PLoS ONE: SULF2 Methylierungs mit In-vitro-Cisplatin Empfindlichkeit Assoziierte und klinische Wirksamkeit für Magenkrebs-Patienten behandelt mit einer modifizierten FOLFOX Regimen

Abstrakte

Ziel

Biomarkers der Lage, die Patienten, die Unterscheidung sind wahrscheinlich auf bestimmte Chemotherapeutika reagieren könnte, die klinische Effizienz zu verbessern. Die Sulfatasen (SULFs) spielen eine entscheidende Rolle in der Pathogenese einer Vielzahl von menschlichen Krebserkrankungen. Hier haben wir unsere Untersuchung über die prognostische und prädiktive Wirkung von SULF2
Methylierung bei Magenkrebs.

Methoden

Promoter CpG-Insel-Methylierung von SULF2
wurde in 100 Magenkrebs-Proben untersucht. Die In-vitro-
Empfindlichkeit gegenüber Cisplatin, Docetaxel, Gemcitabin, Irinotecan und Pemetrexed wurden durch Gewebekultur Arzneimittelreaktion Test (HDRA) bestimmt. Zusätzlich 56 Patienten mit einem modifizierten FOLFOX-Schema behandelt Magenkrebs (alle zwei Wochen Oxaliplatin plus 5-FU und Folinsäure) wurden retrospektiv analysiert, um die prognostische und prädiktive Auswirkungen bewerten SULF2
Methylierung bei Magenkrebs.

Ergebnisse |

methylierter SULF2
( SULF2M
) wurde bei 28 Patienten nachgewiesen, während die restlichen 72 Patienten nicht methylierten zeigte SULF2
( SULF2U
, Methylierungsrate: 28%). Proben mit SULF2U
waren empfindlicher gegenüber Cisplatin als die mit SULF2M
(Hemmungsrate: 48,80% gegenüber 38,15%, P
= 0,02), während die Proben mit SULF2M
waren empfindlicher auf Irinotecan als SULF2U
(Hemmungsrate: 53,61% gegenüber 40,92%, P
= 0,01). Es gab keinen Zusammenhang zwischen SULF2
Methylierung und In-vitro-
Empfindlichkeit gegenüber Docetaxel, Gemcitabin und Pemetrexed. SULF2
Methylierung gefunden wurde eine signifikante Assoziation mit Cisplatin Wirksamkeit zu haben ( SULF2M
: 57,14%, SULF2U
: 80,56%, P
= 0,02 ) und Irinotecan Wirksamkeit ( SULF2M
: 89,29%, SULF2U
: 62,50%, P
= 0,01). Unter den 56 Patienten, die die modifizierte FOLFOX Therapie erhalten, eine signifikante Assoziation zwischen Überleben beobachtet und SULF2
Methylierungsstatus ( SULF2M:
309 Tage, 95% CI = 236-382 Tagen; SULF2U:
481 Tage, 95% CI = 418-490 Tagen; P
= 0,02). Multivariate Analyse ergab, dass SULF2
Methylierung als unabhängiger prognostischer Faktor des Gesamtüberlebens bei Patienten mit Magenkrebs war mit einer platinbasierten Chemotherapie behandelt.

Fazit

SULF2
Methylierung mit Cisplatin Empfindlichkeit in-vitro-
negativ assoziiert. SULF2
Methylierung ein neuer prognostischer Biomarker für Magenkrebs-Patienten mit Platin-basierten Chemotherapie behandelt werden können

Citation:. Shen J, Wei J, Wang H, Yang Y, Yue G, Wang L , et al. (2013) SULF2
Methylierungs ist im Zusammenhang mit In-vitro-
Cisplatin Empfindlichkeit und klinische Wirksamkeit für Magenkrebs-Patienten behandelt mit einem Modified FOLFOX Regimen. PLoS ONE 8 (10): e75564. doi: 10.1371 /journal.pone.0075564

Editor: Zhengdong Zhang, Nanjing Medical University, China

Received: 12. Juni 2013 beginnen; Akzeptiert: 14. August 2013; Veröffentlicht am: 4. Oktober 2013

Copyright: © 2013 Shen et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem National Natural Science Foundation of China (Erteilungsnummer 81220108023 und 81.172.094) und Top Six Talents Projekt in der Provinz Jiangsu (Grant No 2011ws005) gefördert. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs ist eine der häufigsten Ursachen von Krebs-Todesfälle weltweit [1], [2]. Multimodalen Behandlungsprotokolle, vor allem auf Basis von Platin und 5-Fluorouracil (5-FU), haben gezeigt, das Überleben der Patienten zu verlängern; jedoch mit einer beliebigen Kombination von chemotherapeutischen Mitteln, die Antwortrate nur etwa 30% -50% [3], [4]. In einem Versuch, die klinische Effizienz zu verbessern, ist es wichtig und notwendig Biomarker zu identifizieren Lage, die Patienten zum Unterscheiden, die auf bestimmte chemotherapeutische Mittel wahrscheinlich zu reagieren sind [4] - [9].

