PLOS ONE: Análise do MET Expressão mRNA em cânceres gástrico com o RNA Hibridização In Situ Ensaio: A sua implicação clínica e comparação com imuno-histoquímica e prata Hibridização In Situ

Abstract

Nós investigamos MET
status de expressão do mRNA usando RNA hibridização in situ (ISH) técnica em lesões primários e metastáticos de 535 casos de carcinoma gástrico cirurgicamente ressecados (GC). Foram comparados os resultados com os de imuno-histoquímica e prata hibridização in situ, e examinou a associação com características clínico-patológicas e prognóstico. Entre 535 primário GC, 391 (73,1%) foram marcados 0, 87 (16,3%) foram marcados 1, 38 (7,1%) foram marcados 2, 12 (2,2%) foram marcados três e sete (1,3%) foram pontuadas 4 pela RNA ISH. Alta MET
expressão de mRNA (pontuação ≥3) foi associado a metástases em linfonodos ( P
= 0,014), metástases à distância ( P
= 0,001), e maior estágio TNM ( P Art < 0,001). MET
expressão de mRNA foi correlacionada com a expressão da proteína (r = 0,398; P Art < 0,001) e número de cópias do gene (r = 0,345; P Art <. 001). Os pacientes que apresentam alto MET
mRNA em lesões primários ou metastáticos teve sobrevida global mais curto do que aqueles que apresentaram baixa MET
mRNA (tumores primários, P
= 0,002; linfonodos metastáticos, P Art < 0,001). Os pacientes que mostram a conversão positiva de MET
status de mRNA em linfonodo metastático tinham sobrevida global mais curto do que aqueles com nenhuma conversão ( P
= 0,011). A análise multivariada mostrou que a alta MET
expressão de mRNA em linfonodo metastático foi um fator prognóstico independente para a sobrevida global ( P
= 0,007). Portanto, este estudo sugere que MET
expressão de mRNA avaliada por RNA ISH poderia ser útil como um marcador potencial para identificar MET
GC viciado-oncogene

Citation:. Choi J , Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) Análise do MET
expressão de mRNA em cânceres gástrico com o RNA Hibridização In Situ Ensaio: a sua implicação clínica e comparação com imuno-histoquímica e Silver In Situ A hibridação. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10.1371 /journal.pone.0111658

editor: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, Estados Unidos da América

Recebido: 11 de março de 2014; Aceito: 06 de outubro de 2014; Publicação: 03 de novembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Choi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela Fundação Nacional de Pesquisa do programa de Coreia (NRF) A3 Foresight (http://www.nrf.re.kr). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Durante a última década, o receptor tirosina-quinase (RTK) vias provaram ser alvos de drogas atractivos para terapia antineoplásica [1], e a via de MET é um desses alvos promissores.
MET é um proto-oncogene localizada no locus de 7q31 e codifica uma RTK do factor de crescimento de hepatócitos (HGF) [2], [3]. A regulação apertada da via de HGF /MET que é observada no desenvolvimento e regeneração é perdida no cancro, e como a desregulação ocorre através de múltiplos mecanismos [1]. TEM activação aberrante desempenha um papel importante na sobrevivência de células de cancro, crescimento, angiogénese e metástase em vários cancros, incluindo o de pulmão, de mama, rim, e malignidades do tracto gastrointestinal [4]. No entanto, embora a estratificação dos pacientes de acordo com a expressão ou atividade de MET é importante para o sucesso terapêutico, os métodos para avaliar o nível de expressão ou atividade MET não foram estabelecidos [4].

Para carcinoma gástrico (CG), aberrante activação met tem sido pensado para ser relacionado com um efeito de dosagem de gene [5], e tEM
amplificação de genes (GA) ou a sobre-expressão da proteína tem sido associada com as características agressivas do tumor e /ou pior resultado clínico [6] - [14]. Além disso, MET
GC -amplified ou -overexpressed mostraram resposta ao tratamento com vários inibidores da via de sinalização HGF /MET em estudos pré-clínicos [15] e de fase I de ensaios clínicos [12], [16]. Assim, a inibição MET tem o potencial como uma outra estratégia terapêutica bem sucedida seguindo o receptor do factor de crescimento epidérmico humano 2 (HER2) terapia -targeted em GC avançado. No entanto, estudos anteriores utilizaram vários métodos para identificar GC MET-positivos e demonstraram discrepância na prevalência de MET superexpressão ou amplificação: MET superexpressão variou de 18% a 73,7% em estudos utilizando imuno-histoquímica (IHQ) [7] - [9], [13], [14], [17], MET
número de cópias do gene (GCN) ganho variou de 10% a 21,2% em estudos utilizando quantitativo em tempo real reação em cadeia da polimerase (qPCR) [10], [ ,,,0],11], e MET
GA variou de 2% para 3,9% em estudos usando hibridização fluorescente in situ (FISH) [12], [18] ou prata hibridização in situ (SISH) [13]. Destes métodos, IHC é amplamente usada na prática clínica e o método mais provável de triagem para a detecção de CG MET-positiva. No entanto, uma maior exploração ainda é necessária para encontrar um biomarcador preditivo ou metodologia de ensaio para a terapia de inibição TEM.

