PLoS ONE: Intratumor Hipoksija Skatina imuninę tolerancijos skatinančius reguliavimo T ląstelių per TGF-β1 skrandžio vėžio

Anotacija

Reguliavimo T ląstelių (TREG) sąlygojamą imunosupresija yra vienas iš svarbiausių naviko imuninės vengimo mechanizmų ir yra pagrindinė kliūtis sėkmingam naviko imunoterapija. Hipoksija, bendras bruožas solidinių navikų, buvo susijęs su sustiprėti imunosupresija, sumažėjo gydomojo, piktybiniai progresavimą ir vietos invazija. Deja, tarp hipoksija ir TREG sąlygojamą imuninės tolerancijos skrandžio vėžio ryšys vis dar nepakankamai suprantamas. Mūsų tyrime, buvo nustatyta, Tregs ir hipoksija indukuojamo faktoriaus-1α būti teigiamai koreliuoja su viena su kita ir buvo padidintos su naviko progresavimo. Vėliau in vitro
tyrimas parodė, kad supernatantai gautos iš skrandžio vėžio ląsteles pagal hipoksinio būklės, gali indukuoti Foxp3 išraišką per TGF-β1. Šie duomenys patvirtina esminį Tregs kaip terapinio tikslo skrandžio vėžio gydymo, ir jeigu naudingų minčių dėl imunoterapijos dizaino skrandžio vėžiu ateityje

nurodomoji dalis:. Dan B Zhu JM Wang Y Liu TT Ding YB Xiao WM, et al., (2013) Intratumor Hipoksija Skatina imuninę tolerancijos skatinančius reguliavimo T ląstelių per TGF-β1 skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (5): e63777. Doi: 10,1371 /journal.pone.0063777

redaktorius: Nupur Gangopadhyay universiteto Pitsburge, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Sausis 10, 2013 m Priėmė: Balandžio 6, 2013 m Paskelbta: Gegužės 27, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Dan et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas parėmė Šanchajaus mokslo ir technologijų komisijos (10410709400, 10411950100), Nacionalinis gamtos mokslo fondo Kinijos (81.000.968, 81.101.540, 81.101.637 ir 81.172.273) ir nacionalinio klinikinės Key specialiojo Tema Kinijoje. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys yra viena iš labiausiai paplitusių priežasčių vėžio mirčių visame pasaulyje [1]. Nepaisant didelių pažanga per pastaruosius dešimtmečius diagnostikos ir gydymo metodus, skrandžio vėžio prognozė išlieka niūrus, nes jos didelės pasikartojimo ir metastazių [2]. Imunocituose jau seniai pripažintas kaip veiksnys, skatinantis navikų augimo vėžinių mikroaplinkos [3], tačiau pagrindinė molekulinės pagrindas iš esmės išlieka mįslingas. Geresnis supratimas iš skrandžio vėžio mechanizmų bus naudinga sukurti veiksmingas gydomąsias programas.

Intratumor hipoksija yra bendras bruožas solidinių navikų, kurie galėtų paveikti auglių progresavimą aktyvuojant pagrindinius biocheminius ir ląstelinių kelius [4 ], [5], [6]. Tyrimai taip pat parodė, kad hipoksija vaidina svarbų vaidmenį navikų sukelta imuninės slopinimo, padeda išsaugoti imunologinį pabėgti navikų [7], [8]. Neseniai patvirtinta ryšys tarp naviko hipoksija ir imuninės tolerancijos per reguliavimo T ląstelių įdarbinimo (Tregs) buvo nustatytas kiaušidžių vėžys [9]. Taigi, hipotezė, kad tai buvo hipoksija gali numatyti kliūtis terapinių imuninės intervencijų.

