mavekræft (GC) er stadig en af de mest almindelige fordøjelsesforstyrrelser kræftformer verdensplan; Men de fleste patienter præsentere på et fremskredent stadium ved første diagnosticering. Zic1 Henvisning:. Chen X, Lin Z, Xue M , Si J, Chen S (2015) Zic1 Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN Modtaget: April 10, 2015; Accepteret: 2 jul 2015; Udgivet: Juli 24, 2015 Copyright: © 2015 Chen et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres Data Tilgængelighed: Alle relevante data er inden for papir og dens Støtte Information filer Finansiering:. Dette arbejde blev finansieret af National Natural Science Foundation of China (81302070, 81372623) (http://www.nsfc.gov.cn), Zhejiang Provincial Medicinsk og sundhed generelt forskningsplan (2014KYB121) (http://www.zjwst.gov.cn/), Zhejiang Provincial Department of Education forskningsplan (Y201327398) (http://www.zjedu.gov.cn), og Zhejiang-provinsen centrale videnskab og teknologi innovation team (2013TD13) (http://www.zjkjt.gov.cn/). Den bidragyder Shujie Chen udtænkt og designet eksperimenterne for dette håndskrift Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser Introduktion mavekræft (GC) er en af de mest almindelige fordøjelsesforstyrrelser kræftformer og den tredje hyppigste årsag til cancer-relaterede dødsfald på verdensplan [1]. De fleste af GC patienter til stede på et fremskredent stadium ved første diagnose. Globalt GC tegner sig for næsten 952 tusind nye tilfælde årligt i henhold til Globocan 2012 [2]. I Japan, 5-årige overlevelsesrate for tidlig GC (EGC) er 86% sammenlignet med 32% for avancerede GC, som rapporteret af det amerikanske SEER-programmet [3]. Aberrant DNA methylering er en vigtig epigenetisk forandring og en tidlig begivenhed i carcinogenese [4]. For nylig, flere tumorsuppressorgener (GTS), herunder FAM5C Voksende data viser, at Zic1 Hotel ( Zic I den foreliggende undersøgelse, bestemte vi de tidlige diagnostiske og prædiktive potentialer Zic1 Kliniske prøver Plasmaprøver blev opnået præoperativt på Sir køre køre Shaw Hospital, Hangzhou, Zhejiang, Kina, fra november 2012 til april 2015. Alle patienterne indgår i vores undersøgelse gennemgik gastroendoscopy og blev grupperet ifølge histopatologi diagnose. Plasma prøver blev indsamlet fra GC og gin patienter, som var naive over for helbredende behandlinger, såsom kemoterapi, strålebehandling, og kirurgisk resektion. Udelukkelseskriterierne inkluderet gastrointestinale sygdomme med andre årsager og sygdomme i andre organer. Patienter med gastrisk metastaser fra andre tumorer blev også udelukket. Vi nummererede prøverne i henhold til den rækkefølge, de blev indsamlet og derefter udførte methylering-specifik polymerasekædereaktion (MSP) til at vurdere prøverne i numerisk rækkefølge. Prøverne blev yderligere grupperet efter patologien resultater. Plasma prøver blev indsamlet fra 104 GC patienter med en gennemsnitsalder på 59,8 år, der blev diagnosticeret i henhold til World Health Organization kriterier [16]. Halvtreds GIN patienter med en gennemsnitsalder på 58,0 år blev diagnosticeret ved gastroskopi. Blodprøver blev også indsamlet fra 20 raske frivillige i NC-gruppen med en gennemsnitsalder på 38,5 år. Vores projekt har modtaget godkendelse fra Clinical Research etiske komité for Institut for Gastroenterologi Zhejiang University. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver patient før prøvetagning. De personer, der deltog i denne undersøgelse gav skriftligt informeret samtykke (som beskrevet i PLoS DNA blev ekstraheret fra plasmaprøverne under anvendelse af en QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland). DNA-koncentrationer blev målt ved spektroskopi ved en bølgelængde på 260 nm. DNA blev behandlet med bisulfit med en Zymo DNA Modification Kit (Zymo Research, Orange, CA, USA). Det modificerede DNA blev opbevaret ved -20 ° C indtil brug. Zic1 De serumprøver blev sendt til det kliniske laboratorium Sir køre køre Shaw Hospital til test, og en CEA koncentration af > 5 ng /ml blev betragtet som unormal. methylering frekvenser og CEA-niveauer i plasmaprøverne blev sammenlignet under anvendelse af Fishers eksakte test. Sammenhængen mellem de klinisk-patologiske karakteristika og DNA hypermethylering blev analyseret ved hjælp af chi-square test. Den diagnostiske værdi af kombinationen af Zic1 