Plos ONE: Vloge DPY30 pri širjenju in gibljivost Rak želodca Cells

Povzetek

Različne vrste histon metilacije so bili povezani z napredovanjem raka. Glede na mestu metilacije v histonskih proteinov, njeni učinki na prepisu so različni. DPY30 je pogosta član MNOŽICA1 /MLL histonskih H3K4 methyltransferase kompleksov. Vendar pa je njen izraz in vloge pri raku želodca so slabo označena. Za določitev, ali ima DPY30 patofiziološke vlogo pri raku želodca, njihova izražanja in vloge. Imunohistokemija in v realnem času PCR je pokazala, up-regulacijo DPY30 izražanja v nekaterih želodčnih raka celic in tkiv pacientov. Njena rasklapanje s siRNA zmanjšal proliferacijo, migracijo in invazijo želodčnih rakavih celic, medtem ko je njen čezmernim pokazala nasprotne učinke. Ti rezultati kažejo, da ima DPY30 kritične vloge v jedrskega orožja, migracije in invazije želodca rakavih celic, in predlagati DPY30 lahko terapevtski cilj, raka želodca

Navedba. Lee YJ, Han ME, Baek SJ, Kim SY, Oh SO (2015) Vloge DPY30 pri širjenju in motiliteto želodca rakavih celic. PLoS ONE 10 (7): e0131863. doi: 10,1371 /journal.pone.0131863

Urednik: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, UNITED STATES

Prejeto: 3. marec 2015; Sprejeto: 8. junij 2015; Objavljeno: 6. julij 2015

Copyright: © 2015 Lee et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v prispevku

Financiranje:. To delo je bilo podprto z Bio & Medicinska Program tehnološki razvoj (É2M3A9C6050213, OSO) in Basic Science Research Foundation (É2R1A1A3010521, HME) National Research Foundation (NRF), ki ga je korejska vlada (MEST), ter z nepovratnimi sredstvi iz državnega R &financira; D Program za rak Control, Ministrstvo za zdravje, socialo in družino, republika Koreja (\0050, OSO). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Kovalentne modifikacije histonskih repi, kot so, acetilacije, fosforilacije, ubikvitinacije in metilacije, modulacije kromatin strukturo in Play osrednjo vlogo pri uravnavanju napredovanju celičnega cikla, genov prepisovanje, popravljanje DNK, razvoja zarodka, in celično diferenciacijo [1, 2]. Medtem ko se poveča histon acetilacija običajno povezana s transkripcijskim aktivacijo, je metilacija histon povezana s transkripcijskim aktivacijo in represijo. Na primer, metilacija histon H3 na lizin 9, 20 ali 27 ostankov (H3K9, H3K20 ali H3K27) vpletena v transkripcijsko genskim utišanjem, toda po drugi strani se metilacija na H3K4, H3K36 ali H3K79 povezan z odprtim kromatina in aktiven gen prepis [3].

Pri sesalcih, mono-, di- in tri-metilacije H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 in H3K4me3) opravlja šest razlikuje MNOŽICA1 /MLL družinskih kompleksov (SET1A, SET1B , MLL1, MLL2, MLL3 in MLL4) [4, 5]. Te H3K4 metiltransferaz (H3K4MT) vsebujejo različne katalitične podenote, in dejavnosti vseh šestih družinskih kompleksov nadzoruje skupnih osrednjih sestavnih delov, multi-podenote, ki vključujejo WDR5, RBBP5, ASH2L in DPY30, in so navedena tudi kot WRADs. [6-9]. Izguba koli podenote WRAD kompleksnih rezultatov v zmanjšanem H3K4 metilacije. WDR5 in RBBP5 so ključnega pomena za vse tri vrste metilacije H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 in H3K4me3), medtem ko so ASH2L in DPY30 predvsem potrebna za H3K4me3 [6, 8, 10, 11].

DPY30 je član vseh MNOŽICA1 /MLL kompleksov ljudi, in da je potrebno za popolno MNOŽICA1 /MLL methyltransferase dejavnosti [10, 12]. DPY30 je bila vpletena v diferenciacije potencial embrionalnih matičnih celic (ESS) vzdolž nevronov linage [10] in je bistvenega pomena za pravilno diferenciacijo in proliferacijo hematopoetskih matičnih celic [12]. Poleg tega, izčrpavanje DPY30 povzroča celice vnesti staranje podobno stanje in upregulate P16 (CDKN2A) in P15 (CDKN2B), ki so neposredno vključeni v staranje [13].