Neste estudo, foi realizada uma RNA hibridização in situ (ISH) ensaio usando sondas de oligonucleotídeos de DNA pareadas e pré-amplificador-amplificador sondas -label para visualização [19]. Este método usa, tecidos embebidos em parafina fixadas em formalina (FFPE) e permite a visualização única molécula sob um microscópio de campo brilhante. Em nosso estudo anterior, nós provamos que HER2
expressão de mRNA avaliadas pela RNA ISH foi bem correlacionada com superexpressão da proteína e GA avaliada por IHC e FISH em 211 casos GC [20]. Além disso, mostramos a correlação entre o TEM
GCN e expressão da proteína em estudo anterior [13]. Aqui, nós avaliamos MET
expressão de mRNA usando o método RNA ISH, e compararam os resultados com os de IHC e SISH em uma grande série de GC. Além disso, os parâmetros clínico-patológicas e resultados clínicos de pacientes GC de acordo com foram avaliados MET
status de expressão do mRNA.

Materiais e Métodos

Pacientes e tecido espécimes

Foram coletadas amostras de tecido de arquivamento de pacientes GC que gastrectomia consecutivamente submetidos no Hospital da Universidade Nacional de Seul, Seul, Coreia do Sul, a partir de janeiro de 2004 a dezembro de 2005. Finalmente, 535 amostras de GC primária e 199 amostras de nó síncrona regional de linfa metastático (LN) a partir de 535 pacientes estavam disponíveis para este estudo. As características clinicopatológicas dos pacientes foram examinados através da revisão de prontuários e registros patológicas (Tabela 1). estágio TNM foi classificada de acordo com o sistema da American Joint Committee on Manual de estadiamento do câncer, 7 ^{ª edição. Os resultados clínicos foram acompanhados a partir da data da cirurgia até a morte ou 60 meses.}

Todas as amostras de tecido foram fixados em formalina a 10% tamponada por 24-48 horas e depois embebidos em parafina. tecidos núcleo (2 mm de diâmetro) foram feitas usando um aparelho de trefina (Superbiochips Laboratories, Seoul, Coreia). Para os GCs primárias, a frente de cada invasão tumor primário foi seleccionado. Linfonodos metastáticos foram submetidos ao arranjos de tecidos, mas os casos com micrometástases foram excluídos. Total de blocos de microarranjos 22 tecido que continham até 60 núcleos foram construídos.

Ethical declaração

Todos os espécimes humanos foram obtidos durante a cirurgia terapêutica. Os participantes não forneceu o consentimento por escrito para participar neste estudo. O estudo retrospectivo foi realizada utilizando as amostras sobre as prateleiras depois do diagnóstico patológico, e todas as amostras foram anónimos antes do estudo. Nossa IRB (Hospital Universidade Nacional de Seul) aprovou este estudo retrospectivo sob a condição de o anonimização (Referência: H-1006-035-320).

RNA ISH

Para detecção in situ de TEM
ARNm, o kit de ensaio de 2,0 RNAscope FFPE (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, EUA) foi utilizado de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, de 2 a 3 ^ m de espessura secções de tecido FFPE foram desparafinadas, aquecida, tratada por protease, e hibridado com sonda a 40 ° C durante 2 horas (a sequência de referência, NM_001127500; sonda da região, 1236-2257). Após a lavagem e a amplificação, 3, 3'-diaminobenzidina foi adicionado para a detecção de ARN alvo. Os núcleos foram contrastadas com hematoxilina. A coloração positiva foi indicado por pontos puntiformes marrons no núcleo e /ou citoplasma. MET
níveis de expressão de mRNA foram categorizados em 5 graus de acordo com a diretriz de pontuação do fabricante: marcar 0, sem manchas ou < 1 ponto por célula; escore 1, 1-3 pontos por célula (visíveis em 20-40 ×); marcar 2, 4-10 pontos por celular e nenhum ou muito poucos conjuntos de pontos (visíveis em 20-40 ×); escore 3, > 10 pontos por celular e < células positivas 10% têm conjuntos de pontos (visíveis a 20 ×); pontuação 4, > 10 pontos por célula e > 10% de células positivas, têm grupos de pontos (visíveis a 20 ×) (Figura 1). As sondas para UBC
(ubiquitina C) e dapB
(um gene bacteriano) foram usadas como controlo positivo e negativo, respectivamente. As amostras foram consideradas adequadas quando os sinais UBC
mRNA foram facilmente visível sob uma lente objetiva de 10x e dapB
sinal não era visível.

