PLOS ONE: Análisis de MET expresión mRNA en el cáncer gástrico utilizando ARN de hibridación in situ Ensayo: Su implicación clínica y la comparación con inmunohistoquímica y la plata de la hibridación in situ

Extracto

Hemos investigado MET
estado de la expresión de ARNm utilizando ARN técnica de hibridación in situ (ISH) en las lesiones primarios y metastásicos de 535 casos de carcinoma gástrico (CG) resecado quirúrgicamente. Se compararon los resultados con los de la inmunohistoquímica y la plata de hibridación in situ, y examinó la asociación con características clínico y el pronóstico. Entre 535 GC primaria, 391 (73,1%) fueron anotados 0, 87 (16,3%) fueron anotados 1, 38 (7.1%) fueron anotados 2, 12 (2.2%) fueron anotados 3 y 7 (1,3%) fueron anotados 4 por ARN ISH. Alto MET
expresión de ARNm (puntaje ≥3) se asoció con metástasis en los ganglios linfáticos ( P = .014
), metástasis a distancia ( P
= 0,001), y superior etapa TNM ( P Hotel < 0,001). MET
expresión de ARNm se correlacionó con la expresión de la proteína (r = 0,398; P Hotel < 0,001) y el número de copias del gen (r = 0,345; P Hotel <. 001). Los pacientes que presentan un alto MET
ARNm en las lesiones metastásicas o primarias tuvieron una supervivencia general más corta que los que muestran bajos MET
ARNm (tumores primarios, P = .002
; ganglios linfáticos metastásicos, P Hotel < 0,001). Los pacientes que muestran la conversión positiva de MET
estado de ARNm en los ganglios linfáticos metastásicos tuvieron una supervivencia general más corta que aquellos con ninguna conversión ( P = .011
). El análisis multivariado demostró que la alta MET
la expresión de ARNm en los ganglios linfáticos metastásicos fue un factor pronóstico independiente de la supervivencia global ( P = .007
). Por lo tanto, este estudio sugiere que MET
expresión del ARNm de la evaluación de ARN ISH podría ser útil como un marcador potencial para identificar MET
GC-oncogén adicto

Visto:. Choi J , de Lee, Kim MA, Jang BG, SA Lee, Kim WH (2014) Análisis de MET
expresión mRNA en el cáncer gástrico utilizando ARN de hibridación in situ de ensayo: Su implicación clínica y la comparación con la inmunohistoquímica y plata In Situ Hibridación. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10.1371 /journal.pone.0111658

Editor: Paquete de Svetlana, CCR, Instituto Nacional del Cáncer, NIH, Estados Unidos de América

Recibido: 11 de marzo de 2014; Aceptado: 6 Octubre 2014; Publicado: 3 Noviembre 2014

Derechos de Autor © 2014 Choi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Investigación del programa de Corea (NRF) A3 Foresight (http://www.nrf.re.kr). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

Durante la última década, la tirosina quinasa del receptor (RTK) itinerarios han demostrado ser dianas terapéuticas atractivas para la terapia contra el cáncer [1], y la vía MET es uno de estos objetivos prometedores. MET
es un proto-oncogén se encuentra en la 7q31 locus y codifica una RTK para el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) [2], [3]. La regulación estricta de la vía de HGF /MET que se observa en el desarrollo y la regeneración se pierde en el cáncer, y la desregulación se produce a través de múltiples mecanismos de [1]. la activación de Met aberrante juega un papel importante en la supervivencia de células de cáncer, el crecimiento, la angiogénesis y la metástasis en varios tipos de cáncer, incluyendo de pulmón, mama, riñón, y tumores malignos del tracto gastrointestinal [4]. Sin embargo, aunque estratificación de los pacientes de acuerdo con la expresión o actividad de MET es importante para el éxito terapéutico, no se han establecido los métodos para evaluar el nivel de expresión o actividad de MET [4].

