PLoS ONE: Die Umlauf MicroRNA-26a in Plasma und sein Potential diagnostischen Wert in Gastric Cancer

Abstrakt

Hintergrund

In den vergangenen Jahrzehnten hat sich ein großer Teil der Studien die Möglichkeit, die zur Verfügung gestellt microRNAs (miRNAs) als nicht-invasive Biomarker für die Krebsdiagnose im Umlauf. Das Ziel unserer Studie war es, die Mengen an zirkulierendem miRNAs in Geweben und Plasmen von Magenkrebs (GC) Patienten und bewerten ihre diagnostischen Wert zu erkennen.

Methoden

Gewebeproben von 85 GC gesammelt wurden Patienten. Die Plasmaproben wurden von 285 GC-Patienten und 285 Kontrollpersonen gesammelt. Differentiell exprimierte miRNAs mit niedriger Dichte Array (TLDA) von Agilent Menschen miRNA Microarray und TaqMan mit gepoolten Proben wurden filtriert, gefolgt von der quantitative reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) Validierung. Receiver operating characteristic (ROC) Kurven wurden strukturiert, dass die diagnostische Genauigkeit der miRNAs zu bewerten. Die Plasmaspiegel von miR-26a in GC Patienten unterschiedlichen klinischen Phasen verglichen.

Ergebnisse |

Vier miRNAs (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a und Mir- 195) zeigte zufällig erniedrigte Spiegel in Gewebe und Plasma der GC-Patienten verglichen mit den Kontrollen und wurden ROC-Kurven konstruiert, um nachzuweisen, dass miR-26a einen höchsten Fläche unter der ROC-Kurve (AUC) von 0,882 hatte. Des Weiteren wurde miR-26a stabil in dem Plasma von GC Patienten mit unterschiedlichen klinischen Eigenschaften nachgewiesen.

Fazit

Plasma miR-26a, eine neue und stabile Markierung von Magenkrebs kann liefern.

Citation: Qiu X, Zhang J, Shi W, Liu S, Kang M, Chu H, et al. (2016) Zirkulierende MicroRNA-26a in Plasma und seine möglichen diagnostischen Wert in Magenkrebs. PLoS ONE 11 (3): e0151345. doi: 10.1371 /journal.pone.0151345

Editor: Zheng Li, Peking Union Medical College Hospital, CHINA

Empfangen: 29. Oktober 2015; Akzeptiert: 8. Februar 2016; Veröffentlicht: 24. März 2016

Copyright: © 2016 Qiu et al. Dies ist ein offener Zugang Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Datenverfügbarkeit. Alle relevanten Daten sind innerhalb des Papiers und seiner Hintergrundinformationen Dateien

Finanzierung:. Diese Studie wurde zum Teil von der National Natural Science Foundation of China (81230068, 81373091, 81302502, 81302490 und 81473049), Natural Science Foundation der Provinz Jiangsu unterstützt (BK2012842 und BK20130641), das Schlüsselprogramm für Grundlagenforschung von Jiangsu Provincial Department of Education (12KJA330002), Spezialforschungsfonds für das Doktoratsstudium der Hochschulbildung von China (20130092120063), Jiangsu Provincial Trainingsprogramme für Innovation und Entrepreneurship für Absolventen (201412682004Y ), Jiangsu Provinz Wissenschaft und Technologie Innovation Team, und die Priorität Academic Program Development von Jiangsu Hochschulen (Public Health und Präventivmedizin)

