PLoS ONE: Analiza MET mRNA u karcinome želuca upotrebom RNA Pokus situ hibridizacije: njegova klinička implikacija i usporedbu s imunohemije i srebro in situ Hybridization

Sažetak pregled

Istražili smo Met pregled mRNA status izraz pomoću RNA u tehnici situ hibridizacija (ish) u primarnih i metastatskih lezija 535 kirurški reseciranih želučanog karcinoma (GC) slučajeva. Usporedili smo rezultate s onima imunohistokemijski i srebra in situ hibridizacije, te ispitali povezanost s kliničko karakteristikama i prognozu. Među 535 primarnoj GCS, 391 (73,1%) su označeni 0, 87 (16,3%) su označeni kao 1, 38 (7,1%) su zabio 2, 12 (2,2%) su zabio 3 i 7 (1,3%) su zabio 4 strane RNK ISH. Visoka susreo pregled mRNA (ocjena ≥3) povezuje se s limfnih čvorova metastaza ( P pregled = 0,014), udaljenim metastazama ( P pregled = 0,001) i više TNM stadij ( P izvoznici < 0,001). susreo pregled ekspresija mRNA je povezana s ekspresije proteina (r = 0,398; P izvoznici < 0,001) i broj kopija gena (r = 0,345; P izvoznici <. 001). Pacijenti koji pokazuju high Met pregled mRNA u primarnim ili metastatskim lezijama imali kraće ukupno preživljenje u odnosu na one koji pokazuju niske Met pregled mRNA (primarne tumore, P pregled = 0,002; metastatski limfni čvorovi, P izvoznici < 0,001). Pacijenti koji pokazuju pozitivno pretvorbu susreo pregled statusa mRNA u metastatskim limfnim čvorovima imali kraće ukupno preživljenje od onih bez pretvorbe ( P pregled = 0,011). Multivarijatna analiza je pokazala da je visok susreo pregled mRNA u metastatskim limfnim čvorovima bila samostalna prognostički čimbenik za ukupno preživljavanje ( P pregled = .007). Stoga je ova studija sugerira da je susreo pregled mRNA ocjenjuje RNK ISH mogla biti korisna kao potencijalni marker za identifikaciju Met pregled onkogena-ovisnik GC pregled

Citation. Choi J , Lee, Kim MA, Jang BG, Lee HS Kim WH (2014) Analiza susreo pregled mRNA ekspresije u karcinome želuca upotrebom RNA Pokus situ hibridizacije: njegova klinička implikacija i usporedbu s imunohemije i srebro na licu mjesta Hibridizacija. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658 pregled

Urednik: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, United States of America pregled

Primljeno: 11 ožujka 2014; Prihvaćeno: 6. listopada 2014; Objavljeno: 3. studenoga 2014 pregled

Copyright: © 2014 Choi i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane National Research Foundation of Korea (NRF) A3 Predviđanja programa (http://www.nrf.re.kr). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Tijekom proteklog desetljeća, receptora tirozin kinaze (RTK) puta su dokazali da se atraktivne droga mete za antitumorski terapiju [1], a MET put je jedan od tih obećavajuće ciljeva. MET pregled je proto-onkogena nalazi na 7q31 lokusa i kodira RTK za faktora rasta hepatocita (HGF), [2], [3]. Čvrsta regulacija HGF /MET put koji se promatraju u razvoju i regeneraciji je izgubljen u raka, a kao deregulacija javlja višestrukim mehanizmom [1]. Aberantna aktivacija MET igra važnu ulogu u preživljavanju stanica raka, rasta, angiogenezu i metastaze u različitim oblicima raka, uključujući rak pluća, dojke, bubrega i zloćudnih bolesti gastrointestinalnog trakta [4]. Međutim, iako je stratifikacija pacijenta prema MET izražavanja ili aktivnost je važna za terapijskog uspjeha, metode za određivanje razine MET izražavanja ili aktivnosti nisu utvrđeni. [4] pregled

