PLoS ONE: analizė RER iRNR raiška skrandžio vėžio Naudojant RNR in situ hibridizacijos mėginys: jo klinikinės POVEIKIS ir palyginimus su imunohistocheminis ir sidabro situ hibridizacijos

Anotacija

Mes tyrėme, MET
iRNR raiška statusas naudojant RNR in situ hibridizacijos (ISH) technika pradinėse ir metastazavusiu pakitimų 535 chirurginiu rezekcijos skrandžio karcinoma (GC) atvejais. Mes palygino rezultatus su imunohistocheminiu ir sidabro in situ hibridizacijos ir išnagrinėjo asociacijos clinicopathologic charakteristikas ir prognozes. Tarp 535 pirminės GCS, 391 (73,1%) buvo gavo 0, 87 (16,3%) buvo įmetė 1, 38 (7,1%) pelnė 2, 12 (2,2%) buvo pelnyti 3 ir 7 (1,3%) buvo pelnyti 4 d RNR ISH. Aukštos MET
iRNR raiška (rezultatas ≥3) buvo susijęs su limfmazgių metastazių ( P
= 0,014), tolimos metastazės ( P
= 0,001) ir didesnis TNM stadija ( P
< 0,001). MET
iRNR raiška koreliavo su baltymų raiškos (r = 0,398; P
< 0,001) ir genų kopijų skaičiaus (r = 0,345; P
<. 001). Pacientų, kurių aukštos Met
iRNR pirminės ar metastazavusio pažeidimų turėjo trumpesnį bendrą išgyvenamumą nei tie, rodantį mažo Met
iRNR (pirminius navikus P
= 0,002; metastaziniai limfmazgiai P
< 0,001). Pacientų, kurių teigiamą konversija MET
iRNR statusą metastazavusiu limfmazgiuose buvo trumpesnis bendrą išgyvenamumą nei tie, be konvertavimo ( P
= 0,011). Daugiamatė analizė parodė, kad didelė MET
iRNR raiška metastazavusiu limfmazgiuose buvo nepriklausoma prognostinis faktorius bendro išgyvenamumo ( P
= .007). Todėl šis tyrimas rodo, kad MET
iRNR raiška vertinama RNR ISH gali būti naudinga, nes potencialus žymeklį nustatyti MET
onkogeno priklausomas GC

Citation:. Choi J , Lee, jis Kim MA Jang BG Lee SS Kim WH (2014) analizė, MET
iRNR raiška skrandžio vėžio Naudojant RNR in situ hibridizacijos mėginys: jo klinikinės POVEIKIS ir palyginimus su imunohistocheminis ir sidabro in situ hibridizacija. PLoS ONE 9 (11): e111658. Doi: 10,1371 /journal.pone.0111658

redaktorius: Svetlana Pack CCR, Nacionalinio vėžio instituto, Nacionalinio sveikatos instituto Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Kovo 11, 2014 m Priėmė: Vasaris 6, 2014 m Paskelbta: Lapkričio 3, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Choi et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė Nacionalinės mokslinių tyrimų fondo Korėja (NRP) A3 prognozavimo programą (http://www.nrf.re.kr). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Per pastarąjį dešimtmetį, tirozino kinazės receptorių (TKR) keliai pasirodė patrauklus narkotikų tikslai priešvėžinio gydymo [1], ir RER būdas yra vienas iš šių perspektyvių tikslų. RER
yra Proto-onkogeno įsikūręs 7q31 lokuso ir koduoja RTK už hepatocitų augimo faktoriaus (HGF) [2], [3]. Griežta reguliavimas HGF /RER keliu, kad būtų laikomasi kuriant ir regeneracijai prarandama vėžio, ir dėl tokio reguliavimo panaikinimo atsiranda per kelis mechanizmus [1]. Netipinė RER aktyvacijos vaidina svarbų vaidmenį vėžio ląstelių išlikimo, augimo, angiogenezę bei metastazių įvairių vėžio, įskaitant plaučių, krūties, inkstų ir virškinimo traktui piktybinių navikų [4]. Vis dėlto, nors pacientas stratifikacija pagal RER išraiškos ar veikla yra svarbi terapinė sėkmės, nebuvo nustatytos vertinimo dėl RER išraiškos ar veiklos lygį metodai [4].