konkurrierende Interessen:.. die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs (GC) ist eine der häufigsten bösartigen Tumoren in der Welt. Obwohl die Gesamtinzidenz in den letzten Jahren zurückgegangen ist, ist es die vierthäufigste Malignom (989.000 Fälle) und die zweithäufigste Ursache von Krebs-Todesfälle (738.000 Todesfälle) weltweit [1]. Mehr als 70% der Fälle treten in Entwicklungsländern [2]. Insbesondere noch im fortgeschrittenen Stadium Patienten extrem schlechten Überlebensraten [3] .Um Datum zu demonstrieren, wird die Diagnose von GC auf der Grundlage der klinischen Symptome, und es gibt einige Testtechniken wie Endoskopie angewendet und Bariumbrei Prüfung. Jedoch haben alle diese Ansätze einige Mängel bei Detektion von GC gezeigt. Darüber hinaus gibt es einige Serumtumormarker beispielsweise carcinoembryonales Antigen (CEA), Kohlenhydrat-Antigen 19-9 (CA 19-9) und Kohlenhydrat-Antigen 72-4 (CA72-4), und es gibt einige Einschränkungen der Empfindlichkeit und Spezifität für GC-Screening [4]. Daher zahlen wir mehr Aufmerksamkeit Roman, zuverlässige und nicht-invasive Biomarker von GC auf die Entdeckung.

MicroRNAs (miRNAs) sind eine Klasse von kurzen (20 ~ 25 Nukleotide), nicht-kodierende einzelsträngige RNAs [5]. Es wird allgemein angenommen, dass miRNAs bei der Regulierung der Genexpression teilnehmen kann, um mRNA-Silencing wie Zielspaltungs, translationale Hemmung und mRNA decay [6] führt. Thesaurierend Beweise hat gezeigt, dass miRNAs wurden in mehreren pathophysiologischen Prozessen beteiligt und führen zu grundlegenden Veränderungen in mehreren Krankheiten. Zhang et al
. festgestellt, dass miR-26a endotheliale Apoptose induziert und zeigte eine therapeutische Potential von miR-26a für Atherosklerose mit apoptotischen Zelltod [7]. Leonov et al
. beschrieben Hemmung der miR-132 in hoher führte AGO2
Ausdruck, der in der Angiogenese und Entzündung während der primären Aktivierung der Endothelzellen [8] beteiligt war. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass die miRNAs unverzichtbare Rollen auf tumorigenesis spielen werden, die entweder als Onkogene oder Tumor-Suppressor-Gene [9]. Mehrere miRNAs wurden durch die miRNA-Expressionsprofile werden im Zusammenhang mit Krebs berichtet [10-12]. Unglücklicherweise sind die Gewebeproben schwer zu erwerben. miRNAs in Geweben Nachweis ist in der klinischen Anwendung nicht realistisch.

Darüber hinaus hat immer mehr Anzeichen dafür gezeigt, dass zirkulierende miRNAs RNase Verdauung resistent sind und stabil nachweisbar in Plasma und Serum mit Leichtigkeit von Messungen [13-14]. Frühere Studien haben bestätigt, dass die Existenz von miRNAs im Blut und der Ausdruck im Zusammenhang mit Krebs, einschließlich der großen B-Zell-Lymphom, Darmkrebs, Blasenkrebs und Brustkrebs [15-18]. Diese Studien liefern gemeinsam eine Grundlage für die miRNAs, die als neue Biomarker für die Krebsvorsorge im Umlauf.

Viele Studien zeigen, das Expressionsniveau von miRNA im Plasma mit dem im Tumor nicht vollständig konsistent ist. miR-378 deutlich zurückgegangen in GC Gewebe und mehrere Zelllinien [19], aber miR-378 waren sinnvoll hochreguliert in GC Patientenserum [20]. Als die gleiche wie miR-486, miR-486 kann funktionieren, wie ein Tumor-Suppressor-miRNA in Magentumor [21], die in der GC Patientenserum überexprimiert wurden [22]. In der Gegenwart mehrere Serum /Plasma-miRNAs aus den GC-Patienten mit den Kontrollen unterscheiden kann, doch kann dies nicht der miRNA-Expression im Gewebe darstellen. Wenn wir die miRNAs herausfinden können, sowohl differentiell in Magenkrebsgewebe und Plasma ausgedrückt, es sollte mehr klinische Bedeutung haben.