Methylering status i plasma For at vurdere ændringer i Zic1 Foreningen af klinisk-patologiske træk med Zic1 Vi derefter korreleret de klinisk-patologiske træk med Zic1 kombineret bestemmelse af Zic1 betydningen af den kombinerede bestemmelse af Zic1 i GC-gruppen, følsomhed og specificitet af den kombinerede bestemmelse af Zic1 i GPI-gruppen, følsomhed og specificitet af den kombinerede bestemmelse af Zic1 For nylig er der fundet adskillige gener, der skal methyleres i GC væv , herunder E-cadherin Zic1 I den foreliggende undersøgelse, vi først vist, at afvigende methylering af Zic1 Mange tidligere undersøgelser har fokuseret på perifert blod DNA methylering i GC i stedet GIN patienter, med kun en håndfuld undersøgelser, der fokuserer på DNA methylering i gin. Udviklingen af endoskopiske teknikker har gjort det muligt for tilgængeligheden af mere effektive og mindre invasive behandlinger for EGC og gin patienter. Samlet set screening for GIN bidrager til overvågningen af GC og reduktion af GC dødsfald. Et interessant aspekt ved den foreliggende undersøgelse er, at vi demonstreret afvigende Zic1 Vi har også evalueret Zic1 CEA er en klassisk tumor markør, der er almindeligt vurderes i klinikken. Denne markør anses for at være den hyppigst forekommer i sene GC patienter; imidlertid har mange undersøgelser indikerede, at DNA-methylering kan detekteres begynder i de tidlige stadier af GC. I vores nuværende undersøgelse blev en ROC-kurve genereret at vurdere betydningen af den kombinerede påvisning af Zic1 Som konklusion har vores resultater viste, at målingen af Zic1 Støtte Information
er en ny kandidat tumorsuppressorgen der er epigenetisk tavshed i GC. I denne undersøgelse undersøgte vi Zic1
promotor methylering i plasma-DNA som en ny molekylær markør for tidlig diagnose og overvågning af GC. Methyleringsspecifik polymerasekædereaktion (MSP) assay blev udført for at detektere Zic1
promotor-methylering i plasma DNA fra 20 raske forsøgspersoner, 50 gastriske intraepitelialneoplasi patienter og 104 GC patienter. Zic1
promotor methylering sats i plasmaprøver fra raske kontrolgruppe var 0%, men den nåede 54,0% i intraepithelial neoplasi gruppen og 60,6% i GC-gruppen. De sidstnævnte to værdier var signifikant højere end den, der findes i det sunde kontrolgruppen (p < 0,05), med en 100% specificitet for intraepitelialneoplasi og GC diagnose. Den positive prædiktive værdi af plasma Zic1
promotor methylering til diagnosticering af intraepitelialneoplasi og GC var 100%. Status for methylering i GC-gruppen var ikke signifikant associeret med tumorstørrelse, tumor differentiering, lymfeknudemetastase, TNM stadieinddeling eller tumorinvasion (p 0,05). Vurdering af betydningen af påvisning af Karcinogenicitet-embryonale antigen (CEA) niveau og Zic1
promotor methylering sats for GC diagnose afslørede, at følsomheden af Zic1
promotor methylering var signifikant højere end for CEA-niveau som en markør, og at den kombinerede målingen af disse to indeks (parallel test) forbedret følsomhed. Tilsammen vores resultater tyder på, at Zic1
promotor methylering sats i plasma-afledt DNA er af stor betydning for den tidlige screening af GC og overvågning af tumorigenese. Zic1
promotor methylering kan tjene som en ny ikke-invasiv plasma biomarkør for tidlig påvisning af GC og for risikovurdering i højrisiko populationer. Den kombinerede måling af Zic1
promotor methylering sats og CEA-niveau (parallel test) kan forstærke de nuværende retningslinjer for tidlig diagnosticering af GC
Promotor Hypermethylering i plasma-DNA er en potentiel biomarkør for mavekræft og intraepitelialneoplasi. PLoS ONE 10 (7): e0133906. doi: 10,1371 /journal.pone.0133906
, MYLK
, p16
E-cadherin
, er blevet rapporteret til at være methyleret i serum /plasma af GC patienter [5-7]. Desuden hypermethylering af GTS tendens til at blive forbedret med progressionen af forstadier til kræft [8-9]. Derfor kan påvisningen af methyleret DNA i serum /plasma være en lovende fremgangsmåde til tidlig diagnose af GC. Intraepitelialneoplasi (IN) er en potentielt præcancerøse læsion, som giver en høj risiko for GC; således, screening af IN patienter er afgørende for diagnosticering og forudsigelse af GC. Kun få rapporter om hypermethyleret DNA-analyser af blodprøver fra gastrisk intraepitelialneoplasi (GIN) patienter er tilgængelige til dato.
