PLoS ONE: Genetische Empfänglichkeit auf CagA-Interacting Moleküle und Gen-Umwelt-Interaktion mit Phytoöstrogene: Ein mutmaßlicher Risikofaktor für Magen Cancer

Abstrakte

Ziele

, ob Gene zu bewerten, die kodieren CagA- die Interaktion Moleküle ( SRC
, PTPN11
, CRK
, CRKL
, CSK
, c-MET
und GRB2
) mit Magenkrebsrisiko verbunden ist und ob eine Wechselwirkung zwischen diesen Genen und Phytoöstrogene ändern Risiko von Magenkrebs.

Methoden

In der Ermittlungsphase, 137 Kandidat SNPs in sieben Gene wurden in 76 Vorfall Magenkrebsfällen und 322 Kontrollpersonen aus der koreanischen Multi-Zentren-Krebs Kohorte analysiert. Fünf bedeutende SNPs in drei Genen ( SRC
, c-MET
und CRK
) wurden in 386 Fällen und 348 Kontrollen in der Verlängerungsphase neu bewertet. Odds Ratios (OR) für das Risikomagenkrebs geschätzt wurden korrigiert für Alter, Rauchen, H. pylori
Seropositivität und CagA-Stamm Positivität. Zusammengefasst OPs in der gesamten Studienpopulation (462 Fälle und 670 Kontrollen) wurden unter Verwendung von pooled- und Meta-Analyse vorgestellt. Die Plasma-Konzentrationen von Phytoöstrogenen (Genistein, Daidzein, Equol und enterolactone) wurden unter Verwendung der zeitaufgelösten Fluorimmunoassay gemessen.

Ergebnisse |

SRC
rs6122566, rs6124914, c -MET
rs41739 und CRK
rs7208768 zeigten eine signifikante genetische Effekte für Magen in Krebs sowohl der gepoolten und Meta-Analyse ohne Heterogenität (gepoolte OR = 3,96 [95% CI 2,05-7,65], 1,24 [95 % CI = 1,01-1,53], 1,19 [95% CI = 1,01-1,41] und 1,37 [95% CI = 1,15-1,62] sind; meta OR = 4,59 [95% CI 2,74-7,70], 1,36 [95% CI = 1,09-1,70], 1,20 [95% CI = 1,00-1,44] und 1,32 [95% CI = 1,10-1,57], beziehungsweise). Risiko-Allel von CRK
rs7208768 hatte ein deutlich erhöhtes Risiko für Magenkrebs bei niedrigen Phytoöstrogen Ebenen ( p Interaktion
< 0,05).

Schlussfolgerungen

Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass SRC
, c-MET
und CRK
eine Schlüsselrolle bei Magen-Krebsentstehung spielen durch Modulation CagA Signaltransduktionswege und die Interaktion zwischen CRK
Gen und Phytoöstrogene Magenkrebsrisiko ändern

Citation:. Yang JJ, Cho LY, Ko KP, Shin A, Ma SH, Choi BY, et al. (2012) Genetische Empfänglichkeit auf CagA-Interacting Moleküle und Gen-Umwelt-Interaktion mit Phytoöstrogene: Ein mutmaßlicher Risikofaktor für Magenkrebs. PLoS ONE 7 (2): e31020. doi: 10.1371 /journal.pone.0031020

Editor: Deodutta Roy, Florida International University, Vereinigte Staaten von Amerika

Empfangen: 30. November 2011; Akzeptiert: 29. Dezember 2011; Veröffentlicht: 24. Februar 2012

Copyright: © 2012 Yang et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Studie durch das Ministerium finanziert D-Programm für Cancer Control, Ministerium für Gesundheit und Soziales, der Republik Korea (0520140) und der Grund Research Laboratory (BRL) Programm durch die National Research Foundation of Korea, wurde durch einen Zuschuss aus dem National R &unterstützt Bildung, Wissenschaft und Technologie (2011 bis 0.001.564). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Helicobacter pylori
( H. pylori
), eine Gruppe I menschlichen Magen Karzinogen von der Internationalen Agentur für Krebsforschung (IARC) [1], ist die stärkste Risikofaktor für die Entwicklung von Magenkrebs, und persistent H. pylori
Infektion ist der erste Schritt zur Magen Karzinogenese [1] - [3]. Trotz zahlreicher Beweise, dass H. pylori
eine entscheidende Rolle bei Magen-Krebsentstehung spielt, nur ein kleiner Teil der Infizierten entwickeln Magenkrebs. Dies bedeutet, dass andere Faktoren in der pathogene Mechanismus von H beteiligt. pylori
kann für Magenkrebs individuelle Empfindlichkeit ändern. Unsere bisherigen Studien haben gezeigt, H. pylori
Infektion selbst wurde nicht mit dem Magenkrebsrisiko verbunden, aber speziell positive CagA H. pylori
Infektion signifikant erhöhtes Risiko für Magenkrebs von 3,57-fach [4], [5].