Za karcinom želuca (GC), nenormalna MET aktivacija je mislio da se odnosi na učinak doziranja gen [5] i susreo pregled gena pojačanje (GA) ili proteina prekomjerna ekspresija je povezana s agresivnim karakteristikama tumora i /ili lošiji ishod bolesti [6] - [14]. Nadalje, Met pregled -amplified ili -overexpressed GC pokazali odgovor na liječenje nekoliko inhibitora HGF /MET signalnog puta u pretkliničkih studija [15] i klinička ispitivanja faze I [12], [16]. Dakle, MET inhibicije ima potencijal kao još jednu uspješnu terapeutske strategije sljedeće receptor humanog epidermalnog faktora rasta 2 (HER2) -targeted terapije u naprednoj GC. Međutim, prethodne studije su koristile različite metode za identifikaciju MET-pozitivne GC i pokazali su odstupanje u prevalenciji MET prekomjernom ekspresijom ili pojačanje: MET pojačanom ekspresijom u rasponu od 18% do 73,7% u studijama imunohistokemije (IHH) [7] - [9], [13], [14], [17], susreo pregled, broj kopija gena (GCN) dobit kretala se u rasponu od 10% do 21,2% u studijama pomoću kvantitativne realnom vremenu lančane reakcije polimeraze (qPCR) [10], [ ,,,0],11], i susreo pregled GA rasponu od 2% do 3,9% u studijama koriste fluorescentne in situ hibridizacije (FISH) [12], [18] ili srebro in situ hibridizacije (SISH) [13]. Od tih metoda, IHC naširoko koristi u kliničkoj praksi i metoda najvjerojatnije skrining za detekciju MET pozitivne GC. Međutim, daljnja istraživanja i dalje je potrebno pronaći prediktivni biomarkera ili metodologijom testiranja za MET terapiju. Pregled

U ovoj studiji, proveli smo RNK hibridizacije in situ (ish) testom pomoću upareni DNA oligonukleotidnih sondi i predpojačalo pojačala -Label sonde za vizualizaciju [19]. Ova metoda koristi formalinom fiksna, parafin uklopljenih (FFPE) tkiva i omogućuje jednog molekula vizualizaciju pod svijetlo-polju mikroskopa. U našem prethodnom istraživanju, pokazali smo da je HER2 pregled mRNA ocijenjeni od strane RNA ISH je dobro povezana s povećanom ekspresijom proteina i GA ocjenjuje IHC i ribe u 211 GC slučajeva [20]. Također, pokazalo je povezanost MET pregled GCN i ekspresiju proteina u prethodnoj studiji [13]. Evo, istražili smo susreo pregled mRNA pomoću RNA ish metodu, i usporedili rezultate sa onima od IHC-a i SISH u velikoj seriji GC. Osim toga, susreo pregled mRNA status izraz su ocijenjeni kliničko parametri i klinički rezultati GC pacijenata prema. Pregled

Materijali i metode

pacijenata i tkiva primjerci pregled

Mi smo prikupili uzorke arhivske tkiva GC pacijenata koji uzastopno podvrgnuti gastrektomije na Seoul National University Hospital, Seoul, Koreja, od siječnja 2004. do prosinca 2005. Konačno, 535 uzoraka primarnih GC i 199 uzoraka sinkronog regionalne metastatski limfni čvor (LN) iz 535 pacijenata su bili na raspolaganju za ovo istraživanje. U kliničko karakteristike bolesnika pregledao pregledom medicinske tablice i patološke evidencija (Tablica 1). TNM stadij klasificirano u skladu sa sustavom Zajedničkog odbora Američkog na rak inscenacije Manual, 7 ^{-og izdanja. Klinički rezultati su praćeni od dana operacije do smrti ili 60 mjeseci. Pregled}

Svi uzorci tkiva su fiksirani u 10% ublaživač formalin za 24-48 sati, a zatim u parafin. Osnovna tkiva (2 mm) uzeti su primjenom aparata trephine (Superbiochips Laboratories, Seoul, Koreja). Za primarnih GCS, invazija ispred svakog primarnog tumora je izabran. Metastatski LNS su podvrgnuti nizu tkiva, ali su isključeni slučajevi s micrometastasis. su konstruirani Ukupno microarray 22 tkivo blokira, koji su sadržavali i do 60 jezgri. pregled

