absztrakt katalógusa
Háttér katalógusa
Casticin egyik fő aktív összetevők nyert Fructus Viticis anyagok és módszerek katalógusa az apoptotikus tevékenységét casticin (1,0 umol /l) és a TRAIL (25, 50 ng /ml) önmagában vagy kombinációban, a gyomor rákos sejtvonalakban BGC-823, SGC-7901 és MGC-803 mutattak ki a sejt alkalmazása apoptózis ELISA detektáló készlet, áramlási citometria ( FCM) propidium-jodid (Pl) festéssel és tevékenységek a kaszpáz-3, -8 és -9 ELISA és hasítását polyADP-ribóz polimeráz (PARP) fehérje Western blot analízisével. Halál receptorok (DR) expressziós szinteket értékeltük FCM analízis és Western-blottal. 2 ', 7'-diklór-fluoreszcein-diacetát (DCFH-DA) használtuk próbaként mérésére a megnövekedett reaktív oxigéngyökök (ROS) szintjét a sejtekben. Több beavatkozások, mint az siRNS transzfekció és farmakológiai inhibitorok alkalmazása felfedezni a mechanizmusokat ezen intézkedések. Katalógusa Eredmények katalógusa szubtoxikus koncentrációban casticin jelentősen fokozta TRAIL-indukált citotoxicitás és apoptózis BGC-823, SGC-7901 és MGC-803 sejtekben. Casticin drámaian fokozódik DR5 receptor expressziót, de nem volt hatással a DR4 vagy csalogató receptorokhoz. Törlését DR5 siRNS jelentősen csökkentette által indukált apoptózis együttes alkalmazása TRAIL és casticin. Géncsendesítés A CCAAT /enhancer binding protein homológ fehérje (CHOP), valamint előkezelés salubrinal, egy endoplazmatikus retikulum (ER) stressz-inhibitor, legyengített casticin indukálta DR5 receptor expresszió, és az apoptózis és a ROS-termelés. Casticin downregulált expressziós szint a sejt túlélését fehérjék cFLIP, Bcl-2, XIAP, és a survivin. Ezen kívül casticin is indukált kifejezései DR5 fehérjét más gyomorrák sejtek (SGC-7901 és MGC-803). Katalógusa Következtetés /Jelentés katalógusa Casticin fokozza TRAIL-indukált apoptózis révén downregulációját a sejtek túlélési fehérjék és a túlszabályzását DR5 receptorok intézkedések révén a ROS-ER stressz-CHOP útvonal. katalógusa Citation: Zhou Y, Tian L, Long L, M Quan, Liu F, Cao J (2013) Casticin fokozza TRAIL-indukált apoptózis gyomorrák sejtek révén endoplazmás retikulum stressz. PLoS ONE 8 (3): e58855. doi: 10,1371 /journal.pone.0058855 katalógusa Szerkesztő: Kaustubh Datta, University of Nebraska Medical Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa Beérkezett: június 11, 2012; Elfogadva: február 8, 2013; Megjelent: március 11, 2013 katalógusa Copyright: © 2013 Zhou et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa Forrás: Ez a munka támogatta a projekt a NSFC (szám 30760248), a projekt tudományos kutatás Hunan tartományban a Közigazgatási Hivatal a hagyományos kínai orvoslás (szám 2010081), a projekt tudományos kutatás Hunan tartomány, Department of Education (szám 10C0975), Major projekt Elem tudományos kutatás Hunan tartomány az Oktatási Minisztérium (szám 09A054), és a projekt tudományos kutatás Changsha város Iroda Science and Technology (szám K1104060-31). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa Bevezető Fructus Viticis katalógusa ( Manjingzi katalógusa a kínai neve), nevezetesen gyümölcse Vitex trifolia L. katalógusa (család Verbenaceae katalógusa) ez egy hagyományos kínai orvoslás használni, mint egy gyulladáscsökkentő szer. Casticin egyike az aktív komponensek származó Fructus Viticis Nemrégiben előző munka laboratóriumunkban jelezte, hogy a hatása casticin az apoptózis humán hepatocelluláris karcinóma sejtek részt vesz a DR5 útvonal független a státuszát p53 [10]. Ezt igazolja, hogy a CCAAT /enhancer binding protein homológ fehérje (CHOP), más néven növekedési gátlás és a DNS-károsodás-gén 153 (GADD153), amelyek közvetlenül szabályozza a DR5 expressziója révén egy CHOP kötőhelyet az 5-szegélyező régió, a DR5-gén [11], [12]. Mi és mások, arról számoltak be, hogy bizonyos gyógyszerek, mint például az 5, 7-dimethoxyflavone