Plos ONE: intraperitonealna hipoksija Spodbuja imunske tolerance, ki jih indukcijo regulatornih celic T preko TGF-β1 želodčnega raka

Povzetek

predpisani T celic (Treg) pogojenega imunosupresijo predstavlja eno ključno tumorskih mehanizme imunskega utaj in je glavna ovira za uspešno tumorja imunoterapijo. Hipoksija, skupna značilnost solidnih tumorjev, je bila povezana z potencira imunosupresijo, manjši terapevtski odziv, maligni napredovanje in lokalno invazijo. Žal pa ostaja povezava med hipoksijo in Treg posredovano imunske tolerance pri raku želodca slabo razumljen. V naši raziskavi smo ugotovili Tregs in hipoksija inducibilnim faktor 1α biti pozitivni korelaciji s seboj in so se povečala s napredovanja tumorja. Nadaljnja in vitro
Študija je pokazala, da bi lahko supernatante izpeljani iz želodca rakavih celic pod hipoksično stanju, inducira izražanje FoxP3 preko TGF-β1. Te ugotovitve so potrdili ključno vlogo Tregs kot terapevtski cilj pri zdravljenju raka želodca in pod pogojem, koristne misli za oblikovanje imunoterapijo za raka želodca v prihodnosti

Navedba. Deng B, Zhu JM, Wang Y, Liu TT, Ding YB, Xiao WM, et al. (2013) intraperitonealna hipoksija spodbuja imunske tolerance, ki jih indukcijo regulatornih celic T preko TGF-β1 želodčnega raka. PLoS ONE 8 (5): e63777. doi: 10,1371 /journal.pone.0063777

Urednik: Nupur Gangopadhyay, University of Pittsburgh, Združene države Amerike

Prejeto: 10. januar 2013; Sprejeto: 6. april 2013; Objavljeno: 27. maj 2013

Copyright: © 2013 Deng et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija je bil podprt s Shanghai znanost in tehnologijo Komisije (10410709400, 10411950100), National Nature Science Foundation Kitajske (81000968, 81101540, 81101637 in 81172273) in National Clinical Key posebnega Zadeva Kitajske. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca predstavlja enega najpogostejših vzrokov smrti, povezanih z rakom na svetu [1]. Kljub velikim napredkom v diagnostičnih in terapevtskih pristopov so bili v zadnjih desetletjih, je prognoza za rakom želodca, še vedno žalostna zaradi svoje visoke ponovitve in metastaz [2]. Immunocytes že dolgo priznana kot rast tumorja faktorja spodbujanje v mikrookolje tumorja [3], vendar pa je osnovni molekularne osnove ostaja v veliki meri skrivnostna. Boljše razumevanje mehanizmov za rakom želodca, bo koristno za razvoj učinkovitih terapevtskih programov.

intraperitonealna hipoksija je skupna značilnost trdnih tumorjev, ki bi lahko vplivale na napredovanje tumorjev z aktivacijo ključnih biokemičnih in celičnih poti [4 ], [5], [6]. Študije so pokazale, da ima hipoksija osrednjo vlogo v imunskem zatiranju tumorsko posredovana, kar prispeva k ohranijo imunološko uhajanje tumorjev [7], [8]. Pred kratkim je bila potrjena povezava med tumorja hipoksije in imunske tolerance z zaposlitvijo regulatornih celic T (Tregs) s sedežem v raka na jajčnikih [9]. Tako je bila hipoteza je predstavil, da se lahko hipoksija zagotavljajo ovire za terapevtske imunski posegov.

Povečana Tregs so poročali v obtoku in tumorskih tkivih bolnikov z različnimi vrstami raka, vključno z rakom želodca, debelega črevesa in danke, karcinomom jetrnih celic in rak trebušne slinavke [10]. Kopičijo podatki prav tako pokazala, da prisotnost Tregs povzročilo večje tveganje za napredovanje raka [11] [12] [13]. Poleg tega je Treg posredovano imunskega odziva in velja za enega od ključnih mehanizmov imunskega utaj v tumor s katerim so sposobni premagati aktivnost anti-tumorskih CD8 citotoksičnih celic, dendritičnih celic in naravnih celic ubijalk [14]. Tako bo pojasnitev osnovnega mehanizma obogatitve Treg raka želodca pomembne za ciljanje Tregs za upravičenega klinični izid. Čeprav so mehanizmi niso dobro razumeli, so nekatere študije so pokazali, da je TGF-β1 vanjo vključeni [15].