Etički izjava pregled

dobiveni Svi ljudskih jedinki tijekom terapijskog zahvata. Sudionici nije dao pismeni pristanak za sudjelovanje u ovom istraživanju. Retrospektivna studija provedena je pomoću uzoraka tijekom police nakon patološke dijagnoze, a svi uzorci anonimne prije istraživanja. Naša IRB (Seoul National University Hospital) odobrila ovu retrospektivnu studiju uz uvjet od skrivanja (Referenca: H-1006-035-320). Pregled

RNA ISH pregled

Jer u otkrivanju situ Met pregled mRNA je RNAscope FFPE 2.0 komplet za ispitivanje (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, Kalifornija, SAD) je korištena u skladu s uputama proizvođača. Ukratko, 2 do 3 um sekcije debljine FFPE tkiva su deparafmizirani, grije, obrađuje proteaze i hibridizirana sa sondom na 40 ° C tijekom 2 sata (na referentnu sekvencu, NM_001127500 sonda regije, 1236-2257). Nakon ispiranja i pojačanje, 3, 3'-diaminobenzidinu Doda se za detekciju ciljnog RNA. Jezgre su prebrojane s hematoksilinom. Pozitivnim bojanjem označeno smeđe točkaste točkama u jezgri i /ili citoplazmi. susreo pregled razine ekspresije mRNA su svrstani u 5 razreda u skladu s bodovanja smjernica proizvođača: za 0, bez bojanja ili < 1 točka po ćeliji; rezultat je 1, 1-3 točke po stanici (vidljive na 20-40 ×); postići 2, 4-10 točkice po stanici i bez ili s vrlo malo dot klastera (vidljive na 20-40 ×); zabiti 3, > 10 točaka po stanici i < 10% pozitivne stanice imaju dot klastera (vidljivo na 20 ×); zabiti 4, do 10 točaka po stanici i > 10% pozitivne stanice imaju dot klastera (vidljivo na 20 ×) (slika 1). Sonde za UBC
(ubikvitina C) i dapB
(bakterijske gen) korišteni su kao pozitivne i negativne kontrole, respektivno. Uzorci su uzeti u obzir odgovarajuća kada je UBC pregled mRNA signali su lako vidljivi pod objektiva 10x i dapB pregled signal nije bio vidljiv. Pregled

IHC i SISH pregled

Imunohistokemijska bojanja za MET provedena je s anti-ukupnih MET (SP44) kunića monoklonskih primarnih antitijela (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA). Automatsko immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical Systems) se koristi u skladu s uputama proizvođača. MET imunološko je postigao sa HercepTest bodovanje smjernica za GC (Dako, Glostrup, Danska): za 0, bez membranskog bojanja ili obojenost membrane u < 10% tumorskih stanica; bod 1, blijeda /jedva primjetno djelomična membrane obojenja > 10% tumorskih stanica; bod 2, slabo do umjereno obojenje cijelog membrane u > 10% tumorskih stanica; zabiti 3, jak bojenje cijele membrane u >. 10% tumorskih stanica (Slika 2) pregled

SISH test Dual-boja je izvedena s obavijestiti MET DNA sonde i obavijestiti kromosoma 7 sondu (Ventana Medical Systems) na Ventana Benchmark XT slijedeći protokol proizvođača. Signali su navedeni u 40 tumorskih jezgara po jezgri, i susreo pregled statusa gena se svrstati u 6 skupina pomoću kriterija Sveučilišta Colorado Cancer Center za gen receptora epidermalnog faktora rasta [21] (slika 2). Pregled

Statistička analiza pregled

χ ^{2 test ili Fisherov egzaktni test korišten je za testiranje povezanosti MET status i kliničko faktora. Studentski je t pregled -test je korišten za usporedbu sredstva za kontinuirane varijable. Spearman korelacija test korišten je za procjenu odnosa između RNK ISH rezultata i IHC ili rezultate SISH. Kaplan-Meier postupak se koristi za procjenu ukupno preživljenje (OS), a OS razlike između skupina s različitim MET status uspoređene pomoću log-rank testa. Multivarijantna analiza preživljavanja izvršena je Cox proporcionalnih rizika omjer model. Analiza podataka je provedena pomoću SPSS verzija 20.0 (SPSS, Chicago, IL, USA), a rezultati su smatrana značajnom kada je P pregled. < 0,05 pregled}

