Cancer Stammzellen (CSCs) si responsabel fir Kriibs Werdegang, Metastasen, an um Terrain. Fir Datum, bleiwen der konkreter lues vun CSCs undiscovered. D'Zil vun dëser Etude war Roman biomarkers vun gastric CSCs fir Medeziner Diagnos benotzt proteomics Technologie ze identifizéieren. CSC-wëll SP Zellen, OCUM-12 /SP Zellen, OCUM-2MD3 /SP Zellen, an hir Elteren OCUM-12 Zellen an OCUM-2MD3 Zellen sech an dëser Etude benotzt. Protein lysates aus vunenee Linn sech fir eng relativ an absolut quantitation Technologie benotzt QSTAR Elite Liquid Chromatography mat zwee Mass Spectrometry, zesummen mat isobaric Tags analyséiert. Kandidat Proteinen vun proteomics Technologie fonnt goufen duerch immunohistochemical Analyse vun 300 gastric Cancers validéiert. Baséierend op de Resultater vun LC-MS /MS, aacht Proteinen, dorënner RBBP6, GLG1, VPS13A, DCTPP1, HSPA9, HSPA4, ALDOA, an KRT18, sech weider-reglementéiert souwuel OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen wéini hir entspriechend Elterendeel Zellen Verglach. RT-Hinnen alleguer Analyse uginn, datt de Begrëff Niveau vun RBBP6, HSPA4, DCTPP1, HSPA9, VPS13A, ALDOA, GLG1 VerfÜgung, an CK18 VerfÜgung war héich an OCUM-12 /SP an OCUM-2MD3 an /SP, mat der Kontroll vun den Elteren OCUM-12 Verglach an OCUM-2MD3. Dës Proteinen sech vill mat fortgeschratt Invasioun Déift, lymph Node Metastasen, wäit Metastasen, oder fortgeschratt Medeziner Etapp assoziéiert. RBBP6, DCTPP1, HSPA4, an ALDOA Ausdrock vun allem waren däitlech mat engem aarme hätt an der 300 gastric Kriibs Patienten assoziéiert. RBBP6 huet sech eng onofhängeg prognostic Faktor gin. D'motility-Spannend Fähegkeet vun OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen war vun RBBP6 VerfÜgung siRNA inhibited. Dës Conclusiounen kéint hindeit, datt d'aacht Proteinen, RBBP6, GLG1, VPS13A, DCTPP1, HSPA9, HSPA4, ALDOA, an KRT18, schreiwen Komparativ proteomics Analyse, ugesi goufen Potential CSC lues vun gastric Kriibs ze ginn. Vun der aacht Kandidat Proteinen, war RBBP6 proposéiert fir gastric Kriibs eng villverspriechend prognostic uweist an eng therapeutesch Zil- gin VerfÜgung Fro:. Morisaki T, Yashiro M, Kakehashi A, Inagaki A, Kinoshita H, Fukuoka T, et al. (2014) Vergläichend Proteomics Analys vun Gastric Cancer Stammzellen. PLoS NËMMEN 9 (11): e110736. Doi: 10.1371 /journal.pone.0110736 VerfÜgung Redakter: Anita B. Hjelmeland, Universitéit vun Alabama op Birmingham, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: May 3, 2014; Akzeptéiert: 16. September 2014; Publizéiert: November 7, 2014 VerfÜgung Copyright: © 2014 Morisaki et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Data Disponibilitéit:. D' Auteuren confirméieren datt all Daten d'Conclusiounen si voll sinn ouni Restriktioun Basisdaten. All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren. Bäitrëtt Zuelen fir FAQ Daten sinn als UniProt /Schwäizer-PROT zu Table abegraff 2. VerfÜgung Funding:. Dës Etude deelweis duerch KAKENHI (Grant-zu-Hëllef fir wëssenschaftlech Fuerschung, Nos 22390262, 23390329, an 26293307 finanzéiert gëtt ), déi vun der National Cancer Center Fuerschung an Entwécklung Fund (23-a-9), a vun Prioritéit Research Fund vun Rekorder City University. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Cancer Stammzellen (CSCs) sinn als eenzeg subpopulation zu erhéijen definéiert, datt d'Fähegkeet besëtzen entholl Wuesstem ze lancéieren an Self-Erneierung Kopplung [1]. Et gouf virgeschloen, dass se der heterogen antike vun Kriibs Zellen féieren kann, datt de entholl souwéi spillen eng wichteg Roll an der malignant Werdegang vun carcinoma, wéi wäit Metastasen, um Terrain, an chemoresistance sécherlech [2] - [4]. CSCs waren am Ufank zu Fouss Servicer sinn Leukämie [5] identifizéiert, mä hunn kuerzem an enger grousser Villfalt vu Cancers ze existéieren, dorënner gastric Kriibs gemellt ginn [6]. D'Identifikatioun vun CSC lues kann JavaScript eng nei therapeutesch Perspektiv op der Basis vun selektiv dës kleng Bevëlkerung