V tej študiji smo predpostavili, da se lahko rak želodca pridobiti selektivno prednost z indukcijo Tregs pod hipoksije preko TGF-β1 signalne poti in s tem izognejo imunski nadzor. Pokazati našo hipotezo, smo analizirali izražanje hipoksija inducibilnih faktor-1 a (HIF-1 a) in FoxP3 v želodcu tkivih raka, ocenila vpliv hipoksije na proizvodnjo TGF-β1 v raka celičnih linijah, in na koncu pojasniti vlogo hipoksija posredovanju obogatitev Treg raka želodca.

materiali in metode

Bolniki in osebki

Parafinski-vgrajeni,-formalinom določen tumor odseki so bili pridobljeni od 99 bolnikov z rakom želodca, ki so bile opravljene kirurške resekcijo od decembra 2006 do februarja 2008, na drugem kliničnem Medical School of Yangzhou University. Nadaljnji podatki so bili povzeti od oktobra leta 2012 z mediano spremljanja 53 mesecev (razpon 4-70 mesecev). Celokupno preživetje (OS) je bil opredeljen kot iz časa operacije trajala nadaljnje delo ali čas smrti.

Periferne krvne vzorce smo zbrali od 20 bolnikov z rakom želodca en dan pred in 10 dni po operaciji od julija 2012 do oktobra 2012. Sera so bili zamrznjeni pri -80 ° c takoj po centrifugiranju za nadaljnjo uporabo. Periferne krvne mononuklearne celice (PBMC) smo takoj izolirali s gradientu Ficoll gostote.

Noben izmed pacientov so prejeli imunosupresivnih zdravil ali kemoterapijo pred kirurško resekcijo. Študija je odobril Odbor za etiko (Odbor za etiko Druge klinično Medical School v Yangzhou University, Yangzhou), in pisnih obvestil soglasja so bili pridobljeni iz vseh udeležencev raziskave.

Imunohistokemijsko

Serijske oddelke (5 mikrometrov) iz formalin določen,-parafin vgrajeni vzorcih so bile narejene. Oddelki so deparaffinized in rehidrirane v stopenjski alkohola. Antigen Preiskovalna izvedemo z obdelavo stekelca v EDTA pufrom v mikrovalovni pečici 10 minut. Kunčjega anti-humanega HIF-1α primarna protitelesa (bioworld, ZDA), miška anti-človeški TGF-β1 protitelesa (Santa Cruz, ZDA) in miši FoxP3 protitelesa proti humanemu (Abcam, ZDA) smo uporabili za primarne protiteles. Diaminobenzidine (DAB) smo uporabili za podlago naslednjo counterstaining s hematoksilinom za enotno obarvanje. Double obarvanje je bila izvedena z 2 različnih chromogens:. DAB kromogena (rjave barve) za HIF-1 a in hitro red kromogena (rdeče barve) za TGF-β1 ali FoxP3

radioinkorporacijo Točkovanje

HIF -1α jedro obarvanje je ocenil po metodi poročali [16], barvanja točk = intenzivnost radioinkorporacijo (IR) × Delež pozitivno obarvanih celic. Intenzivnost IR je bil stratificiran v štiri kategorije: 0, brez IR; 1, šibka IR; 2, zmerno močan IR; in 3, močne IR. Delež pozitivnih celic smo razvrstili v pet skupin: 0, brez kamna; 1, < 2% obarvanju; 2, 2-10% obarvanje; 3, 11-29% madeži; in 4, >. 30% barvanja

A spremenjeni sistem točkovanja je bila uporabljena za FoxP3 ^{+ celic [17]. Deset polja so bili prešteti na visoki moči za FoxP3. Absolutno število limfocitov na področju visoke moči (HPF 400) je bilo odločeno. smo izračunali povprečno število pozitivnih obarvanih celic na visoko močjo področjih.}