Cytotoxin-assoziierte Gen A (CagA), ein immuno-Protein abgesondert von H. pylori
, erscheint einer der pathogenen modifizierenden Faktoren zu sein [6] - [8]. Nach infizieren H. pylori
in Magenepithelzellen wirkt CagA als wichtige krebserregend und virulent Komponente durch Signaltransduktionsweg sequentielle CagA. Der erste Schritt beginnt mit der Wechselwirkung zwischen CagA und verschiedene Proteine ​​wie SRC, SHP2, CRK, CRKL und CSK nach Phosphorylierung und c-MET und GRB2 ohne die Phosphorylierung [9] - [12]. Tyrosinphosphoryliert CagA von SRC-Familie-Kinasen in Wechselwirkung mit SHP2-Tyrosin-Phosphatase (kodiert durch das PTPN11
Onkogen), CRK, CRKL und CSK und induziert Zell-Streuung, Dissoziation und Mortalität verbunden zur Entwicklung von Krebs [8], [12] -[15]. Zusätzlich können nicht-phosphorylierten CagA Wechselwirkung mit c-MET und GRB2 die einschließlich onkogene Reaktion fördert die Zellproliferation und morphologische Veränderungen wie hummingbird formation [8], [16] - [19]. Diese CagA-Translokation und seine zelluläre Interaktion mit diesen Proteinen kann ein entscheidender Schritt in die Einleitung Magen Karzinogenese sein [9] - [12].

Cellular Veränderung der CagA positive H. pylori
pathogene Mechanismus scheint unterschiedliche Anfälligkeit von Magenkrebs unter H zu erklären. Pylori
infizierten Personen. Da zelluläre Funktionen können durch ihre Host-Gene reguliert werden, genetische Varianten zu den CagA interagieren Moleküle im Zusammenhang kann der Schlüssel für individuelle Magenkrebsanfälligkeit sein. Basierend auf den vermeintlichen genetischen Unterschiede, die Hypothese aufgestellt, dass die Gene CagA-interacting Proteine, die kodieren Risiko für Magenkrebs ändern kann. Außerdem konzentrierten wir uns auf Phytoöstrogene als Effektmodifikator im Transduktionsprozesses CagA-Signal. Studien haben berichtet, dass Phytoöstrogene mit entzündungshemmender, antibakterielle und Antioxidationseigenschaften zu hemmen H. pylori
Aktivität und Magenkrebs Zellwachstum und Proliferation [20] - [22]. Vor allem, Genistein, ein von Phytoöstrogenen und Phosphotyrosin-Kinase-Hemmer, wird berichtet, ein wirksamer Blocker für CagA-Phosphorylierung zu sein [23].

, um die Hypothesen zu bewerten, eine zweistufige genetische Analyse, die auf Gene konzentriert, die direkt kodieren CagA-bindende Moleküle, SRC
, PTPN11
, CRK
, CRKL
, CSK
, c- MET
und GRB2
, wurde durchgeführt, die enthalten: 1) die Entdeckung Phase, die abgeschirmt und Einzel-Nukleotid-Polymorphismen (SNPs) mit einer signifikanten genetische Assoziation auf Magenkrebs identifiziert; 2) die Erweiterungsphase, die erneut analysiert die wichtigsten SNPs in der Entdeckungsphase. Zusätzlich kann in einer Unteranalyse werteten wir die Gen-Umwelt-Interaktion, um zu bestimmen, ob Phytoöstrogen Ebenen, um die Verbindung zwischen Gen-Polymorphismen zu ändern, die direkt CagA-bindende Moleküle und Risiko von Magenkrebs kodieren.

Methoden

Ethik Statement

die Studienprotokolle wurden von der Institutional Review Board von Seoul National University Hospital (H-0110-084-002 für die KMCC Studie und C-0910-049-297 zugelassen für die aktuelle eingebettete Fall -Kontrolle-Studie) und vom Institutional Review Board der Hanyang University Hospital (2003-4). Darüber hinaus unterzeichneten alle Teilnehmer eine Einwilligungserklärung vor, die Studien eingeben.

Studienpopulation

Zwei-Phasen-genetischen Assoziationsstudie durchgeführt wurde. Die eingebettete Fall-Kontroll-Studie Bevölkerung wurde von der koreanischen Multi-Zentren-Krebs Cohort (KMCC) rekrutiert. Detaillierte Informationen über die KMCC wird an anderer Stelle beschrieben [24]. Kurz gesagt, wurden die Teilnehmer aus vier städtischen und ländlichen Gebieten (Haman, Chungju, Uljin und Youngil) in Korea gewonnen werden. Informationen zu den einzelnen Eigenschaften einschließlich der allgemeinen Lebensstil und Umweltexposition wurde mit standardisierten Interview-basierte gesammelt Fragebögen. Blut und Spoturinproben wurden ebenfalls gesammelt. Alle Teilnehmer wurden passiv Follow-up durch computerisierte Rekord Verbindungen zum nationalen Krebsregister, die nationalen Sterbeurkunde und die Krankenversicherung Krankenakten. Die passiven Follow-up-Methoden der KMCC haben sehr effizient und vollständig zu sein [25] berichtet.