Results pregled

1. susreo pregled statusa mRNA ocjenjuje RNA ish pregled

Od 535 primarnih tumora, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) i 7 ( 1,3%) pokazalo je RNA ISH rezultat 0, 1, 2, 3 i 4, odnosno. Kada smo usporedili rezultate RNK ISH s kliničko podataka, uključujući opstanak, i analiziraju rezultate RNK ISH s IHC i SISH podataka, skupine rezultatom 3 i 4 su pokazali različite mogućnosti. Stoga, smatra se rezultat 3 i 4 kao high susreo pregled mRNA grupa, a ukupna 19 slučajeva (3,5%) pripadao visoko- Met pregled mRNA. Pregled

Visoko - MET pregled mRNA je povezana sa starijom dobi ( P pregled = .002), veće veličine tumora ( P pregled = 0,006), LN metastaza ( P pregled = 0,014), limfna invazija ( P izvoznici < 0,001), povećan broj metastatskih limfnih čvorova ( P izvoznici < 0,001), udaljena metastaza ( P pregled = 0,001), a veći TNM stadij ( P izvoznici < 0,001) u odnosu na nižoj Met pregled mRNA (Tablica 2). Međutim, visoko- susreo pregled mRNA nije pokazala nikakvu povezanost s spolu, mjestu tumora, Lauren klasifikacija i dubina invazije (tablica 2). Pregled

Od 199 sinkronih metastatskih LNS, 119 (59,8% ), 45 (22,6%) 22 (11,1%) 4 (2,0%) i 9 (4,5%) pokazalo je RNA ISH postići 0, 1, 2, 3 i 4, redom. Dakle, 13 slučajeva (6,5%) bili su high Met pregled mRNA. Među 199 parova primarnih i metastatskih lezija, 186 (93,5%) pokazali su suglasne susreo pregled statusa mRNA i 13 (6,5%) nije. Od tih 13 oprečnim slučajeva negativan pretvorbe utvrđeno je u 50% (7/14) od high susreo pregled mRNA primarnih tumora, a pozitivni pretvorbe pronađen je u 3,2% (6/185) od niskog Met pregled mRNA primarni tumori (Tablica 3). pregled

2. MET proteina i status GCN ocjenjuje IHC i SISH Netlogu

Korištenje IHC, 236 (44,1%), 171 (32%) 113 (21,1%) i 15 (2,8%) primarni tumori su postigao 0, 1, 2 i 3, redom. IHC zabiti tri pokazali različita kliničko- značajke, a to MET pretjerana ekspresija grupa je značajno povezana s životnom dobi ( P pregled = .005), veće veličine tumora ( P pregled = 0,009), dubina invazije ( P pregled = 0,05), LN metastaze ( P pregled = 0,018), limfna invazija ( P pregled = 0,026), povećan broj metastatskih limfnih čvorova ( P izvoznici < 0,001), udaljena metastaza ( P pregled = .007), a veći TNM stadij ( P pregled = 0,001). Međutim, MET prekomjerna ekspresija nije pokazao nikakvu povezanost s spolu, mjestu tumora, i Lauren klasifikaciji (tablica S1). Pregled

199 sinkrone metastatskih LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) i 15 (7,5%), pokazalo je IHC rezultat 0, 1, 2 i 3, respektivno. Među 199 parova primarnih i metastatskih lezija, 187 (94,0%) pokazali su suglasne status MET proteina i 12 (6,0%) nije. Od tih 12 oprečnim slučajeva negativan pretvorbe pronađen je u 36,4% (4/11) primarnih tumora s MET prekomjernom ekspresijom, a pozitivni pretvorbe pronađen je u 4,3% (8/188) primarnih tumora bez MET prekomjernom ekspresijom. Pregled

Upotreba SISH, MET pregled GA uočen je u 2,6% (14/535) primarnih tumora. susreo pregled GA pokazala značajnu povezanost s većim veličine tumora ( P pregled = 0,038), limfna invazija ( P pregled = 0,009), povećan broj metastatskih limfnih čvorova ( P izvoznici < 0,001), udaljena metastaza ( P pregled = .005), a veći TNM stadij ( P pregled = 0,002). Međutim, susreo pregled GA nisu pokazali nikakvu povezanost s spolu, mjestu tumora, Lauren klasifikaciji, dubini invazije i metastaziranja LN (Tablica S2). Pregled

