Ploche ONE: Intratumor hypoxia podporuje imunitný tolerancie tým, že prinúti regulačných T lymfocytov prostredníctvom TGF-D1 v žalúdočnej Cancer

abstraktné

Regulačná T buniek (Treg) sprostredkovanú imunosupresiu predstavuje jeden z rozhodujúcich nádorových imunitných mechanizmov úniky a je hlavnou prekážkou pre úspešné imunoterapie nádorov. Hypoxia, spoločným znakom solídnych nádorov, bolo spojené s umocneným imunosupresie, zníženie terapeutickej odpovede, malígny progresiu a miestnej invázii. Bohužiaľ, súvislosť medzi hypoxiou a Treg sprostredkované imunitný tolerancie u rakoviny žalúdka zostáva zle pochopený. V našej štúdii Treg a hypoxiou indukovatelný faktor 1α Bolo zistené, že pozitívna korelácia medzi sebou navzájom a sa zvyšuje s progresiou nádoru. Následná in vitro
štúdia preukázala, že supernatanty získané z buniek karcinómu žalúdka za hypoxických stavu, by mohlo vyvolať expresiu Foxp3 pomocou TGF-D1. Tieto zistenia potvrdila kľúčovú úlohu Treg ako terapeutický cieľ pri liečbe rakoviny žalúdka a za predpokladu, užitočné myšlienky pre návrh imunoterapia na rakovinu žalúdka v budúcnosti

Citácia :. Deng B, Zhu JM, Wang Y, Liu TT, Ding YB, Xiao WM, et al. (2013) Intratumor hypoxiou podporuje imunitný tolerancie tým, že prinúti regulačných T lymfocytov prostredníctvom TGF-D1 v rakoviny žalúdka. PLoS ONE 8 (5): e63777. doi: 10,1371 /journal.pone.0063777

Editor: Nupur Gangopadhyay, University of Pittsburgh, Spojené štáty |

prijatá: 10.01.2013; Prijaté: 06.04.2013; Uverejnené: 27. mája 2013

Copyright: © 2013 Deng et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Táto štúdia bol podporený Shanghai Science and Technology komisie (10410709400, 10411950100), Národná prírodná Science Foundation Číny (81000968, 81101540, 81101637 a 81172273) a Národný klinické Key zvláštne predmet z Číny. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je jednou z najčastejších príčin úmrtí súvisiacich s rakovinou po celom svete [1]. Aj napriek významné pokroky v diagnostických a terapeutických prístupov v priebehu posledných desaťročí, prognózu karcinómu žalúdka zostáva žalostný, pretože má vysoký recidívy a metastáz [2]. Imunocyty už dlho uznávaná ako prostriedok zvyšujúci rast nádoru v mikroprostredie nádoru [3], avšak základné molekulárnej podstata zostáva z veľkej časti objasnený. Lepšie pochopenie mechanizmov v karcinómu žalúdka bude prínosom pre vytvorenie účinných terapeutických režimov.

Intratumor hypoxia je spoločným znakom pevných nádorov, ktoré by mohli ovplyvniť progresiu nádorov aktiváciou kľúčových biochemických a bunkových ciest [4 ], [5], [6]. Štúdie tiež preukázali, že hypoxia hrá kľúčovú úlohu v imunitnom potlačenie tumoru sprostredkovanej, prispieva k udržiavaniu imunologickej úniku nádorov [7], [8]. V poslednej dobe sa potvrdilo súvislosť medzi nádorové hypoxie a imunitný tolerancie prostredníctvom náboru regulačných T lymfocytov (Treg) bola založená v roku rakoviny vaječníkov [9]. Tak, hypotéza bola predložená, že hypoxia môže poskytnúť prekážky pre terapeutické imunitný intervencie.

Zvýšená Treg boli popísané v obehu a nádorových tkanivách pacientov s rôznymi typmi nádorov, vrátane karcinómu žalúdka, kolorektálneho karcinómu, hepatocelulárneho karcinómu a karcinóm pankreasu [10]. Hromadiace dáta tiež ukázala, že prítomnosť Treg za následok zvýšené riziko progresie rakoviny [11], [12], [13]. Okrem toho, Treg sprostredkované imunosupresia je považovaný za jeden z dôležitých imunitných mechanizmov úniku nádoru, pričom sú schopné prekonať protinádorovú aktivitu CD8 cytotoxických buniek, dendritických buniek a NK-buniek [14]. Tak, objasnenie základného mechanizmu Treg obohatenia v karcinómu žalúdka bude mať hodnotu pre zacielenie Treg pre priaznivý klinického výsledku. Aj keď mechanizmy nie sú dobre známe, niektoré štúdie ukázali, že TGF-β1 sa podieľa na ňom [15].