vun Zellen gezielt [7], [8]. Viru Kuerzem, huet et schonn erwähnt, datt CSCs vläicht hir eege eenzegaarteg lues maachen auszedrécken, wéi aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1) [9], CD44 [10], [11], an CD133 [12]. Mä, si vill vun de publizéiert lues net eenzegaarteg zu CSCs. Chemeschen FAQ Ausdrock profiling erlaabt efficace Identifikatioun vun korrekt an reproducible Ënnerscheed Ausdrock Wäerter fir Proteinen [13]. Isobaric Tags fir relativ an absolut quantitation (iTRAQ) kombinéiert mat multidimensional flësseg chromatography (LC) an zwee Mass spectrometry (LC-MS /MS) Analyse ass entstanen als mächtegen Methodik an der Sich no entholl biomarkers [14]. Mir Rapport virdrun, datt d'Säit Bevëlkerung (SP) Zellen zu der Lag sinn Self-erneieren an Net-SP Zellen produzéieren, an dat Kriibs Zellen an SP ufale besëtzen héich Potential fir tumorigenicity, wäit Metastasen [3], an chemoresistance [2]. Dëst deit drophin, datt SP Zellen vun gastric Kriibs besëtzen Kriibs Stammzellenfuerschung-wëll Eegeschaften. Dofir, war d'Zil vun dëser Etude engem Roman CSC Bewaacher (s) vun gastric Kriibs z'entdecken vun der proteomes ënnert Elterendeel Zellen vergläichen an Stammzellenfuerschung-wëll SP Zellen datt e räiche CSC Populatioun ze besëtzen [15] bekannt gewiescht. Zell Kulturen VerfÜgung zwee gastric Kriibs Zell Linnen, OCUM-2MD3 [16] an OCUM-12 [17], an dës Studien gebraucht goufen. Dës Zell Strecken vun diffusen-Typ gastric Kriibs ofgeleet. (; Nikken, Kyoto, Japan DMEM) mat 10% Hëtzt-inactivated An et Kallef serum der Kultur Zoustand war zu Dulbecco d'geännert Eagle mëttelfristeg Territoire (FCS; Life Technologies, Grand Island, NY), penicillin an streptomycin, an 0,5 mm Natrium pyruvate, a bei 37 ° C incubated. OCUM-12 /SP an OCUM-2MD3 /SP Zell Strecken SP Zellen déi vun engem Flux cytometric Analyse mat Hoechst 33342 aus hiren Elteren Zell Linnen évaluéiert huet, OCUM-2MD3 an OCUM-12, respektiv. war zortéieren dräimol standing eng stabil Populatioun vun SP-beräichert Zellen ze etabléieren. No enger dräi Mount incubation Period Post-zortéieren, OCUM-12 /SP Zellen (6,5%) an OCUM-2MD3 /SP Zellen (12,2%) vertrueden nach en héije Prozentsaz vun den SP Ëmwandlung, am Verglach zu den Elteren OCUM-12 (3,2% ) an OCUM-2MD3 (6.3%) Zellen (Dorënner S1). Duerno, dës SP-beräichert Zellen mat enger stabiler Bevëlkerung der Zell Linnen fir d'Analyse benotzt goufen, wéi virdrun gemellt [18]. VerfÜgung Mënscherechter Ray uplanzen an Patienten- Informatiounen VerfÜgung Ray ugedait kritt huet vun 300 Patienten mat gastric Kriibs erlaabt Operatiounen um Rekorder City University diagnostizéiert. Table 1 weist d'clinicopathologic Charakteristiken vun de 300 gastric Kriibs Patienten. Et goufen 208 männlech a 92 weiblech Patienten, mat der Steiren Alter vun 64 Joer (Rei, 28-85 Joer) an d'Zäit vun Operatioun. D'Diagnosen sech vun op d'mannst zwee Leit confirméiert. Haut gouf am Aklang mat der japanescher Klassifikatioun vun gastric carcinoma (14 Protein Umeldung an Quantification vun QSTAR Elite LC-MS /MS VerfÜgung D'Kriibs Zellen (60 μg all) sech homogenized an dann lysed benotzt entweder 100 μL vun T-PRO lysis Prellbock (Thermo wëssenschaftlech) oder 500 μL vun 9 M Urea, an 2% Haréi lysis gefiermt mat engem protease inhibitor. Duerno, war d'Zell lysate dann vun ultrasonication behandelt. No acetone Nidderschlag, goufen FAQ Konzentratioune vun BCA Protein Assay (Pierce, IL, USA) gemooss. Reduktioun, alkylation, Verdauung, a Kierzunge peptide Etikette vun 50 μg vun FAQ fir all Prouf sech mat der AB Sciex iTRAQ Reagent Multi-Plex Kit (AB Sciex, Concord, ON, Kanada) standing [20]. D'iTRAQ-Label Echantillon waren op en ICAT dass een Austausch Patroun (AB Sciex) iwwerlaascht. D'peptides sech als sechs ufale (1 ml KCL Léisung vun 10, 50, 70, 100, 200, an 350 mm) eluted, an der supernatant vun all war bannent e Vakuum Fall verdämpt. Echantillon waren dann desalted an Konzentratioun benotzt Sept-Pak Light C18 Patrounen (Waters