3. Korelacija MET status ocjenjuje RNA ISH, IHC i SISH Netlogu

korelacija između susreo pregled mRNA i statusa proteina ocjenjuje RNK ISH i IHC prikazan je u tablici 4. U 535 primarnih tumora, ima je pozitivna korelacija između Met pregled mRNA i proteina izraz (r = 0,398, P izvoznici < 0,001). Sva 7 slučajeva s RNK ISH ocjena 4 pokazala MET proteina ekspresiju. Među 12 slučajeva s RNK ISH postići 3, 5 slučajeva (41,7%) su pokazali IHC ocjenu 3. slučajevima s RNK ISH zabiti 2 pokazao promjenjive IHC rezultate. Slučajevi s RNK ISH rezultat 0 ili 1 nije pokazao MET proteina ekspresiju osim 1 slučaju. Među 10 slučajeva koji pokazuju neusklađenost (tj pozitivno na RNA ISH i negativno u IHC ili obrnuto), 8 pokazala IHC bod 2 ili RNA ISH bodova 2. U 199 metastatskih LNS, tu je dobra pozitivna korelacija između MET
mRNA i proteina izraz (r = 0,462, p izvoznici < 0,001). (Tablica S3) pregled

Osim toga, tu je pozitivna korelacija između Met pregled mRNA izraz i MET
GCN (r = 0,345; P izvoznici < 0,001) (Tablica 4). Među 7 slučajeva sa RNK ISH zabiti 4, 6 (85,7%), pokazalo je MET
GA, a samo jedan slučaj pokazao HP (14,3%). U 12 slučajeva s RNK ISH ocjena 3 pokazao je GA (50%) ili polysomy (50%) od SISH. Slučajevi s RNK ISH ocjena 2 je pokazala različite SISH uzoraka, uključujući GA (5,3%). Niti jedan od slučajeva s RNK ISH rezultat 0 ili 1 pokazali GA. Pregled

Tablica 5 prikazuje rezultate RNA ISH, IHC i SISH primarne GC. Među 535 predmeta, 513 slučajeva (95,9%) bili su negativni i od strane RNA ISH i IHC, a samo 22 slučajeva (4,1%) su pokazali pozitivne rezultate bilo RNA ISH ili IHC. Ovi 22 slučaja izlagao Met pregled, GA (54,5%) ili polysomy (45,5%) od SISH i disomije ili trisomija nikada nije primijetio. U smislu SISH, među 14 slučajeva koji pokazuju GA, 11 slučajeva (78,6%) pokazao je visoku ekspresiju i mRNA i proteina. Među 58 slučajeva koji pokazuju HP, međutim, samo 7 slučajeva (12,1%) pokazao je visoku ekspresiju ili mRNA ili proteina. Među 111 predmeta koji pokazuju LP, samo 3 slučaja (2,7%) pokazao je visoku ekspresiju mRNA. Sve 352 slučajeva koji pokazuju disomiju ili trisomijom izlagao negativne rezultate i od strane RNA ISH i IHC. Pregled

4. Prognostički implikacije MET status u primarnih i metastatskih lezija

High- susreo pregled mRNA u primarnim tumorima ili metastatskim LNS značajno je povezana s lošim OS (primarne tumore, P pregled = 0,002, Slika 3A, metastatski LNS, P izvoznici < 0,001, Slika 3D). U primarnim tumorima s niskim Met pregled mRNA, bolesnici s pozitivnim konverzije pokazali lošiji OS od onih bez pretvorbe ( P pregled = 0,011, Slika 3F). U primarni tumori visokotlano Met pregled mRNA, bolesnici s negativnim konverzije pokazao bolju OS od onih bez pretvorbe, ali nije bilo statistički značaj ( P pregled = 0,137, Slika 3F ) pregled