Heparansulfat-Proteoglycane (HSPG ) sind Corezeptoren für auf der Zelloberfläche verteilt Heparin-bindenden Wachstumsfaktoren und Zytokine und in der extrazellulären Matrix. Zwei Isoformen der extrazellulären Heparansulfat-6-O-endosulfatases (SULFs) SULF1 und SULF2 wurden in Säugetieren entdeckt. Beide Proteine ​​sind an der Zelloberfläche sekretiert die Sulfatierung von HSPGs [10] zu modulieren. Obwohl frühere Berichte eindeutig die entscheidende Rolle hervorgehoben haben, dass SULFs in der Pathogenese einer Vielzahl von Krebserkrankungen des Menschen spielen, haben sich die Meinungen über die Rolle der SULFs bei der Krebsentwicklung etwas polarisiert gewesen. Mehrere Beweise zeigen, dass SULFs negative Regulatoren des Wachstums von Tumorzellen sind und dass die Überexpression von SULFs in Tumorzellen hemmt das Zellwachstum durch mehrere Faktoren deregulieren, einschließlich FGF-2, HB-EGF und HGF [11] - [13]. Andere Studien sind der Ansicht, dass SULFs positive Regulatoren der oncogenetic Signalwege, einschließlich Wnt, BMP, Hedgehog und GDNF [14] - [16], und erhöhte Expression von SULFs ist weit verbreitet in verschiedenen Krebsarten, einschließlich Magen-, hepatozellulären, Pankreas- und Brust Krebs, nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLC) und Kopf-Hals-Tumoren [10], [13], [17] - [20]. Hohe Expression von SULF2 wurde bei Patienten mit hepatozellulärem Karzinom und NSCLC [18], [20] zu einer schlechten Überleben verbunden. Die verfügbaren Daten auf den Methylierungsstatus und Expressionsniveaus von SULFs
bei Magenkrebs, sind jedoch nicht schlüssig, und die prognostische oder prädiktive Wert von SULFs
für Chemosensitivitäts Vorhersage bleibt unbekannt.

in dieser Studie haben wir die Promotor CpG Insel Methylierung von SULF2
, das Gen, codierend das SULF2 endosulfatase, und seine Verbindung mit in vitro
Empfindlichkeit gegenüber Cisplatin, Docetaxel analysiert , Gemcitabin, Irinotecan und Pemetrexed in 100 menschlichen Magenkrebsproben. Zu diesem Zweck haben wir eine Reihe von in vitro
Empfindlichkeitstests an frisch entnommenen Magentumorgewebe und bewertet die mögliche Verwendung von SULF2
Methylierungsstatus für die Vorhersage der chemotherapeutische Wirksamkeit von dort Mittel. Dann analysierten wir retrospektiv die SULF2
Methylierung in einer Kohorte von 56 Patienten mit Magenkrebs mit einem modifizierten FOLFOX-Schema behandelt und festgestellt, dass SULF2U
dient als unabhängiger prognostischer Biomarker bei Patienten Magenkrebs behandelt mit
ein modifiziertes FOLFOX-Schema.

Materialien und Methoden

Ethikerklärung

Alle Forschung am Menschen Teilnehmern wurden von der Human Research Schutzausschuss des Drum Tower Krankenhaus, angeschlossen an die Medizinische Hochschule genehmigt der Universität Nanjing und eine schriftliche Einverständniserklärung von allen Patienten erhalten wurde.