skrandžio karcinoma (GC), netipinė MET aktyvacijos buvo manoma, kad būti susijęs su genų vaisto poveikį [5], ir MET
geno amplifikacija (GA) arba baltymų raiška buvo susijęs su agresyviais vėžinių savybių ir /ar blogiau klinikinė rezultatas [6] - [14]. Be to, MET
-amplified arba -overexpressed GC parodė atsaką į gydymą su keliais inhibitoriais HGF /RER signalinio kelio Ikiklinikinių tyrimų [15], ir aš fazės klinikinių tyrimų [12], [16]. Taigi, RER slopinimas turi potencialą, kaip ir kitas sėkmingo gydymo strategija tokia žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptoriaus 2 (HER2) -targeted terapija Išplėstinė GC. Tačiau ankstesni tyrimai naudojami įvairūs būdai nustatyti RER-teigiamas GC ir parodė neatitikimas dėl RER raiškos ar amplifikacija paplitimas: met raiška svyravo 18% iki 73,7% tyrimuose naudojant imunohistocheminis (IHC) [7] - [9], [13], [14], [17], MET
geno kopija numeris (GCN) pelnas siekė 10% iki 21,2% tyrimuose naudojant kiekybinį realaus laiko polimerazės grandininė reakcija (qPCR) [10], [ ,,,0],11], ir MET
GA svyravo nuo 2% iki 3,9% tyrimuose naudojant chromosomų dažymas (žuvis) [12], [18] arba sidabro in situ hibridizacijos (SISH) [13]. Iš šių metodų, IHC yra plačiai naudojamas klinikinėje praktikoje ir labiausiai tikėtina, atrankos metodas aptikti Met-teigiamas GC. Tačiau toliau tirti vis dar reikia rasti nuspėjimo biologinis ar tyrimų metodologiją RER slopinimo terapijos.

Šiame tyrime mes atliko RNR in situ hibridizacijos (ISH) Analizės naudojant suporuotas DNR oligonukleotidinius zondai ir stiprintuvu stiprintuvas -Pažymėkite zondai vizualizacija [19]. Šis metodas naudoja formalinu fiksuotos, parafino-embedded (FFPE) audinių ir leidžia vieno molekulės vizualizacija pagal šviesus lauko mikroskopu. Mūsų ankstesniame tyrime, mes įrodė, kad HER2
iRNR raiška įvertinta RNR ISH buvo gerai koreliuoja su baltymų raiškos ir GA vertino IHC, ir žuvys, 211 GC atvejais [20]. Be to, mes parodėme tarp koreliaciją, MET
GCN ir baltymų raiškos ankstesniame tyrime [13]. Čia mes vertinami MET
iRNR raiška naudojant RNR ish metodą, ir lyginant rezultatus su tų IHC ir SISH didelėje serijos GC. Be to, , buvo vertinami MET
iRNR raiška statusas clinicopathologic parametrai ir klinikiniai rezultatai GC pacientams pagal.