IHC e SISH

coloração imuno-histoquímica para MET foi realizada com anti-total MET (SP44) coelho anticorpos primários monoclonais (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, EUA). Um imunohistoquímica automática (XT de referência, Ventana Medical Systems) foi utilizado de acordo com as instruções do fabricante. imunocoloração TEM foi marcado com as diretrizes HercepTest de pontuação para GC (Dako, Glostrup, Dinamarca): marcar 0, nenhuma coloração da membrana ou coloração da membrana em < 10% das células tumorais; escore 1, quase imperceptível coloração da membrana fraco /parcial em > 10% das células tumorais; pontuação 2, fraco de coloração moderada de toda a membrana em > 10% de células tumorais; escore 3, forte coloração de toda a membrana em >. 10% das células tumorais (Figura 2)

ensaio SISH Dual-cor foi realizada com INFORM sonda de DNA MET e informar cromossomo 7 sonda (Ventana Medical Systems) num valor de referência XT Ventana seguindo os protocolos do fabricante. Os sinais foram enumerados em 40 núcleos tumorais por núcleo, e TEM
estado do gene foi classificado em 6 grupos, utilizando os critérios da Universidade do Colorado Cancer Center para o gene do receptor do factor de crescimento epidérmico [21] (Figura 2).

a análise estatística

o χ ^{2 ou teste exato de Fisher foi usado para testar a associação entre o estado MET e fatores clínico-patológicas. O Student t
-test foi utilizado para comparar as médias de variáveis ​​contínuas. O teste de correlação de Spearman foi utilizado para avaliar a relação entre a RNA resultados ish e IHC ou resultados sish. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar a sobrevida global (OS), e as diferenças do sistema operacional entre os grupos com estatuto TEM diferentes foram comparadas por meio do teste de log-rank. A análise multivariada foi realizada utilizando o modelo de riscos proporcionais de Cox proporção. A análise dos dados foi realizada usando SPSS versão 20.0 (SPSS, Chicago, IL, EUA), e os resultados foram considerados significativos quando P
. < 0,05}

Resultados

1. MET
status de mRNA avaliada por RNA ISH

De 535 tumores primários, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) e 7 ( 1,3%) mostrou ARN ISH marcar 0, 1, 2, 3, e 4, respectivamente. Quando comparamos os resultados de RNA ISH com dados clínico-patológico, incluindo a sobrevivência, e analisaram os resultados de RNA ISH com dados de IHC e sish, os grupos de pontuação 3 e 4 apresentaram características distintas. Portanto, considerada o marcador em 3 e 4 como de alta MET
grupo mRNA, eo total de 19 casos (3,5%) pertencia à alta MET
mRNA.

High - MET
mRNA foi associado com idade mais avançada ( P
= 0,002), o tamanho do tumor maior ( P
= 0,006), LN metástase ( P
= 0,014), invasão linfática ( P Art < 0,001), aumento do número de linfonodos metastáticos ( P Art < 0,001), metástases à distância ( P
= 0,001) e maior fase TNM ( P Art < 0,001), quando comparado com baixo teor MET
mRNA (Tabela 2). No entanto, de alta MET
mRNA não mostrou qualquer associação com sexo, localização do tumor, classificação Lauren, e profundidade de invasão (Tabela 2).

de 199 linfonodos metastáticos síncronos, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) e 9 (4,5%) mostrou marcar ARN ISH 0, 1, 2, 3, e 4, respectivamente. Portanto, 13 casos (6,5%) eram de alto MET
mRNA. Entre 199 pares de lesões primários e metastáticos, 186 (93,5%) mostraram concordantes MET
status de mRNA e 13 (6,5%) não o fez. Destes 13 casos discordantes, conversão negativo foi encontrado em 50% (7/14) de alta MET
tumores primários de mRNA, e conversão positiva foi encontrada em 3,2% (6/185) de baixa TEM
mRNA tumores primários (Tabela 3).