Corporation, Milford, MA), bannent e Vakuum Fall verdämpt, zu 20 μL vun 0,1% (v /v) formic Seier resuspended, an dono op QSTAR Elite LC applizéiert -MS /MS. All Prouf war fir 150 Minutten lafen. MS /MS Donnéeën war géint de Schwäizer Protein Datebank gesichte (HUMAN) benotzt ProteinPilot Software (Versioun 2.0, AB Sciex) mat trypsin Set wéi d'Verdauung Aktivitéit an Duerch methanethiosulfinate wéi d'cysteine Verännerung. Fir kritt iwwerflësseg Hits an Komparativ quantitation, de Sichresultater sech weider vun ProteinPilot Software benotzen d'Paragon Algorithmus Filteren ze läschen. Dëse Schoss an de Minimum vu Formatioun vun justifiable identifizéiert Proteinen. All Rapport Daten huet mat enger 95% Vertraue präventive Limitéiert benotzt. Relativer quantitation vun peptides war wéi engem Verhältnis berechent vun der iTRAQ reporter Intensitéit deelt. D'nennen vun peptides datt d'Existenz vun engem FAQ Ënnerstëtzung sech fir d'famill FAQ quantitation averaged. Doropshin huet sech d'ProteinPilot Analyse an Ingenuity Passerelle Analyse (QFont) (Ingenuity System, Mountain View, CA) gesuergt. Nom Concert ass e Simple T-Test op ee vun de berechent averaged FAQ nennen géint 1 'Validitéit vun der FAQ Ausdrock Ännerungen ze evaluéieren, e p-Wäert gemellt. Protein nennen mat engem p-Wäert vu manner wéi 0,05 waren verléisslech considéréiert. Et soll bekannt, datt an 90% vun de iTRAQ virdru gemaach experimentell leeft, de Standard Hitparad vun de FAQ nennen, déi aus techneschen Variatioune Desaccord, manner zu gemellt waren wéi 0.3. Dofir, Ännerungen Ausdrock méi wéi 1,2-fantastesch oder manner wéi 0,8-fantastesch vun normalized Ausdrock Niveauen considéréiert goufen ausserhalb der Gamme vun technesch Verännerlechkeet gin. Mir standing och en Net-Label Analyse, an festgestallt d'Präsenz vu Proteinen nëmmen bannent OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen, mä net am Elterendeel Zellen [21]. All Prouf war zweemol lafen. Déi applizéiert LC-MS /MS Ënnersichung zesummen mat iTRAQ Technologie hunn als zouverlässeg grouss Method fir FAQ Ausdrock, dass och méi sensibel wéi déi westlech blot déi op der Zort vun applizéiert antibodies hänkt [22] gemellt ginn. VerfÜgung QFont a Sicht vun de Kandidatelänner Proteinen VerfÜgung d'QFont Datebank ass am Beräich vun propriétaire Ontologie, wou bis zu 300.000 biologescher Artikelen dorënner Genen, Proteinen, molekulare a bewosst Prozesser allem benotzt. Dofir, QFont war fir d'Analyse vun FAQ molekulare Funktiounen, Lokalisatioun agestallt. Ausserdeem, wat detailléiert Informatiounen déi Funktiounen a bewosst Plaze vun der identifizéiert Proteinen kritt. Baséierend op de Resultater vun LC MS /MS an QFont gebueden, Proteinen déi observéiert goufen an SP Zell-Linnen iwwer-ausgedréckt gin, wou hire jeeweilegen Frequenz vun Ausdrock an Elteren Zell-Linnen Verglach, sech als Kandidat biomarkers fir SP Zellen ausgewielt vun gastric Kriibs. D'Identifikatioun vun Netzwierker vu Proteinen proposéiert, wéi och funktionell Gruppen a Weeër war vun QFont entsteet, an d'Analyse hänkt op der virdrun charakteriséiert Associatiounen. VerfÜgung Chemeschen Real-Zäit Réckproduktioun Transkriptioun-polymerase Kettereaktioun (RT-Hinnen alleguer VerfÜgung) Gastric Kriibs Zellen sech cultured. An der total bewosst RNS war mat RNeasy Mini Kit (QIAGEN, Karlsbad CA) ofgebaut. cDNA war vun 2 μg RNS mat ënnerschiddleche primers (Invitrogen) virbereet. Ze bestëmmen fantastesch Ännerungen an all Gentherapie, RT-Hinnen alleguer war op der Abi Prism 7000 standing (Obwuel Biosystems, Foster City, CA), mat kommerziell sinn Gentherapie Ausdrock assays (Obwuel Biosystems) fir RBBP6 VerfÜgung ( retinoblastoma bindend FAQ 6 VerfÜgung; Hs00544663), HSPA4 VerfÜgung ( Hëtzt Schock 70kDa FAQ 4 VerfÜgung; Hs00382884), HSPA9 VerfÜgung ( Hëtzt Schock 70. kDa FAQ 9 VerfÜgung; Hs00269818), GLG1 VerfÜgung (Golgi glycoprotein 1; Hs00939452), DCTPP1 VerfÜgung ( dCTP pyrophosphatase 1 VerfÜgung; Hs00225433), VPS13A Western