PLOS ONE: Analyse de MET expression de l'ARNm dans les cancers gastriques en utilisant l'ARN In Situ Hybridation Assay: Son Implication clinique et comparaison avec immunohistochimie et Silver In Situ Hybridization

Résumé

Nous avons étudié MET
ARNm le statut d'expression en utilisant l'ARN hybridation in situ (ISH) technique dans les lésions primaires et métastatiques de 535 carcinome gastrique (GC) cas réséquées chirurgicalement dans. Nous avons comparé les résultats avec ceux de l'immunohistochimie et l'argent hybridation in situ, et examiné l'association avec des caractéristiques clinicopathologiques et le pronostic. Parmi 535 primaires GCS, 391 (73,1%) ont été notés 0, 87 (16,3%) ont été notés 1, 38 (7,1%) ont été marqués 2, 12 (2,2%) ont été notés 3 et 7 (1,3%) ont été notés 4 par ARN ISH. Haut L'expression de l'ARNm de MET (score ≥3) a été associée à des métastases ganglionnaires ( P
= .014), métastases à distance ( P
= .001), et supérieur stade TNM ( P
< .001). l'expression de l'ARNm de MET a été corrélée avec l'expression de protéines (r = 0,398; P
< .001) et le nombre de copies (r = 0,345; P
<. 001). Les patients montrant haut MET
ARNm dans les lésions primaires ou métastatiques avaient la survie globale plus courtes que celles montrant faible MET
ARNm (tumeurs primaires, P
= 0,002; ganglions métastatiques, P
< .001). Les patients présentant une conversion positive de statut ARNm
MET dans les ganglions lymphatiques métastatique avaient la survie globale plus courtes que celles sans conversion ( P
= 0,011). L'analyse multivariée a montré que la haute l'expression de l'ARNm du MET dans les ganglions lymphatiques métastatique était un facteur pronostique indépendant pour la survie globale ( P
= .007). Par conséquent, cette étude suggère que l'expression de l'ARNm de MET évalué par l'ARN ISH pourrait être utile en tant que marqueur potentiel pour identifier les oncogène-addicted GC de MET

Citation:. Choi J , Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) Analyse de ARNm l'expression de MET dans les cancers gastriques en utilisant l'ARN In Situ hybridation Assay: Son Implication clinique et comparaison avec immunohistochimie et Silver In Situ Hybridation. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10.1371 /journal.pone.0111658

Editeur: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, États-Unis d'Amérique

Reçu le 11 Mars 2014; Accepté 6 Octobre 2014; Publié: 3 Novembre 2014

Droit d'auteur: © 2014 Choi et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenu par la national Research Foundation du programme Corée (NRF) A3 Foresight (http://www.nrf.re.kr). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

au cours de la dernière décennie, le récepteur tyrosine kinase (RTK) des voies se sont avérés être des cibles de médicaments attractifs pour la thérapie anticancéreuse [1], et la voie MET est l'une de ces cibles prometteuses. MET
est un proto-oncogène situé sur le locus 7q31 et code pour un TKP pour le facteur de croissance des hépatocytes (HGF) [2], [3]. La réglementation stricte de la voie HGF /MET qui est observée dans le développement et la régénération est perdu dans le cancer, et une telle déréglementation se produit par le biais de multiples mécanismes [1]. une activation aberrante MET joue un rôle important dans la survie des cellules cancéreuses, la croissance, l'angiogenèse et les métastases dans divers cancers, notamment du poumon, du sein, du rein et des tumeurs malignes du tractus gastro-intestinal [4]. Cependant, bien que la stratification des patients selon l'expression ou l'activité MET est important pour le succès thérapeutique, les méthodes d'évaluation du niveau d'expression ou d'activité MET ont pas été établies [4].