Padidėjęs Tregs buvo pranešta apie judėjimo ir navikų audiniuose, pacientų su įvairiomis vėžio, įskaitant skrandžio vėžio, gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio, kepenų ląstelių karcinoma ir kasos vėžys [10]. Kaupiamosios duomenys taip pat nurodė, kad Tregs buvimas lėmė padidėjusi rizika dėl vėžio progresavimą [11], [12], [13]. Be to, TREG tarpininkaujant imunosupresija yra laikoma viena iš svarbiausių imuninės slėpimo mechanizmai naviko, kuriuo jie galėtų įveikti priešnavikinis aktyvumas CD8 citotoksinių ląstelių, implanto ląstelių ir NK ląstelė [14]. Taigi, išaiškinant pagrindinės mechanizmo TREG praturtėjimo skrandžio vėžio bus vertingos orientacija Tregs už naudingą klinikinės baigties. Nors mechanizmas nėra gerai suprantama, kai kurie tyrimai rodo, kad TGF-β1 dalyvauja joje [15].

Šiame tyrime mes iškėlė hipotezę, kad skrandžio vėžys gali įsigyti atrankinį pranašumą indukcijos Tregs pagal hipoksija per TGF-β1 signalinio kelio taip išvengti imuninę priežiūrą. Norėdami parodyti savo hipotezę, mes išanalizavo hipoksija indukuojamo faktoriaus 1α (HIF-1α) ir Foxp3 skrandžio vėžio audiniuose išraišką, įvertino hipoksijos poveikį TGF-β1 produkcijos vėžio ląstelių linijas, ir pagaliau išaiškinta, kad hipoksija tarpininko vaidmenį TREG sodrinimo skrandžio vėžio.

medžiagos ir metodai

pacientai ir Mėginiai

Parafinas įterptųjų, formalino fiksuoto naviko skyriai buvo gauti iš 99 pacientų, sergančių skrandžio vėžiu, kad operuota rezekcija nuo 2006 gruodžio iki 2008 m vasario mėn Antrojo klinikinio medicinos mokyklos Jangdžou universitete. Tolesni duomenys buvo apibendrinti spalio 2012 su mediana 53 mėnesių (nuo 4-70 mėnesių). Bendras išgyvenamumas (BI) buvo apibrėžta kaip iš operacijos metu į paskutinę stebėti ar laiko mirties.

periferinio kraujo mėginiai buvo surinkti iš 20 pacientų, sergančių skrandžio vėžiu, vieną dieną prieš ir 10 dienų po operacijos nuo liepos 2012 iki 2012 m spalio serumai buvo užšaldyti -80 ° C temperatūroje iš karto po centrifugavimo naudoti ateityje. Periferinio kraujo vieno branduolio ląstelių (PKVL) buvo nedelsiant izoliuoti pagal Ficoll tankio gradiento.

Nė vienas iš pacientų gavo imuninę sistemą slopinančių vaistų ar chemoterapija prieš chirurginį rezekcija. Tyrimas patvirtino Etikos komiteto (Etikos komiteto Antrosios klinikinės medicinos mokyklos Jangdžou universiteto Jangdžou), ir raštu informuoti sutikimai gauti iš visų tyrimo dalyvių.

imunohistocheminį dažymo

Serial skyrius (5 mkm) formalinu fiksuotos, parafino-embedded egzempliorių buvo padaryta. Skyriai buvo deparaffinized ir rehidratuoti rūšiavo alkoholio. Antigenas paieška buvo atlikta apdorojant į EDTA buferinio tirpalo skaidres mikrobangų krosnelėje 10 minučių. Triušis anti-žmogaus HIF-1α pirminis antikūnas (bioworld, JAV), pelės anti-žmogaus TGF-β1 antikūnas (Santa Cruz, JAV) ir pelės anti-žmogaus Foxp3 antikūnas (Abcam, JAV) buvo naudojamas pirminių antikūnų. Diaminobenzidinas (TBP) buvo naudojamas substratas po counterstaining hematoksilinu už vieną dažymo. Dvivietis dažymo buvo atliktas su 2 skirtingų chromogenams. TBP chromogeną (rudos spalvos) už HIF-1α ir greitas raudonas chromogeną (raudonos spalvos) už TGF-β1 ar Foxp3