familiemedlem 1 , ulige-parrede Drosophila homolog) deltager i udviklingen af flere kræftformer [10-13]. Vi har tidligere opdaget, at Zic1
, en hidtil ukendt TSG er tavshed via promotor hypermethylering i både GC celler og væv [14]. Vi har også påvist, at Zic1
er involveret i hæmning af GC celle overlevelse og nedskrivninger på celle migration [15].
hypermethylering i plasmaet hos GC patienter. Vi målte status promotor methylering af Zic1
i plasma fra patienter med GC eller GIN og normal kontrol (NC) emner. Foreningen af Zic1
promotor methylering med klinisk-patologiske parametre blev også vurderet. Desuden har vi klassificeret høj kvalitet IN og T1 GC som EGC og placeret GC og gin patienter i et GC plus IN gruppe (GPI). Derefter analyserede vi den Zic1
hypermethyleringsassocierede satser i både EGC og GPI grupper. Endvidere den kombinerede evaluering af Karcinogenicitet-embryonale antigen (CEA) niveau og Zic1
promotor methylering til GC diagnose blev vurderet ved hjælp af plasma fra GC og gin patienter.
Materialer og metoder
Etik erklæring
samtykkeerklæring) til at offentliggøre disse case detaljer.
DNA isolation og bisulfit modifikation
MSP analyser
promotor methylering blev undersøgt ved at udføre MSP under anvendelse af ovennævnte bisulfit-modificerede fri plasma-DNA som template. MSP blev udført i 40 cykler ved en annealing temperatur på 56 ° C som tidligere [14] beskrevne. De methylering-specifikke primere var ZIC1-MF (5'-GGATTTTTTGTTTCGTAATC) og ZIC1-MR (5'-CCCGTTAACCACGTTAAACG), og de ikke-methylerede-specifikke primere var ZIC1-UF (5'-GGGATTTTTTGTTTTGTAATT) og ZIC1-UR (5' CCCATTAACCACATTAAACA). PCR-proceduren omfattede indledende denaturering ved 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 40 cykler af denaturering ved 95 ° C i 30 s, annealing ved 56 ° C i 40 s, primerforlængelse ved 72 ° C i 40 s, og slutekstension ved 72 ° C i 7 min. PCR produkterne blev elektroforese på 1,5% agarosegeler, farvet med Gel Red, og visualiseret ved UV-belysning.
Serum CEA test
Statistiske analyser
promotor methylering og plasmaet CEA-niveau blev vurderet ifølge arealet under Receiver Operating karakteristiske kurve (AUC). Følsomhed, specificitet og positive og negative prædiktive værdier for patologisk diagnose blev beregnet med intervaller for Zic1
promotor methylering eller Zic1
promotor methylering kombineret med CEA på 95% sikkerhedsgrænser. Positive og negative sandsynlighedsforhold blev også beregnet. For alle de tests, en cut-off værdi af p < 0,05 blev anvendt til at bestemme statistisk signifikans. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS 19,0 software (SPSS Inc., Chicago, IL).
Resultater
promotor methylering i GC, vi først opdaget status methylering af denne promotor i 104 patienter med GC, 50 med gin, 31 med EGC og 20 nationale koordinatorer og udførte sammenligninger mellem grupperne. De methylering satserne for Zic1
promotor i plasmaprøverne var 0% i NC-gruppen (0%), stigende til 54,0% i GIN gruppen og 60,6% i GC-gruppen (p < 0,001 for både GIN og GC vs. NC), med 100% specificitet for GPI diagnose (20/20) (fig 1). De positive og negative prædiktive værdier og positive og negative sandsynligheden nøgletal for diagnosticering IN og GC var 100% (90/90), 23,8% (20/84), uendelig og 0,42 hhv. Repræsentant MSP analyseresultater for Zic1
promotor methylering er vist i fig 2.
