PLoS ONE: intratumorsko Hipoksija Pospješuje imunološki toleranciju Izazivanje regulacijskih T-stanica preko TGF-β1 u rak želuca

Sažetak pregled

Regulatorna T stanice (Treg) posredovano imunosupresija predstavlja jedan od ključne važnosti tumora imunoloških utaja mehanizama, te je glavna prepreka za uspješnu tumora imunoterapija. Hipoksija, uobičajena pojava solidnih tumora, bio je povezan s potencirane imunosupresijom, smanjen terapijski odgovor, maligna napredovanja i lokalne invazije. Nažalost, veza između hipoksije i Treg posredovanog imunog tolerancije u rak želuca, loše ostaje razumio. U našoj studiji, Tregs i faktora induciranog hipoksijom-1α nađeno je da su u pozitivnoj korelaciji međusobno i povećana su progresije tumora. Naknadna In vitro pregled studija pokazala da supernatanti dobiveni iz stanica raka želuca pod hipoksičkog stanja, induciraju ekspresiju Foxp3 preko TGF-β1. Ovi nalazi su potvrdili ključnu ulogu Tregs kao terapijski cilj u želučanom terapije protiv raka i pod uvjetom korisne misli za dizajn imunoterapije raka želuca u budućnosti pregled

Izvor:. Deng B, Zhu JM, Wang Y, Liu TT, Ding YB, Xiao WM, et al. (2013) intratumorsko Hipoksija Pospješuje imunološki toleranciju Izazivanje regulacijskih T-stanica preko TGF-β1 u rak želuca. PLoS ONE 8 (5): e63777. doi: 10,1371 /journal.pone.0063777 pregled

Urednik: Nupur Gangopadhyay, University of Pittsburgh, Sjedinjene Američke Države Netlogu

Primljeno: 10 siječnja 2013; Prihvaćeno: 6. travnja 2013; Objavljeno: 27. svibanj 2013 pregled

Copyright: © 2013 Deng i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan od strane Šangaj znanosti i tehnologije komisije (10410709400, 10411950100), Nacionalna zaklada za znanost priroda Kine (81000968, 81101540, 81101637 i 81172273) i Nacionalnog Clinical Key Tematska Kine. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

karcinoma želuca predstavlja jedan od najčešćih uzroka smrti izazvane rakom diljem svijeta [1]. Unatoč značajnom napretku u dijagnostičkim i terapijskim pristupima tijekom posljednjih desetljeća, prognoza karcinoma želuca ostaje tuga zbog svoje visoke recidiva i metastaza [2]. Imunocitima su odavno prepoznati kao tumorskog rasta faktora promovira u mikro tumora [3] Međutim, temeljni molekularna osnova ostaje u velikoj mjeri zagonetna. Bolje razumijevanje mehanizama u rak želuca će biti koristan za razvoj učinkovitih terapijskih shema. Pregled

intratumorsko hipoksija je zajednička značajka solidnih tumora, što bi moglo utjecati na razvoj tumora aktiviranjem ključne biokemijske i stanične puteve [4 ], [5], [6]. Studije također pokazali da hipoksija igra ključnu ulogu u tumorskoj posredovanog imuniteta, doprinosi održavanju imunološke bijega tumora [7], [8]. Nedavno je potvrđeno veza između tumora hipoksije i imunološkog tolerancije zapošljavanjem regulacijskih T-stanica (Tregs) osnovana je u raka jajnika [9]. Dakle, hipoteza je predstavljeno da hipoksija može pružiti prepreke za terapeutske imunološkim intervencijama. Pregled

Povećana Tregs zabilježeni su u cirkulaciji i tumorskih tkiva bolesnika s različitim oblicima raka, uključujući rak želuca, rak debelog crijeva, karcinom i rak pankreasa [10]. Prikupljeni podaci također pokazuju da prisutnost Tregs rezultiralo povećanim rizikom za progresiju raka [11], [12], [13]. Štoviše, Treg posredovane imunosupresija se smatra jednom od ključnih imunoloških utaja mehanizama u tumor, pri čemu su u mogućnosti da prevlada anti-tumorsku aktivnost CD8 citotoksične stanice, dendritičke stanice i stanica prirodnih ubojica [14]. Dakle, objašnjenje temeljnog mehanizma Treg obogaćenja kod raka želuca će biti od vrijednosti za ciljanje Tregs za koristan klinički ishod. Iako su mehanizmi nisu dobro razumjeli, neka istraživanja su pokazala da TGF-β1 je uključen u njoj [15]. Pregled

