PLoS ONE: kasvaimensisäisellä Hypoksia Edistää siedätyshoitoa indusoimalla Regulatory T Cells kautta TGF-β1 mahasyövän

tiivistelmä

Regulatory T-solu (Treg) -välitteisen immunosuppressio on yksi keskeinen kasvain immuuni veronkiertotapausten ja on tärkein este onnistuneelle kasvaimen immunoterapiaa. Hypoksia, yhteinen piirre kiinteiden kasvainten, on liittynyt voimistua immunosuppressiota, vähentynyt hoitovaste, pahanlaatuinen eteneminen ja paikallinen invaasio. Valitettavasti yhteys hypoksia ja Treg välittämä immuunitoleranssia mahasyövän edelleen huonosti. Tutkimuksessamme Tregs ja hypoksian indusoima tekijä-1α havaittiin positiivinen korrelaatio keskenään ja lisäsi muun syövän etenemiseen. Myöhempi in vitro
Tutkimus osoitti, että supernatantit johdettu mahalaukun syöpäsolujen hypoksisissa kunnossa, voisi indusoida Foxp3 kautta TGF-β1. Nämä havainnot vahvistivat keskeistä asemaa Tregs terapeuttisena kohteena mahasyövän hoidossa ja tarjotaan hyödyllistä ajatuksia suunnittelusta immunoterapiaa mahasyövän tulevaisuudessa.

Citation: Deng B, Zhu JM, Wang Y, Liu TT, Ding YB, Xiao WM, et ai. (2013) kasvaimensisäisellä Hypoksia Edistää siedätyshoitoa indusoimalla Regulatory T Cells kautta TGF-β1 mahasyövän. PLoS ONE 8 (5): e63777. doi: 10,1371 /journal.pone.0063777

Editor: Nupur Gangopadhyay, University of Pittsburgh, Yhdysvallat

vastaanotettu: 10 tammikuu 2013; Hyväksytty: 06 huhtikuu 2013; Julkaistu: toukokuu 27, 2013

Copyright: © 2013 Deng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Shanghai Science and Technology komission (10410709400, 10411950100), National Nature Science Foundation of China (81000968, 81101540, 81101637 ja 81172273) ja National Clinical Key Special Aihe Kiinassa. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää on yksi yleisimmistä syistä syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti [1]. Vaikka merkittäviä edistysaskeleita diagnostisia ja hoitomenetelmiä viime vuosikymmeninä, ennuste mahasyövän edelleen synkkä, koska sen korkea toistuminen ja etäpesäke [2]. Immunosyyttien ovat jo pitkään tunnustettu edistävänä tekijänä kasvaimen kasvua kasvaimen mikroympäristössä [3], mutta taustalla molekyylitason perustan edelleen suurelta osin arvoituksellinen. Parempi käsitys mekanismien mahasyövän hyödyttää kehittää tehokkaita terapeuttisia järjestelmiä.

kasvaimensisäisellä hypoksia on yhteinen piirre kiinteiden kasvainten, jotka saattavat vaikuttaa etenemistä kasvaimia aktivoimalla keskeiset biokemiallisia ja solureiteillä [4 ], [5], [6]. Tutkimukset osoittivat myös, että hypoksia on keskeinen rooli kasvaimen välittämän immunosuppressiota, edistää säilyttää immunologista paeta kasvaimia [7], [8]. Äskettäin vahvistettu yhteys kasvaimen hypoksia ja siedätyshoitoa rekrytoimalla säätelijä-T-solujen (Tregs) on perustettu munasarjasyöpä [9]. Siten hypoteesi on esitetty, että hypoksia saattaa tarjota esteitä terapeuttista immuuni interventioita.