Para el carcinoma gástrico (CG), aberrante la activación de Met se ha pensado que estar relacionado con un efecto de dosis génica [5], y MET
amplificación de genes (GA) o sobreexpresión de la proteína se ha asociado con las características del tumor y /o agresivos peor resultado clínico [6] - [14]. Por otra parte, MET
GC -amplified o -overexpressed mostraron respuesta al tratamiento con varios inhibidores de la vía de señalización de HGF /MET en los estudios preclínicos [15] y los ensayos clínicos de fase I [12], [16]. Por lo tanto, la inhibición MET tiene el potencial como otra estrategia terapéutica éxito siguiente factor de crecimiento epidérmico humano receptor 2 (HER2) terapia -targeted en GC avanzada. Sin embargo, estudios previos han utilizado varios métodos para identificar GC MET-positivas y han demostrado discrepancia en la prevalencia de MET sobreexpresión o amplificación: MET sobreexpresión varió 18% a 73,7% en los estudios que utilizan técnicas de inmunohistoquímica (IHC) [7] - [9], [13], [14], [17], MET
número de copias de genes (GCN) de ganancia varió del 10% al 21,2% en los estudios usando la reacción cuantitativa en tiempo real en cadena de polimerasa (qPCR) [10], [ ,,,0],11], y MET
GA varió del 2% al 3,9% en los estudios utilizando hibridación in situ fluorescente (FISH) [12], [18] o la plata de hibridación in situ (SISH) [13]. De estos métodos, IHC se utiliza ampliamente en la práctica clínica y el método más probable de cribado para la detección de GC MET-positivo. Sin embargo, una exploración más profunda aún es necesario encontrar un biomarcador predictivo o metodología de ensayo para la terapia de inhibición del MET.

En este estudio, hemos realizado un ARN hibridación in situ (ISH) de ensayo usando sondas de oligonucleótidos de ADN emparejados y preamplificador-amplificador sondas -label para la visualización [19]. Este método utiliza tejidos fijados con formalina, incluidos en parafina (FFPE) y permite la visualización de una sola molécula bajo un microscopio de campo brillante. En nuestro estudio anterior, hemos podido comprobar que HER2
la expresión del ARNm evaluadas por ARN ISH se correlacionó positivamente con la sobreexpresión de la proteína GA y evaluadas por IHC y FISH en 211 casos de CG [20]. Además, puso de manifiesto la correlación entre el MET
GCN y la expresión de la proteína en un estudio anterior [13]. A continuación, se evaluó MET
expresión del ARNm utilizando el método de ARN ISH, y se compararon los resultados con los de IHC y SISH en una gran serie de GC. Además, los parámetros clínico-patológicas y los resultados clínicos de los pacientes de acuerdo con GC se evaluaron MET
estado de la expresión de ARNm.

Materiales y Métodos

Pacientes y muestras de tejidos

Se recogieron muestras de tejido de archivo de los pacientes con cáncer gástrico que fueron sometidos a una gastrectomía de forma consecutiva en el hospital de la Universidad Nacional de Seúl, Seúl, Corea, desde enero de 2004 hasta diciembre de 2005. por último, 535 muestras de GC primaria y 199 muestras de ganglio linfático regional síncrono metastásico (LN) a partir de 535 pacientes estaban disponibles para este estudio. Las características clínico-patológicas de los pacientes fueron examinados mediante la revisión de historias clínicas y registros patológicos (Tabla 1). el estadio TNM se clasificó de acuerdo con el sistema de la American Joint Committee on Cancer Staging Manual, 7 ^{ª edición. Los resultados clínicos fueron seguidos desde la fecha de la cirugía hasta la muerte o
60 meses.}

Todas las muestras de tejido fueron fijadas en formalina al 10% durante 24-48 horas y luego se incluyeron en parafina. Se tomaron los tejidos núcleo (2 mm de diámetro) utilizando un aparato de trépano (Superbiochips laboratorios, Seúl, Corea). Para los GCs primarios, se seleccionó el frente de invasión de cada tumor primario. LN metastásicos fueron sometidos a la matriz de tejido, pero se excluyeron los casos con micrometástasis. Se construyeron en total 22 bloques de microarrays de tejidos que contenían hasta 60 núcleos.