Um festzustellen, ob die miRNAs unterschiedlich exprimiert sowohl im Gewebe und Plasma verwendeten wir zwei Mikroarrays Bildschirm miRNAs . In den beiden Prüfschritten, waren vier Kandidaten miRNAs deutlich herunterreguliert im Tumorgewebe und Plasmaproben durch qRT-PCR. Unsere Studie zeigte, dass miR-26a signifikant stabil im Plasma von Patienten mit Magenkrebs verringert wurde und könnte Magenkrebs-Patienten von Kontrollen, mit guter Sensitivität und Spezifität unterscheiden. Es wurde vorhergesagt, eine viel versprechende zirkulierende Biomarker von Magenkrebs in der klinischen Routinediagnostik zu sein.

Materialien und Methoden

Studiendesign und Themen

Diese Studie der Institutional Review autorisiert wurde Board of Nanjing Medical University, und jeder Teilnehmer die unterzeichnete schriftliche Einverständniserklärung zur Verfügung gestellt. Alle Probanden wurden bei Yixin Cancer Hospital, Nantong Tumor Hospital, Huai-An Erste Volkskrankenhaus und das Zweite Affiliated Hospital der Nanjing Medical University von März 2006 bis Mai 2013 in der Provinz Jiangsu, China rekrutiert.

Der Tumor Gewebe und die normalen Geweben (befindet > 5 cm vom Tumor entfernt) wurden von 55 GC-Patienten, die eine Operation erhalten und in flüssigem Stickstoff schockgefroren. Die Plasmaproben wurden aus 285 GC Patienten gesammelt, und 285 Geschlecht und Alter abgestimmt Plasma von den gesunden Personen wurden als Kontrollen gesammelt. Alle Patienten wurden die histologischen Diagnose von GC bei der Erstdiagnose erwiesen, und keiner von ihnen hatte therapeutischen Verfahren erhalten, beispielsweise einer Chemotherapie oder Strahlentherapie. Wir stuften die Tumorstadium in Übereinstimmung mit dem Tumor-Knoten-Metastase (TNM) Staging-System der Union für International Cancer Control (UICC). Die klinischen Merkmale der Studienteilnehmer sind in Tabelle 1

Eine mehrstufige Studie vorgestellt wurde entwickelt, um die Plasma-miRNAs als Biomarker für die GC-Patienten (Abb 1) zu identifizieren. In der Forschungsphase wurden unterschiedlich exprimiert miRNAs in den paarigen Gewebeproben von 5 GC-Patienten (S1 Tabelle) von Agilent Menschliche miRNA Microarray (V12.0, Agilent Technologie, CA, USA) bewertet. Plasmaproben von 5 GC-Patienten (S2 Tabelle), deren Geschlecht, Alter klinischen Zustände abgestimmt mit den Gewebeproben und 5 gesunden Kontrollen wurden einer TLDA (V2.0; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), die unterschiedlich exprimiert miRNAs zu identifizieren . In der Trainingsphase wurden die signifikant verändert miRNAs zuerst in 50 gepaart Geweben durch qRT-PCR ausgewertet Proben und 80 GC Serumproben und 80 Kontrollpersonen. Anschließend wurden die differentiell exprimierten miRNAs zwischen dem Gewebe und Serum weiter in zusätzliche 400 Teilnehmer untersucht, die 200 GC Patienten eingeschlossen und 200 steuert.

RNA Isolierung aus Plasma und Gewebe

Blutproben in der separate Vakuum Würfel wurden für 10 min bei 4 ° C bei 3000 rpm zentrifugiert. Wir sammelten den Überstand und diese bei -80 ° C gelagert. Bevor Sie das Isolierungsverfahren beginnen, haben wir eine endgültige Konzentration von 10 ^{-4 pmol /ul synthetischer C
. elegans
miR-39 (cel-miR-39) (Takara, Japan) zu jeder Probe, um die biologische Variabilität zu steuern. Die RNA wurde aus 100 &mgr; l Plasma unter Verwendung QIAGEN miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) extrahiert. Die Gesamt-RNA von Geweben wurde unter Verwendung von Trizol-Reagenz (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) isoliert.}

Microarrays und qRT-PCR

Profilieren wurde mit Agilent Menschen miRNA Microarray durchgeführt (V12.0 Agilent Technologie, CA, USA) und TaqMan Low-Density Array (V2.0; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). mit SYBR (R) PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Takara Bio) Für die Gesamt-RNA aus dem Gewebe zu isolieren, wurde qRT-PCR durchgeführt. Eine detaillierte Beschreibung der experimentellen Protokolle in der S1-Daten abgelegt wird.