Patienten und Gewebeproben

Eingeschriebene Patienten diejenigen unterziehen die Gastrektomie in der Abteilung für Allgemeine Chirurgie des Drum Tower Hospital, Nanjing waren, China in der Zeit von August 2010 bis Oktober 2011 Zulassungskriterien für die Einschreibung in die Studie eingeschlossen die folgenden Parameter: (1) Alter > 18 Jahre; (2) histologisch Adenokarzinom des Magens, schleimige oder Siegelring-Adenokarzinom; (3) keine früheren oder gleichzeitigen malignen Erkrankungen als Magenkrebs; (4) keine vorherige Geschichte der Chemotherapie oder Strahlentherapie, entweder Adjuvans oder palliative; und (5) eine angemessene Funktion aller wichtigen Organe. Gewebeproben wurden von 100 frisch entnommenen Magentumoren extrahiert. Jede Tumorgewebe wurde in zwei Teile aufgeteilt: (1) Ein Teil wurde in 4 ° C Hanks 'ausgeglichener Salzlösung mit 1% Penicillin /Streptomycin nach dem Sammeln gehalten und dann innerhalb von 15 min in 4 ° C, an das Labor geschickt in vitro
Bewertung der Chemosensitivität durch Gewebekultur Arzneimittelreaktion-Assay (HDRA) [21], [22]; (2) wurde der verbleibende Teil für die pathologische Beobachtung und Methylierungsnachweis Formalin-fixierten und in Paraffin eingebetteten (FFPE) Tumorblöcken in. Wir retrospektiv die Patienten medizinische Aufzeichnungen und OP-Berichte überprüften klinischen und histopathologischen Daten zu identifizieren, einschließlich Geschlecht, Histologie, Tumorstelle, Stadium, Grading und Lymphknotenmetastasen. Die Tumore wurden nach der Internationalen Union gegen Krebs (UICC) TNM-Klassifikation eingestuft. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von allen Patienten erhalten und die Protokolle für diese Studie wurden von der Human Research Schutzausschuss des Drum Tower Krankenhaus zugelassen.

HDRA

HDRA Verfahren wurden wie bereits berichtet durchgeführt von Furukawa und Kollegen [21], [22]. Kurz gesagt wurden die frischen Tumorgewebe zweimal mit Hanks 'ausgeglichener Salzlösung und fein zerkleinert, in kleine Stücke von ungefähr 10 mg Gewicht und 0,5 mm im Durchmesser gewaschen, die dann auf vorbereitete Kollagen platziert wurden (Health Entwurf, Rochester, NY) -Oberflächen in 24 -Nun Mikrotiterplatten. Optimale Konzentrationen der verwendeten Medikamente zu unterscheiden In-vitro-
Empfindlichkeit und Widerstand waren 20 ug /ml für Cisplatin [23], 100 ug /ml für Docetaxel [22], 50 ug /ml für Gemcitabin [23], 20 ug /ml für Irinotecan [23] und 400 ug /ml für Pemetrexed [5], entsprechend seiner Peak-Plasmakonzentration bei Patienten. Cisplatin, Docetaxel und Irinotecan wurden aus Jiangsu Hengrui Medicine Company (Jiangsu, China) erhalten, während Pemetrexed und Gemcitabin von Eli Lilly erhalten und Company (Shanghai, China). 8 parallel Kulturvertiefungen wurden für jede Arzneimittelkonzentration sowie für die Kontrolle eingesetzt. Die Platten wurden für 7 Tage bei 37 ° C in Gegenwart von Arzneimitteln in RPMI 1640-Medium mit 20% fötalem Kälberserum und links in einer befeuchteten Atmosphäre mit 95% Luft-5% CO _{2 gelöst inkubiert. Nach der Gewebekultur wurden 100 ul Typ Kollagenase I (0,1 mg /ml, Sigma, Shanghai, China) und 100 &mgr; l 3- (4,5-Dimethyl-2-thiazotyl) -2,5-diphenyl-2H- tetrazoliumbromid ( MTT) -Lösung (5 mg /ml, Sigma, Shanghai, China) wurden zu jeder Kultur zugegeben und gut für weitere 16 Stunden inkubiert. Nach der Extraktion mit Dimethylsulfoxid wurde die Absorption der Lösung in jeder Vertiefung bei 540 nm abgelesen.}