Pour le carcinome gastrique (GC), aberrante activation MET a été pensé pour être lié à un effet de dosage génique [5], et l'amplification du gène de MET (GA) ou surexpression de la protéine a été associée à des caractéristiques tumorales agressives et /ou pire résultat clinique [6] - [14]. En outre, GC -amplified ou -overexpressed de MET a montré la réponse au traitement avec plusieurs inhibiteurs de la voie de signalisation HGF /MET dans les études précliniques [15] et I des essais cliniques de phase [12], [16]. Par conséquent, l'inhibition de MET a le potentiel thérapeutique comme une autre stratégie réussie suivant le récepteur du facteur de croissance épidermique humain 2 (HER2) Thérapie -targeted CG avancé. Toutefois, des études antérieures ont utilisé diverses méthodes pour identifier GC MET-positif et ont montré un écart dans la prévalence du MET surexpression ou l'amplification: MET surexpression variait de 18% à 73,7% dans les études utilisant l'immunohistochimie (IHC) [7] - [9], [13], [14], [17], MET de numéro de copie du gène (GCN) Gain variait de 10% à 21,2% dans les études utilisant en temps réel la réaction quantitative en chaîne par polymérase (qPCR) [10], [ ,,,0],11], et MET de GA variait de 2% à 3,9% dans les études utilisant la fluorescence dans l'hybridation in situ (FISH) [12], [18] ou d'argent hybridation in situ (SISH) [13]. Parmi ces méthodes, IHC est largement utilisé dans la pratique clinique et la méthode la plus susceptible de dépistage pour la détection de GC MET-positive. Cependant, une exploration plus approfondie est encore nécessaire de trouver un biomarqueur prédictif ou méthodologie d'essai pour la thérapie d'inhibition de MET.

Dans cette étude, nous avons effectué une hybridation d'ARN in situ (ISH) dosage en utilisant appariés sondes ADN oligonucléotidiques et préamplificateur-amplificateur sondes -Label pour la visualisation [19]. Cette méthode utilise, (FFPE) tissus de paraffine fixés au formol et permet une seule molécule visualisation sous un microscope à champ clair. Dans notre étude précédente, nous avons prouvé que l'expression de l'ARNm de HER2 évalué par l'ARN ISH était bien corrélée à la surexpression de la protéine et GA évaluée par IHC et FISH dans 211 cas de GC [20]. En outre, nous avons montré la corrélation entre MET
GCN et l'expression des protéines dans une étude précédente [13]. Ici, nous avons évalué L'expression de l'ARNm de MET en utilisant la méthode ARN ISH, et comparé les résultats avec ceux de IHC et SISH dans une grande série de GC. En outre, les paramètres clinicopathologiques et les résultats cliniques des patients du GC selon ARNm statut d'expression de MET ont été évalués.

Patients et tissus spécimens Matériels et méthodes

Nous avons recueilli des échantillons de tissus d'archives des patients du GC qui gastrectomie consécutivement subi à Séoul national University Hospital, Séoul, en Corée, à partir de Janvier 2004 à Décembre 2005. Enfin, 535 échantillons de GC primaire et 199 échantillons de noeud synchrone régional lymphatique métastatique (LN) à partir de 535 patients étaient disponibles pour cette étude. Les caractéristiques clinicopathologiques des patients ont été examinés par l'examen des dossiers médicaux et des dossiers pathologiques (tableau 1). stade TNM a été classé selon le système de l'American Joint Committee on Manuel de stadification du cancer, 7 ^{e édition. Les résultats cliniques ont été suivis de la date de la chirurgie jusqu'à la mort ou 60 mois.}

Tous les échantillons de tissus ont été fixés dans 10% de formaline tamponnée pendant 24-48 heures puis inclus dans la paraffine. tissus de base (2 mm de diamètre) ont été prises avec un appareil de trépan (Superbiochips Laboratories, Séoul, Corée). Pour les GCS primaires, le front d'invasion de chaque tumeur primaire a été sélectionné. NLs métastatiques ont été soumis à l'ensemble des tissus, mais les cas avec micrométastases ont été exclus. Nombre de blocs de puces à ADN de 22 tissus qui contenaient jusqu'à 60 noyaux ont été construits.