reaktyvumas Balai

HIF -1α branduolys dažymo buvo įvertintas po ataskaitinio metodą [16], dažymo rezultatas = intensyvumą reaktyvumas (iR) × dalis teigiamai tamsintas ląstelės. IR intensyvumas buvo sluoksniuojant į keturias kategorijas: 0, ne IR; 1, silpnas IR; 2, vidutiniškai stiprus IR; ir 3, stiprus IR. Teigiamų ląstelių dalis buvo suskirstyti į penkias grupes: 0, ne dažymą; 1, < 2% dažymo; 2, 2-10% dažymas; 3, 11-29% dažymas; ir 4 >. 30% dažymo

keistas vertinimo sistema buvo naudojama Foxp3 ^{+ ląstelių [17]. Dešimt laukai buvo skaičiuojami ne didelės galios už Foxp3. Absoliutus limfocitų kiekis per didelės galios srityje (HPF 400) buvo nustatytas. buvo apskaičiuojamas vidutinis skaičius teigiamų tamsintas ląstelių viename didelės galios srityse.}

Mobilusis Kultūra ir Hipoksija indukcija

Žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas, AGS ir BGC823, buvo gauti iš Šanchajaus instituto Cell Biologija, Kinijos mokslų akademija (Šanchajus, Kinija). Visos ląstelės buvo padauginti 5% CO _{2 37 ° C temperatūroje DMEM arba RPMI 1640 (HyClone Tianjin, Kinijos), papildytoje 10% FBS (Gibco, Australija), 100 V /ml penicilino ir 100 mg /ml streptomicino ( HyClone Tiandzinas, Kinija). Dėl hipoksiją eksperimentų, ląstelės buvo pasėjamos į 6-duobučių lėkštelėse, nuplauti du kartus PBS, kai jie augo 60-80% santakoje, laikomi serumo neturinčioje AIMV terpės (Invitrogen, JAV) už inkubacijos naktį, ir tada dedamas į modulines inkubatorius kamera (Ruskinn darbai, YK) 24 h pagal hipoksijos (1,0% O 2) arba normoxic (21% O 2) sąlygos, tiek su 5% CO 2 sudaro 37 ° C temperatūroje. Supernatantų, buvo surinkti ir saugomi -80 ° C temperatūroje vėliau nustatymo koncentracijos TGF-β1, o CO-kultūros tyrimu. Visos in vitro
patvirtinimo bandymai buvo atliekami ne rečiau kaip tris kartus.}

Imunofluorescentinis

ląsteles (1 × 10 ^{5 /gerai), buvo padengtas ant coverslips A 24-šulinėlių plokštelė dėl 24 h kultūros. Vėliau, tai buvo nurodyta šalto metanolyje 30 min iki būti padarytos laidžiomis su 0,5% TritonX-100, dar 30 min. Ląstelės buvo plaunamos tris kartus, užblokuotas 10% ožkų serumo PBS 30 min, ir inkubuojami su anti-žmogaus TGF-β1 antikūno (Santa Cruz, JAV) ir anti-žmogaus HIF-1α antikūnai (Epitomics, JAV) šaldiklyje 4 ° C temperatūroje per naktį. Pagrindinis antikūnas buvo aptikta per alexa488-konjuguoto antra antikūnas (Invitrogen, JAV) ir Alexa fluoro 594-konjuguoto antra antikūnas (Invitrogen, JAV) atitinkamai. Į coverslips buvo tiriamas OLYMPUS žydėjimas mikroskopu.}

RNR gavyba ir kiekybinė Realaus laiko PGR (qPCR)