U ovoj studiji, pretpostavili smo da je rak želuca može steći selektivnu prednost indukcijom Tregs pod hipoksije putem TGF-β1 signalnog puta i time zaobilaženja imunološkog sustava. Pokazati našu hipotezu, analizirali smo ekspresiju faktora induciranog hipoksijom-1 a (HIF-1 a) i Foxp3 u želučanog tkiva raka, procjenjuje učinak hipoksije na proizvodnju TGF-β1 u staničnim linijama karcinoma, a na kraju rasvijetlilo ulogu hipoksija posredničkoj Treg obogaćivanje u rak želuca. pregled

Materijali i metode

Pacijenti i Primjerci pregled

parafin-ugrađen, tumorske sekcije formalinom fiksne dobiveni su od 99 bolesnika s rakom želuca koji je podvrgnut kirurškom resekcija od prosinca 2006. do veljače 2008. godine na Drugom Kliničke Medicinskog fakulteta Sveučilišta u Yangzhou. Follow-up podaci sažeti su u listopadu 2012. godine sa srednjom praćenja od 53 mjeseci (raspon 4-70 mjeseci). Ukupno preživljenje (OS) definirana je kao iz vremena operacije na zadnji follow-up ili vrijeme smrti. Pregled

Uzorci periferne krvi prikupljeni su od 20 bolesnika s karcinomom želuca jedan dan prije i 10 dana nakon operacije u srpnju 2012 do listopada 2012. godine Serumi su zamrznuti na -80 ° C odmah nakon centrifugiranja za buduću uporabu. Mononuklearne stanice periferne krvi (PBMC) izolirane su odmah gradijenta gustoće Ficoll. Pregled

Nijedan od pacijenata nije primio imunosupresivne lijekove ili kemoterapija prije kirurške resekcije. Istraživanje je odobreno od strane etičkog povjerenstva (etičkog povjerenstva Drugog Clinical Medicinskog fakulteta Sveučilišta Yangzhou, Yangzhou), a pisani informirani pristanak dobiveni su od svih sudionika.

Imunohistokemijsko bojanje pregled

Serijski sekcija (5 um) od formalinom fiksne, parafin uklopljenih primjeraka su izrađeni. Sekcije su deparafmizirane i rehidrira u ocjenjuju alkohola. Antigen dohvat je izvedena obradom preparata u EDTA puferu u mikrovalnoj pećnici tijekom 10 minuta. Zečji anti-humani HIF-1α primarnog antitijela (Bioworld, USA), mišjim anti-humanim TGF-β1 protutijela (Santa Cruz, USA) i mišjeg anti-humanog Foxp3 antitijela (Abcam, USA) su korišteni za primarnim antitijelima. Diaminobenzidinu (DAB) je korišten za sljedeći podlogu counterstaining hematoksilinom za jednim bojanja. Dvostruko bojenje je izvedena s 2 različita kromogene. DAB kromogena (smeđa boja) za HIF-1 a i fast-crvena kromogena (crvena boja) za TGF-β1 ili Foxp3 pregled

Imunoreaktivnost Bodovanje pregled

HIF -1α jezgra bojenje procijenjena je nakon prijavljenog metode [16], bojenje rezultat = intenzitet imunoreaktivnost (IR) × razmjerno pozitivno obojenih stanica. IR intenziteta je stratificiran u četiri kategorije: 0, bez IR; 1, slaba IR; 2, umjereno jak IR; i 3, jaki IR. Udio pozitivnih stanica je svrstati u pet skupina: 0, bez mrlja; 1 < 2% bojenje; 2, 2-10% bojenje; 3, 11-29% bojenje; i 4, >. 30% bojenje pregled

izmijenjeni sustav bodovanja je bio korišten za Foxp3 ^{+ stanica [17]. Deset polja su brojani na visoke snage za Foxp3. Apsolutni broj limfocita po high-power polje (HPF 400) bio je odlučan. Izračuna se prosječni broj pozitivnih obojenih stanica po high-power poljima. pregled}