Im Dezember 2002 wurden insgesamt 136 Fälle von Magenkrebs definiert nach der Internationalen statistischen Klassifikation der Krankheiten und verwandter Gesundheitsprobleme 10. Revision (ICD-10, C16) wurden in der Entdeckungsphase identifiziert. Unter ihnen 84 Fälle Fälle ohne vor der Einstellung diagnostiziert (n = 36) und ohne Blutproben (n = 16) wurden für die Genotypisierung ausgewählt. Vier Krebs-freie Kontrollen (n = 336) wurden zu jedem Magenkrebs Fall von Inzidenzdichte Probenahme abgestimmt auf das Alter (± 5 Jahre), Geschlecht, Wohnviertel, und Einschreibung Jahr. Acht Fälle und 14 Kontrollen wurden aufgrund der schlechten Genotypisierung Leistung ausgeschlossen und somit 76 Fällen und 322 Kontrollen wurden in der Entdeckungsphase enthalten.

In der Verlängerungsphase, 388 Magenkrebs-Fall-Kontroll-Sets ausgewählt wurden wie folgt : (N = 84) und ohne Blutproben 1) 334 am 31. Dezember identifizierten 136 Fälle einschließlich Magen Fällen Krebs, 2002 wurden 31 von der KMCC ermittelt im Dezember 2008 die Fälle in der Entdeckungsphase analysiert ohne (N = 51), 199 Magenkrebs-Fälle wurden 1.01 Uhr zu den Kontrollen abgestimmt nach Alter (± 5 Jahre), Geschlecht und Einschreibung Jahr. 2) 189 neu Magenkrebsfälle bei Chungnam Universitätsklinikum und Hanyang Universität GURI Krankenhaus mit Einwilligungs diagnostiziert wurden von März rekrutierten 2002 bis September 2006. Die Blutproben wurden zum Zeitpunkt der Diagnose oder vor der Magenkrebs-Operation gesammelt. Zusätzlich 189 Community-basierte Kontrollen nach Alter (± 5 Jahre), Geschlecht und Einschreibung Jahr angepasst (2001 bis 2005) wurden zufällig aus der KMCC ausgewählt. Von den 388 Begegnungen Magenkrebs Fall-Kontroll, zwei Fälle und 40 Kontrollen wurden aufgrund der schlechten Genotypisierung und unzureichende Probe entfernt und schließlich 386 Fälle und 348 Kontrollen wurden in der Verlängerungsphase analysiert.

Kandidatengene und SNP-Auswahl

In der CagA-Signaltransduktionsweg, CagA bindet direkt an sieben Proteine, die an aufeinanderfolgende Prozesse führen. Host-Gene, welche die sieben Proteine ​​kodieren, wurden wie folgt gewählt: v-Crk-Sarkom-Virus CT10 Onkogen Homolog ( CRK
); v-Crk-Sarkom-Virus CT10 Onkogen Homolog (aviäre) -like ( CRKL
); c-Src Tyrosinkinase ( CSK
); Wachstumsfaktor-Rezeptor-gebundenes Protein 2 ( GRB2
); Met-Proto-Onkogen ( c-MET
); nuclear factor von aktivierten T-Zellen, Protein-Tyrosin-Phosphatase, Nicht-Rezeptor-Typ 11 ( PTPN11
) -Codierung SHP2-Tyrosin-Phosphatase und v-Src Sarkom (Schmidt-Ruppin A-2) virales Onkogen Homolog ( . SRC
)

Candidate SNPs wurden nach den drei Kriterien ausgewählt: berichtet SNPs 1) in früheren Studien eine mögliche funktionelle Relevanz für Krebs zu haben; 2) kleinere Allelfrequenz (MAF) > 0,05 in der asiatischen Bevölkerung in öffentlichen Datenbanken wie SNP500Cancer oder dem internationalen HapMap-Projekt mit dbSNP IDs (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp); und gleichzeitig 3) MAF > 0,05 in der japanischen (JET) im internationalen HapMap-Projekt. Schließlich 137 SNPs mit einem Design-Score = 1,1 und r ^{2 > 0,8 genotypisiert wurden die signifikanten SNPs für Magenkrebsrisiko zu screenen. 108 SNPs im Intron-Bereich angeordnet ist; 24 SNPs in der Promotor-Region (flankierende Region oder UTR); fünf SNPs sind in der kodierenden Region.}