V tejto štúdii sme predpokladali, že rakovina žalúdka môže získať selektívnu výhodu indukciou Treg pod hypoxia prostredníctvom TGF-D1 signálne dráhy a tým sa vyhnúť imunitný dohľad. Demonštrovať našu hypotézu, sme analyzovali expresiu hypoxiou indukovatelného faktora-1α (HIF-1α) a Foxp3 v žalúdočnej rakovinové tkanive, hodnotí vplyv hypoxie na produkciu TGF-D1 v rakovinových bunkových línií, a konečne objasnená úloha hypoxii sprostredkovávania Treg obohatenie u karcinómu žalúdka.

materiály a metódy

Pacienti a vzorky

parafínových, formalínom fixované nádorové rezy boli získané od 99 pacientov s rakovinou žalúdka, ktoré podstúpili chirurgický resekcia od decembra 2006 do februára 2008 v rámci druhej klinickej lekárskej fakulty University Jang-čou. Nadväzujúce údaje boli zhrnuté v októbri roku 2012 s mediánom sledovania 53 mesiacov (rozmedzie 4-70 mesiacov). Celkového prežívania (OS) bola definovaná ako od okamihu operácie na poslednej kontrole alebo čas smrti.

periférne krvné vzorky boli odobraté od 20 pacientov s karcinómom žalúdka, jeden deň pred a 10 dní po operácii od júla 2012 do októbra 2012. Séra boli pri teplote -80 ° c a bezprostredne po odstreďovaní pre budúce použitie. Mononukleárny bunky periférnej krvi (PBMC) boli okamžite izolované gradientu hustoty Ficoll.

Žiadny z pacientov dostávala imunosupresíva alebo chemoterapiu pred chirurgickou resekciou. Štúdia bola schválená Výborom pre etiku (etickou komisiou druhej klinickej lekárskej fakulty University Jang-čou, Jang-čou), a písomné informovaný súhlas boli získané zo všetkých účastníkov štúdie.

Imunohistochemické farbenie

sériových rezov (5 um) formalínu fixované, parafínových vzorkách boli vykonané. Rezy boli zbavené parafínu a rehydratované v odstupňované alkohole. Antigén vyhľadávania bola vykonaná spracovaním sklíčka do EDTA v mikrovlnnej rúre po dobu 10 minút. Králičie anti-ľudský HIF-1α primárnej protilátka (BIOWORLD, USA), myší anti-ľudský TGF-β1 protilátka (Santa Cruz, USA) a myší anti-ľudská protilátka Foxp3 (abca, USA) boli použité pre primárne protilátky. Diaminobenzidine (DAB) bol použitý pre nasledujúci substrát kontrastným hematoxylínom pre jednu farbenie. Double farbenie bolo vykonané s 2 rôznymi chromogény :. DAB chromogén (hnedá farba) pre HIF-1α a rýchlo red chromogénu (červená farba) pre TGF-D1 alebo Foxp3

Imunoreaktivita Scoring

HIF -1α jadro farbenie bola hodnotená po hlásené metódy [16], farbenie skóre = intenzita imunoreaktivity (IR) x podiel pozitívne zafarbené bunky. Intenzita IR bola rozvrstvená do štyroch kategórií: 0, žiadna IR; 1, slabý IR; 2, stredne silná IR; a 3, silný IR. Podiel pozitívnych buniek bol klasifikovaný do piatich skupín: 0, žiadne farbenie; 1, < 2% farbenie; 2, 2-10% farbenie; 3, 11 až 29% farbenie; a 4, >. 30% farbenie

Modifikovaný skórovacej systém bol použitý pre Foxp3 ^{+ buniek [17]. Desať polí boli počítané pri vysokej sily pre Foxp3. Absolútny počet lymfocytov na vysoko výkonné pole (HPF 400) bola stanovená. bol vypočítaný priemerný počet pozitívnych zafarbených buniek na vysoko výkonných polí.}