Kultura stanica i hipoksije Indukcija pregled

ljudskog želuca stanične linije raka, AGS i BGC823, dobiveni su iz Šangaja Institute of Cell Biologija, kineske akademije znanosti (Shanghai, Kina). Sve stanice se razmnožavaju u 5% CO _{2 na 37 ° C u DMEM ili RPMI 1640 (HyClone Tianjin, Kina) obogaćenom sa 10% FBS (Gibco, Australija), 100 U /ml penicilina i 100 mg /ml streptomicina ( HvClone Tianjin, Kina). Za hipoksija eksperimente, stanice su nasađene u ploče sa 6 jažica, dva puta isprane s PBS-om, kada su rasli na 60-80% konfluentnosti, drže u seruma AIMV mediju (Invitrogen, USA) za inkubaciju preko noći, a zatim stavi u modularni inkubator komora (Ruskinn radovi, YK) tijekom 24 sati pod hipoksičkih (1,0% O 2) ili normoksičnim (21% O 2) uvjeti, oba s 5% CO 2 na 37 ° C. Supernatanti su prikupljeni i pohranjeni na -80 ° C za kasnije određivanje koncentracije TGF-β1 i za ispitivanje ko-kulture. Svi in vitro
eksperimenti validacije provedene su barem tri puta. Pregled}

Imunofluorescencija

stanice (1 × 10 ^{5 /dobro) su bile stavljene na pokrovnim u 24 jažica na 24 sata u kulturi. Nakon toga, oni su fiksirani u hladnim metanolom tijekom 30 min da se permeabilizirane s 0,5% TritonX-100 za još 30 min. Stanice su isprane tri puta, blokirane s 10% kozjim serumom u PBS-u tijekom 30 minuta, i inkubirane s anti-humanim TGF-β1 protutijela (Santa Cruz, USA) i anti-ljudski HIF-1 a protutijela (Epitomics, USA) u hladnjaku 4 ° C preko noći. Primarni antitijela su otkrivena putem alexa488-konjugirani drugo antitijelo (Invitrogen, USA) i Alexa fluor 594-konjugirani drugo antitijelo (Invitrogen, USA), pojedinačno. Pokrovna stakalca su ispitani pod OLYMPUS procvat mikroskopom. Pregled}

RNA ekstrakcija i kvantitativno Real-time PCR (qPCR) pregled

Svaka od dvije stanične linije gore opisani se kultivira u trostrukim odjeljcima normoksičnim ili uvjetima hipoksije kao što je gore opisano. Ukupna RNA je izolirana iz odmah normoksičnim ili hipoksije stanica na kraju pokusa, pomoću Trizol reagensa (Invitrogen, USA). Ukupna RNA (5 ng) reverzno prepisana korištenjem cDNA reverznom transkripcijom kitova (Takara, Dalian, Kina), u skladu s uputama proizvođača. qPCR je provedeno u SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Dalian, Kina). Fold promjene u ekspresiji svake TGF-β1 mRNA u odnosu na GAPDH izračunati su na temelju praga ciklusa (CT) kao 2 ^{-A (ΔCt), gdje je ΔCt = Ct _{ciljnu - Ct GAPDH i Δ (ΔCt) = ΔCt hipoksija - ΔCt normoxia. TGF-β1 prajmeri su: naprijed, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 '; natrag, 5'AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC -3 ', a GAPDH primeri su: naprijed, 5'GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA-3'; natrag, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 '. qPCR se izvode u tri serije. pregled}}

Ispitivanje Immunosorbent Enzyme-linked (ELISA) pregled

Koncentracija TGF-β1 u supernatantima kultura i serumu određena je pomoću ELISA garniture (eBioscience, San Diego, CA) prema uputama proizvođača. pregled