Statistische Analysen

Die paarigen Gewebeproben wurden verglichen, um einen Wilcoxon-Rangsummentest. Nicht-parametrischen Mann-Whitney-U-Test, die Bedeutung in Plasma miRNA Ebenen zwischen dem Krebs-Gruppe und gesunde Gruppe zu bestimmen, wurde durchgeführt. Receiver-Operator-Charakteristik (ROC) Kurven und die Flächen unter den ROC-Kurven (AUC) erhalten, die GC-Detektionspotential von miRNAs zu beurteilen. Statistische Analysen wurden zweiseitigen Test und P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen. Alle statistischen Analysen wurden mit SPSS Software-Version durchgeführt 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Ergebnisse |

Entdeckung von Biomarker-Kandidaten von Microarrays

Wir haben zwei Microarray-Plattformen für die miRNAs zu analysieren und die miRNA-Expressionsmuster von zwei verschiedenen Bedingungen vergleichen. TLDA Analyse wurde abgeschlossen, um Kandidaten miRNAs Expressionsniveaus bestätigen. Insgesamt 142 miRNAs wurden im Plasma nachgewiesen werden. 65 der insgesamt miRNAs wurden erhöht und 77 wurden in der GC-Patienten im Vergleich zur Kontrollgruppe verringert

Kandidat miRNAs zu identifizieren, der die Expression von miRNAs zwischen Patienten und Kontrollen waren notwendig, mit zwei Kriterien zu entsprechen. (1) der Ausdruck Deregulierung im Tumorgewebe war im Einklang mit TLDA Ergebnis [23]; und (2) die Plasmaspiegel miRNA erweist ≥ 2-fachen Unterschied zwischen Patienten und Kontrollen. Letztlich vier herunterreguliert Plasma miRNAs (dh miR-26a, miR-142-3p, miR-148a und miR-195) wurden als Kandidaten für die Faust-Stufe Validierung (Tabelle 2) ausgewählt.

Bestätigung von miRNAs durch qRT-PCR

Zunächst wurden die Ergebnisse von Microarrays Analysen der GC-Plasma und die entsprechenden Kontrollen für diese vier miRNAs durch qRT-PCR bestätigte die paarigen Gewebe unter Verwendung. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Tendenz der Ergebnisse der qRT-PCR mit den Mikroarrays ähnlich war, analysiert, entweder in Gewebe oder im Plasma. Das Grundstück hat gezeigt, dass die Expression von vier miRNAs in den GC-Gewebe waren statistisch signifikant ( P
= 0,001, P
= 0,002, P
< 0,001 und P
= 0,003 für miR-26a, miR-142-3p, miR-148a und miR-195 bzw. 2A-2D). In der Zwischenzeit führten wir qRT-PCR, die Ausdrücke von miRNAs zu überprüfen, wurden in einem anderen unabhängigen Satz von 80 GC-Plasmaproben und 80 gesunden Kontrollen herunterreguliert. Die Ausdrücke von vier miRNAs in GC Plasma signifikant wurden bei den Kontrollen zu denen sank im Vergleich (alle P
< 0,001, Figuren 2E-2H). Die Ausdrücke Ebenen der vier miRNAs im Plasma waren durchweg verringert, mit Gewebeproben zu vergleichen.