blot Analyse VerfÜgung Expression Niveau vun RBBP6 an ALDOA zu Kriibs Zellen iwwerpréift huet wéi follegt. Zell lysates sech no verschiddene Behandlungen gesammelt. Nodeems d'FAQ Konzentratioun vun all Prouf ugepasst gouf, war electrophoresis 10% Tris /Gly gels Hëllef duerchgefouert (Life Technologies, Karlsbad CA). D'FAQ Bands kritt huet, fir eng Immobilon-P Transfer Membran (Amersham, Aylesbury, UK) transferéiert. Dunn, no der Membran vun PBS-T Léisung Faarwe mat anti-RBBP6 (WH0005930M1, Fläch-Aldrich, MO, USA), anti-ALDOA (HPA004177, Atlas), an anti-β-actin (1:300 dilution; Sigma- Aldrich), an erlaabt fir 2 Stonnen bei Raumtemperatur ze reagéieren. Den Niveau vun spezifesch Proteinen an all lysate sech duerch verstäerkte chemiluminescence benotzt ECL plus (Amersham) vun autoradiography duerno festgestallt. VerfÜgung klenger Interfering RNS Design VerfÜgung De Message fir RBBP6 VerfÜgung kleng interfering RNS (siRNA) entworf gi wéi follegt: si RBBP6 VerfÜgung Sënn, 5'-GAAAGAAGAAUAUACUGAUtt-3 "; antisense, 5'- AUCAGUAUAUUCUUCUUUCgt-3 ", an nontargeting siRNA (negativ-siRNA) aus Ambion (Life Technologies, Karlsbad CA) .OCUM-12 /SP an OCUM-2MD3 /SP Zellen kaaft huet sech bei 60% Niewebaach preparéiert an sechs-gutt Platen. D'transfection Mëschung war vun Schan 150 μL vun Opti-Mem dorënner 9 μL vun Lipofectamine RNS iMAX Regant (Life Technologies) bis 150 μL vun Opti-Mem bereet dorënner 90 pmol vun siRNA an fir 5 min bei Raumtemperatur incubating. Endlech, war den uewe transfection Mëschung zu bereet sechs-gutt Plat notéiert. Twenty-véier Stonnen no transfection, RT-Hinnen alleguer war gesuergt. VerfÜgung Meter-verkënnegt Assay VerfÜgung Cancer Zellen zu cultured goufen 96-gutt Placke (Essen Instrumenter, Birmingham, UK). No der Zellen semi-Niewebaach erreecht, war an der Zell monolayer mat der 96-Meter vun WoundMaker (Essen Bioscience, MI, USA) e gudde Meter hunn. Kapp Felder sech all 3 Stonnen poséiert geholl an war mat Incucyte Live-Zell Imaging System a Software (Essen Instrumenter) iwwerwaacht. Den Ofschloss vun Zell Migratiounen huet 24 Stonnen no enger Behandlung wéi engem Prozentsaz vun enger Niewebaach analyséiert. Déi heeschen vu 4 Beräicher ass wéi d 'Prouf Wäert berechent. VerfÜgung Missiounen Assay VerfÜgung Mir der chemotaxicell CHAMBERS benotzt (Kubota, Rekorder, Japan) mat enger 12-μm pore Membran filter bedeckt mat 50- μg Matrigel (Kollaboratioun an der Fuerschung Co., Bedford, MA). Der Chamber (ieweschten Deel) war an engem 24-gutt Kultur Plack (ënneschten Deel) gesat. Gastric Kriibs Zellen sech zu enger definitiver Konzentratioun vu 5-du suspendéiert × 10 Validatioun vun Protein Expression vum Immunohistochemistry VerfÜgung Immunohistochemistry war op formalin-fix, paraffin-Ënnerbewosstsinn Otemschwieregkeeten Echantillon gesuergt, datt duerch an xylene a léif deparaffinized sech graded Ethanol. D'Sektiounen sech fir 10 Minutten gehëtzter bei 105 ° C vun autoclave op Target Retrieval Solution (DAKO). D'Echantillon waren duerno mat 3% Waasserstoff Hem incubated endogenous peroxidase Aktivitéit ze blockéieren. Anti-RBBP6 (retinoblastoma bindend FAQ 6; WH0005930M1, 6:1000; Fläch-Aldrich), anti-GLG1 (Golgi glycoprotein 1; HPA010815, 1:80; Atlas), anti-VPS13A: Déi folgend antibodies waren am immunohistochemical Prozess benotzt (vacuolar FAQ zortéieren 13 homolog A; NBP1-85642, 1:500; Novus Biologicals), anti-ALDOA (aldolase A, Fruktos-bisphosphate; HPA004177, 1:400; Atlas), anti-DCTPP1 (dCTP 1 pyrophosphatase; HPA002832, 1:200; Atlas), anti-HSPA9 (Hëtzt Schock 70. kDa FAQ 9; HPA000898, 1:200; Atlas), anti-HSPA4 (Hëtzt Schock 70kDa FAQ 4; HPA010023, 1:200; Atlas), an anti-KRT18 (keratin 18; ab668, 1:500; Abcam). D'Echantillon waren mat all antibody Nuecht op ronn 4 ° C incubated. Doropshin Echantillon waren fir 10 Minutten an appropriated immunoglobulin G incubated, gefollegt vun dräi Mëtten mat PBS. All Echantillon sech dann mat streptavidin-peroxidase reagent behandelt, a vun PBS diaminobenzidine