Genotyping

In der Ermittlungsphase, 137 SNPs in sieben Kandidatengene kodieren, CagA interagierende Proteine ​​genotypisiert. Nach Konzentration der genomischen DNA für alle Probanden mit einem Spektrophotometer (ND-ND-1000 Nanodrop Technologies) gemessen wird, wurde unter Verwendung Genotypisierung Golden ™ Assay (Illumina®, San Diego, CA, USA) durchgeführt. Zur Qualitätskontrolle und Bewertung der intraindividuelle Konkordanzrate, 52 Doppelproben wurden zufällig in der Genotypisierung Platte verteilt gewährleisten. Konkordanzraten für alle Assays wurden mehr als 99%. Von den 137 SNPs wurden 21 SNPs wegen des Ausfalls der Genotypisierung (4 SNPs), SNP Anrufrate <fiel aus; 90% (7 SNPs), HWE < 0,0001 (1 SNPs) und MAF ≤0.05 (9 SNPs). Acht Fälle und 14 Kontrollen wurden auch durch Genotypisierung Anrufrate <ausgeschlossen; 90%. Schließlich 116 SNPs in sieben Gene (Genotypisierung Rate von 99,6%) in 76 Fällen und 322 Kontrollen wurden analysiert

In der Verlängerungsphase, fünf SNPs mit einem rohen p
Wert <. 0,02, Tag SNPs oder höhere Design-Scores (rs6122566 und rs6124914 in SRC
; rs41739 und rs41737 in c-MET
; rs7208768 in CRK
) in der Entdeckung, Analyse identifiziert mit dem Illumina Veracode Goldengate-Assay mit BeadXpress gemäß dem Protokoll des Herstellers (Illumina®, USA) wurden genotypisiert [26]. Um die Zuverlässigkeit der Genotypisierungsmethoden in den beiden Phasen zu gewährleisten, wurden 188 Proben zweimal durch jede Methode genotypisiert. Die Konkordanzrate war > 98,4%. Zwei Fälle und 40 Kontrollen mit unzureichender DNA (n = 15) oder Genotypisierung Anrufrate < 90% (n = 27) wurden ausgeschlossen. Schließlich fünf SNPs in drei Genen (Genotypisierung Rate von 99,6%) wurden in 386 Fällen und 348 Kontrollen analysiert.

H. pylori
Infektion und CagA Seropositivität

H. pylori
Infektion und CagA Seropositivität wurden unter Verwendung von Immunoblotassay, Helico Blot 2.1 ™ (MP Biomedicals Asia Pacific, Singapur) bewertet. Helico Blot 2.1 ™ Kits wurden berichtet hohe Sensitivität und Spezifität zu haben (für die Empfindlichkeit, 99% identisch in beiden; Spezifität, 98% und 90% betragen). [27]

Measurements of Phytoestrogen Biomarkern

die Plasmakonzentrationen von vier Phytoöstrogen Biomarkern, die 1 waren) Isoflavone: Genistein, Daidzein und Equol (Daidzein Metaboliten) und 2) Lignan: enterolactone gemessen wurden unter Verwendung der zeitaufgelösten Fluorimmunoassay Kits (Labmaster, Finnland). Nach freien Phytoöstrogen Biomarker wurden aus 200 &mgr; l Plasmaprobe extrahiert, die VICTOR3 ™ 1420 Multilabel-Counter gemessen zeitaufgelöste Fluoreszenz (Perkin-Elmer). Detaillierte Messmethoden für Phytoöstrogen Biomarker sind an anderer Stelle [28] beschrieben. (≫ 200 &mgr; l) der gesamten Studienpopulation, die Plasmakonzentrationen der vier Biomarker wurden in 406 Fällen und 417 Kontrollen mit ausreichend Plasmavolumen gemessen.

Die statistische Analyse

die grundlegenden Eigenschaften zu vergleichen zwischen Magenkrebs Fällen und Kontrollen, die Chi-Quadrat-Test and Student t-
Test wurden durchgeführt. P
-Werten für Differenz im Verhältnis zum Geschlecht, Alter, H. pylori
Infektion, CagA und VacA seropositiv, Rauchen, Alkohol trinken, und Gastritis Geschichte zwischen Fällen und Kontrollen wurden bestimmt.