Lisääntynyt Tregs on raportoitu verenkierrossa ja kasvain kudosten eri syöpiä sairastavien potilaiden, kuten mahasyöpä, peräsuolen syöpä, maksasyövän ja haimasyöpä [10]. Kertyvät data osoitti myös, että läsnäolo Tregs johti lisääntyneen riskin etenemisen syövän [11], [12], [13]. Lisäksi Treg-välitteinen immunosuppressio pidetään yksi keskeinen immuunijärjestelmän veronkiertotapausten kasvaimen jolloin ne pystyvät voittamaan anti-kasvain aktiivisuutta CD8 sytotoksisten solujen, dendriittisolujen ja luonnon tappajasolujen [14]. Siten selvittäminen taustalla olevan mekanismin Treg rikastumisen mahasyövän tulee olemaan arvo kohdentamiseksi Tregs varten suotuisa kliininen tulos. Vaikka mekanismit eivät ole hyvin ymmärretty, jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että TGF-β1 on mukana siinä [15].

Tässä tutkimuksessa olemme arveltu, että mahasyövän voivat hankkia valikoiva etu indusoimalla Tregs hypoksiaolosuhteissa via TGF-β1 signalointireitin siten kiertää immuunivalvonnalle. Osoittaakseen hypoteesia, olemme analysoineet ilmentymistä hypoksian indusoima tekijä-1α (HIF-1α) ja Foxp3 mahasyövän kudoksissa, arvioi vaikutus hypoksia TGF-β1 tuotanto syöpäsolulinjoissa, ja lopulta selvitetty rooli hypoksia välittävä Treg rikastamiseen mahasyövässä.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat ja näytteet

Parafiini-upotettu, formaliinilla kiinnitetyt kasvaimen osat saatiin 99 potilasta mahalaukun syöpä, joka tehtiin kirurginen resektio joulukuusta 2006 päivänä helmikuuta 2008. toinen kliininen Medical School of Yangzhou University. Seuranta tietoja tiivistää lokakuun 2012 mediaani seuranta-53 kuukautta (vaihteluväli 4-70 kuukautta). Kokonaiselinaika (OS) määriteltiin lähtien, kun leikkaus kestää seurantaan tai kuolemaa.

Oheislaitteet verinäytteet kerättiin 20 potilaan mahalaukun syövän päivää ennen ja 10 päivää leikkauksen jälkeen heinäkuussa 2012 lokakuussa 2012. Sera pakastettiin -80 ° C välittömästi sentrifugoinnin jälkeen tulevaa käyttöä varten. Perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC: t) eristettiin välittömästi Ficoll tiheysgradienttia.

Yksikään potilaista ei ollut saanut immunosuppressiivista huumeiden tai kemoterapiaa ennen kirurgista resektiota. Tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea (eettinen komitea Toisen kliinisen lääketieteen School of Yangzhou University, Yangzhou), ja kirjallinen tietoon perustuva suostumus saatiin kaikilta TET.

immunohistokemiallinen värjäys

Serial kohdat (5 um) ja formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut näytteet tehtiin. Osiot poistettiin parafiini ja niihin lisätään arvostellaan alkoholia. Antigeeni haku suoritettiin käsittelemällä liukuu EDTA-puskuria mikroaaltouunissa 10 minuuttia. Kanin anti-humaani HIF-1α primaarisen vasta-aineen (Bio- world, USA), hiiren anti-ihmisen TGF-β1-vasta-ainetta (Santa Cruz, USA) ja hiiren anti-humaani Foxp3-vasta-ainetta (Abcam, USA) käytettiin primaaristen vasta-aineiden. Diaminobentsidiiniä (DAB) käytettiin alustan seuraavan counterstaining hematoksyliinillä yhden värjäystä. Double värjäys suoritettiin 2 eri kromogeeneina: DAB kromogeenilla (ruskea väri) ja HIF-1α ja nopeasti punainen kromogeeni (punainen väri) TGF-β1 tai Foxp3.