izolacije i kulture T stanica pregled

PBMC iz donora posredno označene su biotin antitijelo bocktail i anti-biotin mikročestica. CD4 ^{+ T stanice se odvoje negativnom selekcijom u skladu s uputama proizvođača (Miltenyi Biotec, Njemačka). CD4 + T stanice su izravno označene sa CD25 mikro-perle i CD4 + CD25 - T stanice izolirane su negativnom selekcijom u skladu s uputama proizvođača (čistoće iznad 95%; Miltenyi Biotec, Njemačka) , Supernatanti prikupljeni od uzgojenih AGS stanica normoksičnim ili uvjetima hipoksije su razrijeđene sa svježim AIMV medija (1:3), pod nazivom normoksičnim srednje i uslijed nedostatka kisika medija, respektivno. Ukupno 1.0 × 10 6 /ml CD4 + CD25 - T stanice su stimulirane s anti-CD3 /CD28 prevučene kuglice (01:05, Invitrogen, USA), ± IL-2 (200 u /ml; Peprotech) 72 sata u AIM-V mediju (kontrola medija bez seruma), normoksičnim srednje ili hipoksičnog medija. U nekim eksperimentima, rekombinantni humani TGF-β1 (2 ng /mL; R &D Systems, USA) i inhibitor receptora kinaze TGF-β1 LY-364.947., Dodaju se u kulture (5 uM Merck, Njemačka) pregled}

Tekuća citometrija pregled

fenotip analiza Tregs je izvedena s BD FACS AriaII protočnom citometru (BD, USA). Ukratko, stanice su označene s CD4-FITC i Foxp3-PE (eBioscience, San Diego, CA) po protokolu proizvođača. Kako analizirati zastupljenost Tregs, CD4 ^{+ Foxp3 + T stanice su ocijenjeni nakon vratarenje na CD4 + T stanice i izražene su u postotku od ukupne CD4 + T stanica.}

Statistička analiza pregled

Statističke analize provedene su na SPSS 17,0 for Windows. Razlike među skupinama su analizirane pomoću jednosmjernu ANOVA, test sume rangova ili χ ^{2 testa, ako je potrebno. Korelacija je pregledao Pearson korelacija. Kumulativno vrijeme preživljavanja je izračunata putem Kaplan-Meier i analizirani putem log-rank testa. Podaci su izraženi kao prosjek ± SEM. Statistička značajnost postavljena na P pregled. ≪ 0,05 pregled}

Rezultati

HIF-1α i Foxp3 izražavanja u raka želuca tkiva Netlogu

Nakon histološke potvrde želuca rak (Sl. 1A, gornja lijeva i dolje-lijevo), istražili smo ekspresiju HIF-1 a i Foxp3 imunohistokemijski u 99 bolesnika. HIF-1α niske ekspresije (Sl. 1A, gornji) i visoku ekspresiju (sl. 1, dolje) je nađen pretežno u citoplazmu i u jezgru stanica raka na rubu tumora, i to samo nuklearna HIF-1α obojenje strane. Zanimljivo je napomenuti da, u nekim slučajevima, limfociti također pokazala snažnu ekspresiju HIF-1 a. Foxp3 s niskom ekspresijom (Sl. 1A, gornji desni) i visoki izraz (Sl. 1A, dolje desno) je viđen u jezgri limfocita, od kojih je većina nalazi na rubu tumora. Pregled

Sljedeća , izrazi HIF-1 a i Foxp3 u tumorskim tkivima nego u bolesnika s nonmetastatic (n = 52) i metastazama (n = 47) rak želuca. I prosječna ocjena HIF-1 a, a broj Foxp3 ^{+ stanica u metastatskih bolesnika bila je veća nego u nonmetastatic bolesnika (HIF-1 a, 7,69 ± 0,45 vs 5,41 ± 0,40, P izvoznici < 0.001 Sl 1B, slijeva. Foxp3, 14,61 ± 1,01 vs 8,07 ± 0,95, P izvoznici < 0,001, Slika 1B, desno) pregled}

Odnos između OS i HIF-1 a ili Foxp3.. u raka želuca tkiva Netlogu

Kao što je prošlog praćenja, 50 od 99 (50,5%) bolesnika bili živi, ​​s medijanom praćenja od 64 mjeseci (raspon 57-70), dok je 49 umrlo od bolesti , s medijanom vremena do smrti 28 mjeseci (raspon 4-64). Da se razjasni odnos između ekspresije HIF-1 a ili Foxp3 i OS, HIF-1α je kategoriziran kao negativ (n = 34; semaforu ≤4) ili pozitivna (n = 65; bodova + 4), dok je Foxp3 je kategoriziran kao niska (n = 51f) ili visoka (n = 48), koristeći srednji broj (8,6 stanica /HPF) kao prekinuta. U našoj studiji, OS u Foxp3-low skupini bila je značajno viša nego u Foxp3 visokom grupe ( P pregled = 0,017, sl. 1 C, lijevo), dok HIF-1α-negativna grupa je bila znatno veća od HIF -1α-pozitivne grupe ( P
= 0,009, Slika 1C, desno).