Kiekvienas iš dviejų ląstelių linijų pirmiau aprašytų buvo kultūringas trimis egzemplioriais šulinių pagal normoxic ar hipoksinės sąlygos , kaip aprašyta aukščiau. Bendras RNR buvo iš karto, išskirtas iš normoxic arba hipoksinių ląstelių tuo eksperimento pabaigoje, naudojant Trizol reagentą (Invitrogen, JAV). Iš viso RNR (5 ng) buvo atvirkštinis transkripcija naudojant kDNR atvirkštinės transkripcijos rinkiniai (TAKARA, Dalian, Kinija), pagal gamintojo instrukcijas. qPCR buvo vykdoma SYBR Green PGR Master Mix (TAKARA, Dalian, Kinija). Sulenkite pokyčius kiekvieno TGF-β1 iRNR, palyginti su GAPDH išraiška buvo apskaičiuota remiantis slenkstinis ciklas (CT), kaip parodyta 2 ^{-Δ (ΔCt), kur ΔCt = Ct _{Tikslas - ct GAPDH ir Δ (ΔCt) = ΔCt hipoksija - ΔCt normoxia. Į TGF-β1 pradmenys buvo: į priekį, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 "; pakeisti, 5'-AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC -3 ", o GAPDH pradmenys buvo: į priekį, 5'-GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA 3"; pakeisti, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 ". qPCR buvo pakartotas tris kartus.}}

imunofermentinės analizės (IFA)

iš TGF-β1 kultūroje supernatantų ir serumas koncentracija buvo nustatyti naudojant ELISA komplektas (eBioscience, San Diego, ĮA) pagal gamintojo instrukcijas.

Izoliacija parsisiųsti ir kultūra T ląstelės

PKVL iš donorų buvo netiesiogiai paženklinti biotinu-antikūno bocktail ir kovos su biotinu mikrogranulių. CD4 ^{+ T ląstelės buvo atskirtos neigiamą atrankos pagal gamintojo instrukcijas (Miltenyi Biotec, Vokietija). CD4 + T ląstelės buvo tiesiogiai paženklinti CD25 Micro-karoliukai ir CD4 + CD25 - T ląstelės buvo izoliuotas neigiamos atrankos pagal gamintojo nurodymus (grynumas > 95%; Miltenyi Biotec, Vokietija) , Surinkti iš išaugintų AGS ląstelių pagal normoxic ar hipoksinės sąlygomis supernatantai buvo skiedžiamas šviežių AIMV terpe (1:3), vadinamas normoxic vidutinio ir hipoksinio terpę, atitinkamai. Iš viso 1,0 × 10 6 /ml, CD4 + CD25 - T ląstelės buvo stimuliuojama su anti-CD3 /CD28 dengtos karoliukai (01:05; INVITROGEN, JAV) ± IL-2 (200 U /ml; Peprotech) 72 h aim-V serumo neturinčia terpe (valdymo terpę), normoxic vidutinės ar hipoksinio terpėje. Kai eksperimentų, rekombinantinis žmogaus TGF-β1 (2 ng /ml; R & D Systems, JAV) ir TGF-β1 receptorius kinazės inhibitorius LY-364.947. (5 mkm; "Merck, Vokietija) buvo pridėta prie kultūrų}

tėkmės citometrijos

fenotipas analizė Tregs buvo atliktas su BD FACS AriaII tekėti citometro (BD, JAV). Trumpai tariant, ląstelės buvo paženklinti CD4-FITC ir Foxp3-PE (eBioscience, San Diego, CA) Po gamintojo protokolu. Analizuoti Tregs, CD4 paplitimą ^{+ Foxp3 + T ląstelės buvo įvertintas po strobavimo nuo CD4 + T ląsteles ir buvo išreikštas visos CD4 + T ląstelių procentais.}

Statistinė analizė

Statistinė duomenų analizė atlikta SPSS 17.0 for Windows. Skirtumai tarp grupių buvo analizuojami naudojant ANOVA, Mann-Whitney U testą arba atitinkamą χ ^{2 testą, kur. Koreliacijos buvo nagrinėjama pagal Pearson koreliacijos. Kaupiamasis išlikimo laikas buvo apskaičiuojamas per Kaplan-Meier ir analizuojami naudojant log-rank testą. Duomenys yra išreikšti kaip reiškia ± SEM. Statistinis reikšmingumas buvo nustatytas P
. ≪ 0,05}