Ethical déclaration

Tous les spécimens humains ont été obtenus lors de la chirurgie thérapeutique. Les participants ne fournissent pas le consentement écrit à participer à cette étude. L'étude rétrospective a été réalisée en utilisant les échantillons sur les tablettes après le diagnostic histopathologique, et tous les échantillons ont été anonymisées avant l'étude. Notre IRB (hôpital universitaire national de Séoul) a approuvé cette étude rétrospective sous la condition de l'anonymisation (Référence: H-1006-035-320).

ARN ISH

Pour la détection in situ de chez MET de l'ARNm, le kit 2.0 d'essai RNAscope FFPE (Diagnostics Advanced Cell, Hayward, CA, USA) a été utilisé conformément aux instructions du fabricant. En bref, 2- à des coupes de tissus FFPE épaisseur 3 um ont été déparaffinées, chauffée, traités par la protéase, et hybridés avec une sonde à 40 ° C pendant 2 heures (la séquence de référence, NM_001127500; sonder région, 1236-2257). Après le lavage et l'amplification, 3, 3'-diaminobenzidine a été ajouté pour la détection de l'ARN cible. Nuclei ont été contre l'hématoxyline. Une coloration positive a été indiquée par des points punctiformes brun dans le noyau et /ou le cytoplasme. MET de niveaux d'expression de l'ARNm ont été classés en 5 catégories en fonction de la notation de la ligne directrice du fabricant: score 0, aucune coloration ou < 1 point par cellule; marquer 1, 1-3 points par cellule (visibles à 20-40 ×); marquer 2, 4-10 points par cellule et pas ou très peu de groupes de points (visibles à 20-40 ×); score 3, > 10 points par cellule et < 10% de cellules positives ont des grappes points (visibles à 20 ×); Note 4, > 10 points par cellule et > 10% de cellules positives ont des grappes de points (visibles à 20 ×) (figure 1). Les sondes pour UBC
(ubiquitine C) et dapB
(un gène bactérien) ont été utilisées comme contrôle positif et négatif, respectivement. Les échantillons ont été considérés comme adéquats lorsque les signaux UBC
ARNm étaient facilement visibles sous un objectif 10x et le le signal dapB de n'était pas visible.

IHC et SISH

coloration immunohistochimique pour MET a été réalisée avec des anti-totaux des anticorps primaires monoclonaux MET (SP44) de lapin (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Un immunostainer automatique (BenchMark XT, Ventana Medical Systems) a été utilisé conformément aux instructions du fabricant. immunocoloration MET a été marqué avec les lignes directrices HercepTest de notation pour GC (DAKO, Glostrup, Danemark): score 0, aucune coloration de la membrane ou de coloration de la membrane dans < 10% des cellules tumorales; score 1, faible à peine perceptible coloration /partielle de la membrane dans > 10% des cellules tumorales; score 2, faiblement à une coloration modérée de l'ensemble membrane > 10% des cellules tumorales; score 3, une forte coloration de l'ensemble membrane >. 10% des cellules tumorales (figure 2)

double-couleur SISH essai a été réalisé avec INFORM sonde d'ADN MET et INFORMER Chromosome 7 sonde (Ventana Medical Systems) sur un BenchMark XT Ventana suivant les protocoles du fabricant. Les signaux ont été recensés dans 40 noyaux de tumeur par cœur, et Le statut du gène de MET a été classé en 6 groupes en utilisant l'Université du Colorado Cancer Center critères de gène du récepteur du facteur de croissance épidermique [21] (figure 2).

l'analyse statistique

le χ ^{2 essai ou test exact de Fisher a été utilisé pour tester l'association entre le statut MET et les facteurs clinicopathologiques. t
-test a été utilisé de l'étudiant pour comparer les moyennes des variables continues. Le test de corrélation de Spearman a été utilisé pour évaluer la relation entre l'ARN résultats ISH et IHC ou des résultats de Sish. La méthode de Kaplan-Meier a été utilisée pour estimer la survie globale (OS), et les différences de système d'exploitation entre les groupes ayant un statut différent MET ont été comparées en utilisant le test du log-rank. analyse de survie multivariée a été réalisée en utilisant le modèle des risques proportionnels de Cox rapport. L'analyse des données a été réalisée à l'aide du logiciel SPSS version 20.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), et les résultats ont été considérés comme significatifs lorsque P
<}