Medžiagos ir metodai

Pacientai ir audinių mėginiai

Mes surinkome archyvinius audinių pavyzdžius GC pacientams, kurie iš eilės po to atlikta skrandžio pašalinimas Seulo nacionalinio universiteto ligoninė, Seulo, Pietų Korėja, nuo 2004 metų sausio iki gruodžio 2005 m Galiausiai, 535 mėginiai pirminės GC 199 mėginiai sinchroninio regioninio metastazavusiu limfmazgiuose (LN) nuo 535 pacientai buvo galima šiame tyrime. Į clinicopathologic charakteristikos pacientų buvo nagrinėjami persvarstant medicinos diagramas ir patologinių įrašus (1 lentelė). TNM stadija buvo klasifikuojami pagal Amerikos jungtinio komiteto sistemos Vėžys sustojimo vadove, 7 ^{-osios numeryje. Klinikiniai rezultatai buvo stebimi nuo operacijos dienos iki mirties arba 60 mėnesių.}

Visi audinio mėginiai buvo nustatytas 10% buferiniame formalino 24-48 valandas ir tada įterpti į parafiną. Pagrindiniai audiniai (2 mm skersmens) buvo imtasi naudojant trephine aparatu (Superbiochips Laboratories, Seulas, Pietų Korėja). Dėl pirminių GCS, buvo pasirinktas invazija prieš kiekvieną pirminio naviko. Metastazavusiu LNS buvo atliktas audinių masyvo tačiau atvejai su micrometastasis buvo atmesti. Iš viso 22 audinių mikrogardeliq blokai kuriame yra iki 60 branduolių buvo pastatyti.

Etikos pareiškimas

buvo gauti visi žmogaus mėginiai metu terapinės operacijos. Dalyviai nepateikė rašytinio sutikimo dalyvauti šiame tyrime. Retrospektyvinis tyrimas buvo atliktas naudojant mėginius per lentynos po patologinio diagnozę, ir visi mėginiai buvo anonimiški prieš tyrimą. Mūsų IRB (Seulo nacionalinio universiteto ligoninė) patvirtino šį retrospektyvinę studiją prie anonimizavimą (Nuoroda: H-1006-035-320) būklės.

RNR ISH

Nes situ aptikti MET
iRNR, The RNAscope FFPE 2,0 tyrimas rinkinys ( "Advanced Cell diagnostika, Hayward, CA, JAV) buvo naudojama pagal gamintojo instrukcijas. Trumpai, nuo 2 iki 3-mkm storio FFPE audinio dalys buvo deparaffinized, šildomas, apdoroti su proteaze, ir hibridizuoti su zondo esant 40 ° C temperatūroje 2 valandas (nuoroda sekos, NM_001127500; zondas regionas, 1236-2257). Po plovimo ir amplifikacijos, 3, 3'-diaminobenzidinas buvo įtraukta aptikti tikslinės RNR. Branduoliai buvo counterstained hematoksilinu. Teigiamas dažymo nurodė rudos taškinis taškais branduolio ir /ar citoplazmoje. Met
iRNR raiška koncentracija buvo suskirstyti į 5 klases pagal gamintojo balais gairės: rezultatas 0, ne dažymo ar < 1 taškas už ląstelės; Rezultatas tapo 1, 1-3 taškus per langelį (matomas 20-40 ×); Rezultatas tapo 2, 4-10 dots per ląstelių ir nėra arba labai mažai dot grupes (matomas 20-40 ×); Rezultatas tapo 3, > 10 taškus per langelį ir < 10% teigiamų ląstelės turi dot grupes (mato esant 20 ×); Rezultatas tapo 4, > 10 taškus per langelį ir > 10% teigiamų ląstelės turi dot grupes (mato 20 ×) (1 paveikslas). Už BMS
(ubikvitino C) ir dapB
(bakterijų genų) zondai buvo panaudoti kaip teigiamus ir neigiamus kontrolinius, atitinkamai. Mėginiai buvo laikomas pakankamu, jei UBC
iRNR signalai buvo lengvai matomas 10x objektyvu ir dapB
signalas nebuvo matoma.