immunoreaktiivisuus Pisteytys

HIF -1α tuma värjäys arvioitiin seuraamalla raportoitu menetelmää [16], värjäys pisteet = intensiteetti immunoreaktiivisuus (IR) x osuus positiivisesti värjäytyneiden solujen. IR intensiteettiä ositettu neljään luokkaan: 0, ei IR; 1, heikko IR; 2, kohtalaisen voimakas IR; ja 3, vahva IR. Osuus positiivisten solujen luokitella viiteen ryhmään: 0, ei värjäytymistä; 1, < 2% värjäys; 2, 2-10% värjäys; 3, 11-29% värjäys; ja 4, > 30% värjäystä.

modifioitua pisteytystä käytettiin Foxp3 ^{+ soluihin [17]. Kymmenen kentät laskettiin suuritehoisia varten Foxp3. Absoluuttinen määrä lymfosyyttien kohti korkean tehon kentän (HPF 400) oli päättänyt. Keskimääräinen useita myönteisiä värjättyä solua suuritehoisia kentät laskettiin.}

Soluviljely ja Hypoksia induktio

Ihmisen mahalaukun syövän solulinjat, AGS ja BGC823, saatiin Shanghai Institute of Cell Biology, Kiinan tiedeakatemia (Shanghai, Kiina). Kaikki solut kasvatettiin 5% CO _{2 37 ° C: ssa DMEM: ssä tai RPMI 1640 (HyClone Tianjin, Kiina), jota oli täydennetty 10% FBS: ää (Gibco, Australia), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 mg /ml streptomysiiniä ( HyClone Tianjin, Kiina). Hypoksian kokeissa solut ympättiin 6-kuoppaisille levyille, pestiin kahdesti PBS: llä, kun ne kasvoivat 60-80% konfluenssiin, pidetään seerumittomassa AIMV väliaineessa (Invitrogen, USA) ja inkubointi yli yön, ja sitten laitetaan modulaarinen hautomo kammio (Ruskinn Works, YK) 24 tunnin hypoksisissa (1,0% O 2) tai normoxic (21% O 2) olosuhteissa, joissa molemmissa 5% CO 2 37 ° C: ssa. Supernatantit kerättiin ja säilytettiin -80 ° C: ssa myöhempää käyttöä varten määrittämiseksi pitoisuuksien TGF-β1 ja co-dosviljelmämäärityksessä. Kaikki in vitro
validointi kokeet suoritettiin vähintään kolme kertaa.}

Immunofluoresenssikoe

Solut (1 x 10 ^{5 /kuoppa) maljattiin peitelaseille on 24-kuoppaiselle levylle 24 tuntia kulttuuriin. Sen jälkeen ne kiinnitettiin kylmällä metanolilla 30 min voidaan läpäiseviksi 0,5% Triton X-100 toiset 30 minuuttia. Solut pestiin kolmesti, esti 10% vuohen seerumilla PBS: ssä 30 min ajan, ja inkuboitiin anti-ihmisen TGF-β1-vasta-ainetta (Santa Cruz, USA) ja anti-ihmisen HIF-1α-vasta-ainetta (Epitomics, USA) pakastimessa 4 ° C: ssa yön yli. Primaarisen vasta-aineen havaittiin kautta alexa488-konjugoitua toista vasta-ainetta (Invitrogen, USA) ja Alexa fluor 594-konjugoitua toista vasta-ainetta (Invitrogen, USA), vastaavasti. Peitinlasit tutkittiin OLYMPUS florescence mikroskoopilla.}