Bunková kultúra a hypoxia indukčné

ľudských nádorových bunkových línií v žalúdku, AGS a BGC823, boli získané z Shanghai Institute of Cell biológie, Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Čína). Všetky bunky boli namnožené v 5% CO _{2 pri teplote 37 ° C v DMEM alebo RPMI 1640 (HyClone Tianjin, Čína), doplnenom 10% FBS (Gibco, Austrália), 100 U /ml penicilínu a 100 mg /ml streptomycínu ( HyClone Tianjin, Čína). Hypoxia experimentoch boli bunky vrúbľovať do 6-jamkových doštičiek, dvakrát sa premyjú PBS, keď sa zvýšila na 60-80% zhlukovania, chovaných v AIMV bezsérovém médiu (Invitrogen, USA) pre inkubáciu cez noc, a potom sa umiestni do modulárne inkubátor komory (Ruskinn Works, YK) po dobu 24 hodín za hypoxických (1,0% o 2) alebo normooxickému (21% o 2) podmienky, a to ako s 5% CO 2 pri teplote 37 ° C. Supernatanty boli spojené a skladované pri -80 ° C pre neskoršie stanovenie koncentrácie TGF-D1 a pre kokultivaci testu. Všetky vitro
validačný experimenty boli vykonané najmenej trikrát.}

Imunofluorescenčný

Bunky (1 x 10 ^{5 /jamka) boli nanesené na krycie sklíčko v 24-jamkové doštičky pre 24 h kultúry. Následne boli fixované v chladnom metanole po dobu 30 min, aby sa permeabilizovány 0,5% TritonX-100 po dobu ďalších 30 minút. Bunky boli premyté trikrát, blokované 10% kozím sérom v PBS po dobu 30 minút, a inkubujú sa s protilátkou proti ľudskému TGF-D1 protilátky (Santa Cruz, USA) a anti-ľudský HIF-1α protilátky (Epitomics, USA) v mrazničke pri 4 ° C cez noc. Primárna protilátka bola detekovaná pomocou alexa488-konjugovanou sekundárne protilátka (Invitrogen, USA) a Alexa Fluór 594-konjugovanou sekundárne protilátka (Invitrogen, USA), v danom poradí. Krycie sklíčka boli skúmané pod mikroskopom OLYMPUS kvetu.}

Extrakcia RNA a kvantitatívnej PCR v reálnom čase (qPCR)

Každá z týchto dvoch bunkových línií opísaných vyššie, bol kultivovaný v troch jamkách v normoxické alebo hypoxických podmienok , ako je popísané vyššie. Celková RNA bola izolovaná z bezprostredne normoxických a hypoxických buniek na konci experimentu, za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, USA). Celková RNA (5 ng) bola reverzne transkribovaných s použitím cDNA reverznej transkripciou zostavy (Takara, Dalian, Čína), podľa inštrukcií výrobcu. qPCR bol vykonaný SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Dalian, Čína). Zložiť zmeny v expresiu jednotlivých TGF-D1 mRNA vzhľadom k GAPDH boli vypočítané na základe prahovej hodnoty cyklu (Ct), ako 2 ^{-A (ΔCt), kde ΔCt = Ct _{cieľovej - Ct GAPDH a Δ (ΔCt) = ΔCt hypoxia - ΔCt normoxie. TGF-D1 primery boli: vpred, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 '; reverzný, 5'-AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC-3 ', a GAPDH primery boli: vpred, 5'-GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA-3'; zvrátiť, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 '. qPCR bol vykonaný v troch opakovaniach.}}

ImmunoSorbent Assay enzyme-linked (ELISA)

Koncentrácia TGF-D1 v supernatantu kultúr a séra bola stanovená za použitia kitu ELISA (eBioscience, San Diego, CA) podľa inštrukcií výrobcu.