és dimetil-celekoxib, indukálja a DR5 expressziója révén CHOP-függő transzaktiváló a DR5-gén [13] - [15]. Ezenkívül több tanulmány kimutatta, szoros kapcsolatát endoplazmás retikulum (ER) stresszt és DR5 expresszióját. ER stressz indukálódik amikor kitekeredett fehérjék felhalmozódnak az ER lumen [16]. Úgy tűnik, hogy ez a válasz aktiválhatja specifikus apoptotikus utak megszüntetésére súlyosan károsodott sejteket, amelyekben fehérjeláncok hibák nem lehet megoldani [17], [18]. Különböző ER stressz induktorok, például MG132 [12], tunikamicin [19] és thapsigargin [20], következetesen kimutatták, hogy indukálja a DR5 expresszióját a sejtek felületén. Bár a molekuláris mechanizmusok DR5 fehérje expresszióját ER stressz induktorok változnak is ingerek és a sejttípus, az ER stressz-indukálható transzkripciós faktor, CHOP, biztosította a kapcsolatot az ER stressz és DR5. Azt azonban, hogy casticin indukál DR5 expresszió gyomor rákos sejteket, és ha igen, a természet a molekuláris mechanizmusa ismeretlen. Egy nemrégiben készült tanulmány kimutatta, hogy a hatékony tumor nekrózis faktor-α-kapcsolódó apoptózist indukáló ligandum ( TRAIL) -alapú kombinációs terápia lehet elérni upregulating DR4 és DR5 expresszióját, és közvetlenül célzási tumorsejtek mitokondrium, hogy serkentsék a apoptózist indukáló tulajdonságai [21]. Az a képesség, a mitokondriumok, hogy közvetítsen apoptózis szorosan szabályozza tagjai a Bcl-2-szupercsalád [22]. Elnyomása antiapoptotikus fehérje expresszióját, antiszensz RNS-t vagy siRNS, kimutatták, hogy érzékennyé rákos sejtek TRAIL [23]. Ennek eredményeként, a szerek, amelyek downregulate ilyen antiapoptotikus fehérjék Mivel a survivin, celluláris FADD-szerű interleukin-1β-konvertáló enzim gátló fehérje (cFLIP), a Bcl-2, és X-kromoszómához kötött apoptózisgátló protein (XIAP) potenciálisan érzékennyé rák sejtek apoptotikus TRAIL hatásait [23], [24]. katalógusa a jelen tanulmányban ezért arra koncentráltunk, hogy vizsgálja, hogy casticin fokozza TRAIL által okozott rákos sejt apoptózist, és ha igen, hogyan casticin fokozza ezt hatás. Azt találtuk, hogy casticin potencírozza TRAIL-indukált apoptózis upregulating DR5 keresztül a ROS-ER stressz-CHOP útvonal és mTOR gátlása miatt csökken a kifejezés a sejtek túlélését fehérjék Bcl-2, XIAP, cFLIP, és a survivin a gyomor rákos sejtekben. Eredmények szubtoxikus koncentrációban casticin szelektíven fokozza a TRAIL-indukált citotoxicitás a gyomorrák sejtek A citotoxicitását casticin és TRAIL egyedül, vagy kombinációban, vizsgáltuk humán gyomorrák vonalak BGC- 823, SGC-7901 és MGC-803 által meghatározott, az MTT assay. Casticin és TRAIL egyedül okozott citotoxicitást gyomorrák-sejtek, egy koncentráció-függő módon (1A és B). Enyhén citotoxicitás (< 20%) figyeltek meg az alacsonyabb koncentrációjú casticin (1,0 umol /l, ábra az 1A). Kezelése gyomorrák sejtek 25-50 ng /ml TRAIL 24 óra indukált korlátozott citotoxicitás (< 20%). Azonban, társ-kezelés gyomorrák sejtek casticin (1,0 umol /l) és a TRAIL (25 ng /ml vagy 50 ng /ml) jelentősen növelte a citotoxikus hatásokat összehasonlítva kezelés casticin vagy TRAIL egyedül (1C). Mivel azt találtuk, hogy a kombinált kezelés casticin és TRAIL erősen indukált citotoxicitást gyomorrák-sejtek, a következő alkalommal vizsgáltuk a kezelés hatását a immortalizált humán gyomornyálkahártya epiteliális sejtvonal GES-1. Érdekes, hogy a kombináció a casticin és TRAIL nem indukált citotoxicitást GES-1 sejteket (1D ábra) Ezek az eredmények azt jelzik, hogy szubtoxikus koncentrációban casticin szelektíven szenzibilizált humán gyomorrák sejtek TRAIL-indukált citotoxicitást. Annak vizsgálatára, hogy az apoptózis szerepet játszik a sejt növekedés gátlás következő co-kezelés casticin és TRAIL, először vizsgált apoptózis segítségével áramlási citometriás elemzés kimutatására növekedése hypodiploid