RNA ja Quantitative Reaaliaikainen PCR (qPCR) B

Kumpikin solulinjojen edellä kuvattua viljeltiin kolmena rinnakkaisena alle normoxic tai hypoksinen olosuhteet , kuten edellä on kuvattu. Kokonais-RNA eristettiin välittömästi päässä normoxic tai hypoksinen solut kokeen lopussa, käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen, USA). Kokonais-RNA (5 ng) käänteistranskriboitiin käyttäen cDNA Reverse Transcription sarjat (TaKaRa, Dalian, Kiina), mukaan valmistajan ohjeiden. qPCR suoritettiin SYBR Green PCR Master Mix (TaKaRa, Dalian, Kiina). Kertamuutoksia ilmaisemisessa kunkin TGF-β1 mRNA suhteessa GAPDH laskettiin perustuen kynnyksen (Ct) kuin 2 ^{-Δ (ACt), jossa ACt = Ct _{tavoite - Ct GAPDH ja Δ (ACt) = ACt hypoksia - ACt normoksia. TGF-β1 alukkeet olivat: eteenpäin, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 '; kääntää, 5'AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC -3 ', ja GAPDH alukkeet olivat: eteenpäin, 5'GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA-3'; käänteinen, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 '. qPCR suoritettiin kolmena kappaleena.}}

entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) B

pitoisuus TGF-β1 viljelmän supernatanteista ja seerumit määritettiin ELISA-kittiä (eBioscience, San Diego, CA) mukaan valmistajan ohjeiden.

eristäminen ja kulttuuri T-solujen

PBMC luovuttajista epäsuorasti leimattu biotiinilla-vasta-aineella bocktail ja anti-biotiini mikrohelmien. CD4 ^{+ T-solut erotettiin negatiivisen valinnan mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti (Miltenyi Biotec, Saksa). CD4 + T-solut leimattu suoraan CD25 Micro-Helmet ja CD4 + CD25 - T-solut eristettiin negatiivisen valinnan mukaisesti valmistajan ohjeiden (puhtaus > 95%; Miltenyi Biotec, Saksa) . Supernatantit kerättiin viljellyistä AGS soluja normoxic tai hypoksinen olosuhteet laimennettiin tuoreella AIMV väliaineen (01:03), nimeltään normoxic keskipitkän ja hypoksinen medium, vastaavasti. Yhteensä 1,0 x 10 6 /ml CD4 + CD25 - T-soluja stimuloitiin anti-CD3 /CD28-päällystettyjä helmiä (01:05; Invitrogen, USA) ± IL-2 (200 U /ml; Peprotech) 72 tunnin ajan AIM-V seerumivapaassa väliaineessa (kontrolli medium), normoxic keski tai hypoksinen väliaineessa. Joissakin kokeissa rekombinanttia ihmisen TGF-β1 (2 ng /ml; R &D Systems, USA) ja TGF-β1-reseptorin estäjä LY-364947 (5 uM; Merck, Saksa) lisättiin viljelmiin.}

virtaussytometria

fenotyypin analyysi Tregs suoritettiin BD FACS AriaII -virtaussytometriä (BD, USA). Lyhyesti, solut leimattiin CD4-FITC ja Foxp3-PE (eBioscience, San Diego, CA) seuraten valmistajan protokollaa. Analysoida esiintyvyys Tregs, CD4 ^{+ Foxp3 + T-solut arvioitiin sen jälkeen, kun gating CD4 + T-solut ja ilmaistiin prosentteina CD4 + T-soluja.}

tilastollinen analyysi

Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS 17.0 for Windows. Erot ryhmien analysoitiin käyttäen yksisuuntaista ANOVA, U-testi tai χ ^{2 testi tarvittaessa. Korrelaatio tutkittiin Pearsonin korrelaatio. Kumulatiivinen elinaika on laskettu kautta Kaplan-Meier ja analysoitiin log-rank-testi. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. Tilastollinen merkitsevyys asetettiin P
< 0,05.}