Rak želodca je eden od vodilnih vzroki smrti, povezanih z rakom na svetu [14]. Čeprav nedavni diagnostični in terapevtski napredek zagotavljajo odlično preživetje bolnikov z zgodnjim rakom želodca, je bolezen običajno diagnosticirana v kasnejši fazi, ko je napoved slaba [15]. Želodca nastanek raka pomeni postopnega akumulacije različnih genetskih in epigenetskih sprememb, ki vodijo do pridobijo-of-funkcije, ki jo onkogenov in izgube-of-funkcijo z zaviralnih genov. Poleg tega, ker gen prepis močno opira na kromatina strukture, spremenjene ali nepravilno histonov metilacija je običajno povezana z napredovanja tumorja in prognozo raka [16], in čeprav je bil status histon metilacije dobro opisano v mnogih vrstah raka, ta vidik ostaja nejasno z rakom želodca [16, 17].

v tej študiji je, da se ugotovi, ali ima DPY30 patofiziološke vlogo pri raku želodca, njihova izražanja in vloge.

materiali in metode

celične kulture in siRNA transfekciji

želodca, rak izvira celične linije, SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 in NCI-N87 so bile kupljene od korejske Cell Line banke (Seul). Želodca epitelnih celic linija, HFE145 so nadarjeni profesorja Hasana Ashktorab (Howard University). Želodčnega raka celične linije kultiviramo pri 37 ° C v navlaženi 5% CO _{2/95% zraku v RPMI1640 z dodatkom 25 mM HEPES, 10% fetalnega govejega seruma (FBS) (GE Healthcare ved, Južna Logan , UT, ZDA) in 100 ug /ml penicilina /streptomicina (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, ZDA). DMEM (GE Healthcare Life Science) medij dopolnjen z 10% FBS in 100 ug /ml penicilina /streptomicina bila uporabljena za HFE145 kulturo. Celice so transfekciji s male interferenčne RNA (siRNA) ali umešana (SCR) siRNA uporabo DhamaFECT reagenta 1 ali 3 (Thermo Scientific, Lafayette, CO, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. siRNA sekvence so bili naslednji: DPY30 siRNA duplex (ORF) (Bioneer, Daejeon, Južna Koreja), 5'-CAC UCU GAG UAC GGU CUC A (dTdT) -3 ', 5'CUC UGA GUA CGG UCU CAC A (dTdT) -3 ', 5'CUC ACU UAU UCU AGG UAC U (dTdT) -3'; DPY30 siRNA duplex (3'-UTR) (Bioneer); 5'CCG GAC AAC AGA ACC UAU UUU UGG A (dTdT) -3 ', 5'-GAG GCA GCU UUA AUU GCC avgust AUC A (dTdT) -3'; WDR5 siRNA duplex (Bioneer), 5'GUC CUU GUG AAG CUC GUC U (dTdT) -3 ', 5'GUC AUC GUG UCA ACA GCU U (dTdT) -3', 5'-OAS AUU CUA ACC UUC UUG U (dTdT) -3 '; RBBP5 siRNA duplex (Bioneer), 5'GUG UGA AAA GGG CUC AGU A (dTdT) -3 ', 5'-OAS AUU CUC AUC AGG UUG U (dTdT) -3', 5'GUG GUU GAG AUU AGU AGA U (dTdT) -3 '; ASH2L siRNA duplex (Bioneer), 5'GUA UGA ACG GGU UUU GUU A (dTdT) -3 ', 5'-CUG AGA AB CCU GAA AUC A (dTdT) -3', 5'GUC UAC CUU UCA UGA CCA A (dTdT) -3 '; Umešana (SCR) siRNA (Thermo Scientific), 5'-GAU CCG CAA AAG AGC GAA A (dTdT) -3 ".}

DPY30 prekomerno

cDNA DPY30 smo klonirali v pLenti6.3 -V5 /CILJ vektor (lentivirusni ciljni vektor) z vivo
temelji na rekombinacije Gateway kloniranje sistema (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA). Vektor donor (pDONR221) zatočišča cDNA zaporedje DPY30 je bila kupljena iz Ultimate ORF klonov (Invitrogen) in kombiniranimi z nasprotnega izbira ccdB
gena pLenti6.3-V5 /CILJ uporabo LR clonase encimsko mešanico (Invitrogen). Prazen vektor pLenti6.3 /V5-CILJ smo uporabili kot modelno kontrolo. Rekombinantni lentiviruses so bili proizvedeni v 293FT celicah, in se uporablja za okužbo SNU216 in SNU638 celice, v skladu z navodili proizvajalca (ViraPower lentivirusni Expression sistema; Invitrogen). DPY30-prekomerno ekspresijo stabilno celice so bile določene s selekcijo z blasticidin (7,5 pg /ml) (Invitrogen).