Rezultatai

HIF-1α ir Foxp3 raiška skrandžio vėžio audinių

Po histologinio patvirtinimo skrandžio vėžys (pav. 1A, viršutiniame kairiajame ir žemyn kairėje), mes tyrė HIF-1α ir Foxp3 išraišką imunohistocheminiu 99 pacientų. HIF-1α su maža raiška (pav. 1A, viršutinis) ir didelės raiškos (. 1A pav, žemyn) buvo nustatyta daugiausia citoplazmos ir branduolio vėžio ląsteles naviko marža, ir tik atominės HIF-1α dažymo pelnytas. Įdomu pažymėti, kad kai kuriais atvejais, limfocitai taip pat parodė stiprią išraišką HIF-1α. Foxp3 su mažu išraiškos (. 1A pav, viršutinės dešinės) ir aukštos išraiška (pav. 1A, žemyn dešinėje) buvo vertinamas atsižvelgiant į limfocitai, kurių dauguma buvo esančių naviko marža branduolį.

Kitas , iš HIF-1α ir Foxp3 posakių navikų audiniuose buvo palyginti pacientų, sergančių nemetastazavusiu (n = 52) ir metastazavusiu (n = 47) skrandžio vėžys. Tiek vidutinis balas HIF-1α ir Foxp3 ^{+ ląstelių metastazavusiu pacientų skaičius buvo didesnis nei nemetastazavusiu pacientų (HIF-1α, 7,69 ± 0,45 vs 5,41 ± 0,40 P
< 0,001 pav 1B, kairė;. Foxp3, 14.61 ± 1.01 vs 8.07 ± 0,95 P
< 0,001 pav 1B, dešinėje)}

Santykiai tarp OS ir HIF-1α ar Foxp3.. skrandžio vėžio audinių

nuo paskutinio tolesnių, 50 iš 99 (50,5%) pacientų buvo gyvi, su mediana 64 mėnesių (57-70), o 49 mirė nuo ligos , mediana metu mirties 28 mėnesių (nuo 4-64). Norėdami išsiaiškinti ryšį tarp HIF-1α ar Foxp3 ir OS išraiškos santykį, HIF-1α buvo suskirstyti kaip neigiamas (n = 34; balai ≤4) arba teigiamas (N = 65; balai > 4), o Foxp3 buvo klasifikuojama kaip mažas (n = 51F) arba didelis (n = 48), naudojant vidutinis skaičius (8,6 ląstelių /HPF) Kadangi nukirpimas. Mūsų tyrimo duomenimis, OS Foxp3 mažai grupėje buvo reikšmingai didesnis nei Foxp3 aukščio grupės ( P
= 0,017, pav. 1C, kairėje), o HIF-1α neigiamas grupė buvo gerokai didesnis nei HIF -1α teigiamas grupė ( P
= 0,009, Fig.1C, dešinėje).

asociacija tarp HIF-1α ar Foxp3 ir Clinicopathologic Info

koreliacija tarp klinikos ypatumai ir išraiška HIF-1α ar Foxp3 vėliau buvo įvertintos (1 lentelė). Nėra koreliacijos buvo rastas tarp HIF-1α ar Foxp3 saviraiškos ir amžiaus ar lyties pacientų, taip pat naviko dydžio. Tačiau ten buvo į teigiamą norma HIF-1α su gylio naviko invazijos padidėjimas (, p = 0,013
). Panaši tendencija taip pat buvo nustatyta tarp HIF-1α išraiškos ( P
< 0,001) arba Foxp3 ( P
= 0,008) ir naviko stadijos. Be to, reikšminga koreliacija buvo nustatyta tarp limfmazgių metastazių ir HIF-1α ( P
= 0,029) ar Foxp3 išraiškos ( P
< 0,001)