Tulokset

HIF-1α ja Foxp3 Expression mahasyövän Kudokset

Kun histologista vahvistusta mahalaukun syöpä (Fig. 1A, ylhäällä vasemmalla ja alhaalla vasemmalla), tutkimme ilmaus HIF-1α ja Foxp3 immunohistokemiallisesti 99 potilaalla. HIF-1α alhaisen ilme (Fig. 1A, ylempi) ja korkea ilmaisun (Fig. 1A, alas) havaittiin pääasiassa sytoplasmassa ja tumassa syöpäsolujen kasvaimen marginaali, ja vain ydinvoima HIF-1α värjäys pisteytettiin. On mielenkiintoista huomata, että joissakin tapauksissa, lymfosyytit osoitti myös voimakasta ekspressiota HIF-1α. Foxp3 alhainen ilme (Fig. 1A, ylhäällä oikealla) ja korkea ilmaisun (Fig. 1A, alas-oikea) nähtiin tumassa lymfosyyttien, joista suurin osa sijaitsee kasvain marginaali.

Seuraava , ilmaukset HIF-1α ja Foxp3 kasvainkudoksissa verrattiin potilailla, joilla nonmetastatic (n = 52) ja metastaattinen (n = 47) mahasyöpä. Sekä keskiarvo HIF-1α ja määrä Foxp3 ^{+ solujen metastaattista potilailla oli suurempi kuin nonmetastatic potilailla (HIF-1α, 7,69 ± 0,45 vs. 5,41 ± 0,40, P
< 0,001 , Fig. 1B, vasen; Foxp3, 14,61 ± 1,01 vs. 8,07 ± 0,95, P
< 0,001, Fig. 1B, oikealla).}

suhde OS ja HIF-1α tai Foxp3 mahasyövän kudokset

Kuten viime seurannan, 50 99 (50,5%) potilaista oli elossa, ja seuranta-ajan mediaani 64 kuukautta (vaihteluväli 57-70), kun taas 49 oli kuollut tautiin , ajan mediaani kuolemaan 28 kuukauden (vaihteluväli 4-64). Valaista suhde ekspression HIF-1α tai Foxp3 ja OS, HIF-1α luokiteltiin negatiiviseksi (n = 34; tulokset ≤4) tai positiivinen (n = 65; tulokset > 4), kun taas Foxp3 luokiteltiin pieni (n = 51F) tai korkea (n = 48) käyttäen mediaanilukumäärä (8,6 solua /HPF) cutoff. Tutkimuksessamme OS Foxp3-matalan ryhmässä oli merkittävästi suurempi kuin Foxp3-korkean ryhmän ( P
= 0,017, Fig. 1 C, vasemmalla), kun taas HIF-1α-negatiivinen ryhmä oli huomattavasti korkeampi kuin HIF -1α-positiivinen ryhmä ( P
= 0,009, 1C, oikealla).

Association between HIF-1α tai Foxp3 ja ennusteeseen viittaavia ominaisuudet

korrelaatio kliinis- ja ilmentyminen HIF-1α tai Foxp3 myöhemmin arvioitiin (taulukko 1). Ei korrelaatio löytyi HIF-1α tai Foxp3 ilmaisun ja iästä tai sukupuolesta potilaiden sekä kasvaimen kokoa. Oli kuitenkin kasvua positiivisen määrä HIF-1α syvyys kasvaimen invaasion ( P =
0,013). Samanlainen suuntaus havaittiin myös välillä ilmentymisen HIF-1α ( P
< 0,001) tai Foxp3 ( P
= 0,008) ja kasvaimen vaiheessa. Lisäksi merkittävä korrelaatio löytyi imusolmuke etäpesäke ja ilmentymistä HIF-1α ( P
= 0,029) tai Foxp3 ( P
< 0,001).

suhde HIF-1α ja Foxp3 tai TGF-β1 mahasyövän kudokset

edellä mainittu immunohistokemiallinen tulos osoitti, että määrä Foxp3 ^{+ soluja oli vahva positiivinen korrelaatio pisteet HIF-1α potilailla, joilla on etäpesäkkeitä (r
= 0,772, P
< 0,001; Fig. 2A, vasen), mutta ei potilailla, joilla ei etäpesäkkeitä ( r =
0,461, P
= 0,001; Kuva. 2A, oikealla). Suoritimme sitten immunohistokemiallisella double-värjäyksen arvioida läsnäolo koekspressointi välillä HIF-1α ja Foxp3 tai TGF-β1. Tulokset osoittivat, että Foxp3 + solujen pääasiassa kokoavat sivustot lähellä hypoksinen kasvaimen alueelle korkean HIF-1α ilmentymisen (Fig. 2B). Lisäksi useimmat high HIF-1α kasvainsolut olivat korkeat TGF-β1 (Fig. 2C).}