Za reševanje testov, smo spremenjena, sledijo protokol "motnje RNAi pomočjo zbiranja Precision Lenti patogenom" (http://dharmacon.gelifesciences.com/uploadedFiles/Resources/precision-lentiorfs-rnai-rescue-appnote.pdf). Na kratko, celice okužene z rekombinantne lentiviruses (pLenti6.3-V5 /CILJ ali DPY30-nad konstruktov). 24 ur po transdukcije so mediji, ki vsebujejo virus odstranimo in nadomestimo s popolno gojišča. Naslednji dan smo dodali blasticidin v koncentraciji 7,5 ug /ml. Celice so se ohranili v okviru izbora za šest dni, ki nadomešča srednje ali pasažo vsakih 2-3 dni, kot je potrebno. Izbrane populacije kontrolnih celic ali celic, ki izražajo DPY30 so bili uporabljeni za transfekcijskih poskusi z DPY30 siRNA ciljanje odprti bralni okvir (ORF) ali 3 'neprevedeno področje (UTR).

Real-time PCR

vzorce tkiva so bili pridobljeni iz 23 nepovezanih korejskih osnovnih bolnikov želodca z rakom, ki so doživeli kirurško resekcijo na National Hospital Pusan ​​University in Pusan ​​National University Yangsan bolnišnici in pod pogojem, pisno privolitev. Študija je bila odobrena s National University Hospital-Institutional Review Board Pusan ​​(PNUH-IRB) in Narodni univerzitetni Yangsan Hospital-Institutional Review Board Pusan ​​(PNUYH-IRB). Total RNA iz tkiv in celic so bili pridobljeni s pomočjo TRIzola reagenta (Invitrogen) ali RNeasy Mini kit (Qiagen, Valencia, CA, ZDA), v skladu z navodili proizvajalca. Količinska realnem času verižne reakcije s polimerazo (PCR v realnem času) je bil uporabljen za preverjanje ravni DPY30 mRNK. cDNA smo sintetizirali z MMLV reverzna transkriptaza (Promega, Madison, WI, ZDA), dNTP in oligo-DT primerji. V začetnih oligonukleotidov sekvence, ki se uporabljajo, so bili naslednji: DPY30, 5'-AAC GCA GGT TGC AGA AAA TCC T -3 'in 5' TCT GAT CCA GGT AGG CAC GAG -3 "; WDR5, 5'-TGT TAC TGG TGG GAA GTG GA -3 in 5'-CTG TTG GGT GAC AAG CTG TT -3 "; RBBP5, 5'AGT GCA CAC CAT ATC CCA GT -3 'in 5' TCA CAG TCG SCT GAA AGA AC -3 "; ASH2L, 5'-TAC AAG AGC TGC ACG GTT TC -3 'in 5' CCA GCC CAT GTC ACT CAT AG -3 "; GAPDH, 5'-TGG GCC AGG AAA TCA CAT CC -3 'in 5' CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG -3 ". PCR v realnem času smo izvedli z uporabo LightCycler ™ 96 PCR v realnem času sistem (Roche, Nutley, NJ) in FastStart Essential DNA Green Master (Roche), v skladu z navodili proizvajalca. GAPDH je bila uporabljena kot notranji nadzor.