Hardy-Weinberg-Gleichgewicht (HWE) in der Kontrollgruppe ausgewertet wurde mit der Chi- Quadrat-Test oder Fisher-Test mit einem Cut-off von HWE < 0,0001. In der Ermittlungsphase, globale Mindest p
-Werten ( p
< 0,05) in der Likelihood Ratio Test (LRT) mit 1 Freiheitsgrad (df) in der additiven Modell und LRT mit 2 df im genotypischen Modell signifikante SNPs auszuwählen wurden berechnet. Unter Verwendung von drei genetischen Modellen, additive, rezessiv und dominant Modellen wurde die Assoziation zwischen den ausgewählten SNPs und Magenkrebsrisiko analysiert. Permutierten p
-Werten wurden von 100.000 Permutationstests in der einzigen SNP-Analyse geschätzt. Um falsche Assoziationen zu falsch-positiven Ergebnissen zu vermeiden, die korrigierte permutiert p
-Werten über den Zustand von mehreren SNPs und der False Discovery Rate (FDR) unter Verwendung eines Benjamini-Hochberg-Methode berechnet wurden [29]. Magenkrebsrisiko wurde als Odds Ratios geschätzt (RUP) und 95% Konfidenzintervall (CI) mit unbedingten logistischen Regressionsmodells für Risikofaktoren Anpassung in diesem Alter waren, Raucherstatus (je vs.
Nie), H. pylori
Infektion (positive vs.
negativ) und CagA Seropositivität (positive vs.
negativ). Zusätzlich wurde Haplotypenanalyse für Gene durchgeführt signifikant assoziierten SNPs von einem einzelnen SNP-Analyse unter Verwendung von Haploview 4.1-Software (www.broad.mit.edu/mpg/haploview/).

In der Verlängerungsphase enthält, die bedeutendste SNPs in der Entdeckungsphase identifiziert wurden neu bewertet. Basierend auf dem Zusatzstoff oder rezessiv Modelle wurde Magenkrebsrisiko als OPs und 95% CIs geschätzt für die gleichen Kovariaten mit unbedingten logistischen Regressionsmodells oben erwähnt eingestellt wird. Um die Ergebnisse aus der Entdeckung, zusammenfassen und den Verlängerungsphasen pooled- und Meta-Analyse wurden durchgeführt. Mit dem festen Wirkungs-Modell, zusammengefasst OPs und 95% CIs wurden berechnet. Auch Heterogenität in den Studien wurde von den Cochran Q Statistiken ausgewertet [30].

Unter Verwendung der Varianzanalyse und Kovarianz (ANCOVA) mit dem Alter, Status Rauchen (je vs.
Nie) H. pylori
Infektion (positive vs.
negativ) und CagA Seropositivität (positive vs.
negativ) als mögliche Risikofaktoren für Magenkrebs, die Mittel der Phytoöstrogen Biomarker Ebenen zwischen den Fällen und Kontrollen verglichen. Geschichtete Analyse von hohen und niedrigen Niveaus von Phytoöstrogenen Biomarkern (Genistein, Daidzein, Equol und enterolactone), wo die Cutoff-Ebenen durch die Spline-Analyse bestimmt wurden, wurde unter Verwendung von unbedingten logistischen Regressionsmodellen durchgeführt. Wechselwirkungen zwischen den wichtigsten SNPs und Phytoöstrogen Biomarker wurden auch als RUP berechnet und 95% CIs adjustiert für Alter, Status Rauchen (je vs.
Nie), H. pylori
Infektion (positive vs.
negativ) und CagA Seropositivität (positive vs.
negativ).

Alle statistischen Analysen wurden durchgeführt unter Verwendung von SAS-Software-Version 9.2 ( SAS Institute, Cary, North Carolina), und PLINK Software Version 1.07 (http://pngu.mgh.harvard.edu/purcell/plink) [31]. Meta-Analysen wurden durchgeführt, mit Stata Version 10 (Stata, College Station, TX).

Ergebnisse |

Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen den Fällen und Kontrollen nach Geschlecht, H. pylori
Infektion, CagA /VacA seropositiv, Rauchen /Trinken Status und Magengeschwür Geschichte in der Entdeckung und Erweiterung Phasen (p > 0,05). CagA /VacA Seropositivität und der Anteil der Raucher waren signifikant höher bei Magenkrebsfälle in den gepoolten Daten ( p
= 0,03, p
< 0,01, p
= 0,02, jeweils) (Tabelle S1).

Von den 116 SNPs in den sieben Kandidaten-Gene kodieren Proteine ​​CagA analysiert in der Ermittlungsphase, 22 SNPs in drei Gene in Wechselwirkung tritt, SRC
c-MET
und CRK
, waren signifikant mit Magenkrebs ( p
-LRT < 0,05) assoziiert. SRC
rs6122566 signifikant erhöhtes Risiko für Magenkrebs in den rezessiven Modelle (OR = 4,90 [95% CI 1,19 bis 14,2]). Dreizehn SNPs, die rs41739 waren, rs16945, rs41738, rs6566, rs10435378, rs41737, rs2023748, rs41736, rs41735, rs6951311, rs183642, rs2237717 und rs38859 in c-MET
Gen zeigten eine signifikante Gen-Dosis-Effekt in der linearen Trendtests ( p
< 0,05). CRK
rs7208768 hatte eine marginal signifikant Gen-Dosis-Effekt. 100.000 Permutationstests in der einzigen SNP-Analyse zeigte, SRC
rs6122566, c-MET
rs41739 und CRK
rs7208768 mit den wesentlichsten permutierten p
- Wert in jedem Gen ( p
_{Permutation = 0,00284, p
Permutation = 0,00989, p
Permutation = 0,01392, respectively). Die marginale Bedeutung des korrigierten permutiert p
-Wertes für beobachtet wurde SRC
rs6122566 ( p
= 0,0918), aber alle FDR p
-Werten in allen genetischen Modelle waren nicht signifikant ( p
> 0,2). (Tabelle S2)}