sejt populációk. Az eredmények azt mutatták, hogy az arány az apoptózis 3,78 ± 1,3%, 4,69 ± 1,7%, illetve 37,1 ± 4,9% (átlag ± SD, N Következő megvizsgálták, hogy a kaszpázok ténylegesen aktivált indukció során az apoptotikus sejthalált a kombinált kezelés casticin és TRAIL gyomor rákos sejtekben. Kezelése Gyomor rákos sejtek 1 nmol /liter casticin egyedül 24 órán nem indukált semmilyen tevékenységet a kaszpáz-3, -8 és -9. Válaszul a TRAIL (50 ng /ml), a tevékenységek a kaszpáz-3, -8 és -9 nem változott. Azonban a kombinált kezelés a casticin és a TRAIL által indukált aktiválását a kaszpáz-3 és -8 és enyhén aktivált kaszpáz-9 (2. ábra E, F és G). Azt is megvizsgáltuk, amely kaszpáz kifejezetten aktiválva válaszként casticin és a TRAIL kezelés alkalmazásával kaszpáz-inhibitorok, beleértve a pán-kaszpáz inhibitor zVAD-fmk, a kaszpáz-3-inhibitor zDEVD-fmk a kaszpáz-8 inhibitor zIETD-fmk és a kaszpáz-9 inhibitor zLEHD-fmk. Ábrán látható 2E, zVAD-fmk zDEVD-fmk és zIETD-fmk jelentősen csökkent az aktivitás a kaszpáz-3 által indukált kombinált kezelésére casticin és TRAIL, de zLEHD-fmk volt egy kis hatása. zVAD-fmk és zIETD-fmk egyidejűleg teljesen blokkolja a kaszpáz-8 aktiválás és zDEVD-fmk részlegesen blokkolt kaszpáz-8; Azonban zLEHD-fmk már kis hatással aktiváltsági állapotában kaszpáz-8 (ábra 2F). Ennek megfelelően azt találtuk, hogy a kaszpáz-9-ben kissé aktivált sejtekben kezelt casticin és TRAIL, de nem kezelt sejtek casticin és TRAIL jelenlétében Z-IETD-fmk zVAD-fmk és zLEHD-fmk (ábra 2G). Együttesen ezek az eredmények azt sugallják, hogy casticin azzal a kiegészítéssel, TRAIL indukálja kaszpáz-8 aktiválás upstream a kaszpáz-9-aktiválás [10]. Végül vizsgáltuk, hogy casticin fokozhatja TRAIL-indukált PARP hasítás és megállapította, hogy casticin fokozott TRAIL-indukált növekedését a PARP hasítás BGC-823, SGC-7901 sejtek (2H ábra). Ezek az eredmények erősen azt jelzik, hogy egy szubtoxikus koncentrációban casticin fokozza a TRAIL-indukált apoptózis a gyomor rákos sejteket. Apoptosis hepatocelluláris karcinóma sejtek által indukált casticin részt DR5 upreguláció [10]. Ezért kezelt BGC-823 sejtek casticin 24 órán majd a használt Western blot analízissel, hogy megvizsgálja a sejtek TRAIL-receptor expresszió. Casticin fokozott DR5 expresszió egy koncentráció-függő módon, de nem volt hatással a DR4 expresszió sem DcR1 vagy DcR2 indukció (3A ábra). Indukciós DR5 expresszió casticin történt 6 óra és elérte a 24 óra (3B). Ezek az eredmények azt sugallják, hogy a DR5 upreguláció egy jelölt mechanizmus, amelyen keresztül casticin fokozza az apoptotikus hatásokat a TRAIL in BGC-823 sejtekben. Annak meghatározására, hogy a DR a sejt felszínén vett részt az apoptózis indukcióját által casticin, a sejtfelszíni expresszióját DR5 és DR4 volt megfigyelhető áramlási citométer segítségével. Miután sejt expozíció casticin (1,0 umol /l), a szint a DR5 a sejt felszínén növekedett (3C, ábra). Azonban casticin nem befolyásolta a szintjét DR4 expresszió (ábra 3D). Együttesen ezek az eredmények azt jelzik, hogy casticin upregulálja a kifejezés a DR5 a sejt felületén. Akár túlszabályzását DR5 által casticin specifikus BGC-823 sejtek vagy is előfordul más gyomor rákos sejtvonalak, is vizsgáltuk. Casticin indukált DR5 expresszió gyomorrák SGC-7901 és MGC-803 sejtvonalak, de nem volt nyilvánvaló hatása expresszióját örök életűvé gyomornyálkahártya GES-1 sejtvonal (ábra 3E). Együttesen ezek az eredmények arra utalnak, hogy az fokozza a DR5 által casticin nem specifikus egy adott típusú gyomorrák sejt. annak megállapításához, a szerepe a DR5 receptorok javítására TRAIL-indukált apoptózis által casticin, szoktuk specifikus siRNS DR5 hogy downregulate az expresszióját. A sejtek siRNS esetében DR5 de nem a kontroll siRNS csökkentett casticin-indukált DR5 expresszió. Annak vizsgálatára, hogy a DR5 upreguláció magában casticin fokozott TRAIL-indukált gyomor-sejt-apoptózist, áramlási citometriás elemzést alkalmaztunk annak vizsgálatára, hogy elnyomása DR5 expresszió siRNS lehet gyengíteni a hatása casticin a TRAIL-indukált apoptózis. 