declaración ética

Todas las muestras humanas fueron obtenidas durante la cirugía terapéutica. Los participantes no proporcionan el consentimiento por escrito para participar en este estudio. El estudio retrospectivo se realizó con las muestras en los estantes después del diagnóstico patológico, y todas las muestras se anónima antes del estudio. Nuestro IRB (Hospital de la Universidad Nacional de Seúl) aprobó este estudio retrospectivo bajo la condición de la anonimización (Referencia: H-1006-035-320).

ARN ISH

Para la detección in situ de MET
ARNm, el kit de ensayo 2.0 RNAscope FFPE (Diagnóstico avanzado de células, Hayward, CA, EE.UU.) se utilizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En pocas palabras, de 2 a secciones de tejido de espesor FFPE 3-micras fueron desparafinados, calentada, tratados por la proteasa, y se hibridaron con la sonda a 40 ° C durante 2 horas (la secuencia de referencia, NM_001127500; sonda de la región, 1236-2257). Después de lavar y de amplificación, 3, se añadió 3'-diaminobencidina para la detección de ARN diana. Los núcleos se counterstained con hematoxilina. La tinción positiva se indican con puntos puntiformes de color marrón en el núcleo y /o citoplasma. MET
los niveles de expresión de ARNm se clasificaron en 5 grados de acuerdo con la directriz de puntuación del fabricante: puntuación 0, sin manchas o < 1 punto por celda; marcador 1, 1-3 puntos por célula (visibles a 20-40 ×); marcará 2, 4-10 puntos por célula y ningún o muy pocos grupos de puntos (visibles a 20-40 ×); puntuación 3, > 10 puntos por célula y < 10% de células positivas tienen grupos de puntos (visibles en 20 ×); puntuación 4, > 10 puntos por célula y > 10% de células positivas tienen grupos de puntos (visibles en 20 ×) (Figura 1). Las sondas para UBC gratis (ubiquitina C) y dapB gratis (un gen bacteriano) se utilizaron como control positivo y negativo, respectivamente. Las muestras se consideran adecuados cuando las señales de UBC
mRNA fueron fácilmente visibles bajo un lente objetivo y el dapB
señal no era visible.

IHC y SISH
<10x p> la tinción inmunohistoquímica para MET se realizó con anti-MET totales (SP44) de conejo anticuerpos primarios monoclonales (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Un immunostainer automático (XT de referencia, Ventana Medical Systems) se usó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. inmunotinción MET fue marcado con las directrices de puntuación HercepTest para GC (Dako, Glostrup, Dinamarca): puntuación 0, no tinción de membrana o tinción de membrana en < 10% de las células tumorales; una puntuación de 1, tinción débil /apenas perceptible parcial de la membrana en > 10% de las células tumorales; puntuación 2, débil para tinción moderada de toda la membrana en > 10% de las células tumorales; puntuación 3, fuerte tinción de toda la membrana en >. el 10% de las células tumorales (Figura 2) guía

SISH ensayo de dos colores se realizó con sondas de ADN INFORM MET e informar a la sonda del cromosoma 7 (Ventana Medical Systems) en un XT BenchMark Ventana siguiendo los protocolos del fabricante. Las señales se enumeran en 40 núcleos tumorales por núcleo, y MET
estado del gen se clasificó en 6 grupos mediante la Universidad de Colorado Cancer Center criterios para el gen del receptor del factor de crecimiento epidérmico [21] (Figura 2).

el análisis estadístico

el χ ^{2 o la prueba exacta de Fisher se utilizó para probar la asociación entre el estado y los factores clínico-MET. de Student t-test
se utilizó para comparar las medias de las variables continuas. Se utilizó la prueba de correlación de Spearman para evaluar la relación entre los resultados de ARN ISH y IHC o resultados sish. El método de Kaplan-Meier se utilizó para estimar la supervivencia global (OS), y las diferencias entre los grupos del sistema operativo con diferente estado MET se compararon mediante la prueba de log-rank. análisis de supervivencia multivariante se realizó mediante el cociente de riesgos proporcionales de Cox. Los datos se analizaron con el programa SPSS versión 20.0 (SPSS, Chicago, IL, EE.UU.), y los resultados se consideraron significativos cuando P
. < 0,05}