Groß Validierung der Plasma microRNAs in GC Patienten

Um die Stabilität der Plasma Ausdrücke zu validieren von miRNAs, führten wir in großem Umfang von 200 GC Plasmaproben und 200 angepasst Krebs-freie Kontrollen qRT-PCR. Übereinstimmend mit den Ergebnissen der Trainingsphase zeigten die Expressionsniveaus von vier miRNAs signifikante Herabregulierung im Plasma von Patienten GC (all P
< 0,001, Fig 3), was darauf hindeutet, dass diese vier miRNAs in Plasma kann dienen als Biomarker-Kandidaten für die Diagnose von GC.

Auswertung des Diagnosepotential von miRNAs für GC

Um die Effizienz der oben genannten vier miRNAs als diagnostische Marker für die GC-Erkennung beurteilen zu können, führten wir ROC-Kurve Analyse auf jeder miRNA. Bild 4 ergeben, dass die ROC-Kurven von vier Kandidaten miRNAs zeigten die Plasma-miRNAs Wert waren GC Patienten von normalen Kontrollen zu unterscheiden. Der Cutoff-Wert von 0,651 war gleich Sensitivität + Spezifität-1, die für miR-26a (von Zelle-39 normalisiert relativen Expression) maximal war. Für miR-26a, betrug die Sensitivität 83,6% und die Spezifität betrug 81,5% mit einer AUC von 0.882 (95% CI = 0,847-0,916) (4A). An der Cut-off-Wert von 0,585 für miR-142-3p betrug die Sensitivität 74,4% und die Spezifität betrug 84,1% mit einer AUC von 0.839 (95% CI = 0,800-0,879) (4B). Die AUC-Werte waren 0.842 (95% CI = 0,803-0,882) und 0.765 (95% CI = 0,717-0,812) für miR-148a und miR-195, beziehungsweise. Die Sensitivität und Spezifität waren 75,4% und 83,1% für miR-148a, 69,2% und 75,4% für miR-195, bzw. (4C und 4D). Die Kombination ROC-Kurve Analyse der AUC-Wert von 0.872 (95% CI = 0,836-0,908) (4E) ergab.

die Diagnose Wert des Host-miRNA für GC Um zu überprüfen, kombinierten wir eine der Plasma miRNAs und ausgeführt, um die ROC-Kurven wie in S1 und S2 gezeigt. Diese Daten zeigten, dass die miR-26a, die zur Unterscheidung der GC-Patienten von Kontrollen die größte Fähigkeit zeigte, als ein geeigneter Biomarker zum Nachweis von GC handeln könnte.

Diskussion

Trotz eines deutlichen Rückgangs in GC Sterblichkeit in den letzten zehn Jahren ist die Sterblichkeit immer noch höher als in vielen anderen gängigen malignen Erkrankungen [24]. In den letzten Jahren wurden die Tumor Biomarker zum Beispiel CEA, CA19-9, CA74-2 mit der begrenzten Sensitivität und Spezifität für die Diagnose, Überwachung und Prognose von GC [4] verwendet. Alles in allem ist es von großer Bedeutung für die Diagnose von GC für spezifischere und empfindliche Biomarkern zu suchen.

Tissue miRNAs als Biomarker für die Diagnose und Prognose wurden zuerst vorgeschlagen. Bandres et al
. ergab, dass miR-451 wurde in primären Magen-und kolorektalen Tumoren herunterreguliert und die Herunterregulierung von miR-451 wurde mit dem niedrigen DFS und niedrigen Gesamtüberlebenszeit [25] verbunden. Xiao et al
. identifiziert miR-106a als dramatisch hochreguliert miRNA in GC [26]. Sie fanden auch heraus, dass die Expression von miR-106a zu Tumorstadium signifikant verwandt war, Lymph-, Fernmetastasen und Invasion. Dennoch haben viele Arten von Krebspatienten waren nicht in der Lage Operation in der klinischen Praxis zu unterziehen, wenn sie diagnostiziert werden. Die Abhängigkeit von chirurgischen Bereich und invasive Verfahren für die Gewebeprobenentnahme beschränkt stark die Anwendung von miRNAs in Gewebe von Krebsdiagnose [27]. Die diagnostische Qualität dieser Methoden ist nicht zufriedenstellend.