Udruga između HIF-1 a ili Foxp3 i kliničko karakteristike

korelacije između kliničkopatološkim značajke i izraz HIF-1 a ili Foxp3 naknadno procijenjena je (Tablica 1). Nema korelacije između HIF-1 a ili Foxp3 izražavanja i dob i spol bolesnika, kao i veličine tumora. Međutim, došlo je do povećanja u pozitivnom stopom HIF-1 a sa dubinom invazije tumora ( P = pregled 0.013). Sličan trend je pronađen između ekspresije HIF-1 a ( P izvoznici < 0,001) ili Foxp3 ( P pregled = 0,008) i tumora fazi. Osim toga, značajna korelacija između limfnih čvorova metastaza i ekspresije HIF-1 a ( P pregled = 0.029) ili Foxp3 ( P izvoznici < 0,001) pregled

. odnos između HIF-1 a i Foxp3 ili TGF-β1 u rak želuca tkiva Netlogu

gore navedenog imunohistokemijski rezultat pokazuje da je broj Foxp3 ^{+ stanica bio jakog pozitivnoj korelaciji s rezultatom HIF-1 a kod pacijenata s metastazama (r pregled = 0,772, P pregled i 0,001; sl. 2A, lijevo), ali ne i kod pacijenata bez metastaze ( r = pregled 0,461, P pregled = 0,001; Sl. 2A, desno). Mi smo tada izvedena imunohistokemijskih dvostruko bojenje za procjenu prisustva koekspresiji između HIF-1 a i Foxp3 ili TGF-β1. Rezultati su pokazali da Foxp3 + stanice se uglavnom okupljaju na mjestima u blizini uslijed nedostatka kisika tumora regije s visokim HIF-1α izraza (sl. 2b). Nadalje, većina visoko HIF-1α tumorske stanice bile su visoke izraz TGF-β1 (Sl. 2C). Pregled}

Cirkulacija Tregs i TGF-β1 u prije operacije i nakon operacije pacijenti

za razjasni veza između Tregs i koncentracije TGF-β1 u serumu, CD4 ^{+ Foxp3 + T stanice su bile analizirane u bolesnika s karcinomom želuca preko protočne citometrije (Sl. 3A). Učestalost Tregs prije operacije bio je veći nego nakon operacije (9,84 ± 0,40% u odnosu na 8.47 ± 0.33% P pregled i 0,001, slika 3B).. koncentracije TGF-β1 nakon operacije značajno smanjen u usporedbi s onima koji su prije operacije (6431,95 ± 629.24 vs 7.581,56 ± 556.45 pg /ml, P pregled = 0,005, sl. 3C). Pozitivna korelacija između Treg učestalost i koncentracije TGF-β1 je pronađena u serumu prije operacije ( r pregled = 0,454, P pregled = 0,044, sl. 3D). Pregled}

TGF -β1 Vrlo je reguliran u želudac staničnim linijama karcinoma pod hipoksije pregled

Kako utvrditi da li hipoksija izaziva lučenje TGF-β1 u želučanih stanica raka, razina TGF-β1 ispitivani su u dva želuca staničnim linijama karcinoma, AGS i BGC823, pod hipoksičkih ili normoksičnim uvjetima. Izraz mRNA TGF-β1 pod hipoksije je povećana u usporedbi s normoksičnim uvjetima (Sl. 4a). U skladu s qPCR, razina TGF-β1 u kulturi supernatanta pokazala slične rezultate (Sl. 4b). Nadalje, izrazi TGF-β1 i HIF-1 a također su otkrivene imunofluorescencije, a rezultati su pokazali povećan TGF-β1 i HIF-1α ekspresije pod uvjetima hipoksije u usporedbi s onom u normoksičnim uvjetima (sl. 4, C). pregled