Resultados

1. MET
estado de ARNm evaluada por ARN ISH

de 535 tumores primarios, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) y 7 ( 1,3%) mostró la puntuación de RNA ISH 0, 1, 2, 3, y 4, respectivamente. Cuando se compararon los resultados de ARN ISH con los datos clínico-patológicas incluyendo la supervivencia, y se analizaron los resultados de ARN ISH con los datos de IHC y sish, los grupos de puntuación de 3 y 4 mostraron características distintas. Por lo tanto, hemos mirado la puntuación de 3 y 4 como de alto MET
grupo de ARNm, y el total de 19 casos (3,5%) pertenecían para resaltar MET
ARNm.

Alta - MET
ARNm se asoció con la edad avanzada ( P = .002
), más grande el tamaño del tumor ( P = .006
), metástasis LN ( P
= .014), invasión linfática ( P Hotel < 0,001), mayor número de ganglios linfáticos metastásicos ( P Hotel < 0,001), metástasis a distancia ( P
= 0,001), y superior etapa TNM ( P Hotel < 0,001) en comparación con los bajos MET
ARNm (Tabla 2). Sin embargo, de alto MET
ARNm no mostraron ninguna asociación con el sexo, localización del tumor, clasificación de Lauren, y la profundidad de la invasión (Tabla 2).

De los 199 LN metástasis sincrónicas, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) y 9 (4,5%) mostraron la puntuación de RNA ISH 0, 1, 2, 3, y 4, respectivamente. Por lo tanto, 13 casos (6,5%) eran de alto MET
ARNm. Entre 199 pares de lesiones primarios y metastásicos, 186 (93,5%) mostraron concordantes MET
estado de ARNm y 13 (6,5%) no lo hicieron. De estos 13 casos discordantes, la conversión negativa se encontró en el 50% (7/14) de alto MET
tumores primarios de ARNm, y la conversión positiva se encontró en 3,2% (6/185) de baja MET
tumores primarios de ARNm (Tabla 3).

2. proteína MET y el estado de GCN evaluado por IHC y sish

El uso de IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) y 15 (2,8%) tumores primarios se anotó 0, 1, 2 y 3, respectivamente. IHC puntuación de 3 mostraron características clínico patológicas, y este grupo sobreexpresión MET se asoció significativamente con la edad ( P = .005
), mayor tamaño del tumor ( P = .009
), la profundidad de la invasión ( P
= .05), LN metástasis ( P = .018
), invasión linfática ( P = .026
), aumento del número de ganglios linfáticos metastásicos ( P Hotel < 0,001), metástasis a distancia ( P = .007
), y superior etapa TNM ( P
= 0,001). Sin embargo, la sobreexpresión MET no mostró ninguna asociación con el sexo, localización del tumor, y la clasificación de Lauren (Tabla S1).

De los 199 LN síncronos metastásicos, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) y 15 (7,5%) mostraron la puntuación de IHC 0, 1, 2 y 3, respectivamente. Entre 199 pares de lesiones primarios y metastásicos, 187 (94,0%) mostraron el estado de la proteína MET concordantes y 12 (6,0%) no lo hicieron. De estos 12 casos discordantes, la conversión negativa se encontró en el 36,4% (4/11) de los tumores primarios con sobreexpresión MET, y la conversión positiva se encontró en 4,3% (8/188) de los tumores primarios sin sobreexpresión MET.