promotor methylering i plasmaet af GC patienter
promotor methylering sats i plasmaet af GC patienter til at identificere eventuelle foreninger. Resultaterne viste ingen markante sammenhænge mellem Zic1
promotor methylering sats og de kliniske parametre, herunder tumorstørrelse, differentiering kvalitet, lymfeknude status, tumor invasion dybde og TNM stadie (p > 0,05) (tabel 1) .
hypermethylering og CEA niveau
hypermethylering sats og CEA niveauet for diagnosticering og tidlig forudsigelse af GC blev analyseret. Vi målte CEA niveau i 9 NCS 24 GIN patienter og 71 GC patienter før behandling. De følsomhed CEA niveau i GC, IN, og EGC grupper var 22,5% (16/71), 16,7% (4/24) og 10,5% (2/19), hhv. I alle tre af grupperne, følsomheden af Zic1
promotor methylering var signifikant højere end for CEA-niveau (p < 0,05).
Kombineret bestemmelse af Zic1
hypermethylering og CEA-niveau i GC gruppe.
promotor methylering sats og CEA niveau (tandem test) var 16,9 % og 90,9% (tabel 2). Følsomheden af den kombinerede analyse af disse to parametre (parallel afprøvning) var 69,0% (tabel 2), der var højere end de følsomheder opnået ved afprøvning af enten parameter alene. ROC-kurve analyse blev udført for at vurdere betydningen af methylering rate DNA og CEA-niveau for GC diagnose. AUC for Zic1
promotor methylering test alene var 0,610 (S1 Fig), og at for den kombinerede vurdering af Zic1
promotor methylering og CEA niveau (tandem test) var 0,539 (S2 Fig) . Især når Zic1
promotor methylering og CEA-niveau blev analyseret parallelt, AUC steg til 0,633 (figur 3). Baseret på de ovenstående resultater den kombinerede bestemmelse af Zic1
promotor methylering sats og CEA-niveau (parallel afprøvning) til GC diagnose viste sig at være synergistisk sammenlignet med anvendelsen af hver metode alene.
kombineret bestemmelse af Zic1
hypermethylering og CEA-niveau i GPI-gruppe.
promotor methylering sats og CEA-niveau (tandem afprøvning) var 15,8% og 100,0% (tabel 3). Den kombinerede vurdering af disse to parametre (parallel afprøvning) havde den højeste følsomhed ved 65,3%, med en positiv prædiktiv værdi nåede 98,4% (tabel 3). ROC-kurve analyse blev udført for at vurdere betydningen af methylering rate DNA og CEA-niveau for GPI diagnose. AUC for Zic1
promotor methylering test alene var 0,792 (S3 Fig), og at for den kombinerede vurdering af Zic1
promotor methylering sats og CEA niveau (parallel test) var 0,771 (Fig 4). Derfor påvisning af Zic1
promotor methylering kan være et mere effektivt alternativ til GPI diagnose.
Diskussion
, RASSF1A
, p16
, GSTP1
, SOCS1
, SFRP1
og PTEN
[17]. Rapporterede methylering frekvenser har varieret fra 56% til 96% [17]. DNA methylering er også blevet observeret i blodprøver fra GC patienter. Der er fundet flere GTS skal methyleres i blodprøver fra GC patienter, herunder p16
, E-cadherin
, og RAR
, med afsløring satser på 37% til 48%, henholdsvis [18-21].
er afvigende nedreguleres i visse former for kræft, der indikerer dens funktion som GTS. Vores tidligere arbejde har vist, at Zic1
promotor ofte methyleres i primære gastrisk karcinom væv, med en høj opdagelse sats på 94,6%, men ikke i normale gastrisk væv [14]. Vores resultater har afsløret, at Zic1
er en roman kandidat TSG der nedreguleres via promotor hypermethylering i GC. Men til vores bedste overbevisning, har ingen undersøgelser undersøgt plasma Zic1
promotor methylering i GC eller GIN.
promotor kunne påvises i plasma fra GC og gin patienter ved frekvenser på 60,6% og 54,0%, henholdsvis, som var væsentligt højere end for NCS. Disse resultater er i overensstemmelse med de tidligere undersøgelser [14]. Fra et diagnostisk synspunkt Zic1
promotor methylering udstillet høj specificitet for at diskriminere NCS fra GC og gin patienter (100%). Vores resultater viste også, at påvisning af Zic1
promotor methylering sats havde en høj positiv prædiktiv værdi og en positiv sandsynlighed ratio og AUC for GC og GIN diagnose, hvilket tyder på, at Zic1
promotor methylering vurdering har potentiel anvendelighed til diagnosticering og tidlig forudsigelse af GC.