. Ryšys tarp HIF-1α ir Foxp3 ar TGF-β1 skrandžio vėžys audinių

minėtoje imunohistocheminio rezultatas nurodė, kad Foxp3 skaičius ^{+ ląstelių buvo stiprios teigiamos koreliacijos su HIF-1α rezultatą pacientams, kuriems yra metastazių, (R
= 0,772 P
< 0,001; pav. 2A, kairėje), bet ne pacientų be metastazių ( R =
0,461, P
= 0,001; pav. 2A, dešinėje). Tada atliekamas imunohistocheminės dvigubo dažymo įvertinti coexpression tarp HIF-1α ir Foxp3 ar TGF-β1 buvimą. Rezultatai parodė, kad Foxp3 + ląstelių daugiausia surenka svetainių artimų hipoksinio naviko regione su dideliu HIF-1α išraiškos (2b pav.). Be to, dauguma aukšti HIF-1α naviko ląstelės buvo didelė raiška TGF-β1 (2C pav.).}

Cirkuliacinis Tregs ir TGF-β1 ir prieš operaciją ir po operacijos pacientai

Jei išsiaiškinti ryšį tarp Tregs ir TGF-β1 koncentracija santykius serume, CD4 ^{+ Foxp3 + T ląstelės buvo analizuojami pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu per tėkmės citometrijos (pav. 3A). Iš Tregs dažnis prieš operaciją buvo didesnis nei po operacijos (9,84 ± 0,40%, palyginti su 8,47 ± 0,33% P
< 0,001, 3B pav.). TGF-β1 koncentracija po operacijos gerokai sumažėjo, palyginti su tais, prieš operaciją (6431,95 ± 629.24 vs 7581,56 ± 556.45 pg /ml, P
= 0,005, pav. 3C). Teigiama koreliacija tarp TREG dažnio ir TGF-β1 koncentracija buvo rasta kraujo serume prieš operaciją ( R
= 0,454 P
= 0,044, 3D pav.).}

TGF -β1 labai aktyvinama skrandžio vėžio ląstelių linijas pagal hipoksija

Norėdami nustatyti, ar hipoksija sukelia su TGF-β1 skrandžio vėžio ląstelių sekreciją, kad TGF-β1 koncentracija buvo tiriama dviem skrandžio vėžio ląstelių linijų, AGS ir BGC823 pagal hipoksijos ar normoxic sąlygomis. MRNR išraiška TGF-β1 pagal hipoksija buvo padidintas, palyginti su normoxic sąlygomis (Pav. 4a). Suderinamas su qPCR, kad TGF-β1 koncentracija kultūros nuopilo parodė panašius rezultatus (4b pav.). Be to, šio TGF-β1 ir HIF-1α išraiškos taip pat buvo aptikta imr.rnofluorescencija, ir rezultatai parodė, padidėjo TGF-β1 ir HIF-1α išraiška pagal hipoksinių sąlygomis, kai lyginama su pagal normoxic sąlygų (4 pav., C).

hipoksija padidina siekiant paskatinti Tregs per TGF-β1 skrandžio vėžio ląstelių linijas Gebėjimas

Norėdami patikrinti hipotezę, kad hipoksija sukeltos TGF-β1 prisideda prie Tregs padidėjimas, cirkuliuojančių CD4 ^{+ CD25 - T ląstelės iš sveikų asmenų buvo gydomi nuopile iš ląstelių skirtingomis sąlygomis. DOT sklypai parodė įvairias žiniasklaidos priemones paskatinti iš Foxp3 išraišką CD4 + T ląstelių (pav. 5a). Foxp3 išraiška T ląstelių normoxic terpę, hipoksinio vidutinio ir rekombinantinio žmogaus TGF-β1 vidutinio visi buvo padidintas, palyginti su kontroline terpe ( P
< 0,001). Be to, Foxp3 išraiška hipoksinio terpė buvo gerokai didesnis nei normoxic terpe (13,04 ± 0,74%, palyginti su 6.76 ± 0,35% P
< 0,001, 5B pav.). Be to, kaip buvo įtraukta į kiekvienos žiniasklaidos rūšies LY-364.947, The Foxp3 išraiška atvirai sumažėjo ( P
. ≪ 0,001, 5C pav).}