Auswertung der Empfindlichkeit gegenüber Antikrebsmittel in HDRA

Die Absorption pro Gramm kultivierten Tumorgewebe wurde aus der mittleren Extinktion von Gewebe aus 8 parallelen Kulturvertiefungen berechnet und das Gewicht Tumorgewebe wurde vor der Kultur bestimmt. Die Hemmung Rate (%) = (1-T /C) × 100, wobei T die mittlere Absorption von behandelten Tumors /Gewicht und C wird die Absorption bedeuten: Die Hemmung Rate jedes Antikrebsmittel, wurde unter Verwendung der folgenden Formel berechnet Kontrolle Tumor /Gewicht. Die cut-off Hemmraten die empfindliche und die resistenten Fälle zu unterscheiden verwendet wurden bei 30% angenommen, 40%, 50% und 60% für jedes getestete Medikament. Die In-vitro-
Wirksamkeitsrate auch auf der Cut-off-Hemmung Preis kann jetzt höher geschätzt wurde wie folgt:. Wirksamkeitsrate (%) = Anzahl der sensiblen Fällen /Gesamtzahl der Fälle

Patienten Chemotherapie

von allen Patienten, 56 mit Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) Performance-Status (PS) ≤2 erhielt eine modifizierte FOLFOX (eine Kombination von 5-FU und Platin) Chemotherapie nach Resektion des Primärtumoren wie folgt: Oxaliplatin 85 mgm ^{-2 und Folinsäure 200 mgm -2 als 2 h Infusion am Tag 1, gefolgt von einer 22 h Infusion von 5-FU 2000 mgm -2 an den Tagen 1 und 2, alle zwei Wochen. Diese 56 Patienten wurden weiter verfolgen und die Überlebenszeit wurde ab dem Zeitpunkt der Diagnose bis zum Zeitpunkt des letzten Follow-up oder Tod jeglicher Ursache berechnet.}

DNA-Extraktion und Modifikation

Drei 7 &mgr; m-Schnitte wurden aus primären Tumorblöcken hergestellt, die mindestens 80% Tumorzellen enthalten. Nach der Hämatoxylin-Eosin-Färbung wurden die Krebsteile mikrodissezierten und in ein Mikrozentrifugenröhrchen überführt. DNA wurde routinemäßig isoliert und wurde dann chemisch durch Natriumbisulfit modifizierte alle nicht methylierten Cytosine zu urazile zu konvertieren, während Methylcyto- unverändert [18] zu verlassen. Dann wurden sie bei -20 ° C zur weiteren Analyse gespeichert.

Methylierungs-spezifische Polymerase-Kettenreaktion (MSP)

MSP durchgeführt wurde, den Methylierungsstatus , um zu bestimmen SULF2
unter Verwendung des ABI Prism 7300HT Sequence Detection System (Applied Biosystems). Jede PCR-Reaktion enthielt genomische DNA 2 ul, SYBR Green PCR Mix (Takara, Japan) 10 &mgr; l, 7,7 &mgr; l Wasser und 0,15 ul Primer (10 umol /l). Die PCR-Bedingungen waren 95 ° C für 10 min, gefolgt von 45 Zyklen bei 59 ° C für 30 s, 72 ° C für 30 s und 95 ° C für 30 s. Grundierungen für SULF2
methylierte PCR (Takara, Japan) waren wie folgt: vorwärts 5 'TAAGTGTTTTTTTTATAGCGGC 3', Reverse 5'TACCGTAATTTCCGCTATC 3 '. Grundierungen für SULF2
unmethylierte PCR (Takara, Japan) waren wie folgt: vorwärts 5 'GTTTATAAGTGTTTTTTTATAGTGGT3', Reverse 5'TACCATAATTTCCACTATCCCT 3 '. Jede Charge der Reaktion enthielt eine positive Kontrolle von Methyltransferase (M.SssI) humanen genomischen DNA (vollständig methyliert) -behandelten, eine negative Kontrolle von DNA-Proben, die als nicht-methylierten und andere Negativkontrolle ohne DNA bestätigt worden war. Alle Tests wurden doppelt durchgeführt. Die Ergebnisse wurden für ausgewählte Proben durch kombinierte Bisulfit Modifikation und Bisulfit-Sequenzierung bestätigt.

Statistische Analyse

Die Werte wurden als Mittelwert ± Standardabweichung. Die Unterschiede in der Hemmung Raten zwischen den Gruppen wurden mit dem t-Test ausgewertet. Die möglichen Vereinigungen von SULF2 Methylierung mit klinischen Eigenschaften und In-vitro-
Chemosensitivitäts Wirksamkeit wurden unter Verwendung der exakten Wahrscheinlichkeits Fisher-Test analysiert. Alle statistischen Tests waren zweiseitig und einen P-Wert von weniger als 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet. Die statistische Analyse wurde mit der SPSS, Version 16.0.