Résultats

1. statut d'ARNm de MET évaluée par

535 tumeurs primaires de l'ARN ISH, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) et 7 ( 1,3%) a montré l'ARN ISH score de 0, 1, 2, 3 et 4, respectivement. Lorsque nous avons comparé les résultats de l'ARN ISH avec des données clinico y compris la survie, et analysé les résultats de l'ARN ISH avec des données IHC et Sish, les groupes de notes 3 et 4 ont montré des caractéristiques distinctes. Par conséquent, nous avons considéré le score 3 et 4 haut Le groupe ARNm de MET, et un total de 19 cas (3,5%) appartenaient à haute MET
ARNm.

High - MET de l'ARNm a été associée avec l'âge ( P
= .002), la taille de la tumeur plus grande ( P
= .006), LN métastase ( P
= .014), invasion lymphatique ( P
< .001), augmentation du nombre de ganglions métastatiques ( P
< .001), métastases à distance ( P
= .001), et plus haut stade TNM ( P
< .001) par rapport à faible ou MET de l'ARNm (tableau 2). Cependant, haute MET de l'ARNm n'a pas montré aucune association avec le sexe, la localisation de la tumeur, la classification Lauren, et la profondeur de l'invasion (tableau 2).

199 NLs métastatiques synchrones, 119 (59,8% ) 45 (22,6%) 22 (11,1%) 4 (2,0%) et 9 (4,5%) a montré l'ARN ISH score de 0, 1, 2, 3 et 4, respectivement. Par conséquent, 13 cas (6,5%) étaient haut MET
ARNm. Parmi 199 paires de lésions primaires et métastatiques, 186 (93,5%) ont montré concordant statut ARNm de MET et 13 (6,5%) n'a pas. Sur ces 13 cas discordants, la conversion négative a été observée dans 50% (7/14) du haut MET de tumeurs primaires d'ARNm, et la conversion positive a été trouvée dans 3,2% (6/185) du faible ARNm tumeurs primaires du MET (tableau 3).

2. la protéine MET et le statut GCN évalué par IHC et Sish

Utilisation de IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) et 15 (2,8%) des tumeurs primaires ont été notées 0, 1, 2 et 3, respectivement. IHC score de 3 a montré des caractéristiques clinico distinctes, et ce groupe de surexpression MET était significativement associée avec l'âge ( P
= .005), la taille de la tumeur plus grande ( P
= 0,009), la profondeur de l'invasion ( P
= .05), LN métastase ( P
= .018), invasion lymphatique ( P
= .026), augmentation du nombre de ganglions métastatiques ( P
< .001), métastases à distance ( P
= 0,007), et plus haut stade TNM ( P
= .001). Cependant, MET surexpression n'a montré aucune association avec le sexe, la localisation de la tumeur, et la classification Lauren (tableau S1).

199 NLs synchrones métastatiques, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23.1 %) et 15 (7,5%) ont IHC Le score 0, 1, 2 et 3, respectivement. Parmi 199 paires de lésions primaires et métastatiques, 187 (94,0%) ont présenté l'état de la protéine MET concordante et 12 (6,0%) n'a pas. Sur ces 12 cas discordants, la conversion négative a été trouvé dans 36,4% (4/11) des tumeurs primaires avec MET surexpression, et la conversion positive a été trouvée chez 4,3% (8/188) des tumeurs primaires sans MET surexpression.

Utilisation de SISH, MET de GA a été observée chez 2,6% (14/535) des tumeurs primaires. MET
GA a montré une association significative avec la taille plus grande de la tumeur ( P
= .038), invasion lymphatique ( P
= 0,009), l'augmentation du nombre de ganglions métastatiques ( P
< .001), métastases à distance ( P
= .005), et plus haut stade TNM ( P
= .002). Cependant, MET GA n'a pas montré aucune association avec le sexe, la localisation de la tumeur, la classification Lauren, la profondeur de l'invasion et les métastases LN (tableau S2).