4B ábrán, hogy a hatás a casticin a TRAIL-indukált apoptózis ténylegesen csökkent transzfektált sejtekben DR5 siRNS, míg transzfektált sejtek kontroll siRNS nem változott. Összefoglalva, ezek az eredmények azt mutatják, hogy az indukció DR5 kritikus szenzibilizáló tumorsejtek hatásainak casticin a TRAIL-indukált apoptózis. KMOP-közvetített túlszabályzását DR5 igazolták [11] - [15]; Ezért a következő vizsgáltuk, hogy ez a transzkripciós faktor szerepe lehet casticin indukált DR5 upreguláció. Az 5A ábra azt mutatja, hogy casticin indukált CHOP expressziót, ami történt párhuzamosan a megnövekedett DR5 expresszióját. Teszt szerepét KMOP casticin indukálta túlszabályzását a DR, géncsendesítés CHOP által siRNS használtunk. Transzfekció CHOP siRNS lényegesen csökkentette casticin indukált DR5 upreguláció (5B ábra), míg casticin serkentett expresszióját DR5 nem transzfektált és kontroll-transzfektált (kódolt RNS) cellában. Katalógusa A következőkben használt áramlási citometriás elemzés megvizsgálja, hogy az elnyomása KMOP siRNS legyengített érzékenyítő hatása casticin TRAIL-indukált apoptózis. Transzfekció CHOP siRNS szignifikánsan csökkentette a hatásokat (37,1 ± 5,3% -ról 13,5 ± 1,3%, átlag ± SD, n katalógusa = 3) casticin plusz TRAIL-indukált apoptózis (5C), míg a kezelés ellenőrzése siRNS nem volt hatása (5C). Ezek az eredmények azt jelzik, hogy a CHOP részt vesz a DR5 upreguláció és hozzájárul a érzékenyítő hatása casticin a TRAIL-indukált apoptózis a mi kísérleti modellben. Köztudott, hogy az ER indukál ER stressz marker fehérjék (mint például GRP78 és foszfo-eIF2α), amely upregulálja expresszióját CHOP [12], [19], [20]. A jelen vizsgálatban, a hatás a casticin a kifejezés a ER stressz marker fehérjék vizsgáltuk. Eredményeink azt mutatják, hogy casticin valóban indukálja az összes ilyen markerek ER stressz BGC-823 sejteket (6a ábra). Annak meghatározásához, hogy az ER stressz szerepet játszik a potencírozza casticin a által indukált apoptózis TRAIL, salubrinal, inhibitora ER stressz, használták. Salubrinal (50 nmol /liter) szignifikánsan védett BGC-823 sejteket a által indukált apoptózis együttes alkalmazása casticin és TRAIL (6B). Azt is megvizsgáltuk, hogy a kezelés a BGC-823 sejtek az endoplazmatikus retikulumban (ER) stressz indukáló tunikamicin [25], sokkal magasabb szintű DR5 fehérje szint, és fokozza a TRAIL-indukált apoptózis. Azt találtuk, hogy tunikamicin (3,0 nmol /l) idő-függő módon növelte a fehérje szint DR5, p-eIF2α, GRP78 és CHOP, a BGC-823 sejtek (ábra a 6C). Cotreatment a tunikamicin (3,0 nmol /l) és a TRAIL (50 ng /ml) szignifikánsan növelte a sejtek százalékos arányát a sub-G1 fázisban, míg a tunikamicin vagy TRAIL egyedül (ábra 6D). Ezek az eredmények alátámasztják azt a hipotézist, hogy az ER stressz részt vesz a potencírozó hatása casticin a által indukált apoptózis TRAIL. nemrég kimutatták, hogy az 5, 7-dimethoxyflavone szelektíven fokozza a TRAIL-indukált apoptózis ROS által stimulált ER-stressz kiváltó CHOP-mediált DR5 upreguláció hepatocelluláris karcinóma sejtek [15]. Mi tehát vizsgálni, hogy casticin indukál ROS termelést. 