Izolácia a kultúry T buniek

PBMC od darcov boli nepriamo značená biotínom-protilátka bocktail a anti-biotínu mikroguličky. CD4 ^{+ T bunky boli oddelené negatívne selekciou v súlade s pokynmi výrobcu (Miltenyi Biotec, Nemecko). CD4 + T bunky boli značené priamo s CD25 Micro-Beads a CD4 + CD25 - T-bunky boli izolované negatívne selekciou v súlade s pokynmi výrobcu (čistota väčšia ako 95%, Miltenyi Biotec, Nemecko) , Supernatanty získané z kultivovaných buniek AGS za normoxických a hypoxických podmienok boli zriedené čerstvým médiom (AIMV 1: 3), s názvom normoxické strednej a hypoxické médium, v danom poradí. Celkom 1,0 x 10 6 /ml CD4 + CD25 - T bunky boli stimulované anti-CD3 /CD28-potiahnuté guľôčky (01:05, Invitrogen, USA) ± IL-2 (200 U /ml, PeproTech) po dobu 72 hodín v AIM-v médiu bez séra (kontrola), médium normoxické média alebo hypoxickým média. V niektorých experimentoch, rekombinantný ľudský TGF-β1 (2 ng /ml, R &D Systems, USA) a TGF-β1 inhibítor kinázy receptora LY-364947. (5 uM, Merck, Nemecko) boli pridané ku kultúram}

prietokovej cytometrie

analýza Fenotyp Treg bola vykonaná s BD FACS AriaII prietokového cytometra (BD, USA). V stručnosti, bunky boli značené CD4-FITC a Foxp3-PE (eBioscience, San Diego, CA) po protokolu výrobcu. Analyzovať prevalenciu Treg, CD4 ^{+ Foxp3 + T bunky boli vyhodnotené po vtokových na CD4 + T bunky a boli vyjadrené ako percento z celkovej CD4 + T buniek.}

Štatistická analýza

Štatistické analýzy boli vykonané na SPSS 17.0 pre Windows. Rozdiely medzi skupinami boli analyzované pomocou jednosmernej ANOVA, Mann-Whitney U-test alebo χ ^{2 skúška, ak je to vhodné. Korelácia bola skúmaná korelácia Pearson. Celková doba prežitia bola vypočítaná pomocou Kaplan-Meier a analyzované pomocou log-rank testu. Dáta sú vyjadrené ako priemer ± SEM. Štatistická významnosť bola stanovená na P Hotel <0,05.}

Výsledky

HIF-1α a Foxp3 expresie v žalúdočnej rakovinové tkanive

Po histologické potvrdení žalúdočných rakovina (obr. 1A, ľavý horný a dole doľava), sme skúmali expresiu HIF-1α a Foxp3 imunohistochemicky v 99 pacientov. HIF-1α sa nízka expresie (obr. 1A, horný) a vysokú expresiu (Obr. 1A, dole) sa nachádzajú prevažne v cytoplazme a jadre nádorových buniek na okraj tumoru, a to iba nukleárnej HIF-1α farbenie bola hodnotená. Je zaujímavé si všimnúť, že v niektorých prípadoch, lymfocyty tiež ukázala silnú expresiu HIF-1α. Foxp3 s nízkou expresiou (obr. 1A, v pravom hornom) a vysoká expresie (obr. 1A, down-vpravo) bol videný v jadre lymfocytov, z ktorých väčšina bola umiestnených na okraj tumoru.

Ďalší , výrazy HIF-1α a Foxp3 v nádorových tkanivách sa porovnali u pacientov s nemetastázujúce (n = 52), a je metastázujúci (n = 47), rakovina žalúdka. Oba Priemerné skóre HIF-1α a počtu Foxp3 ^{+ buniek u pacientov s metastatickým bol vyšší ako v nemetastázujúce pacientov (HIF-1 a, 7,69 ± 0,45 vs 5,41 ± 0,40, P Hotel < 0,001 obr 1B, ľavá ,. Foxp3, 14,61 ± 1,01 vs 8,07 ± 0,95, P Hotel < 0,001, obr 1B, vpravo)}

Vzťah medzi OS a HIF-1α alebo Foxp3 .. žalúdočné rakovinové tkanive

Ako posledný follow-up 50 z 99 (50,5%) pacientov boli nažive, s mediánom sledovania 64 mesiacov (v rozmedzí 57-70), zatiaľ čo 49 zomrelo na chorobu s mediánom doby do úmrtia počas 28 mesiacov (v rozmedzí 4-64). Objasniť vzťah medzi expresiou HIF-1α alebo Foxp3 a OS, HIF-1α bola kvalifikovaná ako negatívna (n = 34; skóre ≤4) alebo pozitívne (n = 65; skóre ^ 4), zatiaľ čo Foxp3 bol zaradený do kategórie nízky (n = 51F) alebo vysokou (n = 48) za použitia stredný číslo (8,6 bunky /HPF) ako cut-off. V našej štúdii OS v Foxp3-nízku skupiny bola významne vyššia ako v Foxp3-skupiny s vysokým ( P
= 0,017, obr. 1C, vľavo), zatiaľ čo HIF-1α-negatívna skupina bola významne vyššia ako HIF -1α-pozitívne skupiny ( P
= 0,009, Fig.1C vpravo).