IHC ir SISH

imunohistocheminį dažymo RER buvo atliktas su anti-visų RER (SP44) triušių monokloninių pirminių antikūnų (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, JAV). Automatinis immunostainer (Benchmark XT Ventana Medical Systems) buvo naudojama pagal gamintojo instrukcijas. MET imunodažymu pelnytas su HercepTest balais gairių GC (DaKo, Glostrup, Danija): Rezultatas tapo 0, jokio membranos nusidažo arba membranos nusidažo < 10% vėžinių ląstelių; rezultatas 1, silpnumą /vos pastebimas dalinis membranos nusidažo į > 10% vėžinių ląstelių; komandai 2, silpnas ar vidutinio stiprumo dėmių; visą membranos > 10% naviko ląstelių; Rezultatas tapo 3, stipri dažymo visos membrana >. 10% vėžinių ląstelių (2 paveikslas)

Dviejų spalvų SISH tyrimas buvo atliktas su PRANEŠTI RER DNR zondą ir informuoti Chromosomų 7 zondas (Ventana Medical Systems) ant Ventana Benchmark XT pagal gamintojo protokolus. Signalai buvo išvardyti 40 naviko branduolių per šerdį, ir MET
genas statusas buvo suskirstyti į 6 grupes, naudojant Kolorado universitetas Cancer Center kriterijus epidermio augimo faktoriaus receptoriaus geno [21] (2 pav.)

Statistinė analizė

χ ^{2 bandymas arba tiksli Fišerio testas buvo naudojamas testas tarp RER statuso ir clinicopathologic veiksnių asociacija. Studento , T
-test buvo naudojamas palyginti ištisiniu kintamųjų. Ietininkas koreliacijos testas buvo naudojamas įvertinti tarp RNR ish rezultatus ir IHC ar SISH rezultatus santykius. Kaplan-Meier metodas buvo naudojamas siekiant įvertinti bendrą išgyvenimą (OS), ir OS skirtumai tarp grupių su skirtingu RER statuso buvo lyginami naudojant log-rank testą. Daugiamatė išgyvenamumo analizė buvo atlikta naudojant Cox proporcinės rizikos santykis modelį. Duomenų analizė buvo atlikta naudojant SPSS 20.0 versiją (SPSS, Čikaga, IL, JAV), o rezultatai buvo laikomi reikšmingais, kai P
. ≪ 0,05}

Rezultatai

1. MET
iRNR statusas vertinamas RNR ish

535 pirminių navikų, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) ir 7 ( 1,3%) parodė, RNR ISH tikslo 0, 1, 2, 3, ir 4, atitinkamai. Kai mes palyginti RNR ISH rezultatus su clinicopathologic duomenų, įskaitant išlikimą ir analizuojami rezultatai RNR ISH su IHC ir SISH duomenimis, 3, 4 balo ir grupės parodė skirtingas funkcijas. Todėl mes laikomas rezultatą 3 ir 4 kaip aukštos MET
iRNR grupė, ir iš viso 19 atvejai (3,5%) priklausė aukštos, MET
iRNR.

Aukšto - MET
iRNR buvo susijęs su vyresnio amžiaus ( P
= .002), didesnis naviko dydį ( P
= 0,006), LN metastazių ( P
= 0,014), limfinės invazija ( P
< 0,001), padidėjęs skaičius metastazių limfmazgiuose ( P
< 0,001), tolimos metastazės ( P
= 0,001), ir didesnis TNM stadija ( P
< 0,001), lyginant su nedidelių, MET
iRNR (2 lentelė). Tačiau aukštos MET
iRNR neparodė asociacijos lyties, naviko vietą, Lauren klasifikacijos, o invazijos gylio (2 lentelė).

199 sinchroninių metastazavusiu LNS, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) ir 9 (4,5%) parodė, RNR ISH tikslo 0, 1, 2, 3, ir 4, atitinkamai. Todėl 13 atvejų (6,5%) buvo aukštos MET
iRNR. Tarp 199 porų pirminių ir metastazavusiu pažeidimų, 186 (93,5%) parodė, sutinkantis, MET
iRNR statusą ir 13 (6,5%) nebuvo. Iš šių 13 prieštaringo atvejais neigiamas konversija buvo rasta 50% (7/14), iš aukšto Met
mRNR pirminių navikų, ir teigiamas konversija buvo rasta 3,2% (6/185) iš mažo Met
iRNR pirminiai navikai (3 lentelė).