2 '7'-diklór-fluoreszcein-diacetát (DFCH-DA) használtuk próbaként mérésére bármilyen növelését ROS szintek a sejtekben. Idő természetesen kísérletek azt mutatták, hogy a szintek a ROS emelkedett volt kezdetben 1 H, elérte a csúcsot 3 óra és fennállt legfeljebb 24 órával a kezelés után 1,0 | imol /l casticin (7a ábra). Casticin indukált ROS termelést koncentráció-függő módon (7B ábra). Katalógusa megfejteni a kapcsolatát ROS és a KMOP-függő DR5 indukciós azt vizsgáltuk, hogy a ROS szabályozza casticin kiváltott TRAIL receptorok és KMOP jelenlétében és távollétében N Ezután azt vizsgáltuk, hogy a ROS szerepet játszik a casticin indukált TRAIL fokozó hatás. Ábrán látható 7D, casticin jelentősen javított TRAIL-indukált apoptózist BGC-823-sejtek, és előkezelése sejtek NAC jelentősen csökkent casticin indukálta apoptotikus sejthalál tartozékot 52,4 ± 3,3% -ról 8,2 ± 0,8%, (átlag ± SD, n = 3) arra utal, hogy a ROS kritikus szerepet játszik közvetítésében hatásainak casticin a TRAIL-indukált apoptózis. Casticin gátló módon szabályozza a kifejezés a különböző sejtek túlélését fehérjék BGC-823 sejtek beszámoltak arról, hogy számos anti-apoptotikus proteinek, mint például a survivin, cFLIP, XIAP, Bcl-2 és Bcl-x képes szabályozni a TRAIL-indukált apoptózisra [25], [26]. A jelen tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy bizonyos meghatározott sejtek túlélését fehérjék részt vettek a potencírozó hatása casticin a TRAIL által indukált apoptózis. BGC-823 sejteket tettünk ki különböző koncentrációjú casticin 24 órán át, majd vizsgáltuk a Bcl-x L, Bcl-2, survivin, XIAP, cFLIP, cIAP-1 (celluláris apoptózisgátló protein 1) és TRAF1 (TNF-receptor-asszociált faktor 1) kifejezés. Casticin gátolta a Bcl-x L, Bcl-2, survivin, cFLIP és XIAP expressziója (8a ábra). A hatások a casticin a kifejezés a Bci-x L, Bcl-2, survivin, XIAP és cFLIP voltak drámai, míg a downregulációját cIAP-1 nem nagyon kifejezett. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy alulszabályozása sejt túlélését fehérjék egyike a mechanizmusok vezetés a potencírozó hatása casticin a által indukált apoptózis TRAIL. következő megvizsgálták casticin lehetett expresszióját modulálni pro-apoptotikus proteinek. Azt találtuk, hogy casticin drámaian serkentett expresszióját Bax egy koncentráció-függő módon (8b ábra). Casticin is emelkedett hasítása ajánlatra egy koncentráció-függő módon, amint azt a csökkent expressziójának Bid protein (8b ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy casticin egyidejűleg aktiválja a belső mitokondrium-közvetített úton és az extrinsic DR-indukált útvonal, amint azt a csonkított proapoptotikus protein Bid. A jelen vizsgálat, azt vizsgáltuk, hogy a casticin egy polymethoxyflavone származó Fructus Viticis katalógusa, hogy modulálja TRAIL jelátvitel gyomorrák sejtek és eredményeink arra utalnak, hogy casticin fokozza a TRAIL-indukált apoptózist gyomorrák BGC-823, SGC-7901 és MGC-803 sejtek (1) indukáló DR5 expresszióját és (2) downregulatin sejt túlélésének fehérjék kapcsolódik tumorsejt ellenállás nyomvonalat. Casticin felfokozását DR5 úgy tűnik, hogy közvetített aktiválásán keresztül a ROS-ER stressz-CHOP reakcióút (9. ábra). Kimutattuk, hogy casticin indukált DR5 expresszió gyomor rákos sejtekben. Ezek az eredmények megegyeznek azokkal a korábbi munka [10], azt jelentette, hogy az apoptotikus hatása casticin humán hepatocelluláris karcinóma sejtek részt vesz DR5 upreguláció de nem tér ki arra, hogy vajon casticin javíthatja TRAIL által indukált apoptózis vagy a mechanizmus a túlérzékenységet. Itt, már kimutatták, hogy a DR5 upreguláció kritikus szenzibilizálja a sejtek TRAIL, géncsendesítés a receptor (DR5) attenuált TRAIL-indukált apoptózis. Így DR5 up-regulációját is érzékennyé sejtek TRAIL-indukált apoptózisra [27]. Számos mechanizmus leírták indukció a DR, beleértve a ROS-termelés, a p53 indukció, és az NF-kB, DDIT3 (DNS-károsodás által indukálható átirat 3), peroxiszóma proliferátor-aktivált receptor-γ és a MAPK aktiválását [27], [28] . A jelen vizsgálatban azt találtuk, hogy casticin indukált CHOP és hogy géncsendesítés CHOP által siRNS blokkolta a hatása casticin az indukciós DRS és TRAIL-indukált apoptózis. Eredményeink hasonlóak más vizsgálatok, amelyek azt mutatták, hogy a CHOP kötődik a DR5 promoter és upregulálja Ezt a receptor expressziós [12], [29]. Köztudott, hogy CHOP egy tipikus ER