hipoksija povećava mogućnost induciranja Tregs preko TGF-β1 u želudac staničnim linijama karcinoma

kako bi testirali hipotezu da hipoksija izazvanu TGF-β1 pridonosi povećanju Tregs, kruži CD4 ^{+ CD25 - T stanice iz zdravih pojedinaca su tretirani s supernatanata iz stanica koje su u različitim uvjetima. Točkica parcele su pokazali različite medije, uzrokujući ekspresiju Foxp3 u CD4 + T stanica (sl. 5a). Foxp3 ekspresija T-stanica u normoksičnim medija, hipoksično srednje i rekombinantnog humanog TGF-β1 mediju sve povećan u usporedbi s kontrolnom mediju ( P pregled < 0,001). Osim toga, Foxp3 izraz u hipoksičnom mediju bila je značajno viša nego u normoksičnim mediju (13,04 ± 0,74% u odnosu na 6,76 ± 0,35%, P izvoznici < 0.001, slika 5B).. Nadalje, kao što LY-364.947 je dodan u svaku vrstu medija, Foxp3 izraz smanjila otvoreno ( P pregled. ≪ 0.001, slika 5C). Pregled}

Rasprava pregled

Više posljednjih desetak godina, u nastajanju dokazi ukazuju da su Tregs pridonijeti uspostavi tumora ometanje antitumorsko imuni odgovor, ili čak potaknuti metastaze izravno [18], [19]. Dokazi pribavljeni u posljednjih nekoliko godina pokazala je povećana učestalost intratumoralno Tregs kod raka želuca, koji su povezani s nepovoljnim kliničkopatološkim značajke i lošom prognozom [20], [21], [22]. U skladu s tim što je ranije izvijestili rezultata, naša studija dokazuje da je učestalost tumora infiltracije Tregs povećan napredovanje tumora faze. Nadalje, Tregs također daje faktor prognozu za post-kirurgija raka želuca. Osim toga, utvrdili smo da je broj Tregs u metastatskog karcinoma želuca su znatno veće nego u nonmetastatic raka želuca. Gore navedeni rezultati daju podršku ideji da Tregs može pridonijeti progresiji tumora i može biti potencijalni terapeutski cilj za rak želuca. Mi na taj način pored pokušali istražiti temeljni mehanizam koji posreduje Treg obogaćenje u rak želuca. pregled

Tumor hipoksija i prepoznat kao ključni čimbenik rezultira otpornosti liječenja i slabim prognozama za rak želuca [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, kao glavni molekularni potpis za hipoksije, glavni nizvodno regulator uslijed nedostatka kisika odgovora u tumorskim stanicama [24]. Rezultati našeg istraživanja pokazali su da se HIF-1 a u korelaciji s malignim kategoriju ponašanja, uključujući i dubini invazije, limfnih čvorova metastaza i napredovanje stage tumora. Nevjerojatno, pacijenti s rakom želuca s visokim HIF-1 a imali su lošije preživljenje od onih s niskim HIF-1 a, koji je dodatno poboljšao naš prijedlog da se HIF-1α, odnosno hipoksije, je povezan s progresijom raka želuca. Pregled

odavno je poznato da se stanice tumora zaštititi od imunološkog oštećenja hipoksičnih tumora mikrookoliša; Međutim, temeljni mehanizmi i dalje ostaju pod povećalom [25]. Kao i sada, malo se zna o tome da li postoji veza između hipoksije i Treg posredovanog imunosupresije u tumorima. Nekoliko nedavnih studija proučavali hipoksično regulaciju Tregs s kontradiktornim rezultatima. Ben-Shoshan i sur.
[26] izvijestili da hipoksija povećava broj i supresivnu svojstva Tregs diktirati protuupalni program. Wei et al.
[7] je također potvrđeno da hipoksija povećava sposobnost glioblastoma multiforme da inducira Tregs, i prema tome ima ključnu ulogu u tumorskoj posredovanog imuniteta. Međutim, Dang et al. [27] je utvrdio da HIF-1α inhibira Treg diferencijaciju ciljajući Foxp3 protein za razgradnju. U našoj studiji, predstavili smo jako pozitivna korelacija između Tregs broja i HIF-1 a izražavanja, sugerirajući da hipoksija može pridonijeti Tregs infiltracije u rak želuca. Važno je napomenuti da se u našim istraživanjima, većina Tregs nalazili su se u području blizu stanice raka koje eksprimiraju HIF-1 a. Dakle, daljnje rasvjetljavanje li hipoksija povezane molekule oslobađaju iz stanica raka pridonijeti obogaćivanju Tregs kod raka želuca je potrebno. Pregled