Cell Kultura in hipoksija Indukcijsko

Človekove želodca rakave celične linije, AGS in BGC823, smo pridobili iz Shanghai Institute of Cell biologija, kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska). Vse celice se razmnožujejo v 5% CO _{2 pri 37 ° C v DMEM ali RPMI 1640 (Hyclone Tianjin, Kitajska), dopolnjen z 10% FBS (Gibco, Avstralija), 100 U /ml penicilina in 100 mg /ml streptomicin ( Hyclone Tianjin, Kitajska). Za hipoksije poskusih, smo celice zasejali v 6 vdolbinami, dvakrat izperemo z PBS ko narasla na 60-80% konfluence, shranjena v seruma AIMV mediju (Invitrogen, ZDA), za inkubacijo preko noči, in nato postavi v modularno inkubator komora (Ruskinn dela, YK) 24 h pod hipoksično (1,0% O 2) ali normoxic (21% O 2) pogoji, tako s 5% CO 2 pri 37 ° C. Supernatante zberemo in shranimo pri -80 ° C za poznejše določanje koncentracij TGF-β1 in za sodelovanje kulturo testu. Vse vitro
validacije poskusi so bili opravljeni najmanj treh izvodih.}

Imunofluorescenčni

The celice (1 x 10 ^{5 /dobro) smo nanesli na coverslips je z 24-tudi ploščo za 24 h kulturi. Nato so bile določene v hladnim metanolom za 30 minut se permeabiliziramo z 0,5% TritonX-100 še 30 minut. Celice smo sprali trikrat, blokirana z 10% kozjega seruma v PBS 30 minut, in inkubiramo z TGF-β1 protitelesa anti-humanega (Santa Cruz, ZDA) in HIF-1 a protitelesa anti-humanega (Epitomics, ZDA) v zamrzovalniku pri 4 ° C preko noči. Primarna protitelesa bila odkrita preko alexa488 konjugirano drugo protitelo (Invitrogen, ZDA) in Alexa fluor 594 konjugirano drugo protitelo (Invitrogen, ZDA) oz. V coverslips so bili pregledani v skladu OLYMPUS florescence mikroskopijo.}

RNA Pridobivanje in kvantitativne PCR v realnem času (qPCR)

Vsak od obeh celičnih linij zgoraj opisanih je kultivirani v trojnih vrtin pod normoxic ali hipoksičnih pogojih , kot je opisano zgoraj. Celotno RNA smo takoj izolirali iz normoxic ali hipoksičnih celic na koncu poskusa, s pomočjo TRIzola reagenta (Invitrogen, ZDA). Total RNA (5 ng) je bila reverzno prepisana uporabo cDNA reverzno transkripcijo kompleti (Takara, Dalian, Kitajska), v skladu z navodili proizvajalca. qPCR je bila izvedena v SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Dalian, Kitajska). Krat spremembe v izražanju vsakega TGF-β1 mRNA glede na GAPDH so bili izračunani na podlagi cikla praga (Ct) kot 2 ^{-Δ (ΔCt), kjer ΔCt = Ct _{ciljnem - Ct GAPDH in Δ (ΔCt) = ΔCt hipoksija - ΔCt normoxia. TGF-β1 primerji so bili: naprej, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 '; nazaj, 5'AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC -3 ", in GAPDH primerji so bili: naprej, 5'GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA-3 '; obratno, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 ". qPCR je bila izvedena v treh izvodih.}}

-encimsko-imunskim testom (ELISA)

Koncentracija TGF-β1 v supernatantih kulture in serumov je bila določena z uporabo kompleta ELISA (eBioscience, San Diego, CA), v skladu z navodili proizvajalca.