pridružení medzi HIF-1α alebo Foxp3 a patologickým Charakteristika

korelácia medzi klinicko-patologické rysy a expresie HIF-1α alebo Foxp3 bola následne vyhodnotená (tabuľka 1). Nebola nájdená žiadna korelácia medzi HIF-1α alebo Foxp3 expresie a vekom alebo pohlavím pacientov, rovnako ako veľkosti nádoru. Avšak došlo k nárastu v pozitívnom miery HIF-1α s hĺbkou invázie tumoru ( P =
0,013). Podobný trend bol tiež nájdený medzi expresiou HIF-1α ( P Hotel &0,001) alebo Foxp3 ( P
= 0,008) a štádiom nádoru. Ďalej bolo zistené, že významná korelácia medzi lymfatických uzlín a expresie HIF-1α ( P
= 0,029) alebo Foxp3 ( P Hotel < 0,001)

. vzťah medzi HIF-1α a Foxp3 alebo TGF-D1 v žalúdočnej rakovinové tkanive

vyššie zmienených imunohistochemické výsledkom je uvedené, že množstvo Foxp3 ^{+ buniek bol silne pozitívnu koreláciu s výsledkom z HIF-1α u pacientov s metastázami (r
= 0,772, P Hotel &0,001, obr. 2A, vľavo), ale nie u pacientov bez metastáz ( r = 0,461
, P
= 0,001, obr. 2A, vpravo). potom sa vykonáva imunohistochemické farbenie double-vyhodnotiť prítomnosť súčasnú expresiu medzi HIF-1α a Foxp3 alebo TGF-D1. Výsledky ukázali, že Foxp3 + buniek zhromaždiť hlavne v miestach blízko hypoxické oblasti nádorov s vysokým HIF-1α expresiu (Obr. 2B). Okrem toho väčšina nádorové bunky vysokej HIF-1α bola vysoká expresia TGF-D1 (obr. 2C).}

obehové Treg a TGF-D1 v Predoperačné a pooperačné Pacienti

objasniť vzťah medzi Treg a koncentrácie TGF-D1 v sére, CD4 ^{+ Foxp3 + T bunky boli analyzované u pacientov s rakovinou žalúdka cez prietokovú cytometriou (obr. 3A). Frekvencia Treg pred operáciou bola vyššia ako po chirurgickom zákroku (9,84 ± 0,40 vs 8,47% ± 0,33%, P Hotel &0,001, obr 3B.). Koncentrácia TGF-D1 po operácii, kedy v porovnaní s tými, pred operáciou výrazne znížil (6431,95 ± 629.24 vs 7581,56 ± 556.45 pg /ml, P
= 0,005, obr. 3C). Pozitívna korelácia medzi Treg frekvencie a koncentrácie TGF-D1 bol nájdený v sére pred operáciou ( r
= 0,454, P
= 0,044, obr. 3D).}

TGF -β1 je vysoko up-regulovaná v žalúdku nádorových bunkových línií pod hypoxia

Ak chcete zistiť, či hypoxia indukuje sekréciu TGF-D1 v nádorových bunkách žalúdka, hladiny TGF-D1 boli skúmané v dvoch žalúdočných rakovinových bunkových línií, AGS a BGC823, za hypoxických alebo normoxických podmienok. Expresie mRNA TGF-D1 pod hypoxia bola vyššia v porovnaní s normoxických podmienok (obr. 4a). V súlade s qPCR, hladiny TGF-D1 v supernatantu kultúry vykazovali podobné výsledky (obr. 4b). Ďalej, výrazy TGF-D1 a HIF-1α sa zistili aj pomocou imunofluorescencie, a výsledky ukázali zvýšenú TGF-D1 a HIF-1α expresiu za hypoxických podmienok, v porovnaní so situáciou za normoxických podmienok (obr. 4, C).