Haplotyp-Blöcke von der LD Plot (Abbildung S1) identifiziert wurden. Der größte Block wurde mit den wichtigsten SNPs einschließlich rs41739, rs6566 gebaut und rs41738, aber der Omnibus p
-Wertes nicht signifikant war ( p
> 0,05). Vier Blöcke definiert durch SRC
und einen Block definiert durch CRK
nicht zeigen statistische Signifikanz in der Omnibus-Test. Die Ergebnisse der Haplotypenanalyse haben keine Informationen vermitteln über einzelne SNP Ergebnisse (Daten nicht gezeigt).

In der Verlängerungsphase, zwei SNPs, rs6122566 und rs6124914, in SRC
Gen und rs7208768 in CRK
blieb deutlich mit einem erhöhten Risiko für Magenkrebs (OR = 4,01 [95% CI: 1,62-9,96]; OR = 1,30 [95% CI: 1,00-1,70]; OR = 1.33, [95% CI: 1,08-1,64], beziehungsweise). Assoziationen zwischen den SNPs in c-MET
Gen (rs41739 und rs41737) und Risiko von Magenkrebs wurden gedämpft. In der kombinierten Analyse, die die Entdeckung und Erweiterung Phasen, die Risikoeinschätzung von enthalten SRC
rs6122566 im rezessiven Modell war signifikant mit Magenkrebs assoziiert sowohl in der gepoolten und Meta-Analysen (OR = 3,96 [95% CI: 2,05-7,65]; OR = 4,59 [95% CI: 2,74-7,70], beziehungsweise). Außerdem SRC
rs6124914, c-MET
rs41739 und CRK
rs7208768 zeigten signifikante Gen-Dosis-Effekte für Magenkrebs in beiden Analysen. Es gab keine Heterogenität in den Analysen (Cochran Q-Test, p
> 0,05). (Tabelle S3)

Unter insgesamt 823 Probanden (406 Fälle und 417 Kontrollen), die gemessen wurden, die Plasmaspiegel der vier Phytoöstrogen Biomarkern, die Gesamtkonzentrationen von Genistein, Daidzein und Enterolacton in Fällen waren signifikant niedriger als die der Kontrollgruppe (Genistein 167,6 nmol /L in Fällen vs. 200,2 nmol /L in Kontrollen
p
= 0,0004; Daidzein 91,4 nmol /L in Fällen vs 131,6 nmol /L bei den Kontrollen
, p
. < 0,0001; enterolactone 51,0 nmol /L in Fälle vs
77,7 nmol /L in der Kontrollgruppe, p
. < 0,0001). Insgesamt Plasmakonzentrationen von Equol, einem Daidzein Metaboliten waren in Fällen niedriger, aber statistisch nicht signifikant (50,3 nmol /L für Fälle vs
62,2 nmol /L für Kontrollen;. p
= 0,0977) . Im Schichtanalyse nach Phytoöstrogen Biomarker, eine signifikante Gen-Umwelt-Interaktion in CRK
beobachtet. Risiko-Allel von CRK
rs7208768 hatte ein deutlich erhöhtes Risiko für Magenkrebs bei niedrigen Phytoöstrogen Ebenen. Insbesondere wurde das A-Allel von rs7208768 mit einem größeren Risiko von Magenkrebs assoziiert bei niedrigen Genistein, Daidzein, Equol und enterolactone und statistisch signifikant (OR = 1,91 [95% CI: 1,44-2,52] bei niedrigen Genistein; OR = 2.09, [95% CI: 1,46-3,01] bei niedrigen Daidzein; OR = 1,87 [95% CI: 1,26-2,78] bei niedrigen equol; OR = 1,77 [95% CI: 1,10-2,85] bei niedrigen enterolactone). Die p
-Wechselwirkung war signifikant ( p
= 0,0001, p
= 0,0013, p
= 0,0147, p
= 0,0404, respectively) (Tabelle S4).

Obwohl zusätzliche geschichtete Analysen auch eine Interaktion zwischen CagA Seropositivität und jedes Gen-Effekt für Magenkrebsrisiko, Wechselwirkungen waren nicht signifikant in jeder der drei Gene zu erkennen durchgeführt wurden, SRC
, c-MET
und CRK
(Daten nicht gezeigt).