Izolacija in kultura T celic

PBMC donatorjev so posredno označena z biotina-protitelo bocktail in anti-biotin MicroBeads. CD4 ^{+ T celice smo ločili s negativnem izbor v skladu z navodili proizvajalca (Miltenyi Biotec, Nemčija). CD4 + T celice so neposredno označeni s CD25 mikro-kroglice in CD4 + CD25 - T celice izoliramo s negativnega izbora v skladu z navodili proizvajalca (čistosti > 95%; Miltenyi Biotec, Nemčija) . Supernatante zbrani iz kultiviranih AGS celic pod normoxic ali hipoksičnih pogojih razredčimo s svežim AIMV medij (1:3), ki se imenuje normoxic srednje in hipoksično medija oz. Skupaj 1,0 x 10 6 /ml CD4 + CD25 - T celice smo stimulirali z anti-CD3 /-CD28 obložene kroglice (01:05, Invitrogen, ZDA) ± IL-2 (200 U /ml; Peprotech) za 72 ur pri AIM-v srednjem (kontrolnega medija brez seruma), normoxic mediju ali hipoksične mediju. V nekaterih eksperimentih rekombinantni človeški TGF-β1 (2 ng /ml; R &D Systems, ZDA) in TGF-β1 receptorske kinaze inhibitor LY-364.947. (5 uM, Merck, Nemčija) smo dodali kulturam}

pretočno citometrijo

cvasti analiza Tregs je bila izvedena z BD FACS AriaII pretočnim citometrom (BD, ZDA). Na kratko smo celice označeni s CD4-FITC in FoxP3-PE (eBioscience, San Diego, CA) po protokolu proizvajalca. Za analizo razširjenosti Tregs, CD4 ^{+ FoxP3 + so bile T celice ocenili prehod na CD4 + T celic in so izražene kot odstotek celotne CD4 + T celic.}

Statistična analiza

Statistične analize so bile izvedene na SPSS 17.0 for Windows. Razlike med skupinami smo analizirali z enosmerno ANOVA, Mann-Whitney U test, ali χ ^{2 testa, kjer je to primerno. Korelacija je pregledal Pearson korelacije. Skupni čas preživetja je bila izračunana po Kaplan-Meier in analizirali s pomočjo testa log-ranga. Podatki so izraženi kot sredstvo ± SEM. Statistična značilnost je bila določena na P
. ≪ 0,05}

Rezultati

HIF-1α in FoxP3 Izražanje želodčnega raka tkivih

Po histološko potrditev želodca rak (sl. 1A, zgornji levi in ​​dol, levo), smo raziskovali izražanje HIF-1 a in foxP3 jih imunohistokemijo pri 99 bolnikih. HIF-1α z nizko izražanje (sl. 1A, zgornja) in visoko ekspresijo (sl. 1A, dol) je bilo ugotovljeno pretežno v citoplazmi in jedru rakavih celic na robu tumorja in samo jedrska HIF-1α obarvanje je dosegel. Zanimivo je omeniti, da je v nekaterih primerih, limfociti so pokazali tudi močan izraz HIF-1 a. FoxP3 z nizko izražanje (sl. 1A, zgornji desni) in visoko izraz (sl. 1A, dol-desno) je bila opažena v jedru limfocitov, ki so večinoma nahajajo na robu tumorja.

Naslednja so se izrazi HIF-1 a in foxP3 v tumorskih tkivih, v primerjavi pri bolnikih z nonmetastatic (n = 52) in metastatskim (n = 47), rak želodca. Tako povprečna ocena HIF-1 a in število FoxP3 ^{+ celic pri bolnikih z metastatskim je bila višja kot v nonmetastatic bolnikih (HIF-1 a, 7,69 ± 0,45 proti 5,41 ± 0,40, P
< 0,001 , slika 1B, levo;. foxP3, 14,61 ± 1,01 proti 8,07 ± 0,95, P
< 0,001, slika 1B, desno)}

Razmerje med OS in HIF-1 a ali foxP3.. želodčnega raka tkivih

Kot zadnjega spremljanja, 50 od 99 (50,5%) bolnikov je bilo živih, z mediano spremljanja 64 mesecev (razpon 57-70), medtem ko je 49 so poginile zaradi bolezni z mediano časa do smrti 28 mesecev (razpon 4-64). Za pojasnitev razmerja med izražanjem HIF-1 a ali FoxP3 in OS, je HIF-1α kategorizirani kot negativno (n = 34; rezultati ≤4) ali pozitivna (n = 65; rezultati > 4), medtem ko je FoxP3 je opredeljena kot nizek (n = 51f) ali visoko (n = 48) z mediano število (8,6 celic /HPF) kot cutoff. V naši raziskavi je bila OS v FoxP3 nizko skupine bistveno višja kot v FoxP3 visokih skupino ( P
= 0.017, sl. 1C, levo), medtem ko je bil HIF-1α-negativna skupina bistveno višja od HIF -1α pozitivnih skupina ( P
= 0,009, Fig.1C, desno).