an 1% Waasserstoff Hem (vol /vol) incubated, duerno mat Mayer d'hematoxylin counterstaining. VerfÜgung Immunohistochemical Evaluatioun VerfÜgung RBBP6, GLG1, VPS13A, DCTPP1, HSPA9, HSPA4, ALDOA, an KRT18 Ausdrock Niveauen waren esouwuel Intensitéit vun staining an Undeel vun Kierchefënster entholl Zellen bewäert. D'staining Intensitéit war op enger Skala vun 0-3 stoung (0 = nee, 1 = mëll, 2 = moderéiert, 3 = intensiv). Staining Undeeler sech op enger Skala vun 0-4 stoung (de Prozentsaz war verschidde mat all antibody) baséiert op de Prozentsaz vun positif Kierchefënster Zellen. Dofir, d'final staining stoung, déi als Multiple vun der staining Intensitéit stoung an der staining Undeel stoung, wier op enger Skala vun 0-12 berechent huet. Ausdrock Niveau vun DCTPP1 sech positiv geduecht, wou et e Virsprong vun 3 Ausdrock Niveau vun HSPA4 dobäi waren als positiv, wann et e Virsprong vun 6. Ausdrock Niveau vun ALDOA geduecht, KRT18, VPS13A, an GLG1 positive sech als wann all e Goal vum dobäi 8. RBBP6, d'Evaluatioun vun deem nëmmen d'staining Undeel stoung Berechnunge benotzt gouf, war positiv geduecht, wou et e Virsprong vun 3 HSPA9 dobäi, d'Evaluatioun vun deem nëmmen d'staining Intensitéit stoung Berechnunge benotzt gouf, war positiv, wann et als engem Virsprong vun 3. All Evaluatioune dobäi waren déi zwee Observateuren huet déi bewosst Medeziner Donnéeën an Resultat waren. Wann e discrepant Evaluatioun tëschent deenen zwee onofhängeg Observateuren fonnt gouf, goufen déi drënner rechecked an der Diskussioun reevaluated. VerfÜgung statistique Analys VerfÜgung D'SPSS Software Programm (SPSS Japan, Tokyo, Japan) gouf benotzt fir Donnéeën Analyse. Statistique Bedeitung vun den Associatiounen tëscht den Ausdrock vu Proteinen an de verschiddenen clinicopathological Verännerlechen, dorënner Alter, Geschlecht, macroscopic Typ, entholl dat, Gesamtzuel vun resected lymph Node, an Typ vun Chirurgie (D1 oder D2 gastrectomy) war mat Fisher ass an Chi bewäert -squared Tester. Survival Kéiren sech aus dem Dag vun Agrëff an der Zäit vum Doud oder zu der leschter Suivi Observatioun benotzt d'Kaplan-Meier Language berechent. Zousätzlech goufen all Differenzen tëscht Iwwerliewe Kéiren évaluéieren d'Log-Platz Test mat. Multivariate analyséiert goufen no der Cox Schéin Model standing d'Associatiounen tëscht clinicopathological Verännerlechen a veruerteelt ze bestëmmen. P-Wäerter vu &Si besteet; 0,05 war statistesch relevant als VerfÜgung D'stemness vun gastric Kriibs Zell Linnen VerfÜgung D'Prozentzuelen vun SP Zellen sech méi an der OCUM-12. /SP an OCUM-2MD3 /SP Zellen wéi an hir Elteren OCUM-12 an OCUM-2MD3 Zellen (Dorënner S1). Cancer Stammzellenfuerschung lues vun SP Zellen, OCUM-12 /SP an OCUM-2MD3 /SP, wéi CD44, CD133, an NANOG, waren déi vun RT-Hinnen alleguer analyséiert. Den Ausdrock Niveau vun deene lues war an zwou SP Zell Linnen, am Verglach mat hiren Elteren Zell Linnen (Dorënner S2) däitlech geklommen. D'Zuel vun spheroid Kolonie war wiesentlech méi héich an zwou OCUM-12 /SP an OCUM-2MD3 /SP Zellen wéi hir Elteren OCUM-12 an OCUM-2MD3 Zellen (Daten dës net). VerfÜgung Detektioun vun Kandidatelänner Proteinen Mir propagéieren ob Proteinen differentially waren oder onofhängeg vun SP Zellen, ausgedréckt, an am Verglach eis Conclusiounen zu deene vun hiren Elteren Zellen mat QSTAR Elite LC-MS /MS. An biologesche Prozesser analyséiert, a mat enger 95% Vertraue präventive Plafong an p &Si besteet; 0,05, identifizéiert mir dass Proteinen sech jo differentially ausgedréckt. D'Resultater vun dëse Conclusiounen ginn an Dorënner virgestallt 1. Deel vun de Proteinen am Zytoplasma vun entholl Zellen (Dorënner 1A) iwwer-ausgedréckt huet. De P Wäert am ingenuity Analyse abegraff ass an Table S1 dohinnergestallt. Dës Proteinen huet sech bis zu bewosst Prozesser am Zesummenhang ginn, wéi Zell Doud, ukuerbelt, bewosst Organisatioun, DNA ukuerbelt, FAQ ofgeschnidden, an Veraarbechtung vun RNS (Dorënner 1B). Déi wonnerbar kanonesche