2. proteína MET e estado GCN avaliada por IHC e sish

Usando IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) e 15 (2,8%) tumores primários foram marcados 0, 1, 2 e 3, respectivamente. IHC marcar 3 mostrou características clínico-patológicas distintas, e este grupo superexpressão MET foi significativamente associada com idade mais avançada ( P
= 0,005), maior tamanho do tumor ( P
= 0,009), profundidade de invasão ( P
= .05), LN metástase ( P
= 0,018), invasão linfática ( P
= 0,026), aumento do número de linfonodos metastáticos ( P Art < 0,001), metástases à distância ( P
= 0,007) e maior fase TNM ( P
= 0,001). No entanto, MET superexpressão não mostrou qualquer associação com sexo, localização do tumor, e classificação Lauren (Tabela S1).

de 199 linfonodos síncronos metastáticos, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) e 15 (7,5%) mostrou marcar IHC 0, 1, 2 e 3, respectivamente. Entre 199 pares de lesões primários e metastáticos, 187 (94,0%) apresentaram status de proteína MET concordante e 12 (6,0%) não o fez. Destes 12 casos discordantes, a conversão negativa foi encontrada em 36,4% (4/11) de tumores primários com MET superexpressão e conversão positiva foi encontrada em 4,3% (8/188) dos tumores primários sem MET superexpressão.

Usando SISH, MET
GA foi observada em 2,6% (14/535) dos tumores primários. MET
GA mostraram associação significativa com o tamanho do tumor maior ( P
= 0,038), invasão linfática ( P
= 0,009), aumento do número de linfonodos metastáticos ( P Art < 0,001), metástases à distância ( P
= 0,005) e maior fase TNM ( P
= 0,002). No entanto, MET
GA não mostrou qualquer associação com sexo, localização do tumor, classificação Lauren, profundidade de invasão e metástases LN (Tabela S2).

3. Correlação entre estado MET avaliadas pela RNA ISH, IHC e SISH

A correlação entre a MET
mRNA e estado proteína avaliada pela RNA ISH e IHC é apresentado na Tabela 4. Em 535 tumores primários, há foi uma correlação positiva entre o MET
expressão de mRNA e proteína (r = 0,398, P Art < 0,001). Todos os 7 casos com RNA ISH marcou 4 mostrou superexpressão da proteína MET. Entre 12 casos com RNA ISH marcar 3, 5 casos (41,7%) apresentaram pontuação IHC 3. Os casos com RNA ISH marcar 2 exibiram escores IHC variáveis. Os casos com RNA ISH marcar 0 ou 1 não mostrou MET superexpressão da proteína com exceção de 1 caso. Entre 10 casos que mostram discrepância (ou seja, positivo em RNA ISH e negativo em IHC ou vice-versa), 8 apresentaram pontuação IHC 2 ou RNA ISH marcar 2. Em 199 linfonodos metastáticos, houve uma boa correlação positiva entre o MET
mRNA e expressão de proteína (r = 0,462, P Art < 0,001). (Tabela S3)

Além disso, houve uma correlação positiva entre o MET
mRNA expressão e MET
GCN (r = 0,345; P Art < 0,001) (Tabela 4). Entre os 7 casos com RNA ISH marcar 4, 6 (85,7%) apresentaram MET
GA e apenas um caso mostrou HP (14,3%). Os 12 casos com RNA ISH marcou 3 mostrou GA (50%) ou polissomia (50%) por SISH. Os casos com RNA ISH marcou 2 mostrou vários padrões sish incluindo GA (5,3%). Nenhum dos casos com RNA ISH marcar 0 ou 1 mostrou GA.

A Tabela 5 resume os resultados de RNA ISH, IHC e SISH de GC primário. Entre os 535 casos, 513 casos (95,9%) foram negativas em ambos RNA ISH e IHC, e apenas 22 casos (4,1%) apresentaram resultados positivos por qualquer RNA ISH ou IHC. Estes 22 casos exibiu MET
GA (54,5%) ou polissomia (45,5%) por SISH e dissomia ou trissomia nunca foi respeitado. Em termos de SISH, entre os 14 casos que mostram GA, 11 casos (78,6%) apresentaram expressão elevada de ambos os ARNm e proteína. Entre os 58 casos que mostram HP, no entanto, apenas sete casos (12,1%) apresentaram expressão elevada de ambos os ARNm ou proteína. Entre os 111 casos que mostram LP, apenas 3 casos (2,7%) apresentaram alta expressão de mRNA. Todos os 352 casos que mostram dissomia ou trissomia apresentaram resultados negativos por ambos RNA ISH e IHC.