Iako su mehanizmi uključeni u obogaćivanju Tregs u tumorima još uvijek nije dobro shvaćen, Mi i drugi istražitelji su nedavno pokazano da tumorske stanice mogu poslužiti kao izvor TGF-β1, koji je potreban za izazivanje i održavanje Tregs in vitro pregled i in vivo pregled [28] [29], [30]. U trenutnoj studiji, učestalost Tregs i TGF-β1 u optjecaju prije operacije bio je veći nego nakon operacije, a dva parametra pokazala pozitivnu korelaciju, sugerirajući da tumor potječe TGF-β1 može doprinijeti povećanju Tregs u želučanom rak. pregled

Hipoksija, zajednička značajka raka, može izazvati stanice raka na tajnim imunosupresivnih citokina, uključujući TGF-β1 [7], [31]. Rezultati našeg istraživanja pokazali su većina high TGF-β1 stanice su stanice raka koje eksprimiraju HIF-1 a kod tumora. In vitro pregled studija pokazala je ekspresija TGF-β1 povećao se u većoj mjeri u želučanim stanicama raka pod uslijed nedostatka kisika kulture, što je također u skladu s gore spomenutim studijama. Temelju naših saznanja, pretpostavili smo da stanice raka izlučuju TGF-β1 da induciraju proizvodnju Tregs u raka želuca. Da bi testirali hipotezu, izolirani CD4 ^{+ CD25 - T stanice iz zdravih pojedinaca su kultivirane u razrijeđenim supernatantima tumorskih stanica u različitim uvjetima kulture. Rezultati su pokazali da Foxp3 ekspresija uzgojenih u hipoksičnom mediju T-stanicama bila je značajno viša od stanicama u normoksičnim mediju. Nadalje, dodajući dodatni rekombinantni humani TGF-β1 znatno povećao Foxp3 izraz, dok je dodao LY-364947, inhibitora receptora TGF-β1, smanjenu Foxp3 izraz. Prema tome, ovi rezultati uspostaviti izravnu vezu između hipoksije, TGF-β1 i Tregs kod raka želuca. Pregled}

Međutim, naša preliminarna studija je također pokazala da TGF-β1 je nepromijenjen HIF-1 a stabilizator, kobalt klorid (COCl _{2), ili HIF-1α inhibitor, 2-metoksiestradiol (2ME2) ​​u AGS i BGC823, iako HIF-1α je povećana hipoksijom (podaci nisu prikazani). Ovi nalazi sugeriraju da HIF-1α mogu razdružiti indukcijom TGF-β1 na stanicama raka želuca pod hipoksije, što je u skladu s prethodnom istraživanju [32]. Nadalje, proizvodnja Tregs ne može u potpunosti ablacijom blokiranjem TGF-β1, što znači da drugi citokini ili putevi također mogu biti uključeni. Pored toga, stanice raka nije jedini izvor citokina unutar mikro tumora. Dakle, daljnje studije potrebne za potvrdu temeljni mehanizam Treg akumulacije u raka želuca. Pregled}

U zaključku, ova studija je pokazala da hipoksija potencira mogućnost raka želuca da izbjegne imunološkom nadzoru regulaciju ekspresije TGF-β1, inducirajući Tregs tumora. Nadalje, naši podaci također pruža dokaze za postojanje međustanične interferencija između tumorskih stanica i Tregs, što bi moglo regulirati antitumorskih imunih odgovora. Pregled

• PLoS ONE: Mir-184 Uvez-Site rs8126 T &C Polimorfizam u TNFAIP2 je povezana s rizikom od želučani Cancer
• PLoS ONE: Kratkoročne Klinički Implikacije Pribor Lijevo jetrene arterije u bolesnika podvrgnutih radikalne gastrektomije za želučani Cancer