hypoxia zväčšuje schopnosť indukcie Treg pomocou TGF-D1 v žalúdku nádorových bunkových línií

pre testovanie hypotézy, že hypoxia-indukovanej TGF-β1 prispieva k zvýšeniu Treg, cirkulujúcich CD4 ^{+ CD25 - T-buniek od zdravých jedincov bolo liečených sa supernatanty z buniek za rôznych podmienok. Bodka grafy ukázali, rôzne médiá indukujú expresiu Foxp3 v CD4 + T-buniek (obr. 5A). FOXP3 expresie T-buniek v médiu, normoxické hypoxické strednej a rekombinantný ľudský TGF-β1 médiu boli všetky zvýšená v porovnaní s kontrolným médiom ( P Hotel &0,001). Okrem toho, Foxp3 expresie v hypoxické médiu bola významne vyššia ako v normoxické médiu (13,04 ± 0,74% v porovnaní s 6,76 ± 0,35%, P Hotel &0,001, obr. 5b). Ďalej, ako LY-364947 bol pridaný do každého druhu média, expresia Foxp3 zjavne znížil ( P
. ≪ 0,001, obr 5C).}

Diskusia

Za v poslednom desaťročí, objavujúce sa dôkazy naznačujú, že Treg prispieť k vzniku nádorov narušením protinádorovú imunitnú reakciu, alebo dokonca stimulovať metastáz priamo [18], [19]. Dôkazy získané v posledných rokoch preukázala zvýšenie frekvencie nitronádorových Treg v karcinómu žalúdka, ktoré boli spojené s nepriaznivými klinicko-funkcií a zlou prognózou [20], [21], [22]. V súlade s týmito výsledkami už bolo skôr oznámené, naše štúdie poskytol dôkazy o tom, že frekvencia nádorovo infiltrácie Treg zvýšil s pokročilým nádorovým etáp. Okrem toho Treg tiež prognóza faktor pre následnej operácii rakoviny žalúdka. Okrem toho bolo potvrdené, že počty Treg v metastatického karcinómu žalúdka sú výrazne vyššie, než v nemetastázujúce rakovina žalúdka. Uvedené výsledky poskytovať podporu k predstave, že Treg môžu prispievať k progresii nádoru a môže byť potenciálnym terapeutickým cieľom pre rakovinu žalúdka. Máme teda ďalšie sa pokúsil preskúmať základný mechanizmus sprostredkovateľská Treg obohatenie rakoviny žalúdka.

Nádorové hypoxia je dobre známe ako kľúčový faktor vedúci k rezistencii liečby a zlou prognózou u rakoviny žalúdka [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, ako hlavný molekulárne podpis pre hypoxii, je hlavným smeru prúdenia regulátor hypoxické reakcie v nádorových bunkách [24]. Výsledky z našej štúdia preukázala, že HIF-1α koreluje s kategóriou malígny správania vrátane hĺbkou invázie, lymfatických uzlín a postupujúcej štádiom nádoru. Pozoruhodné je, že u pacientov s rakovinou žalúdka s vysokou HIF-1α mala horšie prežitie než pacienti s nízkym HIF-1 a, ktorý ďalej posilnená náš návrh, že HIF-1α, alebo skôr hypoxia, je spojená s progresiou rakoviny žalúdka.

je už dlho známe, že nádorové bunky sú chránené pred poškodením imunitného v hypoxických nádorových mikroprostredie; Avšak základné mechanizmy stále zostáva pod kontrolou [25]. V túto chvíľu je známe len málo o tom, či existuje súvislosť medzi hypoxiou a Treg sprostredkované imunosupresie v nádoroch. Niekoľko nedávnych štúdií skúmali hypoxické reguláciu Treg s protichodným výsledkom. Ben-Shoshana et al.
[26] uvádzajú, že hypoxia zvyšuje počet a supresívnu vlastnosti Treg diktovať protizápalový program. Wei et al.
[7], tiež potvrdila, že hypoxia zvyšuje schopnosť multiformný glioblastóm indukovať Treg, a tak hrá kľúčovú úlohu v imunitnom potláčaní nádorov sprostredkovaných. Avšak, Dang et al. [27] zistili, že HIF-1α inhibuje diferenciáciu Treg zacielením foxp3 proteínu k degradácii. V našej štúdii sme predstavili silne pozitívnu koreláciu medzi počtom Treg a HIF-1α prejavu, čo naznačuje, že hypoxia môže prispieť k Treg infiltrácie rakoviny žalúdka. Stojí za zmienku, že v našich štúdiách, väčšina Treg boli umiestnené v oblasti blízko k rakovinovým bunkám exprimujúcim HIF-1α. Preto je potrebné ďalšie objasnenie, či hypoxiou spojené molekuly uvoľňované z rakovinových buniek prispievať k obohateniu Treg u rakoviny žalúdka.