Imunohistokemija

Imunohistokemijsko z kunčjega anti-človeški DPY30 poliklonskega protitelesa (Sigma-Aldrich) smo izvedli na tkiva paleto rakom želodca (n = 59) kupili od SUPER BIO CHIPS (Seul) ali 4-mikrometrskimi odsekov-parafinskih vgrajeni osebkov. Na kratko, potem ko deparaffinization in rehidraciji so drsi obdelamo z 0,3% vodikovega peroksida na 30 minut, da zavirajo endogene peroksidaze aktivnost, ter blokirali z 10% normalne osla serum (NDS) in 1% BSA v 1 x fosfatnim pufrom (PBS). Ploščice smo potem inkubirali preko noči pri 4 ° C v pufru za blokiranje, ki vsebuje zajec anti-humanega protitelesa DPY30 primarno (1:80, Sigma-Aldrich). Sekundarna protitelesa (HRP-konjugiranimi) vezavo izvedemo pri razredčenju 1: 200 v pufru za 2h pri sobni temperaturi blokiranje. Zaznavanje je bila izvedena s HO (Vector Laboratories), in so jih nasprotno diapozitive, ki jih obravnava za 1 min s hematoksilin barvanja pufrom (Sigma-Aldrich).

Cell širjenje test

En dan po transfekcijo celic z siRNA, smo medij zamenjali z 1% FBS mediju, in štiri dni kasneje, dodamo 10 ul EZ-Cytox (ITSBIO, Seul) in inkubirali 0,5 do 2 uri. Da bi preverili vpliv DPY30 prekomerno na proliferacijo celic, smo celice zasejali v 10% FBS mediju in po treh dneh kulture, dodamo 10 ul EZ-Cytox (ITSBIO) in inkubirali 0,5 do 2 uri. Viabilnost celic smo določili z merjenjem absorbance pri 450 nm z uporabo VICTOR3 več bralcev (PerkinElmer, MA, ZDA).

Boyden komora test

A spremenjena Boyden transwell komora (Neuro Probe, Gaithersburg, MD, bila uporabljena ZDA). Spodnja komora je napolnjena z 50 ul RPMI, ki vsebuje 10% FBS. Da bi preučili učinke DPY30 znano navzdol, SNU1 in SNU16 (neadherentnih celic) smo transfektirali z ORF-ciljanje siRNA je. En dan po transfekciji smo sprali celice, suspendiramo v gostoti 5 x 10 ^{5 celic /ml v 50 ul v RPMI dopolnjen z 0,5% FBS in zasejali v zgornjo komoro. Za odpravo učinkov proliferacije, dodamo mitomicin C (0,01 ug /ml, Sigma-Aldrich). Celice nato inkubiramo 24 ur pri 37 ° C s 5% CO2. Število preseljenih celic smo ocenili s štetjem celic V spodnji vodnjakov. Da bi preučili učinke DPY30 prekomerno, stabilne celice (sprijete celice; SNU216 in SNU638) so bili uporabljeni. Celice (mock in DPY30-nad) tripsiniziramo in zasejemo pri gostoti od 1 x 10 5 celic /ml. Za odpravo učinkov širjenja orožja, je mitomicina C dodali. Celice bilo dovoljeno, da se selijo za štiri ure, smo membrane fiksne in obarvajo z uporabo Diff-Quik rešitev (SYSMEX, Kobe, Japonska) in speremo z destilirano vodo. Cell številke v 10 naključno izbranih področjih so bili prešteti s pomočjo svetlobnega mikroskopa. Poskuse smo izvedli v treh izvodih.}

poskus vdora v Matrigel

invazivne sposobnosti rakavih celic smo ocenili s pomočjo 8-im porozne BioCoat Matrigel komori vložke (BD bioznanosti, San Jose, CA, ZDA). En dan po transfekciji s SCR ali DPY30 siRNA, tripsiniziramo celice in suspendiramo pri gostoti 5 x 10 ^{4 celic /ml v 500 ul v RPMI dopolnjen z 0,5% FBS in mitomicina C (0,01 g /ml, Sigma -Aldrich). Celice smo nato dodali komornih ploščic in damo v vrtinah napolnjene z 0,7 ml medija z dodatkom 10% FBS kot chemoattractant. Po inkubaciji 24 ali 48 ur, je bilo brez vdrla celic na vrhu membrane odstrani s strganjem in invazivne celice na dnu membrane so bile določene in obarvamo z Diff-Quik raztopine (SYSMEX). Cell številke v 10 naključno izbranih področjih so bili prešteti s pomočjo svetlobnega mikroskopa. Poskuse smo izvedli v treh izvodih in vsaj 5 polja smo šteli za vsak poskus.}

Statistična analiza

Rezultati so izraženi kot sredstvo ± standardnih odklonov (SDS) treh neodvisnih poskusov. Pomene razlik so bile določene z uporabo Student je t
-test za simpleksni pripomb. P
vrednosti < 0.05 so bile upoštevane statistično značilne.