2. RER baltymų ir GCN statusas vertinamas IHC ir SISH

Naudojant IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) ir 15 (2,8%) buvo pelnyti pirminiai navikai 0, 1, 2 ir 3, atitinkamai. IHC rezultatas 3 parodė skirtingus clinicopathologic funkcijų, ir tai RER raiškos grupė buvo reikšmingai susijęs su vyresnio amžiaus ( P
= .005), didesnių naviko dydį ( P
= 0,009), invazija gylio ( P
= 0,05), LN metastazės ( P
= 0,018), limfinės invazija ( P
= 0,026), padidėjęs skaičius metastazių limfmazgiuose ( P
< 0,001), tolimos metastazės ( P
= .007) ir didesnis TNM stadija ( P
= 0,001). Tačiau RER raiškos neparodė asociacijos lyties, naviko vietą, ir Lauren klasifikaciją (lentelė S1).

199 sinchroninius neišplitusios LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) ir 15 (7,5%) parodė, IHC rezultatą į 0, 1, 2 ir 3 punktus, atitinkamai. Tarp 199 porų pirminių ir metastazavusiu pažeidimų, 187 (94,0%) parodė Współbrzmieniowy RER baltymų statusą ir 12 (6,0%) ar ne. Iš šių 12 prieštaringo atvejais neigiamas konversija buvo rasta 36,4% (4/11) pirminių navikų, kuriems taikomas RER raiškos ir teigiamas konversija buvo rasta 4,3% (8/188) pirminių navikų be RER raiškos.

Naudojant SISH MET
GA buvo stebimas 2,6% (14/535) pirminių navikų. MET
GA parodė reikšmingą ryšį su didesniu naviko dydį ( P
= 0,038), limfinės invazijos ( P
= 0,009), padidėjęs skaičius metastazių limfmazgiuose ( P
< 0,001), tolimos metastazės ( P
= .005) ir didesnis TNM stadija ( P
= 0,002). Tačiau MET
GA neparodė asociacijos lyties, naviko vietą, Lauren klasifikavimo, invazijos gylio ir LN metastazių (lentelė S2).

3. Koreliacija RER statuso įvertino RNR ISH, IHC ir SISH

koreliacija tarp MET
mRNR ir baltymų būklę įvertino RNR ISH ir IHC pateikta 4 lentelėje 535 pirminių navikų, yra buvo teigiama koreliacija tarp MET
iRNR ir baltymų raiška (r = 0,398, P
< 0,001). Visi 7 atvejai su RNR ISH rezultatas 4 parodė RER baltymų raiška. Tarp 12 atvejai su RNR ISH rezultatas 3, 5 atvejai (41,7%) parodė, IHC rezultatą 3. atvejais su RNR ISH rezultatas 2 eksponuojami kintamas IHC balus. Atvejai su RNR ISH rezultatas 0 arba 1 neparodė RER baltymų raiška išskyrus 1 atveju. Tarp 10 atvejų, rodančių neatitikimas (ty teigiamas RNR ISH ir neigiamas IHC arba atvirkščiai), 8 parodė IHC rezultatas 2 arba RNR ISH rezultatas 2. 199 metastazavusiu LNS, ten buvo geras teigiama koreliacija tarp RER
iRNR ir baltymų raiška (r = 0,462, p
< 0,001). (lentelė S3)

Be to, ten buvo teigiama koreliacija tarp MET
mRNR išraiška ir RER
GCN (r = 0.345 P
< 0,001) (4 lentelė). Tarp 7 atvejais su RNR ISH rezultatas 4, 6 (85,7%) parodė, RER
GA ir tik vienas atvejis parodė HP (14,3%). 12 atvejų su RNR ISH rezultatas 3 parodė GA (50%) arba polysomy (50%) iki SISH. Atvejai su RNR ISH rezultatas 2 pasireiškė įvairios SISH modelius įskaitant GA (5,3%). Nė vienas iš atvejų su RNR ISH rezultatas 0 arba 1 parodė, GA.