Diskusijos

Per per pastarąjį dešimtmetį, atsiranda įrodymų buvo pasiūlyta, kad Tregs prisidėti prie auglių įsteigimo kliudydami priešvėžiniai imuninį atsaką, ar net skatinti metastazių tiesiogiai [18], [19]. Įrodymai gauti pastaraisiais metais parodė padidėjusį dažnius naviką Tregs skrandžio vėžio, kuris buvo susijęs su nepalankiomis klinikos funkcijų ir blogos prognozės [20], [21], [22]. Atitikti šių pranešta anksčiau rezultatais, mūsų tyrime buvo pateikta įrodymų, kad auglių infiltruojanti Tregs dažnis didėjo su pažanga auglio etapus. Be to, Tregs taip pat pateikė prognozę veiksnys po operacijos skrandžio vėžio. Be to, mes patvirtinta, kad Tregs numeriai skrandžio vėžiui yra žymiai didesnis nei į nemetastazavusiu skrandžio vėžio. Pirmiau pateikti rezultatai paremia sąvoką, kad Tregs gali prisidėti prie naviko progresavimo ir gali būti potencialus terapinis taikinys skrandžio vėžio. Taigi kitą kartą mėgino tyrinėti sukeliančiam mechanizmui tarpininkės TREG sodrinimą skrandžio vėžio.

Naviko hipoksija yra gerai pripažintas svarbiausiu veiksniu, dėl atsparumas gydymo ir blogos prognozės dėl skrandžio vėžio [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, kaip pagrindinės molekulinės parašo hipoksija, yra pagrindinis pasroviui reguliatorius iš hipoksinio atsako vėžinių ląstelių [24]. Rezultatai nuo mūsų tyrimas parodė, kad HIF-1α koreliuojantį su piktybinio elgesio kategorijos, įskaitant gylio invazijos, limfmazgių metastazių ir artėdami naviko stadiją. Įdomu pastebėti, skrandžio vėžiu sergantys pacientai aukštos HIF-1α turėjo blogesnę išlikimą nei tie, su mažu HIF-1α, o tai dar labiau sustiprino mūsų pasiūlymui, kad HIF-1α, ar veikiau hipoksija, yra susijęs su skrandžio vėžio progresavimą.

jis jau seniai pripažino, kad vėžinių ląstelių yra apsaugotas nuo imuninės žalos hipoksinės naviko mikroaplinkos; Tačiau pagrindiniai mechanizmai vis dar lieka tikrinimu [25]. Kaip ir dabar, labai mažai žinoma apie tai, ar yra ryšys tarp hipoksija ir TREG sąlygojamą imunosupresija į navikų nurodo. Keli naujausi tyrimai studijavo hipoksinio reguliavimą Tregs, su prieštaringų rezultatų. Ben Shoshan , et al.,
[26] pranešė, kad hipoksija padidina skaičių ir slopinamąją savybes Tregs diktuoti priešuždegiminį programą. Wei , et al.,
[7] Taip pat patvirtino, kad hipoksija padidina glioblastoma sugebėjimą sukelti Tregs, todėl vaidina svarbų vaidmenį navikų sukelta imuninės slopinimas. Tačiau, Dang ir kt. [27] nustatė, kad HIF-1α slopina TREG diferenciaciją nukreipiant Foxp3 baltymų skilimo. Mūsų tyrimo duomenimis, pristatėme stipriai teigiamą koreliaciją tarp Tregs skaičių ir HIF-1α išraiška, o tai rodo, kad hipoksija gali prisidėti prie Tregs infiltracija skrandžio vėžio. Verta pažymėti, kad mūsų studijų, dauguma Tregs buvo įsikūrusi regione, netoli vėžinių ląstelių išreiškė HIF-1α. Taigi, reikia toliau išaiškinimas ar hipoksija susijusių molekulių grįžę iš vėžinių ląstelių prisidėti prie Tregs praturtėjimo skrandžio vėžio.