Rezultati

Izražanje DPY30 v želodčnih tkivih raka

Da bi raziskali DPY30 izražanje pri raku človeške želodčne smo opravljenih imunohistokemično uporabo želodčni rak tkiva niz ali arhivsko parafin, vgrajene dele tkiva. V normalnih želodčnih tkiv, DPY30 izraz je težko odkriti (slika 1A), ampak v tumorskih tkivih DPY30 protein je pogosto prekomerno (slika 1B-1D). Predvsem je DPY30 izraženi pri preplavljajo želodčne rakave celice (Slika 1B-1D). Poleg tega smo ugotovili raven mRNA DPY30 v enem ovekovečil normalno želodca celične linije epitela (HFE145) in šest želodca raka izhaja celičnih linijah (SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 in NCI-N87) z uporabo PCR v realnem času. Raven mRNA DPY30 je bila bistveno višja (raztegljiv sprememb > 5) SNU1 in SNU16 kot v HFE145 celicah, medtem ravni ekspresije DPY30 v SNU216, SNU620 in SNU638 je bila podobna tistim v HFE145 celicah in je bila nižja (raztegljiv sprememb > 10) v NCI-N87 (slika 1E). Prav tako smo preverili raven mRNA DPY30 v želodčnih tkivih raka. DPY30 je bil močno izražen v 15 primerih (15/23, 65%) v primerjavi z običajnimi tkiva (slika 1F). Ti rezultati kažejo, da je DPY30 zelo izražene v nekaterih želodčnih raka pri ljudeh.

Vloge DPY30 pri širjenju želodca rakavih celic

Da bi ugotovili morebitne vloge DPY30 v želodčnih rakavih celicah, smo prvič potrkajo navzdol DPY30 z ORF-ciljanje DPY30 siRNA in spremljal njegovo rasklapanje učinkovitost s PCR v realnem času (slika 2A). ORF-ciljnih DPY30 siRNA (100 nm) znižala raven mRNA za DPY30 v HFE145, SNU1, SNU16, SNU216 in SNU638 celic v primerjavi z umešana siRNA (SCR), ki ga je 78%, 89%, 79%, 76%, in 88%, v tem zaporedju. Pet dni po transfekcijo celic z SCR ali siRNA na ORF-ciljanje, smo izvedli teste orožja. Rasklapanje od DPY30 inhibira proliferacijami iz HFE145, SNU1 in SNU16 v primerjavi z SCR za 31%, 69% in 71% oziroma, medtem ko rasklapanje ni vplivala na proliferacijami za SNU216 in SNU638 (slika 2b), v kateri je stopnja izraz DPY30 je bila nizka (slika 1E). Dalje, smo pripravili DPY30-prekomerno ekspresijo celične linije (DPY30-over) z uporabo HFE145, SNU216 in SNU638 celice in nato primerjali ravni DPY30 mRNK v modelnih celic (kontrola) in DPY30-več celic. Realnem času Rezultati PCR je pokazala, da je bila raven izraz DPY30 4,2, 3,5 in 3,2-krat večja v DPY30-čezmerno izraženim HFE145, SNU216 in SNU638 celice kot modelnih celic, v tem zaporedju (slika 2A). DPY30 overexpression okrepljeno proliferacije za HFE145, SNU216 in SNU638 celic v primerjavi modelnih celic za 1,9, 2,2 in 1,6-krat, v tem zaporedju (slika 2B).