5 lentelė apibendrina RNR ISH, IHC rezultatus ir SISH pirminės GC. Tarp 535 atvejų 513 atvejais (95,9%) buvo neigiami tiek RNR ISH ir IHC, ir tik 22 atvejai (4,1%) parodė teigiamus rezultatus arba RNR ISH ar IHC. Šie 22 atvejai eksponuojami MET
GA (54,5%) arba polysomy (45,5%) iki SISH ir disomy arba trisomija niekada nebuvo pastebėta. Kalbant apie SISH, tarp 14 atvejų, rodančių GA, 11 atvejų (78,6%) eksponuojama aukštą raišką tiek mRNR ir baltymų. Tarp 58 atvejais, rodančių HP, tačiau tik po 7 atvejai (12,1%) eksponuojama aukštą raišką arba mRNR arba baltymo. Tarp 111 atvejų, rodančių LP, tik 3 atvejai (2,7%) eksponuojami aukštos iRNR išraiška. Visi 352 atvejai, rodantys disomy arba trisomija eksponuojami neigiami rezultatai, taikant tiek RNR ISH ir IHC.

4. Prognostiniai pasekmės RER statuso pradinėse ir Metastazės

Aukšto MET
mRNR pirminės navikų ar metastazių LNS buvo reikšmingai susijęs su prasta OS (pirminių navikų P
= 0,002, 3A pav; metastaziniai LNS P
< 0,001, 3D pav.) Per pirminius navikus su mažo MET
mRNR, pacientai su teigiamu konvertavimo parodė blogiau OS nei tie, be konvertavimo ( P
= 0,011, 3F pav.) Pirminės navikai plonu didelio MET
iRNR, pacientai su neigiamu konvertavimo parodė geresnį OS nei tie, be konvertavimo, bet ten buvo ne statistinis reikšmingumas ( P
= 0,137, 3F pav )

RER raiškos pirminės navikų ar metastazių LNS buvo reikšmingai susijęs su prasta OS (pirminių navikų p
= 0,001, 3b pav,. metastazavusiu LNS p
= 0,024, 3E pav.) Be pirminių navikų be RER raiškos, teigiama konversijos tendencijos faktorių link prognozavimas prasta OS, bet ten buvo ne statistinis reikšmingumas ( P
= 0,393). Be pirminių navikų, kuriems taikomas RER raiškos, neigiama konversijos parodė geresnių OS nei jokio konvertavimo tendencija, tačiau jis nepasiekė statistinio reikšmingumo ( P
= .132). Be to, MET
GA pirminių navikų taip pat buvo reikšmingai susijęs su prasta OS ( P
= 0,005, Fig.3C).

Dispersinės analizės duomenimis, aukštos MET
mRNR metastazavusiu LNS buvo nepriklausoma neigiamas prognostinis faktorius OS, pakoregavus pagal amžių (< 60 m vs ≥60 m), Lauren klasifikacija (žarnyno tipas vs difuzinės arba mišraus tipo) ir TNM etapas (I-II vs III-IV). Rizikos santykis buvo 2,27 ( P
= 0,007) (6 lentelė). Tačiau RER ekspresija metastazavusiu LNS nebuvo statistiškai reikšmingas prognostinis faktorius pagal Dispersinės analizės duomenimis, nors rizikos santykis buvo 1,76 ( P
= 0,067). Be to, MET
GA, aukštos MET
iRNR arba baltymų ekspresija pirminio naviko nebuvo statistiškai reikšmingas prognostinis faktorius pagal Dispersinės analizės (duomenys neparodyti).