Diskussion

CagA-sezerniere H. pylori
Infektion scheint eine wichtige Rolle bei der Magen-Krebsentstehung durch sequentielle CagA-Signaltransduktionsweg zu spielen. CagA bindet zunächst an sieben Proteinkomponenten aberrante zelluläre Reaktionen zu aktivieren, die die Entwicklung von Magenkrebs zu Grunde liegen. Da Funktion des Proteins können durch ihre Wirtsgene reguliert werden, Gene, die CagA wechselwirkende Moleküle codieren können in der Lage sein Risiko für Magenkrebs zu modifizieren. Um diese Hypothese zu bewerten, genotypisierter wir 137 SNPs in sieben Kandidatengene und gezeigt, dass genetische Varianten von SRC
(rs6122566 und rs6124914), c-MET
(rs41739) und CRK
(rs7208768) wurden mit Magenkrebsrisiko signifikant assoziiert. Darüber hinaus wird eine interaktive Wirkung von CRK
genetischen Polymorphismus, rs7208768 und vier Phytoöstrogen Biomarkern, Genistein, Daidzein, Equol und enterolactone auf Risiko von Magenkrebs analysiert.

SRC, ein Nicht-Rezeptor-Protein Tyrosinkinase (TK), erscheinen wesentlich in Magen-Krebsentstehung zu sein. Sobald Magenepithelzellen injiziert, erfährt CagA Tyrosinphosphorylierung durch die SRC-Familie-Kinasen [8], [12], [18]. Die Tyrosinphosphorylierung von CagA ist ein integraler Schritt in die sequentielle zellulären Signalmechanismus zu bestimmen. Da einige CagA Moleküle wie SHP-2 in Wechselwirkung, CRK und CSK sind nur in der Lage mit phosphoryliert CagA reagieren kann SRC wichtiger sein, bei der Beeinflussung des anderen zellulären Funktionen und induzieren Entwicklung von Magenkrebs. Zusätzlich wurde berichtet SRC eine entscheidende Rolle bei der Tumorprogression zu spielen und die Entwicklung von Krebs und Metastasierung [32] vermitteln. Zellaktivität von SRC erscheint durch den Host-Gen und unsere Ergebnisse geändert werden, zeigen an, dass SRC
rs6122566 und rs6124914 können von Risiko im Magen-Karzinogenese sein.
SRC genetischen Variationen, die die Zellkapazität in Magenepithelzellen beeinflussen assoziiert sind mit Magenkrebsrisiko.

Trotz der abgeschwächten Bedeutung in der Verlängerung Analyse, c-MET
die ist gleichbedeutend mit HGFR
(Hepatozyten-Wachstumsfaktor-Rezeptor) eine unabhängige Risiko-Gen für Magenkrebs sein kann. Zahlreiche frühere Studien berichtet, dass c-MET, eines der Rezeptor-TKs, wurde mit verschiedenen menschlichen Karzinomen, einschließlich Magenkrebs [17], zugeordnet invasive Tumorwachstum, Zellinvasion und Mortalität und Amplifikation und /oder Überexpression von c-MET fördert [ ,,,0],33] - [36]. In Bezug auf die c-MET zellulären Mechanismus spielt CagA eine Rolle als Adapterprotein, Gab, Rezeptor-TK-Signalisierung durch einen Cluster von nachgeschalteten Komponenten am aktivierten Rezeptor Steuerung wie Grb2, PLC &ggr; und SHP-2 [37] zu vermitteln, [38]. Durch die funktionell den AKV-Adapter-Protein nachahmen, CagA könnte abnorme Proliferation und Mortalität von Magen epitherialen Zellen [39] zu stimulieren. In der vorliegenden Studie wurde ein Polymorphismus von c-MET
Gen (rs41739) mit dem Risiko von Magenkrebs signifikant assoziiert war und einen möglichen genetischen Faktor anfällig auf Magenkrebs. Im Einklang mit der zellulären Bedeutung und Funktion c-MET
Gen scheint das Risiko für Magen-Krebsentstehung durch CagA Signaltransduktionsweg.

CRK-Adapter-Protein zu modifizieren, die das Spleißen Isoformen, CRK-I ( SH2-SH3) und CRK-II (SH2-SH3-SH3), bindet an die TKS und steuert die Transkription und Zytoskelett-Reorganisation modulieren zelluläre Aktivitäten [40]. Außerdem integriert diese Adaptorprotein verschiedene zelluläre Signale und ihre Dysregulation ist mit dem menschlichen Karzinomen verbunden [41]. Interaktion zwischen CRK und phosphorylierte CagA wurde berichtet, eine biologische Voraussetzung zu sein, die morphologische Veränderung führt, Zellstreuung und Deregulierung der Zell-Zell-Adhäsion in dem Magenepithel [14]. Mehrere Studien haben die Überexpression von CRK angegeben, dass mit verschiedenen Arten von menschlichen Krebsarten, einschließlich Lungen-, Magen- und Darmkrebs [42] zugeordnet ist, [43]. Unsere Ergebnisse unterstützen auch das genetische Potenzial von CRK
rs7208768 auf die Entwicklung von Magenkrebs und sowohl genetische und zelluläre Größenordnung von CRK.