Da bi potrdili specifičnost DPY30 siRNA, smo izvedli reševalne poskuse. Za reševanje poskusih smo uporabili DPY30 siRNA ciljanje 3'-UTR namesto ORF, saj lahko ORF-ciljanje siRNA razgradijo tudi eksogeno DPY30 ORF DNK smo uvedli. Za čezmerno DPY30 smo transduciramo SNU1 in SNU16 z virusnih delcev, pLenti6.3-V5 /CILJ (kontrola) ali DPY30-ORF-nad konstrukti. DPY30-prekomerno ekspresijo SNU1 ali SNU16 celice so pokazale višje izražanje DPY30 2,1 ali 2,5-krat večje, kot modelnih celic, v tem zaporedju (slika 2C). siRNA ORF-ciljanje privedla do zmanjšanjem števila ravni DPY30 izražanja, ki ga več kot 75% v mock kot tudi DPY30-prekomerno ekspresijo celic. 3'-UTR ciljanje siRNA v modelnih celicah navzdol regulirano ekspresijo DPY30, ki je večja od 85%, medtem ko je v celicah, DPY30 prekomerno ekspresijo, se je zmanjšal na DPY30 izraz na raven, ki je podoben SCR siRNA-transfekciji celic ( fig 2C). Ta rezultat kaže, da je eksogeni DPY30-ORF DNA odporen na 3'-UTR-ciljanja siRNA je izražen na podobni ravni endogenega DPY30 mRNA. ORF ciljanje siRNA inhibirana proliferacije celic glede na eksogenega DPY30 izražanja (slika 2D). Širjenje je zaviral tudi 3'UTR-ciljanje siRNA je v modelnih celicah, pa je bilo delno zaviral DPY30-prekomerno ekspresijo celic. V DPY30-prekomerno ekspresijo celic, ORF-ciljanje siRNA zmanjšana širjenja SNU1 in SNU16 v primerjavi z SCR siRNA za 74% in 66%, v tem zaporedju, vendar 3'-UTR ciljanje siRNA zmanjšana za 20% in 8%, v tem zaporedju . Ta rezultat kaže, da eksogeni DPY30 reši zaviranje proliferacije, ki jih 3'-UTR-ciljanje siRNA inducirane, in fenotipi, ki jih DPY30 posebne siRNA povzroča niso zunaj cilja učinki.

Ker DPY30 je sestavni del oddelkih smo pregledali izraze in vloge drugih delov oddelkih. PCR v realnem času je pokazala, da so bili nivoji mRNA za WDR5 in RBBP5 v SNU1, SNU16, SNU216 in SNU638 podobni tistim HFE145. Vendar pa je bila raven mRNA ASH2L bistveno višji (raztegljiv sprememb > 3) v SNU1 in SNU16 kot v HFE145 celic (slika 3A) kot DPY30 v Sl 1E. Da bi raziskali, ali so WRAD komponente, povezane s širjenjem želodčnih rakavih celic, smo knockdowned vsak WRAD komponento s pomočjo svoje posebne siRNA in spremljati rasklapanje učinkovitosti po PCR v realnem času (slika 3B). Vsak siRNA (100 nm) se je zmanjšalo ravni mRNA v SNU1 in SNU16 celic v primerjavi z SCR za 65% -75%. Rasklapanje za WDR5 in RBBP5 inhibira proliferacijo SNU1 in SNU16 celic v primerjavi s SCR, ki ga 30-48% (slika 3C). Vendar ASH2L zaviral širjenja SNU1 in SNU16, v katerem je bila stopnja izraz ASH2L visoka, v primerjavi z SCR za 85% in 75%, v tem zaporedju.

Vloge DPY30 v migracije in invazije želodca rakave celice

Naslednja pregledane ali DPY30 ureja migracijo želodčnih rakavih celic. Rasklapanje od DPY30 zmanjšale FBS-inducirane migracije iz SNU1 in SNU16 celic v primerjavi z SCR za 35% in 45%, v tem zaporedju (slika 4). V nasprotju s tem, DPY30 čezmernim povečala FBS-inducirane migracije iz SNU216 in SNU638 celic v primerjavi modelnih celic za 2,5 in 2,2-krat, v tem zaporedju (slika 4). Ti rezultati nas je preučiti vlogo DPY30 v invaziji želodca rakavih celic. V poskus vdora v Matrigel, DPY30 siRNA inhibira FBS-induciranih vdori SNU1 in SNU16 celic v primerjavi z SCR siRNA za 65% in 84%, v tem zaporedju (slika 5A in 5C). Poleg tega DPY30 čezmernim povečala FBS-induciranih vdori SNU216 in SNU638 celic v primerjavi z modelnimi celic za 3,2 in 2,9-krat, v tem zaporedju (slika 5B in 5C). Ti rezultati kažejo, da DPY30 spodbuja migracije in vdor želodčnih rakavih celic.