stressz-szabályozott fehérje részt vesz az ER stressz-indukált apoptózis [11]. A mi megállapítása CHOP indukció által casticin azt sugallja, hogy casticin válthatnak ER stressz és növelik az expressziós szintek GRP78 és eIF2α, amelyek további fehérjék felhalmozódott vagy megnövekedett alatt ER stressz [17]. Ezért valószínűnek tűnik, hogy casticin indukál ER stressz. Salubrinal egy szelektív inhibitora ER stressz-indukált apoptózis [30]. A jelenléte salubrinal látszólag védett gyomorrák sejtek casticin plusz TRAIL-indukált apoptózis. Úgy tűnik tehát, hogy casticin apoptózist indukál potenciálódását bevonásával ER stressz mechanizmusokat. Katalógusa Azt találtuk, hogy talán a legfontosabb upstream jelhez casticin modulációs TRAIL receptorok ROS. Eredményeink azt mutatják, hogy egyértelműen casticin indukált a ROS-termelés, és az edzés a ROS antioxidáns N Azt is megállapították, hogy a másik mechanizmusa érzékenységet magában foglalja a szabályozás az anti-apoptotikus fehérjék. Casticin downregulált expresszióját elevels a Bcl-2, Bcl-xL, XIAP és a survivin, amelyek mindegyike már kapcsolódik tumorsejt ellenállás TRAIL [34], [35]. Valóban, downregulációját XIAP, Bcl-2 és Bcl-x L expresszióját kimutatták, hogy érzékennyé tumorsejtek TRAIL [36], [37]. Wang et al. Katalógusa (2005) [8] azt mutatta, hogy casticin csökkent a Bcl-2-expresszió mértékét és downregulált aránya a Bcl-2 /Bax expressziójának K562 sejtekben. Eredményeink szintén megegyeznek a korábbi vizsgálatok, amelyek kimutatták, hogy etanolos kivonatot szárított érett gyümölcs a barátcserje katalógusa csökkent a Bcl-2, Bcl-és Bid fehérje, és nőtt a szintje Bax fehérje [7]. A jelentés Chen et al. Katalógusa (2011) nemrég kimutatta, hogy Bax serkentett, míg expressziós szintjeit Bcl-és XIAP arra downregulált által casticin [33]. Katalógusa Kobayakawa et al. számolt be, hogy casticin jelentősen gátolta a növekedést a KB-sejtek, de nem gátolják a A431 sejtek, amelyek hasonló a normál sejtvonal 3T3 svájci albínó és TIG-103 [38]. A jelen vizsgálatban kimutattuk, hogy casticin specifikusan indukált apoptózis humán gyomorrák sejtek, de nem GES-1 sejteket, bár a mechanizmus a szelektív apoptózis indukcióját nem határozták meg. Eredményeink azt sugallják, hogy casticin lehet egy specifikus tumorellenes szer, alacsony toxicitású. Összefoglalva, eredményeink azt bizonyítják, hogy casticin hozzájárul az érzékenységet a tumorsejtek TRAIL által kihasználva több mechanizmusokat. Casticin kezdetben elősegíti ROS és kiváltja az ER stressz akkor indukál DR5 felfokozását aktiválása révén CHOP, amely ennek következtében fokozza a TRAIL-indukált aktiválását DR5-indukált és a mitokondriumok által közvetített apoptózis utakat. Ezzel párhuzamosan, casticin megkönnyíti TRAIL-indukált apoptotikus sejthalál gátlása az anti-apoptosis protein expressziója és aktiválódása a pro-apoptózis fehérjéket. Továbbiak során arra kell irányulniuk, hogy észre kibontakoztatják kombinációja casticin és TRAIL terápiával gyomorrákos betegeknél. Ezért további vizsgálatokat az intézkedések a casticin állatkísérletekben lesz szükség. Katalógusa Anyagok és módszerek katalógusa Reagensek katalógusa Casticin (tisztaság ≥ 98%) vásároltunk a Chengdu Biopurify fitokemikáliák Ltd. (Chengdu, Kína), jelenleg sárga kristályok (molekulatömeg 374,3). Casticin feloldunk dimetil-szulfoxidban (DMSO), hogy egy 10 mmol /l törzsoldatot és hígítani egy sejttenyésztő közegben a kívánt koncentrációra közvetlenül a felhasználás előtt. A következő reagenseket vásárolt Hunani Clonetimes Biotech Co. Ltd. (Changsha, Kína): Oldható rekombináns humán TRAIL (Pepro Tech), sejt apoptózis ELISA Detection Kit (Roche), 2 ', 7'-diklór-fluoreszcein-diacetát (DCFH-DA; Molecular Probes Inc), salubrinal (EMD Chemicals, Inc., San Diego, CA), N-acetil-cisztein (NAC, Sigma), tunikamicin (Sigma), propídium-jodid (Pl, Sigma), kaszpáz-3 aktivitás Detection Kit (Millipore), kaszpáz 8 kolorimetrikus aktivitás vizsgálata Kit 25 (Millipore), kaszpáz 9 Colorimetric aktivitás vizsgálata Kit (Millipore) elleni antitest DR5 (ProSci Inc). Elleni antitestek DR4, PARP, Bcl-2, Bax, Bid, survivin, CHOP, GRP78 és ATF4 kaptuk a Santa Cruz Biotechnology. Anti-XIAP antitestet vásárolt Cell Signaling Technology, Danvers, USA. Kaszpáz inhibitorok, például zVADfmk, zDEVD-FMK, zIETD-FMK és zLEHD-FMK vásároltuk R &D Systems (Minneapolis, MN). Katalógusa Sejtkultúra katalógusa BGC-823, SGC -7901 és MGC-803 humán gyomorrák sejteket nyertünk a kínai Központ Type Culture Collection (CCTCC; Wuhan, Kína) és GES-1 sejteket az Onkológiai Intézet pekingi Egyetem. A sejteket Dulbecco-féle módosított Eagle-féle tápközegben (DMEM, Life Technologies, Grand Island, NY), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS) (Invitrogen), 100 U /ml penicillint és 100 egység /ml sztreptomicinnel párásított légkörben 5% CO 2 37 ° C-on. A sejteket különböző koncentrációjú casticin vagy TRAIL vagy mind a MTT assay. Casticin (1,0 umol /l) és a TRAIL (25, 50 ng /ml) önmagában vagy kombinációban alkalmazták BGC-823 sejtek kimutatására használt apoptózis. A sejteket egy 96 lyukas lemez sűrűségben 0,5104 sejt /lyuk és 24 órán át inkubáltuk, majd ezt követően különböző koncentrációjú casticin és TRAIL 24 óra, vagy kezelt casticin 12 órán végzett kezelés követ TRAIL további 24 órán át. MTT kolorimetriás vizsgálatot végeztünk a korábban leírtak szerint [10]. Az IC 50-értéke, amelynél 50% -a sejt növekedés gátlás összehasonlítva a dimetil-szulfoxid (DMSO) kontroll, úgy számítottuk ki nemlineáris regressziós analízissel GraphPad Prism szoftver alkalmazásával (San Diego, CA). a sejteket oltottunk sűrűségben 4 × 10 6 sejt /ml-100 ml tenyésztő üvegedényekbe 24 órán át, majd tápközeggel kezelt különböző koncentrációban tartalmazó casticin vagy TRAIL vagy mindkettő együtt a jelzett időkben. Sejt apoptózis detektáltuk áramlási citometriával (FCM; American BD Company, FACS 420). A sejt apoptózis ELISA kimutatási kit kimutatására használt apoptózis kezelt sejtekben casticin szerint a gyártó protokollja. Röviden, a sejteket leoltottuk egy 96 rezervoáros lemez sűrűségben 1 × 10 4 sejt /lyuk 24 órán, és a táptalajt különböző koncentrációban tartalmazó casticin adunk szükség szerint. 24 óra eltelte után, a citoplazma a kontroll és kezelt csoportokba került át a 96 lyukas lemez peridiumed a streptavidin, inkubáltuk a biotinilezett hiszton antitest és peroxidáz-jelölt egér anti-humán DNS-t 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az abszorbanciát 405 nm-en mértük egy EXL-800 típusú enzimkapcsolt immunoszorbens berendezés. A tevékenységek a kaszpáz-3, -8 és -9 értékeltünk a kaszpáz 3 Activity Detection Kit, a kaszpáz-8 kolorimetrikus aktivitás vizsgálata Kit 25 és a kaszpáz-9 kolorimetrikus aktivitás vizsgálata Kit, ill. Röviden, a sejtlizátumokat készítettünk után az illető kezelés kísérleti szerek. Az assay-ket hajtunk végre 96 mérőhelyes lemezeken inkubálva 20 ug sejtlizátum 100 ul reakció-pufferrel (1% NP-40, 20 mM Tris-HCl-t (pH = 7,5), 137 mM NaCI, 10% glicerin), amely 5 | iM a kaszpáz-3-szubsztrát Ac-DEVD- p katalógusa NA, a kaszpáz-8 szubsztrát Ac-IETD- p katalógusa NA vagy a kaszpáz-9 szubsztrát Ac-LEHD- p
és leírták, hogy gyakoroljon Rákellenes hatását a különböző rákos sejtek, de a pontos mechanizmusa ezt a tevékenységet továbbra is tisztázatlan. katalógusa
[1]. Számos tanulmány igazolta, hogy casticin fejt ki anti-karcinogén aktivitást mell [2], méhnyakrák [3], a prosztatában [4], a tüdő és a vastagbél rák [5], [6], valamint a gyomorrák [7] in vitro katalógusa. Azt is leírták, hogy casticin növekedését gátolja humán mieloid leukémia sejtek [8] és indukálja a halálát leukémia sejtek indukciója vagy apoptózis vagy egy mitotikus katasztrófa [9].