Ergebnisse |

Patientencharakteristika

Die Eigenschaften aller Patienten sind in Tabelle 1 Die Mehrzahl der Patienten waren Männer gezeigt (73%), und die vorherrschende Histologie war Adenokarzinom (79%). In 35 (35%) der Patienten wurde der Tumor in dem distalen Magen befindet, in 38 (38%) in dem proximalen Magen und in 27 (27%) in der gesamten Magen. Dreiundsechzig (63%) Patienten hatten Stadium III oder IV Krankheit. Lymphknotenmetastasen waren in 75 (75%) Patienten. Methylierter SULF2
( SULF2M
) wurde bei 28 Patienten nachgewiesen, während die restlichen 72 Patienten nicht methylierten zeigte SULF2
( SULF2U
, Methylierungsrate: 28 %). Die RT-PCR-Amplifikation Kurven von SULF2M
und SULF2U
wurden in Abbildung S1 gezeigt. Es gab keinen Zusammenhang zwischen SULF2
Methylierung und keinem der Patienten Eigenschaften, einschließlich Geschlecht, Histologie, Tumorstelle, Stadium, Grading und Lymphknotenmetastasen.

In-vitro-
Wirksamkeitsrate von getesteten Medikamente

in-vitro-
Empfindlichkeit gegenüber Cisplatin, Docetaxel, Gemcitabin, Irinotecan und Pemetrexed erfolgreich in allen Proben getestet. Die mittleren Hemmraten für jeden getesteten Arzneistoff sind in Tabelle 2 aufgeführten Proben mit SULF2U
waren empfindlicher gegenüber Cisplatin als solche mit SULF2M
(48,80% vs. 38,15%, P
= 0,02), während die Proben mit SULF2M
waren empfindlicher auf Irinotecan als SULF2U
(53,61% gegenüber 40,92%, P
= 0,01, Tabelle 2 und Abbildung 1). Es gab keinen Zusammenhang zwischen SULF2
Methylierung und In-vitro-
Empfindlichkeit gegenüber Docetaxel, Gemcitabin oder Pemetrexed (Tabelle 2). Wie in Tabelle 3 dargestellt ist, gab es keinen Zusammenhang zwischen den Hemmung Raten für die Antikrebsmittel und keiner der klinischen Merkmale beobachtet.

weiter Um die mögliche Beziehung zwischen SULF2
Methylierung zu untersuchen und Cisplatin oder Irinotecan Empfindlichkeit, die in-vitro-Wirksamkeit
Rate jeder Arzneimittelkonzentration wurde die Einrichtung unterschiedlicher Geschwindigkeit cut-off-Hemmung untersucht (Tabelle 4). Vier verschiedene Cut-off-Werte angenommen: 30%, 40%, 50% und 60%. An der Cut-off von 30% Hemmungsrate, SULF2
Methylierung wurde gefunden, eine signifikante Assoziation mit Cisplatin Wirksamkeit zu haben ( SULF2M
: 57,14%, SULF2U
: 80.56 %, P
= 0,02) und Irinotecan Wirksamkeit ( SULF2M
: 89,29%, SULF2U
: 62,50%, P
= 0,01, 2 und Tabelle 4). An der Cut-off von 40%, 50% und 60% Hemmungsrate gab es einen Trend, dass die SULF2M
Proben höhere Irinotecan Wirksamkeit zeigte, aber niedriger Cisplatin Wirksamkeit als die SULF2U
Proben (Tabelle 4).

Verband der SULF2
Methylierungs mit dem klinischen Ansprechen auf die Chemotherapie

Unter den 56 Patienten, die die modifizierte FOLFOX Therapie erhalten, die mediane Überlebenszeit 434 Tage war ( Bereich: 111-641 Tage). Ein signifikanter Zusammenhang wurde zwischen Überleben und Tumorstelle ( P
= 0,01) beobachtet. Keine andere Assoziation zwischen klinischen Charakteristika und das Überleben wurde (Tabelle 5 und Abbildung 3). SULF2M
wurde bei 19 Patienten nachgewiesen, während SULF2U
wurde bei 37 Patienten gefunden ( SULF2
Methylierungsrate: 34%). Ein signifikanter Zusammenhang wurde zwischen Überleben und SULF2
Methylierungsstatus beobachtet. Das mediane Gesamtüberlebenszeit betrug 309 Tage (95% CI = 236-382 Tage) für Patienten mit SULF2M
und 481 Tage (95% CI = 418-490 Tage) für die mit SULF2U
( P =
0,02, Abbildung 3). Mit beiden univariate und multivariate Cox Proportional Hazard Analyse, die Berücksichtigung von Alter nahm, Geschlecht, Tumorstelle, Stadium, Grading, Lymphknotenmetastasen und SULF2
Methylierung als Kovariaten, Tumor und SULF2
Methylierung signifikante Marker für das Gesamtüberleben bei Magenkrebs-Patienten blieb behandelt mit einer platinbasierten Chemotherapie (Tabelle 6).