Diskusijos

Šiame tyrime mes įrodė, kad aukštos MET
iRNR raiška buvo reikšmingai susijęs su nepageidaujamomis clinicopathologic funkcijų ir blogos prognozės plačioje serijos GC pacientams, vartojantiems RNR ish metodą. Be to, RNR ish rezultatai buvo gerai koreliuoja su tų SISH ir IHC. Ankstesni tyrimai vertinant , susitiko
iRNR lygiai GC naudojama Šiaurės blotingo tyrimas [8], [22] arba atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandininė reakcija (PGR) [8], [14], [23] - [25]. Tačiau dauguma tyrimų buvo mažas imties dydžius, ir tik keletas iš jų ištirta jo klinikinės reikšmės [22], [24], arba atliktas palyginimas su DNR arba baltymų statuso [14], [25]: Kuniyasu et al. Pirma studijavo RER iRNR raiška naudojant Šiaurės susilpninimas analizę, ir jie pranešė, kad išraiška 6.0 KB stenograma buvo glaudžiai koreliuoja su naviko stadijos ir LN metastazių [22]. Amemiya ir kt. Pranešama, kad IV etapas GC pacientams, sergantiems kepenų metastazių parodė didesnį RER išraišką tiek mRNR ir baltymų koncentracijos nei IV stadijos GC pacientams be metastazių kepenyse, naudojant RT-PGR ir IHC [24].

Neseniai mes pranešė, kad didelis iš HER2
iRNR buvo gerai koreliuoja su baltymų raiškos ir GA palyginant 4 skirtingų rezultatų situ pagrindu metodikų (RNR ish, IHC, žuvis, ir SISH) 211 GC atvejais [20]. Be to, šiame tyrime RER statuso, RNR ISH rezultatai parodė gana gerą koreliaciją su tais IHC ir SISH. Šie rezultatai patvirtina, kad RNR ISH gali būti patikimas tyrimas dėl FFPE audinių pavyzdžių, nors reikia papildomų tinkamumo patvirtinimo tyrimai.

parodė, kad MET
GA, aukštos MET
iRNR ir baltymų raiška įvertinta SISH, RNR ISH ir IHC buvo labai Współbrzmieniowy ir aukštos RER statusas ne DNR, iRNR, o baltymas buvo reikšmingai susijęs su blogos prognozės. Šie duomenys paremti, kad RER raiška yra daugiausia dėl to padidėjo MET
GCN ir šis mechanizmas prisideda prie agresyvaus elgesio MET
onkogeno priklausomas GC. Nepaisant to, ten buvo keletas atvejų, rodantys neatitikimą tarp RER
GCN, iRNR ir baltymų kiekis. Mes spėlioti, kad techninių problemų (pvz, jautrumas ir specifiškumas zondo ar antikūnų, ir vargšų iRNR kokybė FFPE audinius) ir naviką heterogeniškumas RER statuso, gali būti pagrindinės priežastys, dėl šio neatitikimo. Tačiau, kai kurie biologiniai mechanizmai taip pat gali būti susijusios su šio neatitikimo. Pavyzdžiui, susitiko raiška be GA gali atsirasti per transkripcijos aktyvavimo per HGF priklausoma autokrining /paracrine kilpos ar kiti signaliniai keliai [23], [26]. Priešingai, MET
GA negali padidinti genų produktą. Asaoka ir kt. Pranešama, kad keli GC ląstelių linijos slėpimas MET
GA išreiškė baltymo tame pačiame lygyje kaip ir kiti ląstelių linijas be GA, bet jų tirozino liekanos tuo kinazės domeno buvo daugiau fosforilinarai [27]. RER aktyvavimo ir HGF vaidmenį GC mechanizmai dar reikia išsiaiškinti.