4. implicações de prognóstico do estado se reuniram em lesões primários e metastáticos

Alta MET
mRNA em tumores primários ou linfonodos metastáticos foi significativamente associada com a má OS (tumores primários, P
= .002, Figura 3A; linfonodos metastáticos, P Art < 0,001, Figura 3D). Nos tumores primários com baixa MET
mRNA, os pacientes com conversão positiva mostraram pior OS do que aqueles com nenhuma conversão ( P
= 0,011, Figura 3F). Nos tumores primários com alta MET
mRNA, os pacientes com conversão negativo apresentaram melhor OS que aqueles com nenhuma conversão, mas não houve significância estatística ( P
= 0,137, Figura 3F )

MET superexpressão em tumores primários ou linfonodos metastáticos foi significativamente associada com a má OS (tumores primários, P
= 0,001, Figura 3B;. linfonodos metastáticos, P
= 0,024, Figura 3E). Nos tumores primários sem MET superexpressão, conversão positiva tenderam em direção a previsão de má OS, mas não houve significância estatística ( P
= 0,393). Nos tumores primários com MET superexpressão, conversão negativo mostraram uma tendência de melhores OS que nenhuma conversão, mas não alcançou significância estatística ( P
= 0,132). Além disso, MET
GA em tumores primários também foi significativamente associada com mau OS ( P
= 0,005, Figura 3C).

Na análise multivariada, de alta MET
mRNA em linfonodos metastáticos foi um fator prognóstico negativo independente para OS, após ajuste para idade (< 60 y vs. ≥60 y), a classificação Lauren (tipo intestinal vs. difuso ou de tipo misto) e TNM fase (I-II vs III-IV). A taxa de risco foi de 2,27 ( P
= 0,007) (Tabela 6). No entanto, MET superexpressão em linfonodos metastáticos não foi um fator prognóstico estatisticamente significativa pela análise multivariada, embora a taxa de risco foi 1,76 ( P
= 0,067). Além disso, MET
GA, de alta MET
mRNA ou superexpressão da proteína no tumor primário não foi um fator prognóstico estatisticamente significativa pela análise multivariada (dados não mostrados).

discussão

no presente estudo, demonstramos que a alta MET
expressão de mRNA foi significativamente associada com características clínico-patológicas adversas e mau prognóstico em uma grande série de pacientes GC utilizando o método RNA ISH. Além disso, os resultados de ARN ISH foram bem correlacionados com os dos SISH e IHC. Os estudos anteriores avaliando MET
níveis de ARNm em GC utilizado o ensaio de mancha de Northern [8], [22] ou reacção em cadeia de polimerase (RT-PCR) inverter [8], [14], [23] - [25]. No entanto, a maioria dos estudos tiveram amostras de pequenas dimensões, e apenas alguns deles investigou suas implicações clínicas [22], [24] ou comparação realizada com DNA ou proteína estatuto [14], [25]: Kuniyasu et al. em primeiro lugar, estudou a expressão de RNAm MET usando a análise de Northern-blot, e eles relataram que a expressão do transcrito de 6,0 kb foi estreitamente relacionado com o estágio do tumor e LN metástase [22]. Amemiya et ai. relataram que os pacientes Stage IV GC com metástase hepática mostraram maior expressão MET em ambos os níveis de mRNA e proteína do que os pacientes em estágio IV GC sem metástase hepática usando RT-PCR e IHQ [24].

Recentemente, relatou que os níveis elevados de HER2
mRNA foi bem correlacionada com superexpressão da proteína e GA, comparando os resultados de quatro diferentes em metodologias baseadas situ (ISH RNA, IHC, peixe e sish) em 211 casos GC [20]. Da mesma forma, neste estudo para o estado MET, os resultados da RNA ISH mostrou bastante boa correlação com os de IHC e SISH. Estes resultados confirmam que RNA ISH pode ser um ensaio fiável para amostras de tecido FFPE, embora sejam necessários novos estudos de validação.