Kiertävä Tregs ja TGF-β1 Pre-leikkauksen ja leikkauksen jälkeisen Potilaat

valaista suhde Tregs ja pitoisuus TGF-β1 seerumissa, CD4 ^{+ Foxp3 + T-solut analysoitiin potilailla, joilla on mahalaukun syövän kautta virtaussytometrialla (Fig. 3A). Taajuus Tregs ennen leikkausta oli suurempi kuin leikkauksen jälkeen (9,84 ± 0,40% vs. 8,47 ± 0,33%, P
< 0,001, Fig. 3B). TGF-β1 pitoisuudet leikkauksen jälkeen väheni merkittävästi verrattuna niihin ennen leikkausta (6431,95 ± 629,24 vs. 7581,56 ± 556,45 pg /ml, P
= 0,005, Fig. 3C). Positiivinen korrelaatio Treg taajuus ja TGF-β1 pitoisuus seerumissa ennen käyttöä ( r
= 0,454, P
= 0,044, Fig. 3d).}

TGF -β1 on erittäin upregulated mahasyövän Cell Lines hypoksiaolosuhteissa

tunnistaa, onko hypoksia indusoi eritystä TGF-β1 mahalaukun syöpäsoluja, TGF-β1 tasot tutkittiin kahdessa mahasyövässä solulinjoissa, AGS ja BGC823, hypoksisissa tai happiolosuhteissa. MRNA TGF-β1 hypoksiaolosuhteissa nostettiin verrattiin happiolosuhteissa (Fig. 4A). Yhdenmukainen qPCR, TGF-β1 tasot viljelmäsupernatantissa osoittivat samanlaisia ​​tuloksia (Fig. 4B). Edelleen ilmaisuja TGF-β1 ja HIF-1α havaittiin myös immunofluoresenssilla, ja tulokset osoittivat lisääntynyttä TGF-β1 ja HIF-1α ilmentymisen hypoksisissa olosuhteissa verrattuna, että alle happiolosuhteissa (Fig. 4, C).

hypoksia augments kyky aiheuttaminen Tregs kautta TGF-β1 mahasyövän Solulinjat

sen hypoteesin testaamiseksi, että hypoksian aiheuttama TGF-β1 edistää kasvua Tregs, kiertävien CD4 ^{+ CD25 - T-soluja terveistä yksilöistä käsiteltiin supernatantteja soluista, eri olosuhteissa. Piste koealojen osoitti eri medioiden indusoi Foxp3: n ilmentyminen CD4 + T-solut (Fig. 5A). Foxp3 ilmentyminen T-solujen normoxic väliaineessa, hypoksinen keskipitkän ja rekombinantti ihmisen TGF-β1 keskipitkän olivat kaikki kasvanut kontrolliin verrattuna väliaineen ( P
< 0,001). Lisäksi, Foxp3 ilmentymisen hypoksinen väliaineessa oli merkittävästi suurempi kuin normoxic väliaineessa (13,04 ± 0,74% vs. 6,76 ± 0,35%, P
< 0,001, kuvio. 5B). Edelleen, kuten LY-364947 lisättiin kukin laji väliaineen, Foxp3 lauseke laski avoimesti ( P
< 0,001, Fig. 5C).}