Jis yra gerai žinoma, kad RER
vaidina svarbų vaidmenį vėžio metastazių progresavimas. Keletas tyrimų parodė, kad RER
GA ar raiška buvo susijęs su LN metastazių [7], [13], [22] arba tolimoje metastazių [13], GC pacientams. Be to, buvo parodyta, kad RER administracija inhibitorius sumažintas peritoninė sklaidą GC į svetimo modelio [23]. Be to, Di Renzo ir kt. nustatė, kad vėžio ląstelės, vežantys MET
metastazavusiu plitimo galvos ir kaklo plokščiųjų ląstelių karcinomos metu buvo atrinkti aktyvinančių mutacijų lyginant genų seką tarp pirminio naviko ir metastazavusiu limfmazgiuose [28]. Tačiau, tiesiogiai palyginti RER statuso tarp pirminio naviko ir metastazių nebuvo atliktas didelis serijos GC. Kai mes palyginti RER ekspresijos būklė tarp 199 suderintų pirminių auglių ir metastazių LNS, o bendras atitikimas buvo 93,5% ir 94% pagal RNR ISH ir IHC, atitinkamai. Šie rezultatai rodo, kad RER išraiška statusas GC yra santykinai pastovi metastazių į regioninius LNS metu. Tačiau teigiamas konversija MET
iRNR statusas buvo reikšmingai susijęs su blogos prognozės pagal vieną požymį ir Dispersinės analizės. Todėl šie rezultatai rodo, kad RER statusas Metastazės vertinimas gali būti svarbu prognozuoti prognozę bei nustatyti papildomus kandidatus MET-tikslingai terapija.

situ pagrindu RNR analizei turi keletą privalumų per "grind ir įpareigoti "analizė, pavyzdžiui, RT-PCR [19], ir yra taikomos tiek klinikinėje praktikoje ir atgaline data tyrimus. Be to, RNR ISH daugiau palankios nei IHC, kai nėra tinkamo antikūnas arba, kai taikinio molekule yra baltymas. Atžvilgiu RER
, šis pranašumas gali būti naudinga, nes HGF-gaminančios ląstelės gali būti matomos į audinių skyriuje, naudojant HGF zondą. Tačiau pažeidžiami iRNR stabilumas audinių apdorojimo metu ir didesnes išlaidas nei IHC yra RNR ISH metodo trūkumai. Tikimės, kad ir toliau techninė tobulinimas padės išspręsti šiuos apribojimus.

Šiame retrospektyvinio tyrimo, MET
iRNR statusas įvertino RNR ISH gerai koreliuoja su baltymų ir GCN įvertino IHC ir SISH, atitinkamai, ir MET
GA yra labai sutinkantis su aukštos raiškos arba mRNR ar baltymų. Be išgyvenamumo analizė, aukštos raiškos MET
mRNR pradinėse ar metastazavusio pažeidimų, ir teigiamo konversijos MET
iRNR statusas yra reikšmingai susijęs su blogos prognozės. Be to, MET
iRNR statusas metastazavusiu LNS yra nepriklausoma prognostinis faktorius pagal Dispersinės analizės. Mūsų išvados rodo, kad MET
iRNR gali būti alternatyva žymeklį nustatyti MET
onkogeno priklausomas GC.

Pagalbinė informacija
S1 lentelėje.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001
(docx)
S2 lentelėje.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002
(docx)
S3 lentelėje.
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0111658.s003
(docx)

Padėka

Esame labai dėkingi p Hyun Ju Park jos techninę paramą

• PLoS ONE: poveikis Helicobacter pylori ekspresijos Lygiai FHIT, IL-8 ir P73 skrandžio gleivinėje pirmos eilės giminių skrandžio vėžys Patients
• PLoS ONE: a 346 Byla analizė Laparoskopinė Blužnis konservavimo Nr.10 limfmazgių skrodimo už Proksimalios skrandžio vėžys: vieno centro Study