MET prekomjerna ekspresija u primarnim tumorima ili metastatskim LNS je značajno povezana s siromašnih OS (primarne tumore, p pregled = 0,001, Slika 3b;. metastatskih LNS, p Netlogu = 0,024, Slika 3E). U primarnim tumorima bez MET prekomjernom ekspresijom, pozitivna pretvorbe trended prema predviđanju lošeg OS, ali nije bilo statistički značaj ( P pregled = 0,393). U primarnim tumorima s MET prekomjernom ekspresijom, negativni pretvorbe pokazali trend boljih OS nego bez pretvorbe, ali to nije bila statistički značajna ( P pregled = .132). Osim toga, Met pregled GA u primarnim tumorima bila je značajno povezana s lošim OS ( P pregled = 0,005, Slika 3C). Pregled

U multivarijatne analize, high Met pregled mRNA u metastatskih LNS bila samostalna negativan prognostički čimbenik za OS, nakon prilagodbe za dob (< 60 y vs ≥60 y), Lauren klasifikacija (crijevna vrsta u odnosu na difuzni ili mješovitog tipa) i TNM faza (I-II vs III-IV). Omjer opasnost bio 2,27 ( P pregled = 0,007) (Tablica 6). Međutim, MET u metastatskom LNS nije bila statistički značajna prognostički čimbenik po multivarijatne analize, iako je omjer rizika bio je 1,76 ( P pregled = 0,067). Osim toga, Met pregled, GA, high Met pregled mRNA ili proteina prekomjerna ekspresija u primarnom tumoru nije bila statistički značajna prognostički čimbenik by multivarijatne analize (podaci nisu prikazani). Pregled

Rasprava pregled

u ovom istraživanju, pokazali smo da visoka susreo pregled ekspresija mRNA je značajno povezana s nepovoljnim kliničko značajkama i lošom prognozom u velikoj seriji GC pacijenata koji koriste RNK ish metodu. Nadalje, rezultati koji RNA ish su dobro korelira s onima SISH i IHC. Prethodne studije vrednovanja susreo pregled razine mRNA u GC koristi Northern blot testom [8], [22] ili obrnuto lančana reakcija transkripcija-polimeraze (RT-PCR) [8], [14], [23] - [25]. Međutim, većina studija je male veličine uzoraka, a samo neke od njih istražuju njegove kliničke implikacije [22], [24] ili koji se provodi usporedbu s DNA ili status proteina [14], [25]: Kuniyasu et al. prvo studirao MET mRNA ekspresije pomoću analize Northern blot-i su izvijestili da je ekspresija 6.0 kb transkript usko je povezana s pozornice tumora i metastaza LN [22]. Amemiya et al. izvijestio da Stage IV GC bolesnika s metastazama jetre pokazuju višu MET izraz na oba mRNA i proteina razina od faza IV GC pacijenata bez metastaze jetre pomoću RT-PCR i IHC [24]. pregled

Nedavno smo izvijestili da je visoka razina HER2 pregled mRNA je dobro povezana s povećanom ekspresijom proteina i GA usporedbom rezultata od 4 različita in situ bazi metodologija (RNA ISH, IHC, riba i SISH) u 211 GC slučajeva [20]. Isto tako, u ovom istraživanju za MET status, rezultati RNA ISH pokazali prilično dobru korelaciju s onima IHC i SISH. Ovi rezultati podržavaju da je RNA ISH može biti pouzdan test za uzorke FFPE tkiva, iako su potrebne daljnje studije validacije. Pregled

Pokazali smo da Met pregled, GA, visoka Met pregled mRNA i proteina pretjerana ekspresija ocjenjuje SISH, RNK ISH i IHC su vrlo suglasne, a visok status MET na DNA, mRNA i proteina značajno su povezane s lošom prognozom. Ovi rezultati podržavaju da MET pojačana ekspresija je uglavnom zbog povećane MET pregled GCN i taj mehanizam doprinosi agresivnom ponašanju Met pregled onkogena-ovisnik GC. Ipak, bilo je nekoliko slučajeva koji pokazuju nedosljednost među MET
GCN, mRNA i proteina. Mi nagađaju da su tehnički problemi (npr osjetljivosti i specifičnosti probe ili antitijela, a loša kvaliteta mRNK FFPE tkiva) i intratumoralno heterogenost MET status može biti glavni uzroci neslaganja. Međutim, neki biološki mehanizmi mogu biti vezane uz tu nedosljednost. Na primjer, MET ekspresiju bez GA mogu pojaviti kroz transkripcije aktivaciju putem HGF-ovisna autokrinc /parakrine petlje ili drugih signalnih putova [23], [26]. Naprotiv, susreo pregled GA ne povećava proizvod gena. Asaoka et al. izvijestio da je nekoliko GC stanične linije skrivanje susreo pregled GA izrazio protein kao istoj razini kao i druge stanične linije bez GA, ali njihovi tirozin ostataka u domeni kinaze su više fosforiliran [27]. Mehanizmi met aktivaciju i ulogu HGF u GC tek treba razjasniti. Pregled