Beweise Schwellen bedeutet auch, dass zirkulierende miRNAs sind im Zusammenhang mit Krebs [28-30]. Die jüngste Studie berichtete, dass die miRNAs detektierbaren in Plasma und bei Raumtemperatur stabil und /oder mehrere Gefrier-Tau-Verfahren waren [31]. Zahlreiche Berichte hatte beleuchtet, dass der Nutzen von miRNAs als neue nicht-invasive Biomarker für Krebs, wie Darmkrebs [32], Brustkrebs [33-34] und Nierenzellkarzinom [35].

In unserer Studie zirkuliert, prüften wir methodisch die miRNA-Profil in den paarigen Geweben und im Plasma von GC-Patienten und gesunden Kontrollen. Plasma gewonnen aus 5 Fällen und 5 Kontrollen wurden zusammen zwei Mischproben zu bilden und wurden für TLDA verwendet. Diese Methode Proben Pooling ist eine weit verbreitete Technik, die für die Profilierung als zuverlässig gezeigt worden [36-38]. TLDA Analyse und das Ergebnis der Gewebemikroarray-Vergleich, vier miRNAs (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a und miR-195) reduziert in GC ausgewählt wurden.

Anschließend identifizierten wir vier Kandidaten miRNAs durch qRT-PCR in zwei Stufen, und fanden die Expressionsspiegel von vier miRNAs im Plasma von Patienten GC eingebrochen, die mit den Ausdrücken in Geweben in einstimmten. ROC-Kurve, die auch als Empfindlichkeitskurve bekannt ist, wird weithin als ein Bewertungsverfahren für Diagnosetest erkannt. Es ist auch eine integrierte Indikator für die die Sensitivität und Spezifität der kontinuierlichen Variablen. In der vorliegenden Studie zeigten ROC-Analyse, dass die Kombination von vier miRNAs war individuell nicht wirksamer als miR-26a. MiR-26a allein könnte eine gute diagnostische Effizienz bei der Unterscheidung von GC-Patienten von gesunden Kontrollen mit einer AUC von 0,882 (Sensitivität = 83,6% und eine Spezifität = 81,5%) erzielen. Eine frühere Studie von Schneider et al
. die Serumspiegel von CEA, CA19-9 und CA72-4 in GC zeigte eine Sensitivität von 45,5% für CA19-9 erläutert, 23,8% für CEA und 60,7% für CA72-4 [39]. Diese waren weit weniger als die Empfindlichkeit von miR-26a. Außerdem war die Expression von miR-26a im Plasma signifikant niedriger in den GC-Patienten und zeigten keine Bedeutung mit dem Fortschreiten der GC (S3) Abb. Daher miR-26a für GC großes Potenzial als diagnostische Plasma-Biomarker hatte.

In den letzten Jahrzehnten haben sich die bisherigen Studien nicht bestätigen, dass ob der miRNA-Expression von Plasma oder Serum die Ebenen von Gewebe darstellen könnte. Im Vergleich zu diesen Studien unserer Studie hatte eigene Funktion Gründen wegen wie folgt. Zunächst wählten wir die miRNAs, die differenziell sowohl in Gewebe und Plasma ausgedrückt, indem die Ergebnisse von zwei Mikroarrays zu vergleichen. Dies ergab eine bessere Gelegenheit möglich diagnostische Marker zu identifizieren. Darüber hinaus fanden wir, dass die miR-26a Expression signifikant in GC-Patienten reduziert und stabil gehalten im Plasma (S3) Abb.

Die Ergebnisse zeigten, dass die Plasma-Expression von miR-26a signifikant niedriger war in den GC-Patienten verglichen mit den gesunden Kontrollen ( P
< 0,05), die mit verschiedenen klinischen Status Stabilität in GC-Patienten zeigten. Die Herunterregulierung von Plasma miR-26a-Expression kann die Wahrscheinlichkeit der Diagnose von GC anzuzeigen. Daher kann miR-26a eine beste Wahl sein als potentielle Biomarker für die GC zu dienen. Deng et al
. zeigten, dass diejenigen, die mehr verringert bemerkenswert in GC Gewebe wurden als in Nicht-Tumorgeweben durch qRT-PCR [40] miR-26a Ebenen. Sie zeigten auch, dass miR-26a Tumorwachstum gehemmt und Metastasierung zum Teil, indem sie auf FGF9
in vivo. Diese bestanden mit unseren Ergebnissen. Diese Ergebnisse bestätigten, dass miRNA-26a im Plasma eine mögliche diagnostische Marker für GC sein könnte.