Keskustelu

Yli viimeisen vuosikymmenen aikana kehittyvien tutkimusten mukaan Tregs auttaa luomaan kasvainten huonontamalla antituumorivaikutuksen immuunivasteen, tai jopa stimuloida etäpesäkkeiden suoraan [18], [19]. Saatuja todisteita viime vuosina havaittu olevan taajuudet kasvaimensisäisenä Tregs mahasyövän, joka on yhdistetty epäsuotuisa kliinis ja huonon ennusteen [20], [21], [22]. Yhdenmukainen näiden aiemmin raportoituihin, Tutkimuksemme esittänyt todisteita siitä, että taajuus kasvaimen infiltroituneen Tregs lisääntyi etenee kasvain vaiheissa. Lisäksi Tregs myös ennusteen tekijä leikkauksen jälkeisen mahasyövän. Lisäksi olemme vahvistaneet, että määrä Tregs metastaattisessa mahalaukun syöpä, on merkittävästi suurempi kuin nonmetastatic mahasyövässä. Edellä esitetyt tulokset antaa tukensa käsitystä, että Tregs voi myötävaikuttaa taudin etenemiseen ja voi olla potentiaalinen terapeuttinen kohde mahasyövän. Meillä on siis seuraava yrittäneet tutkia taustalla olevan mekanismin välittäjinä Treg rikastamiseen mahasyövässä.

Kasvain hypoksia on hyvin tunnustettu olevan keskeinen tekijä johtaa hoidon kestävyys ja huono ennuste mahasyövän [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, pääasiallisena molekyylitason allekirjoituksen hypoksia, on tärkein alavirtaan säätelijä hypoksia vasteen tuumorisoluissa [24]. Tulokset meidän tutkimus osoitti, että HIF-1α korreloi pahanlaatuinen käyttäytyminen luokka, mukaan lukien syvyys hyökkäystä, imusolmuke etäpesäke ja edistää kasvaimen vaiheessa. Silmiinpistävän, mahasyövän potilailla, joilla on korkea HIF-1α oli huonompi selviytyminen kuin heikosti HIF-1α, mikä vahvisti ehdotuksemme että HIF-1α, tai pikemminkin hypoksia, liittyy etenemisen mahasyövän.

jo kauan on tunnustettu, että kasvainsolut ovat suojassa immuuni vahinkoa hypoksinen kasvain mikroympäristöihin; kuitenkin, taustalla olevien mekanismien edelleen tutkittavana [25]. Kuten nyt, vähän tiedetään onko yhteys hypoksia ja Treg välittämä immunosuppressio kasvaimissa. Useat viimeaikaiset tutkimukset ovat tutkineet hypoksinen sääntelyä Tregs, ristiriitaisia ​​tuloksia. Ben-Shoshan et al.
[26] on raportoitu, että hypoksia lisää määrä ja tukahduttava ominaisuudet Tregs sanella tulehdusta ohjelman. Wei et al.
[7] vahvisti myös, että hypoksia lisää kykyä glioblastooma multiforme aiheuttaa Tregs, ja näin ollen sillä on keskeinen rooli kasvaimen-välitteisen immuuni suppressio. Kuitenkin, Dang, et ai. [27] havaitsivat, että HIF-1α estää Treg erilaistumista kohdistamalla Foxp3 proteiinia hajoamista. Tutkimuksessamme esitimme voimakkaasti positiivinen korrelaatio Tregs numeron ja HIF-1α ilmaisua, viittaa siihen, että hypoksia saattavat edistää Tregs tunkeutuminen mahasyövässä. On syytä huomata, että meidän tutkimuksissa useimmat Tregs sijaitsi alueella lähellä syöpäsolut ilmentävät HIF-1α. Siten edelleen selvittäminen, onko hypoksia liittyviä molekyylejä vapautuu syöpäsolujen osaltaan rikastumista Tregs mahasyövän tarvitaan.