zveza med HIF-1 a ali foxP3 in Clinicopathologic značilnosti

korelacije med clinicopathological lastnosti in izraz HIF-1 a ali foxP3 je nato oceniti (tabela 1). Ni korelacije je bilo med HIF-1 a ali FoxP3 izražanja in starost ali spol bolnikov, kot tudi velikost tumorja. Vendar pa se je povečal na pozitivne stopnje HIF-1 a z globine tumorske invazije ( P =
0,013). Podoben trend je bilo tudi med izražanjem HIF-1 a ( P
< 0,001) ali FoxP3 ( P
= 0,008) in stopnjo tumorja. Poleg tega je bilo ugotovljeno statistično značilna korelacija med bezgavkah metastaz in izražanje HIF-1 a ( P
= 0,029) ali FoxP3 ( P
< 0,001)

. razmerje med HIF-1 a in foxP3 ali TGF-β1 želodčnega raka tkivih

zgoraj omenjeno imunohistokemičnim rezultat kaže, da je število foxP3 ^{+ celice močne pozitivne korelacije z rezultatom HIF-1 a pri bolnikih z metastazami (r
= 0,772, P
< 0,001;. Slika 2A, levo), ne pa tudi pri bolnikih brez metastaz ( r =
0,461, P
= 0.001;. Slika 2A, desno). Nato smo izvedli imunohistokemičnim dvojno obarvanje oceniti prisotnost soizražanjem med HIF-1 a in FoxP3 ali TGF-β1. Rezultati so pokazali, da FoxP3 + celic predvsem zbrati na območjih blizu hipoksične tumorja regiji z visoko HIF-1α izražanja (sl. 2B). Poleg tega je večina visokih HIF-1α tumorske celice visoke izraz TGF-β1 (sl. 2C).}

Krožno Tregs in TGF-β1 v Pre-kirurgiji operacijo in po Bolniki

Na osvetliti odnos med Tregs in koncentracijo TGF-β1 v serumu, CD4 ^{+ foxP3 + T celice so bili analizirani pri bolnikih z rakom želodca prek pretočna citometrija (sl. 3A). Pogostost Tregs pred operacijo je bila višja od tiste, ki je po operaciji (9,84 ± 0,40% v primerjavi z 8,47 ± 0,33%, P
< 0,001, slika 3B.). koncentracije TGF-β1 po operaciji bistveno zmanjšala v primerjavi s tistimi pred operacijo (6431,95 ± 629.24 vs 7581,56 ± 556.45 pg /ml, P
= 0,005, sl. 3C). Pozitivno korelacijo med pogostostjo Treg in koncentracije TGF-β1 je bilo v serumu pred operacijo ( r
= 0,454, P
= 0,044, sl. 3D).}

TGF -β1 je zelo povečana pri želodca rakave celične linije pod hipoksija

Da bi ugotovili, ali hipoksija povzroči izločanje TGF-β1 v želodčnih rakavih celic, so bile koncentracije TGF-β1 raziskovali v dveh želodčnih raka celičnih linij, AGS in BGC823, pod hipoksično ali normoxic pogoji. MRNA izraz TGF-β1 pod hipoksije so primerjali s normoxic pogoji (sl. 4a) povečala. V skladu s qPCR, raven TGF-β1 v supernatanta kulture so pokazale podobne rezultate (sl. 4b). Poleg tega so bile ugotovljene za izražanje TGF-β1 in HIF-1 a tudi z imunofluorescenco, in rezultati so pokazali v primerjavi s tisto pod normoxic pogoji (sl. 4, C) povečana TGF-β1 in HIF-1α ekspresijo pod hipoksičnih pogojih.