Uso de SISH, MET
GA se observó en el 2,6% (14/535) de los tumores primarios. MET
GA mostró asociación significativa con el mayor tamaño del tumor ( P = .038
), invasión linfática ( P = .009
), aumento del número de ganglios linfáticos metastásicos ( P Hotel < 0,001), metástasis a distancia ( P = .005
), y superior etapa TNM ( P = .002
). Sin embargo, MET
GA no mostraron ninguna asociación con el sexo, localización del tumor, clasificación de Lauren, la profundidad de la invasión y la metástasis LN (Tabla S2).

3. Correlación de la condición de MET evaluadas por ARN ISH, IHC y SISH

La correlación entre el MET
ARNm y el estado de la proteína evaluada por ARN ISH y IHC se presenta en la Tabla 4. En 535 tumores primarios, hay se observó una correlación positiva entre la MET
la expresión del ARNm y la proteína (r = 0,398, P Hotel < 0,001). Todos los 7 casos con ARN ISH puntuación de 4 MET mostraron sobreexpresión de la proteína. Entre 12 casos con ARN ISH puntuación de 3, 5 casos (41,7%) mostraron puntuación de IHC 3. Los casos con ARN ISH marcador 2 exhibieron resultados de IHC variable. Los casos con ARN ISH puntuación de 0 ó 1 no mostraron sobreexpresión de la proteína MET a excepción de 1 caso. Entre 10 casos que muestran discrepancia (es decir, positivo en el ARN ISH y negativo en IHC o viceversa), 8 mostraron puntuación de IHC 2 o ARN puntuación ISH 2. En los LN 199 metastásicos, hubo una buena correlación positiva entre la MET
ARNm y la expresión de la proteína (r = 0,462, P Hotel < 0,001). (Tabla S3)

Además, hubo una correlación positiva entre la MET
ARNm expresión y MET
GCN (r = 0,345; P Hotel < 0,001) (Tabla 4). Entre los 7 casos con ARN ISH puntuación de 4, 6 (85,7%) mostraron MET
GA y sólo un caso mostró HP (14,3%). Los 12 casos con ARN ISH puntuación de 3 mostraron GA (50%) o polysomy (50%) por SISH. Los casos con ARN ISH marcador 2 mostraron diferentes patrones sish incluyendo GA (5,3%). Ninguno de los casos con ARN ISH puntuación de 0 ó 1 mostró GA.

La Tabla 5 resume los resultados de ARN ISH, IHC y SISH de GC primaria. Entre los 535 casos, 513 casos (95,9%) fueron negativos por tanto ARN ISH y IHC, y sólo 22 casos (4,1%) mostraron resultados positivos, ya sea ARN o ISH IHC. Estos 22 casos mostraron MET
GA (54,5%) o polysomy (45,5%) por SISH, y disomía o trisomía nunca fue observado. En términos de SISH, entre los 14 casos que muestran GA, 11 casos (78,6%) mostraron alta expresión de ambos ARNm y proteínas. Entre los 58 casos que muestran HP, sin embargo, sólo 7 casos (12,1%) mostraron alta expresión de cualquiera de mRNA o proteína. Entre los 111 casos que muestran LP, sólo 3 casos (2,7%) mostraron alta expresión de ARNm. Los 352 casos que muestran la disomía o trisomía mostraron resultados negativos por tanto ARN ISH y IHC.

4. implicaciones pronósticas de estatus de TEM en las lesiones primarios y metastásicos

Alto MET
ARNm en tumores primarios o metastásicos LN se asoció significativamente con un mal sistema operativo (tumores primarios, P =
0,002, Figura 3A; LN metastásicos, P Hotel < 0,001, Figura 3D). En los tumores primarios con bajo MET
ARNm, los pacientes con conversión positivo mostraron una SG peor que aquellos sin conversión ( P = .011
, Figura 3F). En los tumores primarios con alto MET
ARNm, los pacientes con la conversión negativa mostró un mejor sistema operativo que aquellos sin conversión, pero no hubo significación estadística ( P = .137
, Figura 3F )

MET sobreexpresión en tumores primarios o metastásicos LN se asoció significativamente con un mal OS (tumores primarios, P
= 0,001, Figura 3B;. LN metastásicos, P
= 0,024, Figura 3E). En los tumores primarios sin sobreexpresión MET, la conversión positivo mostró una tendencia hacia la predicción de mala sistema operativo, pero no hubo significación estadística ( P = .393
). En los tumores primarios con sobreexpresión MET, la conversión negativo mostró una tendencia a la mejor SG que ninguna conversión, pero no alcanzó significación estadística ( P = .132
). Además, MET
GA en tumores primarios también se asoció significativamente con un mal sistema operativo ( P = .005
, Figura 3C).