szubtoxikus koncentrációban a casticin érzékennyé gyomorrák sejtek TRAIL-indukált apoptózisra
= 3) a casticin (1 umol /l), TRAIL (50 ng /ml) és casticin plusz TRAIL, illetőleg (2A ábra). A sub-G1 lakossága BGC-823 sejtek jelentősen emelkedett 12 H, és csúcsos 24 óra előkezelés után 1 nmol /l-casticin majd 50 ng /ml TRAIL (2b ábra). Mi a következő meghatározni a hiszton /DNS-fragmens szintje gyomor rákos sejtvonalak BGC-823, SGC-7901 és MGC-803 segítségével a sejt apoptózis ELISA kimutatási kit. 2C ábra szemlélteti, hogy a kombinált kezelés casticin és TRAIL szinergikusan indukált hiszton /DNS fragmentáció. A hiszton /DNS-fragmens szintjeit BGC-823 emelkedett volt 12 óra elteltével, és csúcsos 24 H következő co-kezelést casticin (1 umol /l) és a TRAIL (50 ng /ml, 2D, ábra).
Casticin expresszióját indukálja DR5 gyomorrák sejtek
DR5 indukció által casticin szükséges javítására TRAIL-indukált apoptózist BGC-823 sejtek
Casticin indukált DR5 upreguláció közvetíti indukció CHOP a BGC-823 sejteket
Casticin indukált endoplazmás retikulum (ER) stresszt gyomorrák sejtek
Casticin-indukált DR5 upreguláció és az apoptózis potencírozás vannak ROS-függő in BGC-823 sejtek
-acetylcysteine (NAC), amely egy scavenger oxigén szabad gyökök. Azt találtuk, hogy előkezelést sejtek NAC csökkentette a casticin-indukált túlszabályzását DR5 és a CHOP expresszió (ábra 7C).
Discussion
-acetylcysteine csökkentette a hatását casticin az indukció CHOP és DR5. Azt találtuk, hogy kioltás ROS is legyengített casticin potencírozza a TRAIL-indukált apoptózis. Eredményeink megegyeznek azokkal jelentett a korábbi vizsgálatok során sulforaphane, zerumbone és celastrol a DR5 indukció. Eredmények a jelen és a korábbi vizsgálatok erősen azt jelzik, hogy a ROS fontos szerepet játszik a moduláció a TRAIL-receptor DR5 [31], [32]. Eredményeink megegyeznek azokkal, amelyeket a korábbi munka azt jelentette, hogy casticin felhalmozódását okozta sub-G1 sejtek és megnövekedett ROS termelés HeLa, CaSki és SiHa sejtvonalak, de nem PBMC [33]. De megmutattuk, hogy casticin csökkentette a GSH-tartalom ( P < 0,05
), de nem befolyásolja az intracelluláris ROS PLC /PRF /5 és Hep G2 sejteket [10]. A kézenfekvő magyarázat a látszólagos adatütközésről, hogy vannak különbségek módozat, szabályozzák intézkedéseit a különböző sejttípusok. Katalógusa
MTT assay
Flow citometria segítségével PI festéssel
Histone /DNS-fragmens ELISA
Elemzés a kaszpáz-3, -8 és -9 tevékenységek
NA.
A bél mikrobiomája és az IBD - a kapcsolat talán az étrendben állítja a tanulmányt
A kereskedelmi kefir termékek címkéi helyesen jelzik a mikrobák szintjét?
A fiatal vér visszaállítja az idősek vitalitását
A mikrobiális DNS vérvizsgálata rákra figyelmeztethet
A hüvelyi mikrobiom befolyásolhatja a HIV megelőző terápia hatékonyságát
Glicirrizinsav, mint gyógyszerjelölt a COVID-19-re
GERD diagnózishoz használt tesztek
Néhány betegnél, gyomor -nyelőcső reflux betegségre gyanakodhatunk, de a beteg tünetei atipikusak lehetnek. Vagy egyszerűen meg kell erősítenünk a diagnózist. Ehhez a McKay Ogden Clinic GI -jén, több
A fehérvérsejtek és szerepük az agyban
Egy úttörő tanulmányban nemzetközi kutatók egy csoportja megállapította, hogy az agynak saját házon belüli immunsejtjei vannak, amelyek segítik az agy normális fejlődését és szerepet játszanak bizonyo
Hogyan lehet erősíteni az immunrendszert a koronavírus elleni küzdelemben
Miközben a világ küzd a koronavírus -járvánnyal, egyre többen próbálnak minden eszközzel védekezni a vírus ellen. Jelenleg nincs vakcina a súlyos akut légzőszervi szindróma 2 koronavírus (SARS-CoV-2)