hipoksija povečuje sposobnost indukcijo Tregs preko TGF-β1 v želodcu rakave celične linije

za testiranje hipoteze, da, hipoksija povzroča TGF-β1 prispeva k povečanju Tregs, ki kroži CD4 ^{+ CD25 - T celic iz zdravih posameznikih so bili zdravljeni z supernatantih iz celic v različnih pogojih. Je pika parcele so pokazale različne medije induciranje ekspresije FoxP3 v CD4 + celic T (sl. 5A). FoxP3 izražanje T celic v mediju normoxic, hipoksične srednje- in rekombinantni človeški TGF-β1 mediju bili vsi povečana v primerjavi s kontrolno mediju ( P
< 0,001). Poleg tega je bila FoxP3 izraz v hipoksično mediju bistveno višja kot v normoxic mediju (13,04 ± 0,74% proti 6,76 ± 0,35%, P
< 0,001, slika 5B.). Poleg tega, kot je bilo LY-364947 dodali v vsako vrsto medija je FoxP3 izraz zmanjšala odkrito ( P
. ≪ 0,001, slika 5C).}

Pogovor

Več v zadnjem desetletju, je čedalje očitneje, predlagal, da Tregs prispevati k vzpostavitvi tumorjev zaradi slabše imunski odziv protitumorsko, ali celo spodbujajo metastaz neposredno [18], [19]. Dokazi, pridobljeni v zadnjih letih pokazala povečano pogostnost intratumorska Tregs na raka želodca, ki so bila povezana z neugodnimi clinicopathological funkcij in slabo prognozo [20] [21] [22]. Skladno s tem smo že poročali rezultatov naše raziskave je predložil dokaze, da je pogostost-tumorske infiltracije Tregs povečala s napreduje tumorske faze. Poleg tega Tregs tudi dejavnik prognoze za obdobje po operaciji raka želodca. Poleg tega smo potrdili, da so številke Tregs metastatskega raka želodca bistveno višja kot v nonmetastatic rakom želodca. Zgornji rezultati podpreti idejo, da lahko Tregs prispeva do napredovanja tumorja in je lahko potencialna terapevtska tarča za raka želodca. Tako smo poleg skušali raziskati osnovni mehanizem posredniško Treg obogatijo z rakom želodca.

Tumor hipoksija je priznana kot ključni dejavnik, ki izhaja iz odpora zdravljenja in slabo prognozo za rakom želodca [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, kot glavni molekularni podpis za hipoksijo, je glavni navzdol regulator hipoksično odziva v tumorskih celic [24]. Izsledki naše raziskave so pokazali, da je HIF-1 a korelaciji z malignim kategorijo vedenje, vključno z globino invazije, bezgavk metastaz in napreduje stopnjo tumorja. Presenetljivo so imeli bolniki želodca z rakom z visoko HIF-1 a slabše preživetje kot tisti z nizkimi HIF-1 a, ki je še dodatno okrepila naš predlog, da HIF-1α oziroma hipoksija, ki je povezan z napredovanjem raka želodca.

že dolgo je znano, da so tumorske celice zaščitena pred imunskega škodo v hipoksičnih tumorskih mikrookolje; Vendar pa z njimi mehanizmi še vedno pod nadzorom [25]. Do sedaj je malo znanega o tem, ali obstaja povezava med hipoksijo in Treg posredovano imunosupresijo pri tumorjih. Številne nedavne študije so preučevali hipoksični ureditev Tregs, z nasprotujočimi si rezultati. Ben-Shoshan et al.
[26] je poročal, da hipoksija poveča število in omejevalno lastnosti Tregs narekujejo protivnetno program. Wei et al.
[7] prav tako potrdila, da hipoksija poveča sposobnost glioblastoma multiforme, da povzroči Tregs, in tako igra ključno vlogo pri imunskem zatiranju tumorsko posredovano. Vendar Dang sod. [27] ugotovila, da HIF-1α zavira Treg razlikovanje z usmerjanjem FoxP3 beljakovin za razgradnjo. V naši raziskavi smo predstavili močno pozitivno korelacijo med številom Tregs in HIF-1 a izražanja, kar pomeni, da lahko hipoksija prispevajo k Tregs infiltracije pri raku želodca. Treba je omeniti, da je v naših raziskavah, je bila večina Tregs nahaja v regiji v bližini rakavih celic, ki izražajo HIF-1 a. Zato je potrebna nadaljnja pojasnitev, ali, hipoksija, povezane molekule se sproščajo iz rakavih celic, prispeva k obogatitvi Tregs raka želodca.