3. Corrélation du statut MET évalué par l'ARN ISH, IHC et SISH

La corrélation entre les MET
ARNm et de l'état de la protéine évaluée par l'ARN ISH et IHC est présenté dans le tableau 4. Dans 535 tumeurs primaires, il une corrélation positive entre les ARNm et la protéine expression de MET (r = 0,398, P
< .001). Tous les 7 cas avec l'ARN ISH score à 4 montré MET surexpression de la protéine. Parmi 12 cas avec l'ARN ISH score de 3, 5 cas (41,7%) ont montré des notes IHC 3. Les cas avec l'ARN ISH score 2 présentaient des scores IHC variables. Les cas avec l'ARN ISH score de 0 ou 1 n'a pas montré MET surexpression de la protéine à l'exception de 1 cas. Parmi 10 cas présentant un écart (ie, positif dans l'ARN ISH et négatif dans IHC ou vice versa), 8 ont montré IHC score de 2 ou de l'ARN ISH score de 2. Dans 199 NLs métastatiques, il y avait une bonne corrélation positive entre MET
ARNm et l'expression des protéines (r = 0,462, P
< .001). (Tableau S3)

En outre, il y avait une corrélation positive entre MET
ARNm expression et MET
GCN (r = 0,345; P
< .001) (tableau 4). Parmi les 7 cas avec l'ARN ISH score de 4, 6 (85,7%) ont montré MET
GA et un seul cas a montré HP (14,3%). Les 12 cas avec l'ARN ISH score à 3 ont montré GA (50%) ou polysomie (50%) par SISH. Les cas avec l'ARN ISH score à 2 ont montré divers modèles Sish y compris GA (5,3%). Aucun des cas avec l'ARN ISH score de 0 ou 1 a montré GA.

Le tableau 5 résume les résultats de l'ARN ISH, IHC et SISH du GC primaire. Parmi les cas 535, 513 cas (95,9%) étaient négatifs à la fois par l'ARN ISH et IHC, et seulement 22 cas (4,1%) ont montré des résultats positifs soit par l'ARN ISH ou IHC. Ces 22 cas présentaient MET de GA (54,5%) ou polysomie (45,5%) par SISH et disomie ou Trisomie n'a jamais été observée. En termes de SISH, parmi les 14 cas montrant GA, 11 cas (78,6%) présentaient une expression élevée des deux ARNm et la protéine. Parmi les 58 cas montrant HP, cependant, seulement 7 cas (12,1%) présentaient une forte expression de l'ARNm ou de la protéine soit. Parmi les 111 cas montrant LP, seulement 3 cas (2,7%) présentaient une expression de haut ARNm. Tous les 352 cas montrant disomie ou Trisomie présentaient des résultats négatifs à la fois par l'ARN ISH et IHC.

4. implications pronostiques du statut MET dans

High- MET
ARNm de lésions primaires et métastatiques dans les tumeurs primaires ou métastatiques MILD était significativement associée à un mauvais système d'exploitation (tumeurs primaires, P
= .002, la figure 3A; NLs métastatiques, P
< .001, figure 3D). Dans les tumeurs primaires avec faible MET
ARNm, les patients avec conversion positifs ont montré OS pire que ceux sans conversion ( P
= 0,011, figure 3F). Dans les tumeurs primaires avec haut MET de l'ARNm, les patients avec conversion négatif a montré un meilleur système d'exploitation que ceux sans conversion, mais il n'y avait pas de signification statistique ( P
= 0,137, Figure 3F )

MET surexpression dans les tumeurs primaires ou métastatiques MILD était significativement associée à un mauvais système d'exploitation (tumeurs primaires, P
= .001, Figure 3B;. NLs métastatiques, P
= .024, Figure 3E). Dans les tumeurs primaires sans MET surexpression, conversion positif a connu une tendance vers la prévision des pauvres OS, mais il n'y avait pas de signification statistique ( P
= 0,393). Dans les tumeurs primaires avec MET surexpression, la conversion négative a montré une tendance de meilleures OS que pas de conversion, mais il n'a pas atteint la signification statistique ( P
= 0,132). En outre, MET de GA dans les tumeurs primaires a également été significativement associés à un mauvais système d'exploitation ( P
= .005, figure 3C).