Vaikka mekanismeja rikastamista Tregs kasvaimissa ei vieläkään ymmärretä hyvin, me ja muut tutkijat ovat äskettäin osoittaneet, että kasvainsolut voivat toimia lähteenä TGF-β1, joka tarvitaan induktioon ja ylläpitoon Tregs in vitro
ja in vivo
[28], [29], [30]. Esillä olevassa tutkimuksessa, taajuus Tregs ja TGF-β1 liikkeeseen ennen leikkausta oli suurempi kuin leikkauksen jälkeen, ja kahden parametrin oli positiivinen korrelaatio, mikä viittaa siihen, että kasvaimen johdettu TGF-β1 voivat edistää kasvua Tregs mahalaukun syöpä.

Hypoksia, yhteinen piirre syöpiä, voi aiheuttaa syöpäsolujen salainen immunosuppressiivisten sytokiinien kuten TGF-β1 [7], [31]. Tulokset Tutkimuksemme osoitti kaikkein high TGF-β1 solut olivat syöpäsolut ilmentävät HIF-1α kasvaimissa. in vitro
tutkimus osoitti TGF-β1 kasvoi suuremmassa määrin mahalaukun syöpäsoluissa hypoksisissa kulttuuri, mikä on sopusoinnussa myös edellä mainitut tutkimukset. Perustuu tulosten perusteella olemme arveltu, että syöpäsolut erittävät TGF-β1 aiheuttaa tuotannon Tregs mahasyövän. Testata hypoteesia, eristetty CD4 ^{+ CD25 - T-soluja terveistä yksilöistä viljeltiin laimennettu supernatanteissa syöpäsolujen eri viljelyolosuhteissa. Tulokset osoittivat, että Foxp3: ekspressiota T-solujen viljellä hypoksinen väliaineessa oli huomattavasti suurempi kuin viljeltyjen solujen normoxic väliaineessa. Lisäksi lisäämällä ylimääräisiä rekombinanttia ihmisen TGF-β1 huomattavasti Foxp3 ilmaisu, kun taas lisäämällä LY-364947, TGF-β1-reseptorin estäjä, vähensi Foxp3 ilme. Nämä tulokset siis luoda suora yhteys hypoksia, TGF-β1 ja Tregs mahasyövän.}

Kuitenkin alustavien tutkimus osoitti myös, että TGF-β1 oli muuttumattomana HIF-1α stabilointiaine, kobolttikloridia (CoCl _{2), tai HIF-1α-inhibiittori, 2-methoxyestradiol (2ME2) ​​in AGS ja BGC823, vaikka HIF-1α lisättiin hypoksian (tuloksia ei ole esitetty). Nämä havainnot ehdotti, että HIF-1α voi olla unassociated induktioon TGF-β1 mahalaukun syöpäsoluissa hypoksiaolosuhteissa, joka on yhdenmukainen edellisessä tutkimuksessa [32]. Lisäksi tuotanto Tregs ei voitu täysin ablatoitu estämällä TGF-β1, mikä osoittaa, että muut sytokiinit tai reitit voivat myös osallistua. Lisäksi syöpäsolut eivät ole ainoana sytokiinien kasvaimen mikroympäristössä. Siten tarvitaan lisätutkimuksia vahvistaa taustalla olevan mekanismin Treg kertymisen mahasyövässä.}

Yhteenvetona esillä Tutkimus osoitti, että hypoksia voimistaa kykyä mahasyövän kiertää immuunivalvonnan jopa-ekspressiota sääteleviä TGF-β1, aiheuttaen siten Tregs kasvaimissa. Edelleen, meidän tiedot myös näyttöä, että on olemassa solujen välisen ylikuulumisen välillä kasvainsolujen ja Tregs, jotka saattavat säädellä tuumorin vastaista immuunivastetta.

• PLoS ONE: MIR-184 Binding-Site rs8126 T > C polymorfismi TNFAIP2 liittyy maha- Cancer
• PLoS ONE: lyhytaikaisen kliinisen vaikutukset lisätarvikepakkauksen Left Maksan Valtimo potilailla, joille Radical gastrectomy varten Mahalaukun Cancer