En el análisis multivariado, de alto MET
mRNA en los LN metastásicos fue un factor pronóstico negativo para el sistema operativo independiente, después de ajustar por edad (< 60 y vs. ≥60 y), clasificación de Lauren (tipo intestinal vs. difusa o de tipo mixto), y TNM etapa (I-II vs. III-IV). El índice de riesgo de 2,27 ( P = .007
) (Tabla 6). Sin embargo, MET sobreexpresión en los LN metastásicos no era un factor pronóstico estadísticamente significativo en el análisis multivariante, aunque el índice de riesgo de 1,76 ( P = .067
). Además, MET
GA, de alto MET
ARNm o sobreexpresión de la proteína en el tumor primario no fue un factor pronóstico estadísticamente significativo en el análisis multivariante (datos no mostrados).

discusión

en el presente estudio, hemos demostrado que la alta MET
expresión de ARNm se asoció significativamente con las características clínico-patológicas adversas y mal pronóstico en una gran serie de pacientes con cáncer gástrico, utilizando el método de ARN ISH. Además, los resultados RNA ISH se correlacionan bien con los de SISH y IHC. Los estudios previos evaluar MET
niveles de mRNA en GC utilizaron el ensayo de transferencia Northern [8], [22] o la inversa de la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) [8], [14], [23] - [25]. Sin embargo, la mayoría de los estudios tenían tamaños de muestra pequeños, y sólo unos pocos de ellos investigaron sus implicaciones clínicas [22], [24] o comparación realizada con el ADN o el estado de proteínas [14], [25]: Ku et al. en primer lugar, estudió la expresión del ARNm MET mediante el análisis de transferencia Northern, e informaron de que la expresión del transcrito de 6,0 kb se correlaciona estrechamente con el estadio del tumor y la metástasis LN [22]. Amemiya et al. informaron que los pacientes en estadio IV GC con metástasis hepática mostraron una mayor expresión de MET, tanto a nivel de ARNm y proteínas que los pacientes en estadio IV GC sin metástasis hepática mediante RT-PCR y IHC [24].

Recientemente, se informó que los niveles altos de HER2
ARNm se correlacionó positivamente con la sobreexpresión de la proteína GA y mediante la comparación de los resultados de las 4 diferentes metodologías basadas en-situ (ISH ARN, IHC, FISH, y sish) en 211 casos GC [20]. Del mismo modo, en este estudio para el trato de economía, los resultados de ISH ARN mostraron bastante buena correlación con los de IHC y SISH. Estos resultados apoyan que el ARN hipertensión sistólica aislada puede ser un ensayo fiable para muestras de tejido FFPE, aunque se necesitan más estudios de validación.

Hemos demostrado que MET
GA, alta MET
ARNm y la sobreexpresión de la proteína evaluadas por SISH, ARN ISH y IHC eran muy concordantes, y un alto estatus se reunieron en el ADN, ARNm y proteínas se asociaron significativamente con un mal pronóstico. Estos resultados apoyan que la sobreexpresión MET se debe principalmente a un aumento de MET
GCN y este mecanismo contribuye a la conducta agresiva de los MET
GC-oncogén adicto. Sin embargo, hubo algunos casos que muestran inconsistencia entre los MET
GCN, mRNA y los niveles de proteína. Especulamos que los problemas técnicos (por ejemplo, la sensibilidad y especificidad de la sonda o anticuerpo, y la mala calidad del ARNm de los tejidos FFPE) y la heterogeneidad intratumoral de estatus de TEM pueden ser las principales causas de esta discrepancia. Sin embargo, algunos mecanismos biológicos también pueden estar relacionados con esta discrepancia. Por ejemplo, la sobreexpresión MET sin GA puede ocurrir a través de la activación transcripcional a través dependiente de HGF autocrinos /paracrinos bucles u otras vías de señalización [23], [26]. Por el contrario, MET
GA no puede aumentar el producto del gen. Asaoka et al. informaron que unas pocas líneas de células que albergan GC MET
GA expresa la proteína como mismo nivel que otras líneas celulares sin GA, pero sus residuos de tirosina en el dominio quinasa fosforilada eran más [27]. Los mecanismos de activación de MET y el papel de HGF en GC aún no se han dilucidado.