Noch interessanter ist, signifikante Wechselwirkungen zwischen den CRK
genetischen Polymorphismus und vier Phytoöstrogen Biomarkern, Genistein, Daidzein, Equol und enterolactone, Magenkrebs Risiko modifiziert. Studien zeigten, schützende Wirkung von Phytoöstrogenen auf Magenkrebs [20], [28] und insbesondere Genistein die ERK Signalübertragungskaskade gehemmt induziert durch H. pylori
Infektion eine Rolle als ein Tyrosinkinase-Inhibitor spielt [44]. In Anbetracht CRK der Haupt Upstream-Molekül von ERK-Aktivierung ist, die riskante genetische Varianten von CRK
die ERK-Signal aktivieren kann durch Phytoöstrogene blockiert werden, und die Entwicklung von Magenkrebs vermitteln.

SRC, c-MET und CRK sind auch in der Protein TKs beteiligt, die eine vielfältige Genfamilie ist, die eine Reihe von nachgelagerten zellulären Prozessen zellulären Signaltransduktionsweg steuert die Vermittlung und spielt eine bedeutende Rolle in der Entwicklung von verschiedenen klinischen Erkrankungen [45], [46]. TKs sind auch als Onkogene involviert in menschlichen Tumoren bekannt. SRC gehört zu einer nicht-Rezeptor-TK und c-MET ist ein Rezeptor TK, während ein Adapter CRK-Protein ist, die TK-phosphorylierte Proteine ​​bindet und verstärkt die Hauptproteine ​​in dem Signaltransduktionsweg [41]. Diese drei Moleküle codiert von SRC
, c-MET
und CRK
Gene können unabhängig Zelldifferenzierung, Adhäsion, Tod und morphologische Veränderungen durch transmiting Zelle Signale induzieren im Zusammenhang mit ihre TK-Aktivitäten unabhängig von Interaktion mit CagA. Futhermore, Gene zu TK Aktion im Zusammenhang scheinen eine entscheidende Rolle als anfällig Faktor für Magenkrebs unter Berücksichtigung Genistein zu spielen, die ein Tyrosinkinase-Inhibitor ist, kann Magenkrebsrisiko reduzieren [28]. Dies weist darauf hin, dass genetische Empfänglichkeit von SRC
, c-MET
und CRK
im Magen Karzinogenese sollte als unabhängige Risikofaktoren behandelt werden, die die zelluläre Signaltransduktion in TK ändern abhängige Sitten, weil nicht-infizierten Personen mit CagA sezer H. Pylori
kann für Magenkrebs gefährdet sein, je nach individuellen genetischen Varianten der drei Gene.

Obwohl PTPN11
, CRKL
, CSK
und GRB2
keine signifikante Assoziation mit Magenkrebs in der vorliegenden Studie, deren genetische Effekte übersehen werden sollte nicht zeigen. Auf zellulärer Ebene werden diese Moleküle deutlich anomale Effekte im Zusammenhang, die Magen-Krebsentstehung zu Grunde liegen [12]. Als einer der humanen Protoonkogene, PTPN11
mit SHP2 zytoplasmatische Tyrosin-Phosphatase codiert und können aberrante Hyperaktivierung der ERK Signal [47] zu induzieren. Eine Studie hat auch berichtet, dass ein PTPN11
Genvariante das Risiko für Magen-Atrophie und Krebs unter CagA positive H erhöht. pylori
infizierten Menschen [48]. In der CagA-Signaltransduktionsweg, arbeitet CRKL ganz ähnlich wie CRK; CSK vereitelt eine Aktivität von SRC-Familie-Kinase und CagA-SHP2 Signalisierung; und GRB2 fungiert als Auslöser der RAS /MEK /ERK-Weg [14], [18], [49] zu aktivieren. Weitere Studien mit einer größeren Anzahl von Magenkrebsfälle und breitere Abdeckung von genetischen Polymorphismen in diesen Genen sind gerechtfertigt.

Magen-Karzinogenese induziert durch CagA positive H. Pylori
Infektion kann von unserer Studienergebnisse und Überprüfung der zellulären Mechanismen, [16], [18], [47] (Abbildung S2) infered werden. Sobald CagA in Magen ephithelial Zellen injiziert wird, initiiert SRC CagA-Phosphorylierung, die mit CRK Adapterprotein und SHP2 in Wechselwirkung tritt die ERK-Aktivierung zu fördern. ein. ein. b. c. d. e. f. G.

• PLoS ONE: Identifizierung von Serum MicroRNAs als Novel nicht-invasive Biomarker für die Früherkennung von Magenkrebs
• PLoS ONE: Aktivieren Transcription Factor 4 Verleiht ein Multidrug-Resistenz Phänotyps Magenkrebszellen durch Trans von SIRT1 Expression