Pogovor

Vloge DPY30 v raka biologije so slabo označena, čeprav svojih vlogah v diferenciaciji ESS in hematopoetske matične celice imel poročali [10, 12]. V tej študiji smo pokazali nove vloge DPY30 raka želodca. DPY30 ojačeno (podatki niso prikazani) in močno izražena (slika 1), v nekaterih želodčnih tkivih rakom. Poleg tega je njegov rasklapanje ali prekomerno uredila proliferacijo, migracijo in invazijo želodčnih rakavih celic. Spremembe v izražanju, kromosomske translokacije in somatske mutacije genov, ki kodirajo podenote MNOŽICA1 /MLL kompleksov, so poročali v mnogih raka. Ti rezultati podpirajo ključne vloge članov MNOŽICA1 /MLL kompleksa v napredovanju raka.

Up-regulacijo DPY30 izražanja so opazili samo pri SNU1 in SNU16 želodčne rakavih celic med šestimi želodčnih rakavih celic smo pregledali. Vendar pa je bil njegov up-ureditev opazili pri več kot polovici želodčnega tkiva raka smo pregledanih (slika 1). Težko je razložiti to razliko. Vendar je očitno, da je število želodčnih tkiv raka smo pregledali ni dovolj. Torej, je potrebna obsežna raziskava izraz uporablja veliko več število tkiv ovrednotiti klinično vrednost v prihodnosti.

Vloge MNOŽICI 1 /MLL H3K4 metiltransferaza zapletene biologije raka je zapleteno. Regulativni podenote MNOŽICA1 /MLL kompleksov, vključno WRAD, vsebujejo tako močne oncoproteins in tumorske valov. Na primer, MEN1 gen kodira Menin, sestavni podenoto MLL1 in MLL2, in mutiran pri bolnikih z multiplo endokrine neoplazije tipa 1 (MEN1) [18, 19]. Poleg tega, Menin ureja P18 (CDKN2C) in P27 (CDKN1B) z zaposlitvijo MLL1 kompleks [20]. V nasprotju s tem, WDR5, komponenta WRAD kompleksa, so poročali, da deluje kot onkoproteina pri raku na prostati, v katerem je pretirano izražena in je bistven za proliferacijo-androgena inducirane tumorskih celic [21]. ASH2L, kar je še en del WRAD kompleksa in lahko interakcijo z onkoproteina myc [22], je ključnega pomena za myc /Ha-RAS-odvisne preoblikovanja fibroblastov rat zarodkov. Poleg tega je močno izraženi v veliko različnih vrst tumorjev in je ključnega pomena za proliferacijo tumorskih celic [23]. V tej študiji smo pokazali vloge DPY30 kot onkoproteina pri raku želodca.

Kaj so molekularne mehanizme, povezane z vlogo DPY30 pri raku želodca? Kljub temu, da ni razkrila, lahko več hipoteze predlagani na podlagi predhodnih študij. Ena od možnih hipotez je, da DPY30 prekomerno vodi do overexpressions s onkogeni preko povečane aktivnosti H3K4MT. Izčrpavanje DPY30 ali ASH2L vodi do zmanjšanja H3K4me3, medtem ko so WDR5 in RBBP5 ključnega pomena za vse tri vrste H3K4 (H3K4me1, H3K4me2 in H3K4me3) [6, 8, 10, 11]. Poleg tega se lahko prekomerno samega DPY30 poveča H3K4MT dejavnost [10]. Ker H3K4me2 /3 je aktiven znak za prepisovanje [3, 24], povečala H3K4MT lahko neposredno upregulate veliko genov, na primer, onkogeni ali pa posredno navzdol urejanje tumorske valov. Eden od prejšnje poročilo, ki podpirajo ta hipoteza je, da ASH2L, ključna sestavina MNOŽICA1 /MLL kompleksa, se je pokazalo, da igrajo kot onkoproteina [25, 26]. Druga prejšnjem poročilu je, da DPY30 neposredno aktivira izražanje osebnih proteinov preko H3K4 metilacije [13, 27]. ID proteini zavrl dejavnosti ETS1 in ETS2, ki lahko sprožijo enega gena zaviralnih, p16. V tej raziskavi smo pokazali, da lahko sestavine WRAD (WDR5, RBBP5 in ASH2L) inhibira proliferacijo želodčnih rakavih celic (slika 3), kar kaže, da akt DPY30 s povečano aktivnostjo H3K4MT. Več študij morajo razkriti mehanizme, ki podpirajo vlogo DPY30 v želodcu rakavih celic.

• Plos ONE: Analiza deregulirati microRNAs in njihovih ciljnih genov želodčnega raka
• Plos ONE: MED30 Uravnava širjenju in gibljivost želodčnega raka celic