Es bien sabido que los MET
juega un papel en la progresión metastásica del cáncer. Varios estudios demostraron que MET
GA o sobreexpresión se asocia con metástasis LN [7], [13], [22] o metástasis a distancia [13], en pacientes con cáncer gástrico. Además, se demostró que la administración de MET inhibidor reduce diseminación peritoneal de GC en un modelo de xenoinjerto [23]. Además, Di Renzo et al. encontraron que las células cancerosas que llevan MET
se seleccionaron activación de mutaciones durante la diseminación metastásica de cabeza y cuello carcinomas de células escamosas mediante la comparación de la secuencia del gen entre el tumor primario y metastásico de los ganglios linfáticos [28]. Sin embargo, la comparación directa de la condición de MET entre el tumor primario y la metástasis no se ha realizado en una gran serie de GC. Cuando se comparó el estado de expresión de MET entre 199 tumores primarios emparejados y los LN metastásicos, y la concordancia global fue del 93,5% y el 94% en ARN ISH y IHC, respectivamente. Estos resultados sugieren que el estado de la expresión de MET GC es relativamente constante durante la metástasis a los LN regionales. Sin embargo, la conversión positiva de MET
estado de ARNm se asoció significativamente con un mal pronóstico mediante análisis univariante y multivariante. Por lo tanto, estos resultados sugieren que la evaluación del estatus de TEM en las lesiones metastásicas puede ser importante para predecir el pronóstico y para identificar candidatos adicionales para la terapia dirigida-MET.

En el análisis de ARN basado situ tiene varias ventajas sobre el 'grind y se unen "análisis tales como RT-PCR [19] y es aplicable tanto para la práctica clínica y la investigación retrospectiva. Por otra parte, el ARN ISH es más favorable que IHC cuando no hay anticuerpo adecuado o cuando la molécula diana es la proteína secretada. En lo que respecta a MET
, esta ventaja puede ser útil porque las células HGF productoras pueden ser visualizados en una sección de tejido utilizando la sonda de HGF. Sin embargo, la estabilidad del mRNA vulnerable durante el procesamiento de los tejidos y el coste más alto que el de IHC son las desventajas de método RNA ISH. Esperamos que la mejora técnica va a resolver estas limitaciones.

En este estudio retrospectivo, MET
estado de mRNA evaluadas por ARN ISH se correlaciona bien con la proteína y GCN evaluados por IHC y SISH, respectivamente, y MET
GA es muy concordantes con alta expresión de cualquiera de ARNm o proteína. En el análisis de supervivencia, la alta expresión de MET
ARNm en las lesiones primarios o metastásicos, y la conversión positiva de MET
estado de ARNm se asocian significativamente con un mal pronóstico. Además, MET
estado de ARNm en los LN metastásico es un factor pronóstico independiente en el análisis multivariante. Nuestros hallazgos indican que MET
ARNm puede ser un marcador alternativo para identificar el MET
GC-oncogén adicto.

Apoyo a la Información sobre Table S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s001 gratis (DOCX)
Tabla S2.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s002 gratis (DOCX) sobre Table S3.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0111658.s003 gratis (DOCX)

Reconocimientos

Estamos muy agradecidos a la Sra Hyun Ju Parque por su apoyo técnico

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