Nós demonstramos que MET
GA, alta MET
mRNA e superexpressão da proteína avaliada por SISH, RNA ISH e IHC foram altamente concordantes, e elevado estatuto TEM no DNA, mRNA e proteína foram significativamente associados com mau prognóstico. Estes resultados suportam que o TEM superexpressão é principalmente devido ao aumento da TEM
GCN e este mecanismo contribui para o comportamento agressivo de MET
GC viciado-oncogene. No entanto, houve alguns casos que mostram inconsistência entre o MET
GCN, mRNA e os níveis de proteína. Nós especulamos que problemas técnicos (por exemplo, de sensibilidade e especificidade da sonda ou anticorpo, e má qualidade mRNA de tecidos FFPE) e heterogeneidade intratumoral do estado MET podem ser as principais causas dessa discrepância. Contudo, alguns mecanismos biológicos também podem estar relacionados com esta discrepância. Por exemplo, se reuniu superexpressão sem GA pode ocorrer através de activação da transcrição via dependente de HGF autócrinos /parácrinos laços ou outras vias de sinalização [23], [26]. Pelo contrário, TEM
GA pode não aumentar o produto do gene. Asaoka et ai. relatou que algumas linhas celulares GC abrigar MET
GA expressa a proteína como mesmo nível que outras linhas celulares sem GA, mas os seus resíduos de tirosina no domínio quinase foram mais fosforilada [27]. Os mecanismos de activação MET e o papel do HGF em GC permanecem por ser elucidados.

é bem conhecido que TEM
desempenha um papel importante na progressão do cancro metastático. Vários estudos mostraram que MET
GA ou a sobre-expressão foi associada com LN metástase [7], [13], [22] ou metástases à distância [13], em pacientes do GC. Além disso, foi mostrado que a administração de inibidor de MET reduzida difusão peritoneal de GC num modelo de xenoenxerto [23]. Além disso, Di Renzo et ai. descobriram que as células cancerosas que transportam TEM
mutações ativadoras foram selecionados durante a propagação metastática da cabeça e pescoço carcinoma de células escamosas, comparando a sequência de genes entre tumor primário e linfonodo metastático [28]. No entanto, a comparação directa do estado MET entre tumor primário e metástases não foi realizado em uma grande série de GC. Quando comparamos o status de expressão MET entre 199 tumores primários combinados e linfonodos metastáticos, e a concordância geral foi de 93,5% e 94% em RNA ISH e IHC, respectivamente. Estes resultados sugerem que o status do GC expressão MET é relativamente constante durante a metástase para linfonodos regionais. No entanto, a conversão positiva de MET
status de mRNA foi significativamente associada com mau prognóstico por análise uni e multivariada. Portanto, estes resultados sugerem que a avaliação do estado de TEM em lesões metastáticas pode ser importante para o prognóstico e para identificar candidatos adicionais para a terapia de MET-alvo.

Na análise de RNA-based in situ tem várias vantagens sobre o 'moagem e bind 'análise tais como RT-PCR [19] e é aplicável tanto para a prática clínica e investigação retrospectiva. Além disso, o ARN ISH é mais favorável do que o IHC quando não há anticorpo adequado ou quando a molécula alvo é a proteína secretada. Em relação ao MET
, esta vantagem pode ser útil porque as células HGF produtoras podem ser visualizados em uma secção de tecido utilizando a sonda HGF. No entanto, a estabilidade do mRNA vulneráveis ​​durante o processamento de tecidos e de custo mais elevado do que o de IHC são os inconvenientes do método de ARN ISH. Esperamos que um maior aperfeiçoamento técnico irá resolver essas limitações.

Neste estudo retrospectivo, MET
status de mRNA avaliadas pela RNA ISH está bem correlacionada com proteína e GCN avaliada por IHC e SISH, respectivamente, e MET
GA é altamente concordante com alta expressão de ambos os mRNA ou proteína. Na análise de sobrevivência, alta expressão de MET
mRNA em lesões primários ou metastáticos, e conversão positiva de MET
status de mRNA estão significativamente associados com mau prognóstico. Além disso, MET
status de mRNA em linfonodos metastáticos é um fator prognóstico independente de análise multivariada. Nossas descobertas indicam que MET
mRNA pode ser um marcador alternativo para identificar o MET
GC viciado-oncogene.

Informações de Apoio
Tabela S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s001
(DOCX)
Tabela S2.
doi: 10.1371 /journal.pone.0111658.s002
(DOCX)
Tabela S3.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0111658.s003
(DOCX)

Reconhecimentos

Estamos muito gratos à Senhora Hyun Ju Park por seu suporte técnico

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