Diskussion

Obwohl frühere Studien, die die Beteiligung von SULF2 in der Krebs Pathogenese unter Beweis gestellt haben, deren Wert für Chemosensitivität bleibt Vorhersage unklar. Diese Studie konzentriert sich auf die Promoter CpG-Insel-Methylierung von SULF2
als potenzieller Biomarker bei Magenkrebs. Die wichtigsten Ergebnisse der vorliegenden Studie zeigen, dass: (i) die Rate von SULF2M
in menschlichen Magenkrebs ist um 30%; (Ii) der erste Beweis für die SULF2U
mit Cisplatin Empfindlichkeit in Krebs in Verbindung gebracht wird; (Iii) den Nachweis für die SULF2M
wird bei Magenkrebs mit Irinotecan Empfindlichkeit assoziiert sind; (Iv) eine retrospektive Untersuchung und Bestätigung für SULF2
Methylierung in einer Kohorte von 56 Patienten mit Magenkrebs, die uns, dass SULF2U
zu entdecken erlaubt ist ein unabhängiger prognostischer Biomarker bei Patienten Magenkrebs behandelt mit einem modifizierten FOLFOX-Schema.

In früheren Studien von Magenkrebs, die Erkenntnisse über Methylierungsstatus und Expressionsniveaus von SULFs
waren nicht schlüssig. In einer Studie nur 13 Frühstadium Brust- und Magenkrebs, von denen die meisten ich waren Stufe durch semi-quantitative RT-PCR analysiert wurden für SULF1
Ausdruck [24]. Es wurde gezeigt, dass niedrige Expression von SULF1
in diesen beiden Arten von Krebs weit verbreitet war. In einer weiteren Studie, die beide die Expression von SULF1
und SULF2
mRNA wurde mittels real-time RT-PCR für eine große Kohorte von Magenkrebsgewebe, Befund festgestellt, dass SULFs
wurden auf höheren Ebenen in Magenkrebs ausgedrückt als mit normalen Geweben verglichen. In der aktuellen Studie fanden wir durch die Untersuchung der SULF2
Methylierung in 100 Magenkrebs-Proben, dass die Rate von SULF2M
war etwa 30%, die ergab, dass Magenkrebs vorherrschend waren SULF2U
. Jüngste Studien durch integrierte genomische Analysen zeigten, dass SULF2
wirkt als nachgeschalteter Effektor von p53, und dass die Aktivierung von p53 an die führen könnte SULF2U Karten und Hochregulation von SULF2
. Die mögliche Verbindung zwischen p53 und SULF2 in Wachstumsfaktor-Signalweg vorgeschlagen, eine mögliche Rolle für SULF2 bei der Krebsentstehung und Krebspatienten "Ergebnis [25]. Die Beziehung zwischen SULF2
unmethylation und SULF2
Hochregulierung muss weiter in diesen Proben getestet werden. Die unterschiedliche Expressionsniveaus und Methylierungsstatus von SULF2
zwischen Tumor- und Normalgewebe müssen auch weiter überprüft werden.