Weeër mat dësen Ziler verbonnen an bestëmmt QFont sinn an Table S2 gewisen. VerfÜgung Am Verglach zu hire jeeweilegen Elterendeel Zellen, 40 Proteinen sech weider-reglementéiert OCUM-12 /SP, an 35 Proteinen sech weider -regulated zu OCUM-2MD3 /SP. Dorënner Proteinen, aacht ware bis-reglementéiert souwuel OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen, am Ufank keen esou association tëscht hire jeeweilegen Elterendeel Zellen (Table 2 an Dorënner 1c) observéiert gouf. Vun dësen aacht Proteinen, déi dräi Proteinen, RBBP6, GLG1, an VPS13A, sech an zwee SP Zell Linnen onofhängeg fonnt, mee net an hire jeeweilegen Elterendeel Zellen. Déi fënnef Proteinen, DCTPP1, HSPA9, HSPA4, ALDOA, an KRT18, waren däitlech méi-ausgedréckt vun op d'mannst 1,2-fantastesch zu souwuel SP Zellen wéini hir entspriechend Elterendeel Zellen Verglach. VerfÜgung D'mRNA Ausdrock Niveau vun deene 8 Kandidat Molekülle, RBBP6, HSPA4, DCTPP1, HSPA9, VPS13A, ALDOA, GLG1 VerfÜgung, an CK18 VerfÜgung war zu OCUM-12 /SP (9.15 fantastesch, 9,36 fantastesch, 4,14 fantastesch fräi, 7,80 fantastesch, 2,08 fantastesch, 1,46 fantastesch, 3,44 fantastesch, an 1,99 fantastesch, bzw.) an OCUM-2MD3 /SP (6.15 fantastesch, 1,71 fantastesch, 2.33 fantastesch, 2,30 fantastesch, 2,03 fantastesch, 1.32 fantastesch, 1,35 fantastesch, an 1,31 fantastesch, bzw.) Zellen, am Verglach mat deene vun der Kontroll vun den Elteren OCUM-12 an OCUM-2MD3 Zellen (Dorënner 1D). Western blot Analyse uginn, datt de Begrëff Niveau vun RBBP6 an ALDOA héich war alles-12 /SP an OCUM-2MD3 /SP Zellen, am Verglach mat deem OCUM-12 an OCUM-2MD3 Zellen (Dorënner S3). VerfÜgung d'Netz an Dorënner 1E virgestallt gouf duerch QFont entsteet, an d'Analyse hänkt op der virdrun charakteriséiert an Untersuchungshaft FAQ Interaktiounen. Sou, RBBP6, déi an CSC-wëll SP Zellen iwwer-ausgedréckt gin, OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen, observéiert huet sech direkt un HSPA4 an RB dinn, an indirekt mat Hsp90 an TAGLN2 assoziéiert. HSPA4, Hsp90 an TAGLN2 goufen och gin an-reglementéiert CSC-wëll SP Zellen fonnt. VerfÜgung Effekt vun siRBBP6 transfection op der Migratioun an invasiv Fähegkeeten vun gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Dorënner 2A weist, datt si RBBP6 VerfÜgung transfection ofgeholl vill mRNA Ausdrock Niveau vun béiden SP Zell Linnen (OCUM-12 /SP 12 war%, p &si besteet; 0,01, war OCUM-2MD3 /SP 2,5% p &si besteet;. 0,01), am Verglach mat déi vun negativen-siRNA transfection. RBBP6 VerfÜgung siRNA knockdown ofgeholl bedeitend der Invasioun (Dorënner 2B) a Migratioun Aktivitéit (Dorënner 2C) souwuel SP Zellen. VerfÜgung Immunohistochemical Assessment vun Kandidatelänner Proteinen an hir Association mat Clinicopathological BIG VerfÜgung RBBP6, DCTPP1, an HSPA9 goufen observéiert allem an der Zytoplasma a Käre vun gastric Kriibs Zellen ausgedréckt gin. GLG1, VPS13A, HSPA9, HSPA4, ALDOA, an KRT18 goufen observéiert allem an der Zytoplasma (Dorënner 3A) ausgedréckt gin. Am normal epithelial Zellen, goufen RBBP6, GLG1, VPS13A, DCTPP1, an HSPA9 Ausdrock puer Zellen am epithelial drüs fonnt. KRT18 waren am meeschte epithelial Zellen ausgedréckt. HSPA4 an ALDOA Ausdrock war net am normalen Zellen fonnt. BBP6, DCTPP1, an HSPA9 waren an der Zytoplasma a Käre vun normal epithelial Zellen ausgedréckt. GLG1, VPS13A, HSPA9, an KRT18 waren an der Zytoplasma vun epithelial Zellen (Dorënner 3B) observéiert. VerfÜgung Mir lant der Associatioun tëscht der Ausdrock Niveau vun der aacht Kandidat Proteinen an der clinicopathological Fonctiounen. Zuel vun de Fäll fir all Goal fir den aacht Ziler war an Table S3 gewisen. Dës aacht Proteinen huet sech fir mat potenziell malignant Prozesser verbonne ginn, wéi wäit Metastasen, lymph Node (Am) Metastasen, Invasioun Déift, oder Bühn Fortschrëtt (Table 3). D'berechent p-Wäerter sech wéi follegt zesummen: RBBP6 vill mat Invasioun Déift (p &Si besteet; 0.001) verbonne war, Am Metastasen (p &Si besteet; 0.001), wäit Metastasen (p = 0.013), a Krankheete Etapp (p &Si besteet; 0.001); GLG1 war vill mat nëmmen wäit Metastasen (p = 0.045) assoziéiert. , A Etapp Fortschrëtt (p = 0.005); VPS13A war vill mat Invasioun Déift (p = 0.005), Am Metastasen (0.001 p &Si besteet) verbonnen; , Am Metastasen (p &Si besteet; 0.001), wäit Metastasen (p &Si besteet; 0.001), a Etapp Fortschrëtt (p &Si besteet; 0.001); DCTPP1 war vill mat Invasioun Déift (0.001 p &Si besteet) verbonnen; , Am Metastasen (p &Si besteet; 0.001), a Etapp Fortschrëtt (p &Si besteet; 0.001); HSPA9 war vill mat Invasioun Déift (0.001 p &Si besteet) verbonnen; , Am Metastasen (p &Si besteet; 0.001), wäit Metastasen (p = 0.007), a Etapp Fortschrëtt (p &Si besteet; 0.001); HSPA4 war vill mat Invasioun Déift (0.001 p &Si besteet) verbonnen; ALDOA war vill mat Invasioun Déift (p = 0.034), Am Metastasen (p = 0.004), a Etapp Fortschrëtt (p = 0.029) verbonnen; an KRT18 war vill mat Invasioun Déift (p = 0.001), Am Metastasen (p = 0.001), wäit Metastasen (p = 0.034), a Etapp Fortschrëtt (p = 0.004) assoziéiert. VerfÜgung Iwwregens hätt VerfÜgung d'Kaplan-Meier Diagrammen ugeholl, datt vun der aacht iwwer-ausgedréckt Proteinen, RBBP6, DCTPP1, HSPA4, an ALDOA, vill mat aarmséileg Iwwerliewe vun all Patienten verbonne waren (Dorënner 4). Entwéckele fënnef-Joer globale Iwwerliewe Taux vun RBBP6-positiv Fäll (61%) war vill manner (p = 0.002) wéi dat vun RBBP6-negativ Fäll (78%). Desweideren, an Patienten op der Bühn III, de globale Iwwerliewe Taux vun RBBP6-positiv Fäll war vill manner (p = 0.034) wéi dat vun RBBP6-negativ Fäll. Iwwregens hätt vun Patienten mat DCTPP1-positiv erhéijen (63%) war wiesentlech méi aarmen (p = 0.016) wéi dat vun DCTPP1-negativ erhéijen (75%). Déi fënnef-Joer globale Iwwerliewe Taux vun HSPA4-positiv Fäll (66%) war vill manner (p = 0.047) wéi dat vun HSPA4-negativ Fäll (75%). Déi fënnef-Joer globale Iwwerliewe Taux vun ALDOA-positiv erhéijen suer- iwwer-Ausdrock (61%) war wiesentlech méi aarmen (p = 0.043) wéi dat vun ALDOA-negativ erhéijen (72%). Am Géigesaz, huet kee groussen kennenzeléieren tëscht aner Proteinen an Patient Iwwerliewe observéiert. univariate Analyse, RBBP6, DCTPP1, HSPA4 folgenden, an ALDOA Ausdrock Niveauen sech vill mat aarmséileg hätt zu 300 gastric Kriibs Patienten (Table 4) assoziéiert. Ausserdeem goufen macroscopic Typ (Typ 4), histological Typ (diffusen), T Kategorie (T2-4), Zuchstreck Invasioun, einfach Muster (INF b, c), peritoneal Metastasen, an Am Metastasen sech mat enger gin vill assoziéiert aarmséileg hätt. Multivariate Analyse gouf mat de Cox proportional Risikoe Model fir all wichteg Verännerlechen an der univariate Analyse gesuergt. Beim Analyse Réalisatioun, RBBP6 Ausdrock (p = 0.023), Borrmann Typ 4 (p &Si besteet; 0.001), peritoneum positiv (p = 0.001), Am Metastasen (p = 0.003), an hepatic Metastasen (p = 0.001) sech als onofhängeg Facteure bestätegt soll mat Iwwerliewe (Table 3). Vun der aacht Proteinen, war RBBP6 Ausdrock eng onofhängeg prognostic Faktor. VerfÜgung Gastric Kriibs Resultater an engem schlechte hätt wéinst heefeg metastatic Prozesser, wéi Am Metastasen an peritoneal Metastasen [23]. CSCs goufen wéi se eng wichteg Roll an der malignant Potential vun Kriibs Zellen, dorënner wäit Metastasen an chemoresistance [4] proposéiert. Mir hunn zënter entdeckt datt SP Zellen aus gastric Kriibs Sujeten besëtzen dës CSC Eegeschafte kritt [3]. Mir confirméiert datt Kandidat an dëser Etude geheescht SP Zellen auszedrécken gastric Kriibs Stammzellenfuerschung lues dorënner CD44 [24], CD133 [25], an NANOG [26] (Dorënner S2). D'spheroid Kolonie Opstellung Aktivitéit vun dësen SP Zellen war méi héich wéi déi vun den Elterevertrieder Zellen [18]. Och, dës CSC-wëll SP Zellen Ecran chemoresistance Drogen ze anticancer [2]. Dës bruet hunn confirméiert, datt OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen kann Kriibs Stammzellenfuerschung-wëll Eegeschafte vertrieden. Zanter spezifesch ze lues fir gastric CSCs hunn net als vun