Nors dalyvaujančios Tregs navikuose praturtėjimo mechanizmai dar nėra gerai suprantama, mes ir kiti tyrėjai neseniai parodė, kad naviko ląstelės gali tarnauti kaip TGF-β1 šaltinis, kuris reikalingas, kad indukcijos ir priežiūra Tregs in vitro parsisiųsti ir vivo
[28], [29], [30]. Atsižvelgiant į dabartinę tyrime Tregs ir TGF-β1 apyvartoje prieš operaciją dažnis buvo didesnis, nei po operacijos, o du parametrai rodė teigiamą koreliaciją, o tai rodo, kad naviko kilmės TGF-β1 gali prisidėti prie Tregs padidinti skrandžio vėžys.

Hipoksija, bendras bruožas vėžio, gali sukelti vėžines ląsteles slaptiems imuninę sistemą slopinančių citokinų, įskaitant TGF-β1 [7], [31]. Rezultatai nuo mūsų tyrimo parodė, dauguma aukštos TGF-β1 ląstelės buvo vėžinės ląstelės išreiškiantys HIF-1α į navikų. An in vitro
tyrimas parodė, kad TGF-β1 išraiška padidėjo labiau, skrandžio vėžio ląsteles pagal hipoksinio kultūrą, kuri taip pat yra suderinamas su pirmiau minėtų tyrimų. Remiantis mūsų duomenimis, mes iškėlė hipotezę, kad vėžinės ląstelės išskiria TGF-β1 sukelti, kad Tregs gamybą skrandžio vėžio. Norėdami išbandyti mūsų hipotezę, izoliuota CD4 ^{+ CD25 - T ląstelės iš sveikų asmenų buvo auginamos sumažintą nuopile vėžinių ląstelių pagal skirtingų kultūrinių sąlygų. Rezultatai parodė, kad Foxp3 išraiška T ląstelių auginamos hipoksinio terpė buvo gerokai didesnis nei ląstelių išauginti į normoxic terpėje. Be to, pridedant papildomos rekombinantinis žmogaus TGF-β1 gerokai padidėjo Foxp3 išraiška, o pridedant LY-364.947, TGF-β1 receptorių inhibitorius, sumažino Foxp3 išraiška. Taigi, šie rezultatai nustatyti tiesioginį ryšį tarp hipoksija, TGF-β1 ir Tregs skrandžio vėžio.}

Tačiau mūsų išankstinis tyrimas taip pat parodė, kad TGF-β1 buvo nesikeičia HIF-1α stabilizatorius, kobalto chlorido (CoCl _{2) arba HIF-1α inhibitorius, 2-methoxyestradiol (2ME2) ​​į AGS ir BGC823, nors HIF-1α buvo padidintas hipoksija (duomenys neparodyti). Šie rezultatai rodo, kad HIF-1α gali būti unassociated su TGF-β1 indukcijos skrandžio vėžio ląsteles pagal hipoksija, kuri yra suderinama su ankstesniame tyrime [32]. Be to, Tregs gamyba negali būti visiškai išgarina blokuoja TGF-β1, nurodant, kad kitų citokinų ar planai taip pat gali būti įtraukti. Be to, vėžio ląstelės yra ne vienintelis šaltinis citokinų, kaip apibrėžta naviko mikroaplinka. Taigi, būtini tolesni tyrimai siekiant patvirtinti pagrindinės mechanizmą TREG kaupimosi skrandžio vėžio.}

Taigi, dabartinis tyrimas parodė, kad hipoksija stiprina skrandžio vėžio galimybę išvengti imuninę priežiūrą iki reguliavimo išraiškos TGF-β1, taip sukeliant Tregs navikuose. Be to, mūsų duomenys taip pat pateikė įrodymų dėl tarpląstelinės kryžminio aptarimas tarp vėžinių ląstelių ir Tregs, kuris gali reguliuoti priešnavikinis imuninį atsaką egzistavimą.

• PLoS ONE: Mir-184 Įrišimas-Svetainės rs8126, T > C polimorfizmas į TNFAIP2 yra susijęs su rizika skrandžio vėžio
• PLoS ONE: Trumpalaikis klinikinė reikšmė Aksesuarai Kairysis kepenų arterija pacientams, kuriems atliekama Radical pašalintas skrandis skrandžio Cancer