Allerdings sind die Grenzen unserer Studie sind, dass die Proben für das Gewebe-Mikroarray und für die TLDA waren nicht von den gleichen Patienten, und unsere Probengrößen für die Microarrays waren relativ klein. Eine weitere Analyse der Mikroarrays für die gleichen Patienten und der vergrößerten Probe Bestätigung benötigt als neuartige Screening-Werkzeug für GC in der klinischen Routinenutzung angewendet werden. Zusätzlich haben wir nicht wählen, die hochreguliert miRNAs aufgrund der Tatsache, dass es nicht die hochregulierten miRNAs, deren fache Veränderungen waren waren ≥ 2. Wir ausgewählten Kandidaten miRNAs, die reichlich im Plasma ausgedrückt wurden sicher von der Wahrscheinlichkeit der Prüfung zu machen in der klinischen Praxis.

Schlussfolgerungen

Insgesamt unsere Studie ergab vier herunterreguliert miRNAs, miR-148a, miR-142-3p, miR-26a und miR-195, in der GC Patienten. Noch wichtiger ist, wurde das Plasma Expression von miR-26a deutlich reduziert und stabil bei Patienten mit Magenkrebs. Als Ergebnis kann miR-26a eine nicht-invasive und stabile Biomarker für die Diagnose Magenkrebs bieten und Screening.

Grundinformationen
S1 Daten. Experimentelle Protokolle von Microarrays und qRT-PCR
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s001
(DOC)
S1 Abb. ROC-Kurve Analyse der Kombination von zwei miRNAs unter den vier Kandidaten miRNAs.
Die Kombination von miR-26a und miR-142-3p (A), die Kombination von miR-26a und miR-148a (B), die Kombination von miR-26a und miR-195 (C), und die Kombination von miR-142-3p und miR-148a (D), die Kombination von miR-142-3p und miR-195 (E) und die Kombination von mir- 148a und miR-195 (F) lieferte die größte AUCs
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s002
(DOC)
S2 Abb. ROC-Kurve Analyse der Kombination von drei miRNAs unter den vier Kandidaten miRNAs.
Die Kombination von miR-26a, miR-142-3p und miR-148a (A), die Kombination von miR-26a, miR-142-3p und miR-195 (B), die Kombination von miR-26a, miR-148a und miR-195 (C) und die Kombination von miR-142-3p, miR-148a und miR-195 (D) lieferte die größte AUC-Werte.
doi: 10.1371 /journal.pone.0151345.s003
(DOCX)
S3 Abb. . Plasmaspiegel von miR-26a in Magenkrebs-Patienten mit dem klinischen Zustand geschichtete
Box-Plots zeigten die Plasmaspiegel von miR-26a in 200 gesunden Kontrollen und 200 Patienten mit Magenkrebs in verschiedenen klinischen Status
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s004
(DOCX)
S1 Tabelle. Klinische Merkmale der Gewebe Themen Screening von Agilent Menschliche miRNA Microarray
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s005
(DOC)
S2 Tabelle. Klinische Charakteristika von Plasma Probanden Screening von TLDA
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s006
(DOC)

Acknowledgments

Wir sind zutiefst dankbar für die Beteiligung von alle Probanden dieser Studie beitragen.

• PLoS ONE: Die Überexpression und Biologische Funktion von Ubiquitin-spezifische Protease 42 in Magenkrebs
• PLoS ONE: Assoziation zwischen Zahnverlust und Magenkrebs: Eine Meta-Analyse von Beobachtungsstudien