En analyse multivariée, haute MET de l'ARNm dans NLs métastatiques était un facteur pronostique négatif indépendant pour OS, après ajustement pour l'âge (< 60 ans vs ≥60 y), la classification Lauren (de type intestinal vs diffuse ou mixte), et TNM l'étape (I-II par rapport à III-IV). Le hazard ratio était de 2,27 ( P
= 0,007) (tableau 6). Cependant, MET surexpression dans NLs métastatiques n'a pas été un facteur pronostique statistiquement significatif par analyse multivariée, bien que le rapport de risque était de 1,76 ( P
= 0,067). En outre, MET
GA, haute MET
ARNm ou surexpression de la protéine dans la tumeur primaire n'a pas été un facteur pronostique statistiquement significatif par analyse multivariée (données non présentées).

Discussion

dans la présente étude, nous avons démontré que la haute l'expression de l'ARNm de MET était significativement associée à des caractéristiques clinico indésirables et un mauvais pronostic dans une grande série de patients du GC en utilisant la méthode ARN ISH. En outre, les résultats ARN ISH étaient bien corrélées avec celles de SISH et IHC. Les études précédentes évaluant Les taux d'ARNm de MET en GC ont utilisé le test Northern blot [8], [22] ou inverser la réaction en chaîne de transcription-polymerase (RT-PCR) [8], [14], [23] - [25]. Cependant, la plupart des études avaient échantillons de petite taille, et seulement quelques-uns d'entre eux ont étudié ses implications cliniques [22], [24] ou comparaison effectuée avec de l'ADN ou de l'état des protéines [14], [25]: Kuniyasu et al. tout d'abord étudié MET expression de l'ARNm en utilisant l'analyse Northern-blot, et ils ont indiqué que l'expression de la transcription de 6,0 kb a été étroitement corrélée avec le stade de la tumeur et les métastases LN [22]. Amemiya et al. ont rapporté que les patients de stade IV GC avec métastases hépatiques ont montré plus élevé expression MET à la fois d'ARNm et de protéines niveaux que les patients de stade IV GC sans métastases hépatiques par RT-PCR et IHC [24].

Récemment, nous avons rapporté que des niveaux élevés de HER2 de l'ARNm était bien corrélée à la surexpression de la protéine et GA en comparant les résultats de 4 différentes dans les méthodologies à base in situ (ISH ARN, IHC, FISH et Sish) dans 211 cas de GC [20]. De même, dans cette étude pour le statut MET, les résultats de l'ARN ISH ont montré assez bonne corrélation avec ceux de IHC et SISH. Ces résultats confirment que l'ARN ISH peut être un test fiable pour les échantillons de tissu FFPE, bien que d'autres études de validation sont nécessaires.

Nous avons démontré que MET
GA, haute MET
ARNm et surexpression de la protéine évaluée par SISH, ARN ISH et IHC étaient très concordante, et le statut élevé MET à l'ADN, l'ARNm et la protéine étaient significativement associés à un mauvais pronostic. Ces résultats confirment que la surexpression MET est principalement due à une augmentation de MET
GCN et ce mécanisme contribue à un comportement agressif de oncogène accro GC
MET. Néanmoins, il y avait des cas montrant l'incohérence entre les MET
GCN, l'ARNm et des protéines. Nous pensons que les problèmes techniques (par exemple, la sensibilité et la spécificité de la sonde ou de l'anticorps, et la mauvaise qualité des tissus FFPE d'ARNm) et l'hétérogénéité intratumorale du statut MET peuvent être les principales causes de cet écart. Cependant, certains mécanismes biologiques peuvent également être liées à cet écart. Par exemple, MET surexpression sans GA peut se produire grâce à l'activation de la transcription via HGF-dépendant autocrine /boucles paracrines ou d'autres voies de signalisation [23], [26]. Au contraire, MET de GA ne peut pas augmenter le produit du gène. Asaoka et al. ont rapporté que quelques lignées de cellules GC hébergeant MET
GA a exprimé la protéine en même niveau que d'autres lignées cellulaires sans GA, mais leurs résidus de tyrosine dans le domaine kinase étaient plus phosphorylée [27]. Les mécanismes d'activation MET et le rôle de HGF dans GC restent à élucider.