promotor-methylering i plasma fra GIN patienter, med en opdagelse sats, der var betydeligt højere end for NC individer (p < 0,001). I fremtiden, afsløring af hypermethylering af Zic1
promotor kan potentielt anvendes som et advarselssignal tidligt eller til at screene for GC i højrisikogrupper.
promotor-methylering i plasma fra GC patienter i association med forskellige klinisk-patologiske parametre. Ingen statistisk blev observeret signifikante relationer mellem Zic1
promotor methylering og de forskellige kliniske parametre, herunder tumor størrelse, differentiering kvalitet, lymfeknude status, tumor invasion dybde og TNM stadie; men i vores tidligere undersøgelse [15] Zic1
methylering er fundet, at være involveret i GC invasiv. I den foreliggende undersøgelse blev de fleste af de GC patienter diagnosticeres og behandles på et tidligt tidspunkt, hvilket kan have indflydelse på de endelige resultater. Validering i en større population kan give indsigt i disse forskellige resultater. Hvorvidt der findes en sammenhæng mellem afvigende Zic1
promotor methylering og GC kliniske karakteristika kræver en afklaring af yderligere analyse.
promotor methylering sats og CEA-niveau (parallel test) til diagnosticering af GC, afslører, at deres kombinerede afsløring produceret mere signifikante resultater end påvisningen af enten parameter alene. Derfor foreslår vi, at den samlede måling af Zic1
promotor methylering sats og CEA-niveau kan øge diagnosen GC.
promotor methylering i plasma-afledt DNA er af betydning for tidlig påvisning af GC og for risikovurdering i højrisiko populationer. Den kombinerede måling af Zic1
promotor methylering sats og CEA-niveau (parallel test) kan forstærke de nuværende retningslinjer for tidlig diagnosticering af GC; imidlertid yderligere undersøgelser med større stikprøvestørrelser og klinisk validering påkrævet.
S1 Fig. Påvisning af Zic1
promotor methylering i gastrisk cancer (GC) plasmaprøver.
En ROC-kurve for at vurdere betydningen af Zic1
promotor methylering test for GC diagnose.
Doi : 10,1371 /journal.pone.0133906.s001
(TIF)
S2 fig. Kombineret påvisning af Zic1
promotor methylering og CEA-niveau (tandem afprøvning) i gastrisk cancer (GC) plasmaprøver.
Et ROC-kurve for at vurdere betydningen af den kombinerede detektering af de to parametre (tandem test .) til GC diagnose
doi: 10,1371 /journal.pone.0133906.s002
(TIF)
S3 fig. Påvisning af Zic1
promotor methylering i gastrisk intraepitelialneoplasi (GPI) plasmaprøver.
En ROC-kurve for at vurdere betydningen af Zic1
promotor methylering test for GPI diagnose.
doi: 10,1371 /journal.pone.0133906.s003
(TIF)
Rotavirus -vaccination er ikke forbundet med risiko for type 1 -diabetes mellitus
SARS-CoV-2-infektion forlænger viral shedding og lymfocyttab hos patienter med kræft
Økologiske æbler har probiotiske egenskaber
Tarmbakterier knyttet til stærkere muskler hos ældre mennesker
Matematisk model afslører risikoen for SARS-CoV-2-infektion efter fækal mikrobiotatransplantation
Humant mikrobiom beskærer slimhindeglykaner,
Visse bakteriearter kan øge hiv -risikoen hos kvinder,
finder en ny undersøgelse En nylig undersøgelse offentliggjort i Lancet infektionssygdomme, beskriver syv arter af vaginale bakterier, der kan øge risikoen for HIV -infektion betydeligt hos kvinder
Plantebaseret kost kan helbrede din leddegigt
Ifølge den seneste anmeldelse, vedtagelse af en plantebaseret kost kunne godt lindre de hævede led og smerter ved leddegigt (RA). RA har autoimmun oprindelse, en smertefuld ledforstyrrelse forårsage
Tarmimmunceller kan være ansvarlige for stofskifteændringer, finder undersøgelse
En ny undersøgelse har vist, at immuncellerne i tarmen kan relateres til metabolismen. Resultaterne af den nye undersøgelse med titlen, Tarm intraepiteliale T -celler kalibrerer stofskiftet og fremsky