Studien auf SULF2
Methylierung als Chemosensitivität Prädiktor knapp sind. Methylierung der SULF2
Promotor mit besseren Überleben der reseziert Lungenadenokarzinom-Patienten, und auch mit einer marginalen Verbesserung der Überlebenszeit von Patienten mit fortgeschrittenem NSCLC Empfang einer Standard-Chemotherapie (Hazard Ratio = 0,63, P
= 0,07) [18]. Nachfolgende Studien zeigten, dass NSCLC-Zelllinien mit SULF2M
waren 134-fach empfindlicher auf Topoisomerase-Inhibitor I als solche mit SULF2U
. In der aktuellen Studie haben wir gezeigt, dass Magentumoren mit SULF2M
empfindlicher auf Irinotecan sind als solche mit SULF2U
. Darüber hinaus haben wir zum ersten Mal gezeigt, dass SULF2
Methylierung ist auch eine potentielle prädiktive Biomarker für Cisplatin Wirksamkeit. Magentumoren mit SULF2U
waren empfindlicher gegenüber Cisplatin als die mit SULF2M
und Magenkrebs-Patienten mit SULF2U
zeigte eine geringere Mortalität als Platin-basierten Chemotherapie erhalten. Obwohl mehrere prädiktive Biomarker wurden Cisplatin, wie ERCC1 identifiziert [7], BRCA1 [4], [26], [27] und XRCC1 [28] - [30], unter Berücksichtigung der relativ niedrigen Antwortraten der üblicherweise verwendeten Platin /5FU-basierte neoadjuvante Behandlung Protokoll für fortgeschrittenem Magenkarzinom-Patienten ist die Identifizierung von Biomarkern zur Vorhersage Reaktion dringend erforderlich. Die Entdeckung eines neuen prädiktiven Biomarkern, die durch Methylierungsanalyse untersucht werden kann, ist faszinierend und ergänzende. Der Grund, warum SULF2
unmethylation erhöht Tumorempfindlichkeit gegenüber Cisplatin auf Ubiquitin konjugierende Enzyme (UBE) liegen. Es wurde berichtet, dass SULF2
Methylierung führt zu einer erhöhten Expression von UBE [18]. UBE hinzugefügt Ubiquitin an bestimmte Lysinreste und wurde in der DNA-Reparatur, Mutagenese und Zellproliferation beteiligt. Die Überexpression bestimmter UBEs, wie RAD6B könnte in erheblichen Widerstand führen zu Cisplatin [31]. Weitere Studien sollen die molekularen Mechanismen von SULF2M
induziert Cisplatin Resistenz zu untersuchen, durchgeführt werden.

Eine signifikante synergistische Wirkung von Cisplatin und DNA methyltransferase (DNMT) -Inhibitoren 5-Aza-dC (DAC) auf die Lebensfähigkeit der Zellen wurde in der Cisplatin-resistenten AGS-Zelllinie, aber nicht in der Cisplatin-sensitive Zellinie MKN28 [32] beobachtet. Daten aus Koloniebildungsfähigkeit der Analyse zeigte, dass der Zuschlags DNMT1 eine Erhöhung der Empfindlichkeit Cisplatin verursacht [32]. Der molekulare Mechanismus unklar bleibt. Jedoch ist die Beziehung zwischen SULF2
Methylierung und Cisplatin Empfindlichkeit kann teilweise um dieses Phänomen zu erklären. Die Behandlung von Magenkrebs mit DNMT Inhibitoren in Demethylierung von SULF2
und folglich erhöhen die Empfindlichkeit gegenüber Cisplatin führen könnte. Somit kann zusätzlich zu den Auswirkungen prädiktiven unsere Daten unterstützt auch die Aufnahme eines DNMT-Inhibitors in derzeitigen Behandlungsprotokolle für mindestens eine Untergruppe von Patienten mit Magenkrebs.

Abschließend unserer Studie liefert neue Beweise, dass em <> SULF2
wird Methylierung negativ mit Cisplatin Empfindlichkeit in-vitro-
verbunden. SULF2
Methylierung ist ein potentieller prognostischer Biomarker für Patienten Magenkrebs behandelt mit einer platinbasierten Chemotherapie.

Hintergrundinformationen
Abbildung S1. , Die RT-PCR-Amplifikation Kurven von SULF2M und SULF2U. Die rote Kurve steht für die Amplifikation SULF2M und die blaue Kurve steht für die Amplifikation SULF2U. Abbildung S1a zeigt die Verstärkungskurven der Probe mit SULF2M; Abbildung S1b zeigt die Verstärkungskurven der Probe mit SULF2U
doi:. 10.1371 /journal.pone.0075564.s001
(TIF)

• PLoS ONE: Aktivierung von STAT3 in menschlichen Magenkrebszellen über Interleukin (IL) -6-Typ Cytokine Signaling korreliert mit der klinischen Implikationen
• PLoS ONE: Tetrandrin Induziert Mitochondrien-vermittelte Apoptose in menschlichen Magenkrebs BGC-823 Zellen