nach publizéiert gouf, Opkläerungsaarbecht vun der spezifesch sécher Weeër a Mechanismen d'Aktiounen vun CSCs Basisdaten vläicht hätt vun gastric Kriibs verbesseren. Hëllef LC-MS /MS zesummen mat iTRAQ Technologie an dëser Etude, goufen aacht Kandidat CSCs lues duerch proteomic Techniken identifizéiert. Dräi Proteinen, RBBP6, GLG1 an VPS13A, sech nëmmen an SP Zell Linnen fonnt mä net zu hirem respektiven Elteren Zell Linnen. Ausserdeem, déi fënnef Proteinen, HSPA9, ALDOA, DCTPP1, HSPA4, an KRT18, sech iwwer ausgedréckt-Souwuel SP Zell Linnen relativ zu hire respektiven Elteren Zell Linnen. RT-Hinnen alleguer Analyse annoncéiert och dass d'Ausdrock Niveau vun RBBP6, HSPA4, DCTPP1, HSPA9, VPS13A, ALDOA, GLG1 VerfÜgung, an CK18 VerfÜgung war héich an OCUM-12 /SP an OCUM- 2MD3 /SP, am Verglach mat der Kontroll vun den Elteren OCUM-12 an OCUM-2MD3. Dës Proteinen verdächtegt Roman biomarkers fir gastric CSCs gin. Dës Hypothes war vun immunohistochemical Analyse vun 300 gastric Kriibs Fäll getest. VerfÜgung RBBP6 ass eng nuklear FAQ, déi engem verbonne ginn ass bekannt an eventuell ze p53 dinn, an retinoblastoma bindend Q FAQ 1 (RBQ-1) [ ,,,0],27]. RBBP6 openee mat der p53 suppressor Proteinen entholl an RB, a spillt eng wichteg Roll an der Aféierungs- vun apoptosis souwéi der Zell Zyklus Regulatioun [28], [29]. RBBP6 Photo'en zu Wildwest-Typ p53 Proteinen mee net ze p53 mutants [30]. Et huet och d'Modalitéite vun MDM2 ze förderen [31], eng E3 ubiquitin ligase déi Ziler déi p53 [32], an zu Bréissel mat senge Géigner der Zil- Genen ze transactivate [33] gewise gouf. Up-Regulatioun vun RBBP6 gouf mat entholl Werdegang vun esophageal Kriibs an cervical Kriibs [32] staark soll. An dëser Etude, war RBBP6 Ausdrock mat "T" Kategorie Kriibs mat Bezuch zu Invasioun Déift, wäit Metastasen, lymph Node Metastasen, a Krankheete Etapp assoziéiert. Ausserdeem, war RBBP6 Ausdrock vill mat aarmséileg Iwwerliewe vun Patienten bei all Etappe assoziéiert, besonnesch um Etapp III, doraus zu der Conclusioun, datt RBBP6 eng onofhängeg Faktor fir Iwwerliewe war. Mir standing der RBBP6 VerfÜgung siRNA knockdown vun RBBP6 VerfÜgung Gentherapie OCUM-12 /SP Zellen an OCUM-2MD3 /SP Zellen an dëser Etude benotzt.
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
( vacuolar FAQ zortéieren 13 homolog A VerfÜgung; Hs00362891), CK18 (keratin 18 VerfÜgung; Hs028277483), ALDOA (aldolase A VerfÜgung; Hs00605108), CD44 VerfÜgung (Hs01075862), CD133 VerfÜgung (Hs01009250) an NANOG VerfÜgung (Hs02387400). GAPDH (Fläch) huet als eng intern Standard benotzt mRNA Niveauen ze normaliséieren. D'loung Zyklus (Kosovo) Wäerter sech benotzt der famill Ausdrock nennen tëscht Kontroll a behandelt Zellen ze berechnen. VerfÜgung Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Nei entdeckt grouss Phagen verschwannen d'Liewen/Net-Liewensgrenz
Éischt Befunde vum Human Microbiome Project hunn "Honnerte vu spéider Studien" ausgeléist
Wuesstumsprobleemer bei virzäitege Puppelcher verbonne mat verännert Darmbakterien
Fuerschung weist datt intestinal Parasitinfektiounen d'COVID-19 Gravitéit reduzéieren
Reizbar Darmkrankheet erhéicht de Risiko vun Demenz
Fuerschung seet an der SARS-CoV-2 Hënninfektioun,
Firwat brauch ech eng Koloskopie?
DLeit hunn genuch Horrorgeschichten iwwer Koloskopie héieren fir en Halloween Spuerhaus ze fëllen. Och wann Dir net al sidd fir een ze hunn, Dir hutt wahrscheinlech vun hinnen héieren. Also, wa se s
Wat kann antike Feeën eis iwwer d'Evolutioun vum mënschlechen Darmmikrobiom soen?
Antike Mikrobiota Informatioun representéiert eng vital Ressource fir bakteriell Evolutioun ze studéieren an dbiologesch Verbreedung vu chronesche Krankheeten duerch dGeschicht ze entdecken. En inte
Gutt Bakterien kënne Risiko vu pulmonarer Hypertonie viraussoen
En Team vu Fuerscher huet festgestallt datt dMikroflora vu Bakterien am Darm vu Mënschen e Bäitrag zu der Entwécklung vu pulmonarer arterieller Hypertonie (PAH) kéint sinn. DEtude mam Titel, Ännert Da