT-PCR (csomóponti negatív: 12 beteg; nyirokcsomó pozitív: 25 beteg, a női-férfi arány: ~1:1 , részletes betegjellemzőket lásd táblázat S3). Immunhisztokémiai elemzések pácienscsoporton 347 egymást követő gyomorrákos betegeknél vizsgálták, amely 194 intesztinális típusú és 122 diffúz típusú carcinoma szerint Laurén besorolás. 31 minta esetében többi szövettani altípus (azaz mucinosus, cső alakú, differenciálatlan). Röviden, a kohort 220 férfi és 127 nő. Az átlagéletkor a betegek a diagnózis idején 64 év volt. Túlélési adatok álltak rendelkezésre álló 196 betegnél. A nyomon követés adatait a többi beteg hiányzott, mert ezek a betegek nem rezidens a kórház közelében, és elvesztek a követés. A 196 beteg, 124 halt meg a követési idő alatt. A medián követési idő azoknak a betegeknek még életben lévő végpontja elemzés 33 hónap. A 61 beteg, szöveti illő nyirokcsomó-metasztázisok állt rendelkezésre (27 intesztinális típusú, 26 diffúz típusú, 8 egyéb szövettani altípus). Csak a betegek szövettanilag igazolt gyomorrák és szövetek megfelelő rendelkezésre vontak be. Betegek neoadjuvantly kezelt gyomor karcinóma vagy más ismert rosszindulatú kizártuk a vizsgálatból. Ez a projekt által jóváhagyott helyi etikai bizottság (ref. Szám EA1 /06/2004). Katalógusa

GeneChip elemzés katalógusa

A teljes RNS-t izoláltunk fenol-kloroform segítségével Mirvana ™ miRNS Isolation Kit ( Ambion, Austin, USA). A szennyező DNS-t eltávolítjuk, a DN-áz kezelés (Turbo DNAfree készlet; Ambion, Austin, USA) 37 ° C-on 30 percig. Mi használtuk GeneChip® Human Genome U133 Plus 2.0 tömbök (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) határoztuk meg a gyártó protokoll elemzése mRNS expressziós szintek. Affymetrix GeneChip® operációs szoftverrel (GCOS 1.4) automatizálja ellenőrzése GeneChip® Fluidics Állomások és GeneChip® Scanner 3000. katalógusa

Bioinformatikai katalógusa

A nyers adatokat elemeztük a Affymetrix GeneChip operációs szoftverrel (GCOS 1.4) . A kimutatási p-érték a transzkriptum meghatározza a kimutatási hívást, amely jelzi, hogy a transzkriptum megbízhatóan kimutatható (p < 0,05, jelen van), vagy nem mutatható ki (hiányzik). Annak érdekében, hogy az összehasonlítás chipek közötti az adatokat méretezhető globális intenzitása 500. A Data Mining Tool 3.0 (Affymetrix) és GeneSpring szoftvercsomag 7.2 (Silicon Genetics, Redwood City, CA) használtunk átlagos eredményeit a különböző minták és hajtsa végre a statisztikai elemzés összehasonlítani között gyomorrák (N1) és anélkül (N0) nyirokcsomó-metasztázisok. Az adatok hat tömbök normalizálódtak elszámolni változékonysága hibridizációs szondák párok és más hibridizáció műtárgyak. A normalizálás az alábbi három lépésből áll: először, az adatok átalakítását (set mérések kevesebb 300,0-300,0); második, egy chip (normalizálni minden chip a 50. percentilis a mérések vett a chip); és a harmadik, egy gén (normalizálni minden gén a medián a mérések az adott gén). A szoros változást számoltuk minden egyes gén számtani átlagát normalizált kifejezés értékeit N1 osztva a számtani átlagát normalizált kifejezés értékeit N0. A nyers adatokat microarray kísérletek feltölteni a Gene Expression Omnibus Database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?token=pzmjlcoscakugfc&acc=GSE17187).

Real-time reverz transzkriptáz polimeráz-láncreakció

cDNS-szintézishez, 2 ug teljes RNS-t reverz transzkripció révén Omniscript RT kit (Qiagen). A gén-specifikus primereket terveztünk a BioTeZ Berlin-Buch GmbH (Berlin, Németország). A primer szekvenciák a következők voltak: a CXCR4 5 'CAG CAG GTA GCA AAG TGA CG, 3' CAG GGT TCC TTC ATG GAG TC; CXCL12 5 'CGA TTC TTC GAA AGC CAT GT, 3'CAC TTG TCT GTT GTT GTT CTT CAG; béta-2-mikroglobulin 5 'ACC CCC ACT GAA AAA GAT GA 3' ATC TTC AAA CCT CCA TGA TG. Valós idejű reverz-transzkriptáz polimeráz-láncreakció (Real-time RT-PCR) alkalmazásával hajtottuk végre a QuantiTect ™ SYBR® Green PCR kit (Qiagen), és a LightCycler rendszer (Roche Diagnostics, Mannheim, Németország). Az összehasonlító C _{t értékeket normalizáltuk, hogy a háztartási gén béta2-mikroglobulin. Templát nélküli kontrollok (nincs cDNS PCR) futtattunk minden egyes gén kimutatására specifikus vagy genomiális amplifikációs láncindító dimerizáció.}

Szövettan

A szövettani vizsgálatok, a szöveti mintákat fixáltuk 10% semlegesített formalin és paraffinba ágyaztuk. Paraffint metszeteket haematoxylin és eozin. Gyomorrák sorolták a WHO szerint osztályozás [1]. A pTNM szakasz szerint határoztuk meg a UICC irányelveket. Katalógusa

Tissue microarray építőipari katalógusa

A formalinban fixált és paraffinba ágyazott szövettani mintákat előállításához használt szöveti microarray korábban leírtak szerint [40], [41 ]. Röviden, 3-6 morfológiailag reprezentatív részek a paraffin "donor" blokkok kerültek kiválasztásra.

• PLoS One: Gene Expression-aláírások különböztethetünk gyomorkarcinóma fajtájának és szakaszai
• PLOS Genetics: Mir-218 Gátolja invázió és metasztázis gyomorrák megcélozva Robo1 receptor