Poznato je da MET pregled igra važnu ulogu u napredovanju metastatskog raka. Nekoliko studija pokazalo je da MET
GA ili prekomjerna ekspresija bila povezana s LN metastaza [7], [13], [22] ili udaljenih metastaza [13], u GC pacijenata. Osim toga, pokazalo se da primjena inhibitora MET smanjena peritonealnoj širenja GC u modelu ksenografta [23]. Nadalje, Di Renzo et al. nađeno da su stanice raka koje nose MET pregled aktivacija mutacija u metastaziranju glave i vrata skvamoznih stanica su odabrani usporedbom sekvencu gena između primarnog tumora i metastatski limfnog čvora [28]. Međutim, izravna usporedba MET statusu između primarnog tumora i metastaza, nije provedena u velikoj seriji GC. Kada smo u odnosu na izraz status MET između 199 podudaraju primarnih tumora i metastatskih LNS, a ukupna podudarnost je 93,5% i 94% po RNA ISH i IHC, respektivno. Ovi rezultati ukazuju na to da MET izraz status GC je relativno konstantna tijekom metastaze na regionalnim LNS. Međutim, pozitivni pretvorba susreo pregled statusa mRNA je značajno povezana s lošom prognozom po univarijantne i multivarijatne analize. Prema tome, ovi rezultati ukazuju na to da je procjena MET statusa u metastatskih lezija može biti važno predvidjeti prognozu i identificirati dodatne kandidate za MET-ciljane terapije. Pregled

U analizi RNK situ bazi ima nekoliko prednosti u odnosu na 'samljeti i vežu 'analiza poput RT-PCR [19] i primjenjiv je i za kliničku praksu i retrospektivna istraživanja. Štoviše, RNA ISH povoljniji od IHC kada nema prikladan protutijelo, ili kada je ciljna molekula je izlučeni protein. S obzirom na MET Netlogu, ova prednost može biti korisno, jer su HGF-stanice koje proizvode može se vizualizirati u odsječku tkiva pomoću HGF sondu. Međutim, ranjiv stabilnost mRNA tijekom obrade tkiva i veći trošak nego što je IHC su nedostaci RNK ISH metode. Nadamo se da će daljnji tehnički napredak će rješavanje tih ograničenja. Pregled

U ovoj retrospektivnoj studiji, susreo pregled statusa mRNA ocijenjeni od strane RNA ISH dobro korelira s proteinima i GCN ocjenjuje IHC i SISH, odnosno, i Met pregled GA vrlo je saglasan s visokom ekspresijom ili mRNA ili proteina. U analizi preživljavanja, visoku ekspresiju susreo pregled mRNA u primarnim ili metastatskim lezijama, i pozitivno pretvaranje susreo pregled statusa mRNA su statistički značajno povezana s lošom prognozom. Osim toga, susreo pregled statusa mRNA u metastatskih LNS je nezavisni prognostički čimbenik po multivarijatne analize. Naši rezultati pokazuju da je susreli pregled mRNA može biti alternativa marker za identifikaciju Met pregled onkogena-ovisnik GC. Pregled

popratne podatke
tablici S1. pregled doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001 pregled (docx) pregled Tablica S2. pregled doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002 pregled (docx) pregled Tablica S3. pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0111658.s003 pregled (docx) pregled

Priznanja

Mi smo vrlo zahvalni gospođi Hyun Ju park za svoje tehničke podrške