Aj keď mechanizmy podieľajúce sa na obohatenie Treg v nádoroch sú ešte stále dobre nerozumieme, my a ďalší vedci v poslednej dobe dokázané, že nádorové bunky môžu slúžiť ako zdroj TGF-D1, ktorý je vyžadovaný pre indukciu a udržiavanie Treg in vitro stroje a in vivo
[28], [29], [30]. V tejto štúdii, frekvencia Treg a TGF-D1 v obehu pred operáciou bola vyššia ako po operácii, a dva parametre vykazovali pozitívnu koreláciu, čo naznačuje, že nádorovo derivovaný TGF-D1 môže prispieť k zvýšeniu Treg v žalúdku rakovina.

hypoxia, spoločným znakom rakoviny, môže vyvolať rakovinové bunky k tajnému imunosupresívnych cytokínov vrátane TGF-D1 [7], [31]. Výsledky z našej štúdie preukázali vysokú väčšina TGF-D1 bunky boli rakovinové bunky exprimujúce HIF-1α v nádoroch. Od in vitro štúdia preukázala,
expresie TGF-D1 zvýšil vo väčšej miere do buniek karcinómu žalúdka za hypoxických kultúry, ktorá je tiež v súlade s vyššie uvedenými štúdiami. Na základe našich zistení sme predpokladali, že rakovinové bunky vylučujú TGF-D1 indukovať produkciu Treg u karcinómu žalúdka. Ak chcete vyskúšať našu hypotézu, izolovaný CD4 ^{+ CD25 - T-bunky od zdravých jedincov boli kultivované v zriedených supernatantov nádorových buniek za rôznych podmienok kultivácie. Výsledky ukázali, že Foxp3 expresie T buniek kultivovaných v médiu hypoxické bola významne vyššia ako buniek kultivovaných v médiu normoxické. Okrem toho, pridanie ďalšej rekombinantný ľudský TGF-β1 výrazne zvýšil foxp3 expresiu, zatiaľ čo pridanie LY-364947, inhibítor TGF-β1 receptor, zníženej expresie foxp3. Tak, tieto výsledky vytvorí priame spojenie medzi hypoxia, TGF-D1 a Treg u karcinómu žalúdka.}

Avšak, naša predbežná štúdia tiež ukázala, že TGF-β1 bol nezmenený stabilizátora HIF-1 a, chlorid kobaltnatý (Coclé _{2), alebo HIF-1α inhibítor, 2-methoxyestradiol (2ME2) ​​v AGS a BGC823, aj keď HIF-1α bola zvýšená hypoxiou (dáta nie sú uvedené). Tieto zistenia naznačujú, že HIF-1α môže byť unassociated s indukciou TGF-D1 v nádorových bunkách žalúdku pod hypoxia, ktorá je v súlade s predchádzajúcou štúdie [32]. Okrem toho, výroba Treg nemôže byť úplne ablácii blokovaním TGF-D1, čo znamená, že môžu byť zapojené aj iné cytokíny alebo cesty. Okrem toho sa rakovinové bunky nie sú jediným zdrojom cytokínov v mikroprostredie nádoru. Preto sú potrebné ďalšie štúdie s cieľom potvrdiť základný mechanizmus akumulácia Treg u rakoviny žalúdka.}

Na záver, táto štúdia preukázala, že hypoxia potencuje schopnosť rakoviny žalúdka sa vyhnúť imunitný dohľad až regulujúci expresiu TGF-β1, a tým vyvolanie Treg v nádoroch. Ďalej, naše dáta tiež dôkaz o existencii medzibunkovej presluchu medzi nádorovými bunkami a Treg, ktoré by mohli regulovať protinádorovej imunitnej odpovede.

• Ploche ONE: Mir-184 Väzba-Site rs8126 T > C polymorfizmus v TNFAIP2 je spojená s Riziko rakoviny žalúdka
• Ploche ONE: krátkodobých klinických Dôsledky príslušenstvom Ľavý pečeňových artérií u pacientov podstupujúcich radikálnu gastrektómia pre žalúdočné Cancer