Il est bien connu que MET
joue un rôle dans la progression métastatique du cancer. Plusieurs études ont montré que MET
GA ou surexpression est associée à LN métastases [7], [13], [22] ou des métastases à distance [13], chez les patients du GC. En outre, il a été montré que l'administration d'inhibiteur de MET a réduit la dissémination peritoneale de GC dans un modèle de xénogreffe [23]. Par ailleurs, Di Renzo et coll. ont constaté que les cellules cancéreuses portant MET
mutations activatrices ont été sélectionnés lors de la dissémination métastatique de la tête et du cou carcinomes épidermoïdes en comparant la séquence de gènes entre la tumeur primitive et des ganglions lymphatiques métastatique [28]. Toutefois, la comparaison directe de l'état MET entre la tumeur primaire et les métastases n'a pas été effectuée dans une grande série de GC. Lorsque nous avons comparé le statut d'expression MET entre 199 tumeurs primaires appariées et NLs métastatiques, et la concordance globale était de 93,5% et 94% par l'ARN ISH et IHC, respectivement. Ces résultats suggèrent que le statut d'expression MET de GC est relativement constante au cours des métastases à NLs régionales. Cependant, la conversion positive de l'état de l'ARNm de MET était significativement associée à un mauvais pronostic en analyse univariée et multivariée. Par conséquent, ces résultats suggèrent que l'évaluation du statut MET dans les lésions métastatiques peut être important pour prédire le pronostic et d'identifier des candidats supplémentaires pour la thérapie MET ciblée.

Dans l'analyse de l'ARN à base in situ présente plusieurs avantages par rapport à la «grind et bind 'analyse comme la RT-PCR [19] et est applicable pour la pratique clinique et la recherche rétrospective. En outre, l'ARN ISH est plus favorable que l'IHC lorsqu'il n'y a pas d'anticorps approprié ou lorsque la molécule cible est la protéine sécrétée. En ce qui concerne MET
, cet avantage peut être utile parce que les cellules HGF productrices peuvent être visualisées dans une section de tissu à l'aide de la sonde HGF. Toutefois, la stabilité de l'ARNm vulnérable lors du traitement des tissus et un coût plus élevé que celui de l'IHC sont les inconvénients du procédé ARN ISH. Nous espérons que d'autres améliorations techniques résoudra ces limitations.

Dans cette étude rétrospective, statut d'ARNm de MET évalué par l'ARN ISH est bien corrélé avec la protéine et GCN évaluée par IHC et SISH, respectivement, et GA de MET est très concordant avec une expression élevée de l'une ou de la protéine. Dans l'analyse de survie, une expression élevée de MET
ARNm dans les lésions primaires ou métastatiques, et de conversion positif de statut ARNm de MET sont significativement associés à un mauvais pronostic. En outre, statut ARNm de MET NLs métastatiques est un facteur pronostique indépendant par une analyse multivariée. Nos résultats indiquent que l'ARNm de MET peut être un marqueur de remplacement pour identifier le oncogène-addicted GC de MET.

Informations complémentaires
Tableau S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s001
(DOCX)
Tableau S2.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s002
(DOCX)
Tableau S3.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0111658.s003
(DOCX)

Remerciements

Nous sommes très reconnaissants à Mme Hyun Ju Park pour son soutien technique

• PLOS ONE: Effet de l'éradication de l'Helicobacter pylori sur les niveaux d'expression de FHIT, IL-8 et P73 dans la muqueuse gastrique des parents au premier degré de Gastric Cancer Patients
• PLOS ONE: A 346 Analyse de cas pour laparoscopique Spleen-Préserver No.10 curage ganglionnaire pour cancer gastrique proximal: A Study Center Simple