Čeprav so mehanizmi, ki sodelujejo pri bogatitvi Tregs v tumorjih še vedno ne razumemo dobro, smo in so drugi raziskovalci nedavno pokazala, da lahko tumorske celice služijo kot vir TGF-β1, ki je potrebna za indukcijo in vzdrževanje Tregs in vitro
in in vivo
[28], [29], [30]. V sedanjem študiji je bila pogostnost Tregs in TGF-β1 v obtoku pred operacijo višja od tiste po operaciji, in dva parametra pokazala pozitivno korelacijo, kar kaže, da tumorjem izvira TGF-β1 lahko prispeva k povečanju Tregs v želodcu rak.

hipoksija, skupna značilnost raka, lahko povzroči rakave celice na skrivnih imunosupresivnih citokinov, vključno TGF-β1 [7], [31]. Izsledki naše raziskave so pokazali največ visoko TGF-β1 celice so bile rakave celice, ki izražajo HIF-1 a tumorjev. in vitro
Študija je pokazala, izraz TGF-β1 povečala v večji meri v želodčnih rakavih celic pod hipoksično kulture, kar je tudi v skladu z zgoraj omenjenih študij. Ki temelji na naših ugotovitvah, smo predpostavili, da rakave celice izločajo TGF-β1 inducira produkcijo Tregs raka želodca. Če želite preizkusiti našo hipotezo, isolated CD4 ^{+ CD25 - T celic iz zdravih posameznikov, smo gojili v razredčenih supernatantih tumorskih celic v različnih pogojih kulture. Rezultati so pokazali, da je bila FoxP3 izražanje celice T kultiviramo v hipoksične mediju bistveno višja kot celice, gojene v mediju normoxic. Poleg tega, dodaja dodatno rekombinantni humani TGF-β1 znatno povečal FoxP3 izraz, medtem ko dodajanje LY-364947, zaviralec receptorjev TGF-β1, zmanjšano FoxP3 izraz. Tako ti rezultati vzpostaviti neposredno povezavo med hipoksijo, TGF-β1 in Tregs raka želodca.}

Vendar naš predhodna študija je tudi pokazala, da je TGF-β1 ne spremeni HIF-1 a stabilizator, kobaltovega klorida (COCI _{2) ali HIF-1α inhibitor, 2-metoksiestradiol (2ME2) ​​v AGS in BGC823, čeprav je bil HIF-1α povečal hipoksija (podatki niso prikazani). Te ugotovitve kažejo, da je lahko HIF-1α več povezan z indukcijo TGF-β1 v želodcu rakavih celic pod hipoksijo, ki je v skladu s prejšnjo raziskavo [32]. Poleg tega je proizvodnja Tregs ni bilo mogoče v celoti ablacije z blokado TGF-β1, kar pomeni, da lahko sodelujejo tudi drugi citokini ali poti. Poleg tega rakave celice niso edini vir citokinov znotraj mikrookolju tumorja. Zato so potrebne nadaljnje študije za potrditev osnovni mehanizem akumulacije Treg raka želodca.}

Skratka, ta študija je pokazala, da hipoksija okrepi sposobnost raka želodca, da se izognejo imunski nadzor, ki ga up-regulacijo izražanja TGF-β1, in s tem induciranje Tregs v tumorjih. Nadalje naši podatki tudi dokaze o obstoju medceličnem navzkrižno talk med tumorskih celicah in Tregs, ki lahko regulira protitumorske imunske odzive.

• Plos ONE: MIR-184 Binding-Site rs8126 T > C polimorfizma v TNFAIP2 je povezano s tveganjem za želodčne Cancer
• Plos ONE: Kratkoročne Klinične posledice arterije Accessory Levi jeter Pri bolnikih z radikalne želodca za želodca Cancer